PENYIAPAN SAMPEL OBAT

UNTUK ANALISIS
 Penyiapan Sampel
Obat Untuk Analisis

Teknik untuk
mempersiapkan Sampel
sampel farmasi Biologi
untuk analisis.

Analisis
Kromatografi
Analisis Farmasi
Pengukuran kuantitatif dari bahan aktif dan
senyawa terkait dalam produk farmasi

• Akurasi tertinggi

• Presisi

• Kehandalan
• Kehadiran bahan aktif merupakan pertimbangan penting
ketika mengembangkan metode persiapan sampel. Produk
persiapan sampel harus menghasilkan solusi dengan sifat
dan langkah-langkah sebagai berikut :

1. Konsentrasi analit berada dalam kisaran yang terukur dari

instrumen
2. Kemurnian melengkapi sistem kromatografi
3. Pemulihan/recovery adalah kuantitatif atau direproduksi
dari sampel ke sampel
4.Analit bersifat stabil sampai sampel dianalisis.
5.Sampel bersifat kompatibel dengan sistem kromatografi
 Konsentrasi Rentang konsentrasi
Sampel metode instrumental

Volume
pengenceran Terlalu encer
untuk sampel

Teknik persiapan sampel

yang sesuai
Tabel 1 . Jenis Sampel
Tabel 2. Farmasi Excipient
Tabel 3 : Perbandingan Teknik Preparasi
Sampel Untuk Cuplikan Biologis (1)
 Teknik Aplikasi Prinsip Syarat
Ekstraksi cair- Isolasi dari sampel cair Partisi Alat dan bahan yang
cair tersedia secara umum

Ekstraksi fasa Isolasi dari sampel cair Mekanisme gradien Kebutuhan tersedia pada
padat bertahap dalam umumnya termasuk alat
kromatografi cair terotomasi.

Pertukaran Sampel biologis Kombinasi berbagai Sistem kompleks

kolom selektivitas kromatografi komputer-katup
cair terkendali
Mikroekstraksi Isolasi dari sampel cair, Partisi atau adsorpsi dri Bagian dari silika terlapis
fasa padat perendaman langsung larutan atau gas

Pengendapan Pemisahan protein untuk Menurunkan kelarutan Alat dan bahan yang
protein analisis sampel plasma protein menggunakan tersedia secara umum
agen chaotropic

Ultrafiltrasi Pemisahan protein untuk Membran yang selektif Filtrasi khusus dan
analisis sampel plasma terhadap berat molekul sentrifuge kecepatan
lambat
Dialisis Pemisahan protein Membran yang Membran dialisis
untuk analisis selektif terhadap
sampel plasma berat molekul
dikombinasi dengan
tekanan osmotik

Hidrolisis konjugat Hidrolisis kimiawi dari Hidrolisis Alat dan bahan yang
obat metabolit obat tersedia secara umum
Injeksi HPLC Analisis sampel plasma Mencapai selektivitas Beberapa metode
langsung tanpa preparasi sampel berdasarkan berat membutuhkan kolom
molekul menggunakan dengan harga mahal
silika terikat yang
didesain khusus atau
mempertahankan
kelarutan protein
dengan surfaktan

Derivatisasi Reaksi kimia untuk Perlakuan gugus fungsi Sedikit reagen

meningkatkan hidrogen aktif dengan derivatisasi yang reaktif
pemisahan atau deteksi reagen elektrofilik
III. Teori Dasar dalam Teknik
Preparasi
A. Interaksi Fisikokimia -> ionik, dipol-dipol,
ikatan hidrogen, interaksi hidrofobik.
B. Kelarutan -> pH, kekuatan ionik, dan
suhu
C. Kesetimbangan Fasa -> konsep koefisien
partisi
IV.Validasi
 Tujuan : menentukan keccokan metode
dengan tujuan dan membandingkan dengan
kriteria (akurasi, presisi, linearitas, spesifisitas,
jangkauan, dan ketidakrataan).
 Validasi akurasi dilakukan dengan
menerapkan metode untuk sampel yang
jumlah analitnya yang diketahui.
 Validasi metode bioanalitik memerlukan
percobaan untuk menilai akurasi, presisi,
batas deteksi, batas kuantisasi, range,
linearitas, selektivitas, dan stabilitas sampel
EKSTRAKSI EKSTRAKSI CAIR-CAIR
SOXHLET
EKSTRAKSI FASE PADAT

TEKNIK
TEKNIK PENGGANTIAN-
PERSIAPAN KOLOM
SAMPEL
EKSTRAKSI MIKRO
KHUSUS FASE-PADAT

METODE PENGENDAPAN
PROTEIN
DIALISIS
ULTRAFILTRASI
 Teknik Soxhlet tidak sering digunakan
dalam setiap persiapan sampel farmasi
karena dua alasan: 1. suhu tinggi dapat
menyebabkan degradasi yang tidak
dapat diterima untuk menunjukkan tes
stabilitas, 2. teknik ini sulit dilakukan
pada multi sampel karena waktu dan
kebutuhan ruang.

