Uji pirogen dengan rabbit test

• menggunakan kelinci sehat yang telah dijaga

dalam keadaan lingkungan dan makanan yang
tepat sebelum dilakukan uji.
• Temperature control diukur untuk tiap hewan
yang akan digunakan, sebagai dasar penentuan
setiap kenaikan temperature yang ditimbulkan
akibat penyuntikan larutan uji.
• Kelinci-kelinci yang digunakan temperaturnya
tidak boleh berbeda lebih dari 1o, dan
temperature tersebut diperkirakan tidak akan
meningkat (Ansel, 1989: 419)
• alat suntik, jarum dan alat gelas dibuat bebas
pirogen dengan : memanaskan pada temperature
250oC selama tidak kurang dari 30 menit.
Hangatkan produk yang akan diuji sampai
temperature 37oC ± 2oC.
• Suntikkan produk yang akan diuji pada vena
telinga setiap kelinci sebanyak 10 ml per kgBB,
• selesaikan tiap suntikan dalam waktu 10 menit
dihitung dari awal pemberian.
• Catat temperature pada 1,2, dan 3 jam sesudah
penyuntikan.
• Bila masing-masing kelinci :
 Tidak menunjukkan kenaikan temperature ≥0,6oC dari temperature
control masing-masing, dan jika hasil penjumlahan kenaikan
temperature dari 3 kelinci tidak lebih dari 1,4oC, Maka zat yang diuji
memenuhi persyaratan bebas pirogen.
 menunjukkan kenaikan temperature ≥ 0,6oC atau hasil penjumlahan
kenaikan temperature 3 kelinci lebih dari 1,4oC, ulangi dengan
menggunakan 5 kelinci lain.
 Jika tidak lebih dari 3 dari 8 kelinci, masing-masing menunjukkan
kenaikan temperature 0,6oC atau lebih dan jumlah kenaikan
temperature 8 kelinci tidak lebih dari 3,7oC, maka larutan
memenuhi ppersyaratan bebas pirogen.
uji Limulus amebocyte lysate (LAL)
• Uji LAL adalah metode spesifik untuk bakteri
endotoksin, hanya untuk pirogen yang signifikan
pada kebanyakan pabrik farmasetikal dan
peralatan medis.
• Test didasarkan pada mekanisme primitive
penggumpalan darah dari kepiting seperti Kuda
Amerika (Limulus polyphemus).
• Berberapa enzim diletakkan pada sel darah
amoeba kepiting yang dipicuh oleh endotoksin
perpanjangan koagulasi enzimatik yang di akhiri
dengan produksi di gel protenose.
• Test harus dihindarkan dari kontaminasi
• test ini penting untuk memastikan bahwa tidak ada factor
campuran dalam sediaan, peralatan tidak menyerap endotoksin
(seperti pada beberapa plastic) dan sensitifitas dari lisat diketahui.
• Reagen test LAL disediakan dengan lyopilisasi sel di mubasit limulus.
Volume setara reagen LAL dan larutan test (0,1 mikron per masing-
masing)dicampurkan dalam gelas tube test elipirogenasi.
• Tube diinkubasikan pada suhu 37oC selama 1 jam, setelah test
wadah dibaca.
• Tube diambil dari incubator dan diubah.
• Bekuan oleh yang rusak mengandung energy padatan merupakan
factor dari test positif.
• Ketika digunakan pada bagian ini bekuan gel uji awalnya, melewati
test kegagalan dibatasi dan reagen sensitive LAL.
• Test ini spesifik untuk endotoksin gram
negative, dimana test pirogen kelinci sensitive
untuk semua pirogen endotoksin dan sumber
lain disbanding gram negative.