OLEH :

KELOMPOK 6

Asam amino yang merupakan monomer (satuan

pembentuk) protein adalah suatu senyawa yang
mempunyai dua gugus fungsi yaitu gugus amino dan
gugus karboksil.
Rumus struktur asam amino :

UJI KUALITATIF ASAM AMINO

1. Tes millon
3 ml larutan protein (albumin, alanin, asam aspartat)
dimasukkan di dalam tabung reaksi yang berbeda dan masingmasing ditambahkan 5 tetes reagen Millon. Diamati
perubahan yang terjadi sebelum pemanasan dan sesudah
pemanasan. Kemudian ditambahkan reagen Millon secara
berlebih dan diamati kembali perubahan yang terjadi.

2. Tes Ninhidrin
3 mL larutan protein (albumin, alanin, threonin, glisin)
dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berbeda,
kemudian ditambahkan dengan 0,5 mL larutan ninhydrin 0,
1% dan diamati perubahan yang terjadi.
Kemudian
dipanaskan hingga mendidih, dan diamati perubahan yang
terjadi.

3. Tes Sistein
Beberapa kristal sisstein hidroklorida dilarutkan ke
dalam 5 mL aquadest, diamati perubahan yang
terjadi. Kemudian ditambahkan 0,5 mL natrium
nitroprussida 1 %, diamati kembali, selanjutnya
ditambahkan 0,5 ml larutan NH3, diamati perubahan
yang terjadi

4. Tes Sistin
Sedikit Sistin dilarutkan dalam 5 mL NaOH 1 M,
diamati perubahan yang terjadi. Kemudian
ditambahkan beberapa kristal Pb-Asetat, diamati
kembali. Setelah itu dipanaskan hingga mendidih,
kemudian diamati perubahan yang terjadi.

5. Uji Xanthoproteat
Uji Xanthoproteat menggunakan 2 ml larutan protein yang ditambahkan 1
ml HNO3 pekat,lalu dicampurkan dan dipanaskan selama 5 menit. Kemudian
didinginkan dan ditambahkan NaOH pekat sampai larutan menjadi basa dan
terjadi perubahan warna. Uji ini dilakukan pada larutan albumin 2%,kasein
2%, gelatin 2%, pepton 2%, dan fenol 2%. Uji yang terakhir adalah Uji Biuret
yang menggunakan 3 ml larutan protein lalu ditambahkan ke dalam 1 ml
NaOH 10 % dan dikocok. Setelah itu ditambahkan 1 tetes larutan
CuSO4 dan kocok kembali jika tidak timbul warna. Uji ini dilakukan pada
larutan albumin 2%, kasein 2%, gelatin 2%, dan pepton 2%.

6. Uji Belerang
Uji belerang dilakukan untuk mengetahui apakah didalam bahan-bahan
tersebut terdapat asam amino sistein atau tidak.
Berdasarkan hasil
pengamatan didapatkan bahan-bahan yang positif terhadap uji ini adalah
senyawa albumin. Sistein merupakan asam amino yang mengandung atom S
pada molekulnya. Reaksi yang positif ditandai oleh adanya endapan garam
PbS berwarna abu-abu/kehitaman. Hal ini karena adanya reaksi antara Pbasetat dengan asam-asam amino tersebut. Penambahan NaOH dalam hal ini
adalah untuk mendenaturasikan protein sehingga ikatan yang menghubungkan
atom S dapat terputus oleh Pb-asetat membentuk PbS.

6. Uji Hopkins-Cole
Pada uji ini positif ditunjukkan oleh albumin, gelatin,
kasein, dan pepton, dengan ditunjukkan oleh adanya cincin
berwarna ungu. Uji ini spesifik untuk protein yang
mengandung Triptofan. Triptofan akan berkondensasi dengan
aldehid bila ada asam kuat sehngga membentuk cincin
berwarna ungu.
Cara kerjanya: ke dalam 2 ml larutan protein tambahkan 2
ml reagen Hopkins-Cole. Tambahkan sedikit demi sedikit kirakira 5 ml H2SO4 pekat melalui sisi tabung. Amati warna yang
terbentuk pada pertemuan kedua cairan. Jika perlu putar
perlahan-lahan tabung tersebut, sampai terbentuk cincin
berwarna.

UJI KUANTITATIF ASAM AMINO

1. Metode HPLC
Sampel sebanyak 20 mg dilarutkan dalam 50 L larutan fase
gerak (metanol-air) dimana 0,1 L metanol-air (70:30) dan 0,5
L metanol-air (60:40) dicampurkan dan di tambahkan dengan
flash volumetri sampai 50 mL. 5 L dari larutan kemudian
diinjeksikan ke dalam kolom dan dilakukan pengukuran.

2. Metode Spektrofotometri
Larutan standar (metanol) disiapkan kemudian dibuat
dalam beberapa konsentrasi yaitu 20, 30, 40, 50, 60 g L
kemudian kurva dikalibrasi pada panjang gelombang =262,
=212, =240. Sampel sebanyak 12,5 mg dilarutkan dalam 25
mL metanol. Kemudian diambil sebanyak 1 mL larutan dan
diukur absorbansinya.

3. Metode Asidimetri
Sampel sebanyak 0,04 gram dilarutkan dalam
campuran asam asetat glacial 5 L dan 2 L asam asetat
anhidrat dan dititrasi dengan 0,1 MolL dari asam
perklorik yang menghasilkan krital ungu.

TERIMA KASIH