LAPORAN PRAKTIKUM KULTUR JARINGAN

INDUKSI KALUS WORTEL (Daucus carota L.) MENGGUNAKAN ASAM 2,4DIKLOROFENOKSIASETAT (2,4 D) SEBAGAI ZAT PENGATUR TUMBUH
CARROT (Daucus carota L.) CALLUS INDUCTION USING 2,4DICHLOROPHENOXYACETIC ACID (2,4 D) AS PLANT GROWTH
REGULATOR

Korektor : Ratna Yuliani, M.Biotech.St

Oleh:
NORMAIDAH
K100110129

Kelas/Kelompok A.3

LABORATORIUM KULTUR JARINGAN

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
2014

INDUKSI KALUS WORTEL (Daucus carota L.) MENGGUNAKAN ASAM 2,4DIKLOROFENOKSIASETAT (2,4 D) SEBAGAI ZAT PENGATUR TUMBUH
CARROT (Daucus carota L.) CALLUS INDUCTION USING 2,4DICHLOROPHENOXYACETIC ACID (2,4 D) AS PLANT GROWTH
REGULATOR

NORMAIDAH (K 100110129)
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Jalan Ahmad Yani, Tromol Pos I, Pabelan Kartasura, Surakarta 57102

Abstrak
Wortel merupakan salah satu tanaman yang kaya akan beta karoten dan
vitamin A. Induksi kalus in vitro diharapkan mampu membantu petani wortel dalam
mengembangkan jumlah wortel. Digunakan media Murashige-Skoog (MS) steril
yang mengandung ZPT 2,4 D 0,1 mg/L. 15 kultur eksplan yang berasal dari embrio
somatik. Pada percobaan ini 3 kultur mengalami kontaminasi jamur, 12 kultur
mengalami kontaminasi bakteri dengan 3 di antaranya mengalami pemucatan dan 9
mengalami pencoklatan.
Kata kunci : wortel; 2,4 D; Murashige-Skoog (MS); induksi kalus.

Abstract
Carrots are one of the plants that are rich in beta carotene and vitamin A. In
vitro callus induction is expected to assist farmers in developing a number of carrots
carrots. Murashige-Skoog medium used (MS) containing sterile PGR 2,4 D 0.1 mg /
L. 15 explant cultures derived from somatic embryos. In this experiment 3 culture
fungal contamination, bacterial contamination of culture 12 with 3 of them have
experienced bleaching and 9 browning.
Keywords: carrot; 2.4 D; Murashige-Skoog (MS); callus induction.

menurunkan kolesterol darah, dan

PENDAHULUAN
Wortel (Daucus carota L.)
merupakan

terpopuler

Tim Peneliti karena mengandung

kedua setelah kentang. Memiliki

vitamin A dan beta karoten yang

massa tumbuh 12-24 bulan. Dapat

tingg (Anonim, 2014).

digunakan

tanaman

mencegah kanker (Cahyono, 2002 cit

untuk

mengobati

hipertensi, mencegah rabun jauh,

Induksi kalus dengan cara

kultur in vitro pada tanaman wortel

dilakukan

untuk

memperbanyak

a. Persiapan Media Murashige-

kuantitas dari wortel dengan massa

Skoog (MS)

tanam yang lebih pendek.

Dibuat media sebanyak 150

Daiharapkan

metode

dalam

mL. Dilarutkan sukrosa 30 g/L,

percobaan ini dapat membantu para

makro nutrien 7,5 mL, mikro

petani dalam perkebunannya.

nutrien 0,75 mL, suplemen

organik 0,75 mL, sumber besi

METODOLOGI

0,75 mL, myo-inositol 100

1. Alat

mg/L, dan ZPT 2,4 D 0,1

Dalam percobaan ini digunakan

mg/L.

magnetic

homogen,

stirrer,

cvcvcvcawan

Sambil

menunggu

Agar

g/L

petri steril, scalpel dan pisau steril,

dilarutkan ke dalam akudes

forsep steril, bunsen, dan laminar

sampai

melarut

sempurna

air flow (LAF).

dengan

bantuan

microwave.

