Rivew Kuliah Kultur In Vitro Tumbuhan

Uho baihaqi (B1J014031)

Kelas A
Kultur in vitro pada dasarnya adalah kultur jaringan yang merupakan teknik yang
melibatkan pembentukan sel atau kultur jaringan atau terdiferensiasi, proliferasi untuk
sejumlah generasi sel dan regenerasi tanaman berikutnya. Kemudian Pierik (1987) dan
Thorpe (2000) menggunakan istilah "kultur in vitro" untuk menggambarkan budaya
tanaman, biji, embrio, organ, eksplan, jaringan, sel-sel dan protoplas, pada media nutrisi
dalam kondisi steril. Kultur ini dimungkinkan karena sel-sel tumbuhan totipoten yang
mampu regenerasi untuk menjadi tanaman lengkap. Pertumbuhan dan perkembangan
eksplan yang sedang dibudidayakan dapat dikontrol dengan beberapa cara, misalnya
mekanisme fisiologis, PGR treatment, environmental factors, dan genotipe. Setiap jenis
PGR digunakan untuk menginduksi perkembangan eksplan tertentu.
Kultur In Vitro tumbuhan dilakukan oleh para ilmuwan untuk memenuhi beberapa
tujuan:
a. Propagasi genotipe unggul, perbanyakan dengan menggunakan vegetatif bagian
tanaman dengan metode in vitro.
b. Penggunaan kultur tanaman untuk pembuatan produk tanaman
c. Manipulasi genetik tanaman atau perbaikan tanaman, bisa diperoleh oleh:
1) Variasi Somaklonal, variasi fenotipe yang bisa spontan atau diinduksi oleh PGR
aplikasi dan perawatan lingkungan.
2) Embryo rescue, dengan membedah benih yang belum matang dan mengambil
embrio yang akan dibudidayakan, yang biasanya dilakukan untuk benih dengan
masa dormansi yang panjang.
3) In vitro selection, menerapkan kondisi stres ke dalam budaya dan mengharapkan
kalus untuk menahan.
4) Protoplast fussion, hal itu dilakukan melalui beberapa langkah; menghapus dinding
sel lalu memberikan sengatan listrik lalu yang fussion dari dua sel akan terjadi,
regenerasi menjadi sel fungsional
d. Konservasi genetik.
1) pertumbuhan normal tanaman
2) Pertumbuhan Minimal yaitu pertumbuhan ditekan, mengurangi kebutuhan nutrisi
3) Kriopreservasi yaitu menyimpan tanaman dalam nitrogen cair.
Karakteristik Kultur In Vitro Tumbuhan
1. Pada skala kecil di laboratorium
2. Semua mikroorganisme dan hama dikecualikan atau steril
3. kondisi pertumbuhan lingkungan, berkaitan dengan faktor fisik, gizi, dan hormonal
yang dioptimalkan
4. Pola normal perkembangan tanaman dapat diubah
5. Kemungkinan untuk memanipulasi pertumbuhan eksplan ini
Jenis Kultur In Vitro Tumbuhan:
1. kultur tanaman utuh: eksplan berasal dari tanaman utuh

2. Kultur Embrio: mengisolasi dan tumbuh embrio, apakah dewasa atau belum dewasa,
di media.
3. Kultur meristem: menghilangkan patogen, kloning massa tanaman, koleksi plasma
nutfah, kriopreservasi.
4. Kultur Kalus: kloning tanaman, penciptaan varian genetik, penghapusan patogen,
sumber protoplas, produksi metabolit sekunder.
5. Kultur Anther: produksi homozigot, mutasi induksi
6. Kultur sel tunggal: berasal dari sel-sel
7. Kultur protoplas: hibridisasi somatik, studi transformasi.
Jenis-jenis pertumbuhan tanaman menurut De Fossard (1977)
1. Terorganisir: Karakteristik organisasi tanaman pada organ individu dipertahankan mis
daun
2. Non-terorganisir: terorganisir de-dibedakan dan membentuk kalus
3. Non-terorganisir / Organised: Regenerasi
Pengaruh bahan tanaman pada pengembangan:
1. Genotipe, misalnya monokotil vs dycots, genotipe yang berbeda akan menghasilkan
pertumbuhan yang berbeda.
2. Umur tanaman, yang lebih tua akan memiliki pertumbuhan yang lebih lambat, karena
sebagian besar sel-sel yang sudah benar-benar dibedakan.
3. Usia jaringan atau organ, pertumbuhan tunas ketiak terbentuk baru harus berbeda
dengan cabang tua.
4. Fisiologis, misalnya vegetatif vs regeneratif
5. Kondisi kesehatan
6. Pengaruh tahun yang berbeda, pertumbuhan tanaman juga akan dipengaruhi oleh
variasi musiman, misalnya pertumbuhan di musim hujan di mana air berlimpah lebih
cepat daripada di musim kemarau.
7. Kondisi Pertumbuhan, misalnya radiasi cahaya, ketersediaan hara
8. Posisi eksplan dalam tanaman, misalnya eksplan dari kambium atau apikal apikal wil
memiliki tingkat pertumbuhan yang tinggi.
9. Ukuran eksplan, misalnya eksplan yang lebih kecil akan memiliki luas permukaan
yang lebih luas yang akan berinteraksi dengan nutrisi dalam medium.
10. Melukai, itu akan mendorong pertumbuhan sel-sel
11. Efek Metode inokulasi
12. Nurse effect
13. Persiapan
Media Pertumbuhan
The key factor in Plant In Vitro Culture, mengandung semua nutrisi yang dibutuhkan
oleh eksplan tumbuh. Sehingga harus menyediakan air, kebutuhan gizi mineral,
vitamin, zat pengatur tumbuh, akses ke atmosfer untuk pertukaran gas, pembuangan
limbah metabolit tanaman. Banyak jenis media yang akan digunakan dalam Kultur In
Vitro Tumbuhan, sehingga harus ada beberapa pertimbangan untuk memilih jenis
media yang digunakan:
1. The experimental plant
2. The age of the plant
3. The age of the organ
4. The type of organ cultured
5. Culture period

