Reagen pemeriksaan Ferritin Serum

Metode ELISA Double Sandwich

-

Preparat antiferitin Ig G yang dikonjugasi dengan horseradish peroxidase

Larutan standar feritin.
Dibuat dengan cara
o Encerkan human ferritin 200 g/ml ke dalam air. Encerkan larutan feritin
200 g/ml ke dalam 10 l/ml dalam 0,05 mol/l larutan sodium barbitone
(yang terdiri dari 0,1 mol/l NaCl, 0,02% NaN dan BSA 5 gr/dl), pH
disesuaikan sampai pH 8 dengan menambah HCl 5 mol/l.
o Bagi dalam 200 tabung kecil, masing-masing berisi 200 l, tutup rapat
dan tahan sampai 1 tahun pada suhu 40C
o Jika akan dipakai, encerkan dengan buffer B sampai 1000 g/l dan
siapkan larutan dalam range 0,2 25 g/l (bandingkan dengan standar
WHO untuk uji serum ferritin 94/572)
Buffer A : Phosphate-buffered saline pH 7,2
Buffer B : 5 gram BSA (Bovine Serum Albumin) dalam 1 liter buffer A
Buffer C: Carbonate buffer pH 9,6
Buffer D : Citrate phosphate buffer pH 5.
Larutan substrat

Pemeriksaan Ferritin Serum

Metode ELISA Double Sandwich
1

Lapisi microtitreplate, dengan cara :

o Preparat antiferitin Ig G diencerkan dengan 2 g/ml buffer C,
tambahkan 200 l ke dalam tiap-tiap sumuran.
o Tutup dan inkubasi semalam pada suhu 40C. Kosongkan
sumuran dengan cara dibalik dan di-tapping pada handuk
kering.
o Tambahkan 200 l 0,05% BSA dalam buffer C, diamkan 30
menit dalam suhu ruangan.
o Cuci tiap sumuran dengan buffer A sampai 3x. plate dapat

2
3

disimpan sampai 1 minggu pada tempat kering dan suhu 40C

Encerkan 50 l serum pasien dengan 1 ml buffer B.
Tambahkan 200 l larutan standard dan serum pasien ke dalam tiap sumuran dalam

waktu 20 menit.
Tutup dan diamkan selama 20 menit pada suhu kamar dan jauhkan dari sinar

matahari
Kosongkan sumuran dan cuci 3x dengan buffer A.

Tambahkan 200 l preparat konjugasi antiferitin Ig G dengan horseradish peroxidase

7
8

yang sudah diencerkan, tutup dan diamkan selama 2 jam pada suhu kamar.
Cuci 3x dengan buffer A
Tambahkan 200 l larutan substrat pada tiap-tiap sumuran, inkubasi selama 30

menit.
9 Tambahkan 50 l asam sulfur 4M pada tiap-tiap sumuran untuk menghentikan reaksi
10 Tunggu 30 menit dan baca absorbannya pada 492 nm dengan microtitre plate reader,
atau ambil 200 l larutan dari tiap sumuran dan masukkan dalam 800 l air, baca
dengan fotometer.