TEKNIK BIOASSAY :

SPF, SITOTOKSIK, ANTIPOLIFERASI

Nama Kelompok :
Gita Setya Ningrum (2320801029)
Elva Angela (2320801047)

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 PENGERTIAN

SPF adalah ukuran

Bioassay adalah yang digunakan Sitotoksisitas adalah
analisis atau untuk mengetahui kemampuan suatu
pengukuran dari seberapa efektif senyawa untuk
suatu zat untuk suatu produk tabir membunuh sel atau
menentukan surya dalam menghambat
keberadaan dan melindungi kulit pertumbuhan sel
dampaknya dari sinar matahari

Antipoliferasi adalah kemampuan suatu zat untuk

menghambat pertumbuhan sel kanker

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Jurnal 1 Jurnal 2 Jurnal 3

Bioassay-Guided Skin- Bioassay-Guided Isolation

Bioassay-guided isolation
Beneficial Effects of and HPLC Quantification of
of cytotoxic constituents
Fractionated Sideritis Antiproliferative
from the flowers of
raeseri subsp. raeseri Metabolites from
Aquilaria sinensis
Extract Stahlianthus thorelii

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 OUTLINE

s
pu

pu

pu
em

em

em
t

t
Nue

ue

ue
nAg

ng

ng

N
LcoU

LA
co

co
U
um

uEm

PU
H

lu
uAl

uDl

IM
Lu
ibO
iDb

SiIb
EstT

ES
sNt

Ast
PEe

Me

He

K
V

V
1 2 3 4

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
 Jurnal 1

Bioassay-Guided Skin-Beneficial Effects

of Fractionated Sideritis raeseri subsp.
raeseri Extract

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
 Pendahuluan

Bagian udara dari tanaman Sideritis, juga dikenal sebagai ironwort atau teh
gunung, disiapkan sebagai infus atau rebusan, banyak digunakan dalam pengobatan
tradisional sebagai agen anti- inflamasi, antiulseratif, antimikroba, antiplatelet,
analgesik, dan karminatif. Selain itu, di berbagai negara, spesies Sideritis digunakan
secara topikal untuk menyembuhkan luka dan luka bakar, dan untuk menghentikan
pendarahan dari luka.
Karena tirosinase adalah polifenoloksidase, senyawa polifenol dapat bertindak
sebagai penghambat enzim yang kompetitif. Penggunaan ekstrak tanaman sebagai
sumber antioksidan dan penghambat tirosinase dapat menjadi salah satu pendekatan
terapeutik untuk mengendalikan masalah yang berkaitan dengan hiperpigmentasi kulit.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Metode
• Persiapan Ekstrak
Serbuk yang sudah kering dimaserasi dan diekstraksi berulang. ekstrak yang diperoleh diuapkan di
bawah tekanan tereduksi (Buchi rotavapor R-114) hingga kering
• Penentuan Kandungan Fenolik Total
Kandungan fenolik total ekstrak hidroetanol kering SR dan fraksinya diperkirakan
dengan metode Folin-Ciocalteu dengan modifikasi [63]. Pada dasarnya, ekstrak yang dilarutkan
dalam etanol 70% (200 μL) dicampur dengan pereaksi Folin-Ciocalteu yang diencerkan
dengan air 1:10 (1000 μL)
• Metode kuantifikasi HPLC-UV
Menentukan kandungan fenolik total, untuk mengukur flavonoid terpilih yang melimpah pada spesies
Sideritis dan dikenal dengan potensi aktivitas yang bermanfaat bagi kulit (turunan dari isoscutellarein
dan hypolaetin), asam klorogenat dan verbascoside melalui analisis HPLC, dan untuk mengevaluasi
antioksidan in vitro, anti- tirosinase dan aktivitas antimikroba, serta untuk menentukan faktor
perlindungan terhadap sinar matahari (SPF) dari ekstrak hidroetanol bagian udara S. raeseri subsp.
raeseri dan fraksi-fraksinya.
Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi
UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Hasil
Komposisi Kimia
Kandungan fenolik total ekstrak hidroetanol Sideritis raeseri subsp. raeseri (SR) dan fraksi- fraksinya
berkisar antara 13,45-92,20 mg GAE/g. Kandungan fenolik total tertinggi ditentukan pada fraksi n-
butanol, diikuti oleh fraksi etil asetat (88,48 mg GAE/g)

