Telaah kritis artikel

penelitian aplikasi di
bidang eszimologiOleh

Masriadi
Alfani
Aida Ayu
Laras
Enzymatic preparation of chitooligosaccharides
and their anti-obesity application

Yu Zhou, Shangyong Li, Dandan Li, Shuo Wang, Wandong Zhao, Zhiyuan Lv, Xiao Li,
Haoyan Li and Yantao Han
 Abstrak
• Chitooligosaccharides (COS) berasal dari kitosan, yang dapat digunakan sebagai nutraceuticals dan
makanan fungsional.
• Karena berbagai aktivitas biologisnya, COS banyak digunakan dalam makanan, obat-obatan, pertanian,
dan bidang lainnya.
• COS berasal kitosanase yang diperoleh dari Pseudoalteromonas sp. SY39 dan pada studi ini aktivitas anti-
obesitasnya diteliti pada tikus .
• Studi ini juga membahas Pengaruh waktu hidrolisis, suhu, rasio enzim terhadap kitosan, dan pH terhadap
produktivitas COS
• Hasil penelitian menunjukkan bahwa COS dapat secara efektif menurunkan kadar lipid serum dan obesitas
pada tikus, dan memiliki aktivitas anti-obesitas yang baik.
• Teknologi dan anti-obesitas COS yang luar biasa semakin memperluas aplikasinya dalam makanan dan
industri farmasi.
 Chitooligosaccharides (COS)
terdiri dari oligomerdari -1,4-linked 2-
amino-2-deoxy-d-glucopyranose(GlcN) Hasil dari metode fisik rendah
dan 2-acetamido-2-deoxy-d- meskipun produknya mudah
glucopyranose(GlcNAc) [1–3]. dimurnikan,

Dapat dibuat dengan Metode hidrolisis enzimatik paling

• Metode hidrolisis enzimatik (enzim spesifik dan
ideal karena
enzim nonspesifik), • Ramah lingkungan,
• Metode fisik (perawatan ultrasonik, • Efektifitas yang lebih tinggi,
ultravioletradiasi, dan perawatan gelombang • Operasi dan monitor dapat
mikro) dan dikontrol
• Metode kimia (hidrolisis asam dan oksidasi
hidrogen peroksida)
Metode enzimatik
• kitosanase baru, CsnM, dimurnikan dari bakteri laut nonspesifik, tetapi
Pseudoalteromonassp. SY39 penerapannya sangat
• Dapat adaptasi suhu dingin dan toleransi suhu membuatnya dibatasi oleh:daya degradasi
cocok untuk penyiapan COS dalam jumlah banyak dan efisiensi dan produktivitasnya
 Material dan metode
Material
• Kitosan(viskositas: 20 mPa·s; derajat deasetilasi: 93%) diperoleh dari Anhui
yuanzhengBioengineering Co., Ltd. (Anhui, Cina).
• CsnM(180 U/mL)
• Semua bahan kimia lain yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas
reagen.
• Diet tinggi lemak(HFD) pakan dan pakan diet lemak normal dibelidari
Perusahaan Peternakan Darenfucheng
Metode
• Reaksi enzimatik yang khas untuk produksi COS dilakukan dengan
menginkubasi substrat kitosan dan CsnM.
• Substrat kitosan disiapkan dengan asam asetat 1 M dan NaOH 1 M.
• Kitosan dilarutkan dalam larutan berair asam asetat 1 M hingga konsentrasi 10
mg/mL, dan pH diatur menjadi6.0 dengan 1 M NaOH..
• Gula pereduksi yang ditentukan dengan asam 3,5-dinitrosalisilat(DNS) dan
dinyatakan sebagai nilai ekuivalen dekstrosa(DE)
• Kitosan terhidrolisis sempurna ketika kadar gula pereduksi konstan
 Preparasi COS

