Media Kultur
Media Kultur
jaringan adalah:
organogenesis atau
embriogenesis.
Apa perlunya?
MEDIUM KULTUR
Keberhasilan dalam teknologi serta
penggunaan metode in vitro terutama
disebabkan pengetahuan tentang
kebutuhan hara sel dan jaringan.
Pengatur tumbuh:
untuk menginduksi
pembelahan sel
Auksin : IAA,NAA &
2,4-Diklrofenoksiasetat(2,4-D).
Sitokinin : kinetin,
benziladenin(BA), 6benzilaminopurin
(BAP).
Pelengkap organik:
dapat merangsang laju
pertumbuhan sel.
GARAM-GARAM MINERAL
SUMBER KARBON
VITAMIN
AUKSIN dgunakan
untuk merangsang
pertumbuhan kalus
Level dlm eksplan
tergntung dr bgian dan
jenis tanaman
Alamiah:indole acetic
acid (IAA)
2,4dichlorophenoxyacetic
acid (2,4D)
naphthaleneaceic acid
(NAA)
SITOKININ turunan
adenin.
Sangat penting dlm
pembelahan sel dan
morfogenesis.
Kinetin diisolasi dr DNA
ikan Herring yg
diautoklaf dalm larutan
asam oleh Prof.Skoog
dr WI merangsang
pembelahan sel &
diffrensiasi sel.
-auxin - Roots
-cytokinin - Shoots
-gibberellin Cell Enlargement
-abscisic acid Plant stress hormone
-ethylene BAD!
PELENGKAP ORGANIK
PELENGKAP ORGANIK
Ekstrak Ragi
digunakan pd awal
sejarah KJT oleh White
dan Robbins
As.amino,peptida,
vitamin untuk per
tumbuhan kultur akar
Kons.0,5-2 g/l
ARANG AKTIF
pH MEDIA
Harus diatur agar
tdk mengganggu
fngsi membran sel
dan pH sitoplasma
Selain memperhati
kan kepentingan
fisiologi sel jugahrs
memperhatikan:
1.Kelarutan dr garam
garam penyusun
2.pengambilan dr zat
pengatur tumbuh.
3. Efisiensi pembeku
an agar.
Sel tanaman mem
butuhkan pH yang
sedikit asam 5,5
5,8.
Penambahan asam
amino sbg buffer
organik
Components
Murashige
Skoog
(1962)
White
(1963
Gamborg
(1968)
Nitsch
(1951)
Heller
(1953)
SchenkHildebr
andt
(1972)
Nitsch Nitsch
(1967)
Kohlenbach
Schmidt
(1975)
Knop
(1865)
134
370
720
500
250
250
400
125
185
250
Na2SO4
200
KC1
65
1,500
750
440
150
25
75
200
166
600
1,900
80
3,000
2,000
2,500
125
950
250
300
500
1,000
1,650
720
NaH2PO4 H2O
16.5
150
250
125
NH4H2PO4
300
170
125
68
250
FeSO4 7H2)
27.8
27.8
15
27.85
27.85
Na2EDTA
37.3
37.3
20
37.25
37.25
MnSO4 4H2O
22.3
0.1
10
25
25
ZnSO4 7H2O
8.6
0.5
0.1
10
10
CuSO4 5H2O
0.025
0.025
0.025
0.03
0.2
0.025
0.025
H2SO4
0.5
Fe2(SO4)3
2.5
(NH4)2SO4
MgSO4 7H2O
CaC12 2H2O
NaNO3
KNO3
Ca(NO3)2
4H2O
NH4NO3
KH2PO4
10(1H2O)
Cell yield
g dwt/1
Serpentine
mg/1
Serpentine Content
% dwt
7.6
4.6
5.2
7.6
5.1
5.4
9.3
8.9
2.3
5.0
0.8
4.4
0.5
0
1.2
0
6.6
0
10.4
2.0
0
0
0.06
0.01
0
0.02
0
0.12
0
0.12
0.09
0
0
*
IAA
=
Indole-3-acetic
acid
NAA = 1-Naphthalene acetic acid
2,4-D = 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid
Kin
=
Kinetin
BA = Benzyladenine
Tradisional
Makan waktu & biaya, misal untuk meneliti 4 faktor membutuhkan 256 treatmen
Tidak dapat ditentukan mana factor yang efeknya kecil atau tidak berefek terhadap produk
3. Faktorial sebagian
Oleh Plackett & Burmann
Setiap komponen media diuji dengan dua level yang berbeda; missal medium kontrol (yang sudah ada)
mengandung glukosa 2%, maka diujikan glukosa 1% dan 4%. Dengan metodestandar-orde maka
medium yang komponennya tujuh setidaknya harus dilakukan 8 kali treatmen.
4. Array testing
Meneliti pasangan factor, masing-masing pada tiga level yang berbeda (biasanya level kontrol, 2 x
kontrol, dan 0,5 x kontrol). Misal pasangan factor:
Preparation of Media
For example, MS medium is prepared as follows:
a. MS-Micronutrient stock solution (store in freezer)
Ingredient mg/100 ml
H3BO3 620
MnSO4 4H2O 2230
ZnSO4 7H2O 860
Na2MoO4 2H2O 25
CuSO4 5H2O 2.5
CoCl2 6H2O 2.5
b. Vitamins (store in freezer)
Vitamins mg/100 ml
Nicotinic acid 100
Thiamine HCl 1,000
Pyridoxine HCl 100
Myo-Inositol 10,000
c. Calcium chloride
CaCl2 2H2O 15 g/100 ml
d. Potassium iodide (store in amber bottle in refrigerator)
KI 75 mg/100 ml
e. 2,4-D (2.2 mM)
Dissolve 50 mg 2,4-D in 2 to 5 ml ethanol, heat slightly and gradually dilute to 100 ml with water.
(Store in refrigerator).
f.
NAA (2.8 mM)
Prepare the same as 2,4-D above.
g. Kinetin (1 mM)
Dissolve 21.5 mg of kinetin in a small volume of 0.5 N HCl by heating slightly and gradually diluting to
100 ml with distilled water. (Store in refrigerator) Similar procedures can be used for other cytokinins.