Mengenai kandungan senyawa individu, semua sampel mengandung karakteristik 8-hydroxyflavone 7-

allosylglucosides (turunan isoscutellarein dan hypolaetin serta metil eternya) yang tersebar luas dalam genus
Sideritis.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antioksidan dari sampel SR dan kontrol positif dievaluasi menggunakan empat uji in vitro yang
berbeda, untuk memperhitungkan berbagai cara kerja antioksidan .

Fraksi etil asetat menunjukkan aktivitas

antioksidan tertinggi pada uji ABTS dan β-
karoten, dan aktivitas yang sedikit lebih
rendah daripada fraksi n-butanol yang paling
aktif pada uji DPPH dan FRAP. Fraksi
petroleum eter menunjukkan aktivitas
terendah pada semua uji kecuali pada uji β-
karoten. Hasil yang diperoleh sejalan dengan
kandungan fenolik total yang tinggi dan
senyawa individu yang ditemukan dalam
fraksi n-butanol dan etil asetat.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
Aktivitas Anti-Tirosinase
Aktivitas penghambatan tirosinase dari ekstrak hidroetanol dan fraksi-fraksinya diuji pada tiga konsentrasi
yang berbeda (100, 200 dan 500 µg/mL). Huruf yang berbeda (a, b) dalam sel yang sama menunjukkan perbedaan
yang signifikan (p <0,05) antara konsentrasi yang diuji menurut uji post hoc Tukey.

Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa aktivitas

tergantung pada jenis pelarut ekstraksi ulang yang
digunakan. Meskipun fraksi n-butanol mengandung jumlah
polifenol total terbesar, serta semua senyawa fenolik, fraksi
ini menunjukkan potensi penghambatan tirosinase yang
relatif rendah, seperti diterpenoid atau asam hidroksisinamat
yang terdeteksi pada spesies Sideritis yang berbeda dan
diketahui memiliki aktivitas anti- tyrosinase.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
Aktivitas Antimikroba
• Aktivitas antimikroba terdeteksi pada tingkat yang sebanding untuk semua sampel yang diteliti,
dengan nilai MIC antara 1,88 dan 12,42 mg / mL. Baik ekstrak maupun fraksi aktif terhadap bakteri
Gram positif dan Gram negatif, dan yang paling rentan adalah S. epidermidis.
• Fraksi petroleum eter dengan kadar fenolik terendah dan fraksi etil asetat dengan kadar fenolik
total yang tinggi menunjukkan aktivitas antimikroba yang baik, sedangkan fraksi butanol memiliki
aktivitas yang lebih rendah meskipun memiliki kadar fenolik total yang paling tinggi
• Karena ekstrak SR dan fraksinya menunjukkan aktivitas antimikroba yang sangat baik terhadap S.
epidermidis, dan juga terhadap bakteri infeksi kulit yang umum, S. aureus dan P. aeruginosa, yang
terkait dengan resistensi antibiotik yang tinggi terhadap sebagian besar antimikroba, kemungkinan
menggunakan beberapa ekstrak atau fraksi S. raeseri untuk pengobatan topikal gangguan kulit
seperti infeksi bakteri dapat dipertimbangkan.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 • Aktivitas Fotoprotektif
.
Nilai SPF dari ekstrak hidroetanol SR dan fraksinya yang ditentukan pada tiga konsentrasi
yang berbeda disajikan. Semua sampel yang diuji, kecuali fraksi petroleum eter, memenuhi
kriteria ini pada konsentrasi sampel 0,1 mg/mL. Ini adalah laporan pertama tentang aktivitas
fotoprotektif pada beberapa spesies Sideritis. El Aanachi dkk

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Kesimpulan

Fraksi-fraksi yang diperoleh diuji aktivitas biologis yang berbeda, yaitu aktivitas antioksidan, anti
tirosinase, antimikroba, dan fotoprotektif

Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat dan n-butanol, yang paling kaya akan
kandungan fenolik total, paling aktif dalam uji antioksidan (β-karoten, DPPH, ABTS, FRAP).