Setelah kedua larutan terlarut

2. Bahan
Bahan yang digunakan adalah

sempurna, kemudian keduanya

bagian embrio somatik wortel

dicampurkan dan ditambahkan

impor segar yang diperoleh dari

akuades

Carrefour

media

dengan ph 5,9-6,0. Dituangkan

steril

ke dalam 15 botol media

yang mengandung ZPT 2,4 D 0,1

dengan masing-masing volume

mg/L,

sebanyak 10 mL. Ditutup mulut

Pabelan,

Murashige-Skoog

etanol

(MS)

70%,

pemutih,

akuades, dan akuades steril.

sampai

150

mL

botol dengan aluminium foil

sebanyak 2 lapis dan diberi
label. Disterilisasikan media ke

3. Cara Kerja
Prosedur percobaan ini mengacu

dalam autoklaf bersuhu 1210C

pada Buku Petunjuk Praktikum

selama 20 menit.

Kultur Jaringan dari

Farmasi
Muhammadiyah
(Yuliani, 2014)

Fakultas

b. Sterilisasi Peralatan

Universitas

Cawan

petri,

skalpel,

Surakarta

forsep

dibungkus

dan

dengan

kertas. Akuades dimasukkan

sebanyak 500 mL ke dalam

bagian dalam. Ditanam eksplan

Erlenmeyer 500 mL kemudian

kedalam media. Disimpan

mulutnya

media pada ruangan yang telah

ditutup

dengan

aluminium foil sebanyak 2

diatur suhunya. Dilakukan

lapis. 2 tempat selai ditutup

pengamatan per minggu setelah

mulutnya dengan aluminium

pengkulturan.

foil sebanyak 2 lapis. Semua

peralatan

disterilisasi

dalam

HASIL DAN PEMBAHASAN

oven bersuhu 1700C selama 1

jam.
c. Persiapan

Pada pengamatan setelah satu

minggu pengkulturan, semua kultur

Induksi

Kalus

terdapat kontaminasi, baik itu dari

Wortel

bakteri maupun dari jamur. Hanya 4

Laminar air flow (LAF), media

kultur yang mengalami respon berupa

MS dengan 2,4 D 0,1 mg/L

pembesaran volume eksplan. Data

steril, peralatan yang telah

hasil pengamatan dapat di lihat pada

disterilkan, dan pisau dalam

table

kemasan steril disiapkan.

pertama.

Wortel dicuci bersih dan

hasil

pengamatan

minggu

Pada minggu kedua setelah

dikupas kulitnya, dipotong

pengamatan, kultur yang mengalami

bagian atas dan bawah, dicuci

respon berupa pembesaran meningkat

bersih. Dipotong sebanyak 4

total sebanyak 7 kultur. Namun pada

bagian. Digojog ke dalam

kultur no 14 tidak mengalami respon

pemutih selama maksimal 10

pertumbuhan lagi. Data pengamatan

menit. Dipindahkan wortel

minggu kedua dapat dilihat pada table

yang telah disterilkan ke dalam

hasil pengamatan minggu kedua.

wadah selai di dalam LAF.

Dibilas dengan akuades steril
sebanyak 3 kali. Dipindahkan
ke dalam cawan petri steril,
diambil bagian embrio somatik
yang berada di tengah wortel

Tabel hasil pengamatan minggu pertama

No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15

Respon
Ya
Tidak
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V

Kontaminasi
Ya
Tidak
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
-

Keterangan
Kontaminasi bakteri
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri
Kontaminasi bakteri
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri
Kontaminasi jamur + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + pucat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi jamur + coklat
Kontaminasi bakteri + pucat

Tabel hasil pengamatan minggu kedua

No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15

Respon
Ya
Tidak
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V

Kontaminasi
Ya
Tidak
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
-

Keterangan
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + pucat
Kontaminasi bakteri + pucat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi jamur + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi bakteri + coklat
Kontaminasi jamur + coklat
Kontaminasi jamur + coklat
Kontaminasi bakteri + pucat

Dari gambar diatas, 3 dari 15

Dari gambar di atas, kultur

kultur (media kultur 10,13, dan 14)

media no 3, 4, dan 15 terjadi

yang dibuat terkontaminasi oleh jamur.

pemucatan pada eksplan di minggu

Semakin hari, semakin banyak jamur

kedua. Ini merupakan proses awal

yang

terjadinya

tumbuh.