6. Case by case.
Setiap medium pertumbuhan harus berisi macronutrients (N, P, K, Ca, Mg, S),
mikronutrien (Fe, Mn, Zn, B, Cu, Mo, Co, dll), gula (umumnya digunakan sukrosa),
vitamin, PGR, dan senyawa lain misalnya arang aktif untuk mencegah browning.
PGR merupakan salah satu komponen yang paling penting, dengan PGR kita bisa
memanipulasi pertumbuhan eksplan misalnya pembentukan akar, pembentukan kalus.
Air membangun 95% dari media. Ini harus spesifik, destilasi ganda dan de-terionisasi
untuk memastikan H2O murni.
Gula juga dibutuhkan dalam medium karena Eksplan adalah heterotrofik / setengah
heterotrofik.
Banyak jenis media aleardy dirumuskan dan memiliki proporsi mereka sendiri dari
komponen media:
1. Knop (1884)
2. Knudson C (1946)
3. Heller (1953)
4. Murashige & Skoog / MS (1962) umum digunakan karena sebagian besar
tanaman memberikan respon positif.
5. Nitsch (1972)
6. Schenk & Hildebrandt / SH (1972)
7. Chu / N6 (1975/1978)
8. Gamborg / B5 (1976)

Ada 3 jenis media:

1. Solid merupakan media padat mengandung zat perkuat, digunakan untuk kultur kalus,
dan kultur embrio
2. Liquid merupakan media tanpa zat perkuat, digunakan untuk protoplast fussion and
growing planlet
3. Semi-padat sebenarnya adalah sebuah medium padat yang ditambahkan dengan air
lebih atau cair.
Support systems, memberikan struktur dalam medium untuk pertumbuhan eksplan.
Contohnya Agar atau alternatif lain. Agar polisakarida dengan massa molekul tinggi yang
memiliki kemampuan media pembentuk gel (0,6-0,8%), alternatif lain juga memiliki
karakteristik sendiri yang digunakan sebagai preferensi bagi kita untuk memilih.
Kontrol pertumbuhan tanaman pada dasarnya berasal dari genotipe dan faktor lingkungan
yang akan mempengaruhi proses fisiologis di dalam
Genotipe tersebut hanya bisa berubah dengan metode modifikasi genetik.
Sedangkan faktor lingkungan dapat diubah/ memanipulasi untuk menghasilkan
pertumbuhan tanaman yang kita inginkan:
1. Control plant development
2. Mengoptimalkan laju pertumbuhan

3. Mengoptimalkan morfologi
4. Menjaga kualitas tanaman
5. Aklimatisasi tanaman
Faktor-faktor lingkungan termasuk:
1. Radiasi cahaya (kualitas, kuantitas, siklus, dan arah)
2. Suhu
3. Komposisi Gas
4. Uap air / humiditiy
5. Gas difusivitas
6. Tekanan
Lingkungan pada media (atau lingkungan root) juga dapat mempengaruhi eksplan.
Beberapa faktor yang harus dipertimbangkan adalah konsentrasi dan soliditas media, pH,
gas-gas terlarut, ukuran tanaman, ketersediaan hara, potensi air, difusivitas komponen
menengah, kehadiran patogen, dll.
Setelah lama inkubasi di media, akan ada beberapa perubahan terjadi:
1. Genetik (somatik) variabilitas
2. Pembiasaan untuk pengatur tumbuh
3. Exhaustion of some nutrients
4. Akumulasi racun
5. perubahan fotokimia
6. perubahan pH
7. Ketersediaan air.
Teknik dasar dalam Kultur In Vitro
1. Semua bahan dan alat yang akan digunakan harus steril
2. Prosedur kerja harus dilakukan secara aseptik dalam transfer untuk mencegah
kontaminasi.
3. Berat, konsentrasi, dan pH dari komponen harus tepat.
4. Gunakan jas lab dan safety apparatus lainnya selama bekerja.
5. Tidak makan, minum, atau merokok di laboratorium
6. Menjaga kebersihan ruangan.
7. Hati-hati terjadi tumpahan dan kecelakaan di laboratorium, jika itu terjadi, segera
hubungi pihak yang lebih tau
Beberapa alat dapat digunakan untuk sterilisasi.
1. Autoclave merupakan alat sterilisasi alat dan bahan
2. Oven menggunakan sistem panas kering biasanya digunakan untuk bahan yang
sensitif tekanan
3. Antiseptic untuk area kerja