Aktivitas antimikroba terbaik terhadap Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis

dan Pseudomonas aeruginosa, agen penyebab infeksi kuli

Penerapan metode ekstraksi ini memungkinkan untuk mendapatkan fraksi S.

raeseri dengan spektrum bioaktivitas yang luas, sehingga memungkinkan tanaman
ini menjadi bahan multi-target yang bermanfaat untuk berbagai formulasi

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
 Jurnal 2

Bioassay-guided isolation of cytotoxic

constituents from the flowers of
Aquilaria sinensis

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
 Pendahuluan

Aquilaria sinensis Tanaman ini Data ini menunjukkan bahwa

memiliki kepentingan ekologis
tertentu karena merupakan
sumber utama gaharu (chen-
xiang dalam bahasa
Mandarin), yaitu bagian
tengah tanaman yang
mengandung resin. Sebagai
obat tradisional Tiongkok,
gaharu telah banyak diteliti.
Dalam skrining ekstrak
antikanker tanaman, ekstrak
bunga Aquilaria sinensis
ditemukan memiliki aktivitas
penghambatan yang
signifikan.
memiliki beberapa selektivitas
untuk garis sel kanker yang
berbeda dan garis sel BEAS-
2B normal. Juga memiliki
penghambatan yang lebih
baik terhadap garis sel kanker
paru-paru dibandingkan
dengan garis sel kanker
lainnya.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Metode

Metode Komputasi
03
konfigurasi absolut dari senyawa
Persiapan Ekstraksi dan baru ini ditentukan oleh
perhitungan teori fungsional
fraksi serta isolasi densitas bergantung waktu (TDDFT)
senyawa dari spektrum ECD

Tanaman setelah dikeringkan

diekstraksi dibawah
ultrasound
01 02
Uji MTS untuk
Sitotoksisitas
untuk mengevaluasi aktivitas
sitotoksisitas

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Hasil
Fraksinasi dan isolasi yang dipandu oleh bioaktivitas
Ekstrak EtOH 90% (PXS65) dari aliran A. sinensis
setelah ekstraksi air diuji secara in vitro untuk sitotoksisitas
terhadap 16 garis sel kanker

PXS65 memiliki aktivitas sitotoksik yang nyata terhadap SPC-

A-1, NCI-H520, A549, HeLa, SH-SY5Y, SK-OV-3, MT4, dan
Sel PC-3 (1-8) dengan nilai IC50 kurang dari 1 μg / mL.
Sementara itu, PXS65 menunjukkan aktivitas penghambatan
yang lemah terhadap SW480, MCF-7, HL-60, HL-60, Caco2,
dan BEAS-2B (13-17) sel dengan nilai IC50 lebih besar dari
20 μg/mL.

Data ini menunjukkan bahwa PXS65 memiliki beberapa

selektivitas untuk garis sel kanker yang berbeda dan garis sel
BEAS-2B normal. PXS65 memiliki penghambatan yang lebih
baik terhadap garis sel kanker paru-paru dibandingkan
dengan garis sel kanker lainnya
Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi
UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 kanker paru-paru (A-549,
NCI-H520, dan SPC-A-1),
serta sel BEAS-2B normal
dan sel kanker paru-paru
yang resisten terhadap
paclitaxel, A549 / Taxol.

