Neutrofil perangkap ekstraseluler (jaring) dan disfungsi vaskular terkait infeksi

Elizabeth E. Gardiner , Robert K. Andrews

Sistem kekebalan bawaan diatur oleh leukosit terutama neutrofil, berfungsi untuk
mengangkat sel inang mati dan sekarat dan untuk memberikan perlindungan
terhadap invasi oleh patogen. Kegagalan sistem ini mengakibatkan timbulnya
sepsis menyebabkan konsekuensi serius untuk tuan rumah. Bersama-sama dengan
metode mekanik untuk fisik mengisolasi dan menghapus patogen, neutrofil juga
merilis sebuah set penting dari modulator biologi proinflamasi yang memediasi
perekrutan sel tambahan untuk situs infeksi dan memperkuat respon pelindung
bawaan. Selain itu, neutrofil melepaskan sangat dituntut campuran DNA dan
protein nuklir bernama perangkap ekstraseluler neutrofil (jaring). Ini jaringan
perekat elektrostatis bermuatan memicu koagulasi intrinsik, membatasi dispersi
dan menjebak patogen. Nets juga mengandung protease sekretaris neutrofil granul
yang diturunkan serin, neutrofil elastase dan cathepsin G, yang dikenal untuk
mengatur reaktivitas kedua neutrofil dan trombosit. Sejak karakterisasi jaring pada
tahun 2004, studi baru dari efek fungsional mereka in vivo terus memperluas
peran ekstraseluler tak terduga untuk DNA, dan dalam melakukannya
memperbaharui perhatian pada peran hemostatik dari leukosit tersebut. Ini
reviewwill memberikan ofNETs gambaran dasar dan memeriksa pengetahuan saat
pertahanan ini systemof penting, termasuk recentwork menggambarkan peran
jaring di aktivasi trombosis.

1. Perkenalan
Pada tahun 1987 ulasannya "Mengapa alam memilih fosfat", ahli kimia terkenal
Frank H. Westheimer mencatat bagaimana fosfat, cukup unik di antara alternatif
yang masuk akal, memiliki sifat kimia untuk kovalen Link twomoieties seperti
nukleotida belum mempertahankan muatan negatif di fisiologis

pH-nya juga dianggap ulasan bagaimana muatan negatif ini bisa berkontribusi
untuk menjaga asam deoksiribonukleat (DNA) dalam membrane.1 nuklir atau
seluler

Menariknya,

temuan

oleh

Brinkmann

dkk.

pada

tahun

2004

mengungkapkan peran baru bagi DNA ekstraseluler, dalam bentuk perangkap

ekstraseluler neutrofil (jaring), sebagai mekanisme pertahanan terhadap
pathogens.2 menular Namun, jaring berbasis DNA juga dapat berkontribusi untuk
peradangan merusak atau mengganggu systemby hemostatik interferingwith
interaksi elektrostatik terlibat dalam adhesi sel atau koagulasi. Artikel terbaru
telah menyoroti bagaimana studi jaring dalam model eksperimental telah
menyediakan mekanisme baru untuk patologi terkait dengan penyakit menular dan
jalan baru yang berpotensi untuk pengobatan menargetkan neutrofil, DNA di
jaring atau proteins.3-5 terkait ini "off-target" atau efek hilir Nets memperpanjang
patologi luar defensif bakteri langsung ke sistem pembuluh darah dan penyakit
seperti trombosis, pembekuan dan inflammation.3-8 Dalam ulasan ini, kami akan
mencoba untuk memberikan gambaran dasar dari jaring dan memeriksa
bagaimana mereka berinteraksi dengan sel-sel pembuluh darah lainnya seperti
trombosit, dampak potensial terhadap neutrofil dan platelet reseptor, implikasi
klinis dan potensi relevansi sebagai biomarker untuk diagnosis atau evaluasi
pengobatan pada sepsis dan penyakit manusia lainnya.

2. jaring-struktur dan rilis

Jaring terdiri dari untai DNA berserabut menyediakan struktur jaring web-seperti,
berdasarkan pewarnaan dengan pewarna DNA-selektif, resistensi terhadap
pengobatan

protease,

dan

kepekaan

terhadap

pengobatan

dengan

deoksiribonuklease (DNAse) 0,2 jaring yang dihiasi dengan protein nuklir, seperti
kromatin atau isoform dari histon (H1, H2A, H2B, H3, H4), diidentifikasi oleh
immunostaining. Juga hadir adalah secretable protein granular neutrofil, termasuk
protease serin, neutrofil elastase dan cathepsin G, 2 yang mengatur reseptor adhesi
kunci pada neutrofil dan platelet (bawah). Apa yang tidak mudah terdeteksi di

jaring protein sitoplasma, atau bukti membran plasma, memberikan bukti penting
untuk bagaimana jaring yang dirilis cells.2,9 fromstimulated Bersama, profil
themolecular, kurangnya efek agen yang memblokir fagositosis pada NET
formasi, dan kurangnya tanda tangan penanda apoptosis pada neutrofil mampu
melepaskan jaring membantu menyingkirkan mekanisme yang melibatkan hanya
berusia atau nekrotik cells.2,5,9 Sebaliknya, bukti ini poin untuk mekanisme
ekstrusif berbeda mendasari cepat NET rilis dari sel dirangsang oleh agonis
fisiologis

yang

beredar,

atau

faktor

patogen

seperti

endotoksin

atau

lipopolisakarida (LPS) sugestif setidaknya beberapa selektivitas dalam konten

NET. Pembentukan jaring memerlukan sinyal sel, dan metode skrining inhibitor
berbasis sel telah mengidentifikasi jalur sinyal, termasuk Raf-MEK-ERK kinase,
mungkin terlibat dalam pelepasan jaring fromstimulated neutrophils.10NETs
menyediakan kerangka kerja struktural untuk melokalisasi sel dan faktor
stimulasi, dan tidak seperti bekuan fibrin, tidak rentan terhadap pathways.2,5
fibrinolitik