• kitosan dibuat terlebih dahulu dengan cara dilarutkan dalam asam asetat encer 1 M
untuk konsentrasi 1% (b/v), dan pH disesuaikanmenjadi 6,0 dengan 1 M NaOH.
• Dua liter kitosan 1%substrat dan 360 U CsnM kemudian dimasukkan ke dalamfermentor.
• Suhu dan kecepatan pengadukanfermentor diatur pada 40 ° C dan 200 r / menit
• konsentrasi yang lebih tinggi dari substrat kitosan (5%, b/v) dengan viskositas lebih tinggi
digunakan untuk mendapatkan konsentrasi COS yang lebih tinggi.
• Dua liter substrat kitosan 5% (b/v) dan CsnM(1.800 U) ditambahkan ke fermentor dan
pHfermentor diatur menjadi 6,0 dengan NaOH.
• Sebagai waktu reaksi enzimatik, kitosan secara bertahap terdegradasi menjadi
COS dengan viskositas yang lebih rendah.
• Larutan reaksi diakhiri dengan pemanasan pada suhu 100oC selama 30 menit.
pH dari larutan reaksi diatur menjadi 7,0 dengan larutan 1 M NaOH diikuti
dengan disentrifugasi selama 20 menit pada6.000rpm.
• Akhirnya, COS diperoleh dengan mengumpulkan supernatan. Selain itu, 2 L
substrat kitosan 5%dan CsnM (1.800 U) ditambahkan ke dalam yang tersisa
sistem reaksi.
• Saat kandungan gula pereduksitidak lagi meningkat, semua larutan reaksi
adalahdikeluarkan dari fermentor dan diproses seperti sebelumnyauntuk
mendapatkan COS.
 Eksperimen pada hewan coba
24 tikus KM jantan sehat (16–18 g;4 minggu) dibeli dari
Darenfucheng Perusahaan Peternakan (Qingdao, Cina).

1. Kelompok lemak normal (NF), diberi makan dengan diet

Tikus ditempatkan di bawah kondisi
lemak normal selama 8 minggu;
standar:21 ± 2°C, ritme siang-malam,
2. Diet tinggi lemak (HFD)kelompok, diberi makan HFD
dan kelembaban relatif 45-65%.
selama 8 minggu;
Setelah seminggu masa aklimatisasi,
3. Grup COS, diberi makan HFD selama 4 minggu dan
tikus secara acak dibagi menjadi 3
kemudian diberi makan dengan HFD dan COS(350 mg/kg
kelompok (8 tikus per kelompok).
berat badan per hari) untuk yang lain 4 minggu

1. Tikus ditimbang setiap minggu dan tingkat asupan energi untuk setiap kelompok
2. Pada akhir perawatan minggu ke empat, hewan dipuasakan 12 jam.
3. Darah diperoleh dari pleksus retro-orbital.
4. Serum diperoleh dari darah dengan sentrifugasi (4°C,12.000 putaran/menit, 20 menit), dan disimpan pada -80 °C.
5. hatidan jaringan adiposa dengan cepat dilucuti dan ditimbang. Setelah foto diambil, jaringan disimpan pada -80 ° C
untuk analisis lebih lanjut.
6. Hewan yang digunakandalam percobaan ini menerima perawatan manusiawi sesuai dengan pedoman Komite
Perawatan dan Penggunaan Hewan Universitas Qingdao.
 Analisis Parameter Biokimia

Total kolesterol, Trigliserida, LDL, HDL, FFA ditentukan oleh kit deteksi komersial (Nanjing
Jiancheng dari Bioengineering Institute,Nanjing, China)

Analisis histologis

1. Jaringan epididymis hati dan adiposa dikumpulkan dan ditimbang satu per satu dan
kemudian dibilas dengan normal saline pada akhir periode percobaan.
2. Jaringan segera difiksasi dalam formalin buffer 10% selama 24 jam dan tertanam
dalam parafin, dipotong dengan ketebalan 5 m.
3. Setelah diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H&E), bagian-bagiannyadiamati di
bawah mikroskop dengan perbesaran 200x.

Analisis data

Semua data disajikan sebagai mean ± SD dengan uji Satu arah (ANOVA) diikuti oleh
Dunnett'stes dengan SPSS. Nilai p <0,05 dianggap signifikan secara statistik.