fraksi yang larut dalam EtOAc(PXS66-2) menunjukkan aktivitas penghambatan paling

banyak terhadap A-549 (IC50 = 0,17 μg/mL), NCI-H520 (IC50 = 0,08 μg/ mL), SPC-A-1
(IC50 = 0,08 μg/mL), dan sel A549/Taxol (IC50 = 0,08 μg/mL). Aktivitas penghambatan
terhadap sel A549/Taxol lebih baik dibandingkan dengan paclitaxel (IC50 = 0,54 μg/mL),
dengan toksisitas yang lebih rendah (IC50 = 4,48 μg/mL) dibandingkan dengan paclitaxel
(IC50
UMP
= 1,85 μg/mL)Fakultas
Fakultas Farmasi
terhadap
UMP
Farmasi
sel BEAS-2B normal. Fakultas
Fakultas Farmasi
UMP UMP
Farmasi
farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
(Tabel 3) PXS66-2 difraksinasi dengan kromatografi kolom silika gel
untuk menghasilkan enam fraksi lebih lanjut (B-1 hingga B-6),
yang juga dimasukkan ke dalam uji sitotoksisitas. Fraksi B-1
menunjukkan aktivitas penghambatan yang lebih tinggi terhadap
empat garis sel kanker paru-paru dibandingkan fraksi lainnya
dengan nilai IC50 kurang dari atau sama dengan 0,02 μg/mL.
Fraksi B-1 dipisahkan dengan kromatografi kolom silika gel fase
terbalik (RP) C18 untuk menghasilkan 12 fraksi lebih lanjut (B-1-1
hingga B-1-12), yang juga diajukan ke uji sitotoksisitas
Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi
UMP UMP UMP
(Tabel 4) Fraksi B-1-6 dan B-1-7 menunjukkan
aktivitas penghambatan yang lebih tinggi terhadap
keempat garis sel kanker paru-paru dibandingkan
fraksi lainnya dengan nilai IC50 kurang dari atau
sama dengan 0,02 μg/mL. Selanjutnya, fraksi B-1-6
dan B-1-7 diisolasi dan dimurnikan untuk
menghasilkan enam senyawa
Fakultas Farmasi
UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Hasil sitotoksik dari isolat 1-6

Aquilarolide A (1), cucurbitacin E

(3), cucurbitacin B (4), dan 7-
hidroksi-6-metoksi-2-[2-(4-
metoksifenil) etil]-4H-1-benzo-
piran-4-satu (6)

(Tabel ) Isolat 1-6 dievaluasi untuk mengetahui sitotoksisitasnya terhadap SPC-A-1, NCI-H520, A549, A549/Taxol, dan
BEAS-2B. (1,3,4,6) menunjukkan sitotoksisitas yang teramati terhadap empat garis sel kanker yang diuji dengan nilai
IC50 mulai dari 0.001 hingga 1,84 μM dan terhadap garis sel BEAS- 2B normal dengan nilai IC50 mulai dari 3,46 hingga>
40 μM. 3 > 4 > 1 > 6 memiliki aktivitas penghambatan yang lebih baik terhadap sel A549 / Taxol daripada paclitaxel
(IC50 = 1,80 μM). Senyawa aktif ini termasuk dalam triterpenoid tipe cucurbitane (1, 3, dan 4) dan 2- (2-feniletil) chr-
omone (6). Hasil ini sesuai dengan yang dilaporkan dalam literatur bahwa triterpenoid tipe cucurbitane ditemukan
sebagai konstituen utama yang berkontribusi terhadap aktivitas sitotoksik pada buah dan kulit A. sinensis

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Kesimpulan
• fraksinasi dan pemurnian yang dipandu oleh bioassay digunakan untuk mengisolasi senyawa
sitotoksik dari ekstrak bunga A. sinensis. Ekstrak kasar menunjukkan aktivitas penghambatan yang
signifikan terhadap 16 garis sel kanker dengan aktivitas paling signifikan terhadap kanker paru-paru
SPC-A-1, NCI-H520, dan A549.
• semua fraksi, subfraksi, dan senyawa murni diskrining aktivitas sitotoksiknya terhadap kanker paru-
paru SPC-A-1, NCI-H520, A549, dan A549/Taxol cell lines dan sel epitel bronkial manusia normal
BEAS-2B.
• Dari semua senyawa yang diidentifikasi, enyawa 1, 3, 4, dan 6 menunjukkan aktivitas sitotoksisitas
yang signifikan terhadap keempat garis sel kanker paru-paru manusia. Keempat senyawa aktif,
dengan kekuatan aktivitas 3 > 4 > 1 > 6, memiliki aktivitas penghambatan yang lebih baik terhadap
sel A549 / Taxol daripada paclitaxel

