PENDAHULUAN
Produk
farmasi Steril Sterilisasi Endotoksin
parenteral
Bagaimana Produk Parenteral
dapat Terkontaminasi Endotoksin?
Pembagian Pirogen
• Demam
• Aktivasi sistem sitokin
• Rusaknya sel-sel endotelial
• Permeabilitas pembuluh darah berubah
sehingga menyebabkan turunnya tekanan
darah
LAL-
Test
• The Limulus amebocyte lysate (LAL) test
adalah uji in vitro untuk deteksi dan analisis
kuantitatif endotoksin bakteri.
• Metode analisis LAL yang dilakukan mencakup
teknik gel-clot dan turbidimetri kinetik dan
kromogenik (kolorimetri)
LAL-
Test
Metode Gel • LAL menggumpal karena endotoksin
Clot
Metode Kinetik • Kecepatan pembentukan gel
Turbidimetri
Metode • Menggunakan substrat kromogentik
sintetik
Kromogenik • Menghasilkan warna kuning
Mengapa LAL test?
LAL-
Test
Lebih akurat
LAL-
Test
• Lisat diperoleh dari amubosit kepiting landam kuda
(Limulus polyphemus)
• Penggunaan LAL untuk deteksi endotoksin berawal dari
pengamatan Bang (1956) bahwa infeksi bakteri gram
negatif pada Limulus polyphemus menyebabkan
koagulasi intravaskular yang parah.
• Th 1964, Levin and Bang kemudian menunjukkan
bahwa penggumpalan itu merupakan hasil
reaksi antara endotoksin dan protein yang dapat
menggumpal dalam amubosit.
LAL-
Test
• Solum (1970, 1973) dan Young (1972),
melakukan pemurnian dan karaterisasi protein
yang dapat bergumpal dari reaksi LAL dan
menunjukkan bahwa reaksi dengan
endotoksin merupakan reaksi enzimatik.
Cara memperoleh lysate
Kepiting laman
Cek kesehatan Darahnya diambil
kuda ditangkap
Disentrifugasi
Amoebpcytes di (memisahkan
freeze-dried amoebocytes dan
plasma cair)
+ 100 μl Lysate
Tabung dibalik
perlahan (180º)