Kelemahan dari ekstraksi

cair-cair yaitu sangat sulit
untuk mengotomatisasi.
EKSTRAKSI FASE PADAT

Ekstraksi fase padat adalah teknik persiapan

sampel yang telah diturunkan dari teknologi
kromatografi cair dan telah diterapkan secara luas
untuk analisis sampel biologis serta produk
farmasi. Keuntungan lain dari ekstraksi fase
padat adalah bahwa hal itu umumnya
menggunakan volume yang lebih kecil dari
pelarut organik dibandingkan dengan metode
yang lebih konvensional seperti ekstraksi cair-
cair.
 TEKNIK
PENGGANTIAN-
KOLOM

Teknik penggantian-kolom telah diterapkan secara

luas untuk analisis obat HPLC dalam cairan biologis
dan pencarian analisis lainnya dalam matriks yang
kompleks, yang memungkinkan ahli kimia analitik
untuk menyuntikkan sampel secara langsung, tanpa
persiapan sampel sebelumnya.
 teknik persiapan sampel yang telah
diterapkan untuk melacak metode
analisis seperti analisis komponen
rasa, pelarut residu, pestisida,
komponen kemasan pencucian, atau
senyawa organik lainnya yang
mudah menguap.
Protein juga bisa
dihilangkan dengan
pengendapan dan METODE PENGENDAPAN
sentrifugasi dengan PROTEIN
menambahkan reagen
yang mengurangi
kelarutan protein.
 Proses pemisahan
ini digunakan dalam
industri dan riset
untuk memurnikan
dan berkonsentrasi
makromolekuler
solusi, khususnya
Dialisis adalah metode protein solusi
pemisahan klasik yang
menggunakan membran
semipermeabel untuk
memisahkan senyawa
dengan berat molekul.
 TEKNIK PERSIAPAN SAMPEL
KHUSUS (LANJUTAN)
Metode lain Belajar
Protein yang Preparasi Sampel
mengikat
Obat Konjugat

Teknik Direct-Injection Teknik

untuk Plasma Sampel derivatisasi

Sampel Persiapan
Preparasi Sampel sisa-Pelarut kapiler
untuk Kromatografi Gas (GC) Electrophoresis

Metode Kalibrasi
Metode lain Belajar
Protein yang
mengikat

•Banyak metode modern untuk

mempelajari parameter kualitatif obat-
protein kompleks telah dikembangkan
•Metode ini meliputi kromatografi
ukuran-eksklusi, analisis frontal HPLC, dan
suntikan elektroforesis kapiler, serta
metode spektral, SPME
 Preparasi Sampel
Konjugat obat dapat Obat Konjugat
dihidrolisis dengan
menggunakan asam, basa,
atau katalis enzim
(50,65,71,72). Khas
Kondisi dasar hidrolisis
adalah pH 12 selama 1
jam pada 80 ° C.
 Tujuan pertama sampel plasma
dari langkah persiapan sampel
Teknik Direct-Injection
adalah penghapusan selektif
untuk Plasma Sampel
protein plasma. Jika sampel
plasma disuntikkan langsung ke
fase terbalik (Sistem HPLC),
protein akan mengendap pada
fase diam hidrofobik
•Reaksi kimia derivatisasi
dalam kimia analitik telah
digunakan untuk
meningkatkan deteksi,
meningkatkan volatilitas
untuk GC, atau
meningkatkan selektivitas
seperti untuk pemisahan Teknik
kiral. derivatisasi
•Banyak aplikasi
derivatisasi dikembangkan
untuk meningkatkan
senyawa volatilitas sehingga
kromatografi gas dapat
digunakan
 •Ada empat jenis metode persiapan sampel
untuk pelarut sisa: headspace sampling,
ekstraksi, injeksi langsung, dan fase padat
microextraction.
•Metode persiapan sampel untuk analisis yang
disukai untuk pelarut residu farmasi adalah
injeksi langsung dari sampel terlarut

Preparasi Sampel sisa-Pelarut

untuk Kromatografi Gas (GC)
Elektroforesis kapiler (CE) adalah
teknik yang jauh lebih baru, dan
masih banyak belum akan belajar
tentang mengoptimalkan
persiapan sampel dan sampel
solusi untuk CE analisis. CE
pemisahan dilakukan dengan
menggunakan aliran yang diinduksi Sampel Persiapan
dengan menerapkan listrik bidang kapiler
Electrophoresis
di kapiler leburan silika.
 1. Eksternal Standar Kalibrasi
Kalibrasi standar eksternal adalah metode kalibrasi yang paling
sederhana. Hal ini dapat digunakan jika perolehan kembali analit
adalah 100%.
2. Internal Standard Kalibrasi
Standar kalibrasi internal sama membutuhkan persiapan larutan
standar eksternal, tetapi di samping konsentrasi konstan dari
senyawa kedua ditambahkan ke masing-masing sampel.
3. Standar Adisi
Standar Adisi adalah metode kalibrasi berguna ketika sampel matriks
tidak bisa direproduksi cukup baik untuk mempersiapkan solusi
standar untuk kalibrasi.

Metode Kalibrasi
VI. TREN MASA DEPAN

 Mengotomatisasi persiapan sampel atau masukkan

in-line. Inline dikembangkan meliputi perbaikan
untuk memungkinkan menghubungkan berbagai
teknik.
 Kecenderungan saat lain yang berjalan dengan baik
adalah penggunaan yang lebih spesifik
instrumentasi analitis yang memungkinkan
persiapan sampel yang kurang luas.
 Pengembangan teknik spektrometri massa,
khususnya tandem MS terkait dengan sistem
injeksi HPLC atau aliran, telah memungkinkan
analisis spesifik dan sensitif ekstrak sederhana
sampel biologis
Daftar Pustaka
Ohannesian, L., Streeter, A.J 2002,
Handbook of Pharmaceutical Analysis,
Marcel Dekker, Inc, New York.