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Jurnal 3

Bioassay-Guided Isolation and HPLC

Quantification of Antiproliferative
Metabolites from Stahlianthus thorelii

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
 Pendahuluan

Stahlianthus thorelii
Diteliti fitokimia dan
Gagnep. telah digunakan
bioaktivitasnya, yang
untuk mengobati penyakit
menunjukkan aktivitas
yang berhubungan
dengan peradangan,
antikanker, antimikroba dan
bisul, dan kanker antiinflamasi yang
signifikan

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Metode

Metode kuantifikasi HPLC-UV

Senyawa utama dan senyawa aktif dikuantifikasi dengan HPLC-UV. Penelitian ini
mempresentasikan isolasi potensi antiproliferasi kalkon baru dan turunan flavonoid yang
telah diketahui dari S. thorelii. Metode HPLC sederhana, akurat, dan cepat yang telah
divalidasi dapat digunakan untuk kontrol kualitas obat herbal.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Hasil
• Isolasi Konstituen Kimia yang Dipandu Bioaktivitas

SF3, SF7, dan SF9 menunjukkan penghambatan proliferasi adenokarsinoma kolon manusia (WiDr) dengan nilai IC 50 =
43,42, 25,49, dan 20,04 µg/mL, secara berurutan (Tabel 1). Selain itu, SF7 dan SF9 juga menunjukkan aktivitas
antiproliferasi pada sel A549, MCF-7, dan HepG2. SF3 difraksinasi menjadi subfraksi sederhana; dan SF 3.5 dan SF 3.6
memiliki aktivitas antiproliferasi yang sama pada sel WiDr.
Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi
UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 • Evaluasi Potensi Antikanker dari Senyawa Terisolasi

sitotoksisitas senyawa 1-6 diuji pada empat garis sel kanker (A549, WiDr, HepG2, dan MCF-7)
dengan uji MTT. Senyawa 1 dan 3 menunjukkan aktivitas sitotoksik yang lebih kuat pada sel
A549, WiDr, dan HepG2, karena memiliki struktur kalkon.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
• Validasi Metode Analisis HPLC-UV

Metode HPLC-UV divalidasi dalam hal analisis

kesesuaian sistem, spesifisitas, presisi, akurasi,
linearitas, dan batas deteksi dan kuantifikasi. Batas
deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ) ditentukan
dengan menghitungnya masing- masing sebagai tiga
dan 10 kali intensitas kebisingan awal. LOD dan LOQ
senyawa 4 masing-masing adalah 0,05 dan 0,17 µg /
mL, dan LOD dan LOQ senyawa 3 adalah 0,025 dan
0,08 µg/mL, masing-masing.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 Kesimmpulan
• Kandungan senyawa utama dalam S. thorelii ditentukan secara bersamaan dengan data HPLC-UV yang
sederhana, akurat, dan cepat.
• Senyawa 3, senyawa antikanker yang paling kuat yang diisolasi, bersama dengan isolat utama yang
dihasilkan, senyawa 4 [(+)-Crotepoxide], dipilih sebagai penanda analitik spesies ini.
• menyimpulkan bahwa kandungan penanda analitik ini cocok untuk membandingkan tanaman berjudul
yang dikumpulkan di beberapa daerah. Disarankan agar metode yang telah divalidasi ini dapat
diterapkan untuk kontrol kualitas obat herbal ini di masa depan.

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id
farmasi.ump.ac.id
 TERIMAKASIH

Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi Fakultas Farmasi

UMP UMP UMP UMP farmasi.ump.ac.id