Ini

dimungkinkan

browning

(pencoklatan)

karena tata letak dari media kultur jauh

yang dikarenakan oleh adanya reaksi

dari

sehingga

enzimatik dan reaksi non enzimatik

lingkungan dari kultur menjadi lembab

dari ekslannya sendiri. Kultur media

dan mudah ditumbuhi jamur walaupun

no 12 pada pengamatan minggu

suhu ruangan telah di atur. Kultur no

pertama juga mengalami pemucatan

14 mengalami kematian karena kalah

dan setelah satu minggu, tepatnya pada

saing terhadap pertumbuhan jamur di

pengamatan minggu kedua terjadi

dalam kultur. Pada minggu pertama,

pencoklatan. Namun pada kultur no 3

kultur no. 14 mengalami respon

terjadi kebalikannya. Pada pengamatan

pertumbuhan.

minggu pertama terjadi pencoklatan,

sinar

matahari,

tetapi pada pengamatan minggu kedua

terjadi pemucatan. Ini dimungkinkan

karena terjadi reaksi enzimatik yang

kedua. Media MS merupakan media

dapat

yang paling banayak digunakan dalam

mengurangi

pigmen

dari

eksplan.

kultur

jaringan

tanaman

dan

merupakan media dengan kandungan

nutrisi terlengkap sehingga sangat
cocok

untuk

tempat

tumbuh

mikroorganisme

seperti

bakteri.

Walaupun dalam pengkulturan telah

dilakukan secara aseptik dari awal
hingga

akhir,

namun

keberadaan

mikroorganisme sangat sulit untuk

dikendalikan. Kultur no 1, 5, 7, dan 9
yang

telah

mengalami

respon

pembesaran volume dapat terhambat

pertumbuhannya karena kalah saing
dalam memperebutkan nutrisi dari
media.
Pada
Holden

percobaan
(1973),

Chen

dan

mengalami

keberhasilan dalam pengkulturan kalus

wortel menggunakan ZPT 2,4 D, asam
naftalenasetat, dan tordon. Perbedaan
dari percobaan sekarang adalah pada
pH dari media. Pada percobaan Chen
dan Holden (1973) menggunakan pH
5,6,

sedangkan

pada

percobaan

sekarang pH yang digunakan sekitar 6

yang diukur menggunakan pH stik.
Pada gambar di atas, terdapat
kontaminasi oleh bakteri dan semua
terjadi

pencoklatan

pada

minggu

KESIMPULAN
Media MS yang kaya nutrisi menjadi
media

yang

pertumbuhan

sesuai
bakteri,

dengan

jamur,

dan

mempercepat pencoklatan yang dapat

menghambat pertumbuhan kalus dari
wortel.

SARAN
Perlu dilakukan pengkulturan ulang
dengan

pengukuran

media

menggunakan pH meter dan penataan

lingkungan kultur yang kondusif, serta
perlu

dilakukan

percobaan

dari

validasi
Buku

metode
Petunjuk

Praktikum Kultur Jaringan Fakultas

Farmasi UMS.

DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2014, Manfaat dan Khasiat
Buah Wortel pada Tubuh
Manusia,
http://www.gexcess.com/manfaat-dankhasiat-buah-wortel-padatubuh-manusia.html,
diakses
pada 24 Oktober 2014.
Chen, C. H., & Holden, D. J., 1973,
Differential
Morphogenetic
Responses of Carrot Callus to
Naphthaleneacetic Acid, 2,4Dichlorophenoxyacetic Acid,
and Tordon In Vitro, Proc. S.
D. Acad. SCI., 52, 67-69.
Tim

sk1/457/jbptunikompp-gdlderibamban-22814-2-babii.pdf,
diakses pada 24 Oktober 2014.

Peneliti
Unikom,
2014,
http://elib.unikom.ac.id/files/di

Yuliani, R., 2014, Buku Petunjuk

Praktikum Kultur Jaringan
Fakultas
Farmasi
UMS,
Surakarta, UMS-Press.