HIGH PERFORMANCE LIQUID

CHROMATOGRAPHY
(HPLC)

Oleh:
Kelompok II
DAUQI IRFAN AL MISARI
ABD. WARIS
TAUFIQURRAHMAN

INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI ANNUQAYAH

GULUK – GULUK SUMENEP MADURA
 DEFINISI

Dilihat dari sudut pandang bahasa, HPLC berasal dari bahasa Inggris. Awalnya HPLC memiliki
kepanjangan High Pressure Liquid Chromatography. Keempat suku kata tersebut jika diartikan
perkata :

 High berarti tinggi
 Pressure berarti tekanan
 Liquid memiliki arti cairan, dan
 Chromatography merupakan suatu metode tentang pemisahan molekul.
Jika disimpulkan secara sederhana High Pressure Liquid Chromatography dapat diartikan sebagai
suatu metode pemisahan molekul dengan media cair yang diberikan tekanan tinggi. Seiring dengan
perkembangannya, HPLC(High Pressure Liquid Chromatography) bertransformasi menjadi High
Performance Liquid Chromatography. Hingga kini beberapa diantara kita lebih familiar dengan
istilah High Performance Liquid Chromatography.
 TUJUAN HPLC

Ialah memisahkan molekul dalam

waktu minimum
 PRINSIP KERJA HPLC
Prinsip kerja HPLC adalah pemisahan komponen analit berdasarkan kepolarannya, setiap campuran yang keluar
akan terdeteksi dengan detektor dan direkam dalam bentuk kromatogram. Dimana jumlah peak menyatakan
jumlah komponen, sedangkan luas peak menyatakan konsentrasi komponen dalam campuran.

Contoh Kromatogram HPLC

Interkasi analait pada fase diam dan fase gerak menyebabkan pemisahan. Pemisahan ini didorong oleh
kekuatan interaksi dan kepolaran. Bila analit lebih polar dia akan menempel ke fase yang lebih polar, bila
fase diam lebih polar maka analit akan banyak menempel di dase diam. Akhirnya akan menciptakan
pemisahan-pemisahan fase. Deteksi menggunakan detektor (UV-VIS) akan mengenali pemisahan analit
ini setelah melewati kolom HPLC. SIgnal akan dikonversi dan direkam oleh komputer dan ditunjukkan
menjadi kromatogram.

Mekanisme dasar HPLC

Fase gerak biasanya adalah campran air, asetonitril dan metanol. Berbagai komponen campuran
berinteraksi pada berbagai tingkatan karena interaksi fase diam dan gerak.
 CARA KERJA HPLC
Proses pemisahan dalam kromatografi didasarkan pada perbedaan laju
migrasi masing-masing komponen dalam sistem kromatografi. Perbedaan
laju migrasi dari masing-masing komponen merupakan akibat dari perbedaan
keseimbangan distribusi masing-masing komponen diantara fasa gerak dan
fasa diam. Dalam kromatografi cair Kinerja tinggi ini fasa gerak yang
digunakan berupa cairan, sedangkan fasa diamnya berupa padatan (silica gel)
yang ditempatkan pada kolom tertutup (melekat secara kimia dalam kolom
tersebut). Untuk mencapai tujuan analisis ini, maka dipilih pelarut
pengembang yang sesuai dengan komponen yang dipisahkan, kolom yang
digunakan juga harus diperhatikan, dan detektor yang memadai. Pelarut yang
digunakan dialirkan terus menerus secara kontinyu ke dalam pompa.
Kromatogram HPLC merupakan relasi antara tanggapan detektor sebagai koordinat dan waktu sebagai absis dalam
sistem koordinat Cartesian, dimana titik nol dinyatakan sebagai saat dimulainya injeksi sampel (Ahmad dan Suherman,
1991).

Bagan Kerja HPLC

 JENIS-JENIS HPLC
Menurut penulis pengelompokan HPLC berdasarkan jenisnya agak sulit dilakukan. Tidak seperti mikroskop yang
memiliki berbagai jenis, seperti :

1. Monokuler
2. Binokuler
3. Trinokuler
Atau seperti water bath yang memiliki 2 jenis, seperti :

1. Analog
2. Digital
BAGIAN-BAGIAN HPLC

Solvent Organizer HPLC

High Pressure Pump
HPLC
Auto Sampler HPLC

Column Oven HPLC

 TERIMAKA
-

SIH
Program Study Kimia IST Annuqayah