3. Bakteri dalam aliran darah

Kedua bakteri positif dan Gramnegative Gram yang ditemukan terkait dengan
NETs.2 Banyak jenis bakteri Gram negatif positif dan Gram menginfeksi aliran
darah manusia melalui beragam cara, termasuk trauma, infeksi kulit, prosedur
bedah atau pencemaran lingkungan, tetapi tingkat hemostatik terkait, inflamasi
atau risiko patologis lainnya pada individu juga sangat bervariasi, dan sering
diperparah oleh resistance.11,12 antibiotik bakteri Neutrofil menfagositosis,
dalam aktif, proses sitoskeleton-driven, dan membunuh mereka dengan berbagai
cara di disposal.9,13 mereka Respon cepat NET generasi kemungkinan untuk
proses ini, tapi apakah ini adalah mekanisme pembunuhan atau melibatkan
jebakan dan lokalisasi mikroba hidup, atau keduanya, tidak pasti, karena
setidaknya beberapa mikroorganisme dilaporkan tetap bertahan dalam NETs.14
Dalam hal ini , NETsmay juga menyediakan kerangka kerja untuk lokalisasi dan

mengatur interaksi antara bakteri dan trombosit, dengan konsekuensi untuk

peradangan diperburuk dan / atau bekuan formation.12,15,16 Generasi jaring oleh
neutrofil dalam menanggapi endotoksin bakteri, LPS atau faktor-faktor lain juga
bisa memperkuat interaksi dua arah antara neutrofil dan platelet (Gambar. 1).

4. neutrofil-trombosit interaksi
Neutrofil dapat mengatur fungsi platelet oleh adhesi langsung dan oleh efek
parakrin dari disekresikan faktor dan jaring cenderung meningkatkan interaksi ini.
Pada neutrofil, reseptor sialomucin PSGL-1 (P-selektin glikoprotein-ligan 1)
mengikat yang kontra-reseptor P-selektin, protein granular cepat diekspresikan
pada permukaan sel endotel diaktifkan atau diaktifkan platelets.17-20 PSGL-1
berisi sebagai situs pengakuan untuk P-selektin, sebuah anion, sulfat tirosin
mengandung urutan di N-terminus dari reseptor, QATEYEYLDYDFLPETE
(residu 1-17; Y = sulfat tirosin; residu bermuatan negatif digarisbawahi) 0,21-23
keterlibatan dari PSGL-1 mengarah ke aktivasi integrin M2, yang berikatan
dengan reseptor kontra-adhesi sel antar molekul-1 (ICAM-1) pada sel endotel
diaktifkan, atau glikoprotein Ib (GPIb) pada platelets.24 Diaktifkan neutrofil
mengeluarkan serin protease, seperti neutrofil elastase atau cathepsin G, 13 yang
mengatur PSGL-1-dimediasi adhesi P-selektin, 25 mengaktifkan trombosit dan /
atau trombosit membelah GPIb menghambat ligan binding.23,26,27 Situs
cathepsin G pembelahan (s) di GPIb berada dalam anion, sulfat urutan analog
dengan yang ditemukan di PSGL-1.23,26,27

5. trombosit-neutrofil interaksi
Pada trombosit, GPIb dinyatakan sebagai ligan mengikat subunit utama
kompleks platelet adhesi-sinyal, GPIB-IX-V, yang membentuk kompleks dengan
reseptor

kolagen

platelet,

GPVI.28,29

GPIB-IX-V

GPVI

kompleks

memungkinkan trombosit dengan cepat mematuhi dan menjadi aktif pada matriks

subendothelial terkena cedera vaskular, dengan masing-masing mengikat faktor

von Willebrand (VWF) dan kolagen,. GPIb mengikat A-jenis domain (A1) dari
VWF (homolog ke I-jenis domain di M subunit dari M2). The GPIb-VWF
interaksi disesuaikan untuk ikatan afinitas tinggi antara GPIb dan VWF-A1
sebagai geser fluida stres meningkat. Ini melibatkan perubahan konformasi dan
keselarasan situs positif dan negatif dari ligan dan reseptor untuk mendukung
adhesi trombosit di bawah kondisi geser tinggi di mengalir blood.30-32 anionik
The, urutan sulfat dari GPIb (residu 269-285) memediasi mengikat kedua Pselektin dan thrombin.23,28,33-35 GPIb sehingga menengahi interaksi platelet
dengan neutrofil (via M2), sel-sel endotel diaktifkan (melalui P-selektin) dan
trombin, serta faktor-faktor koagulasi intrinsik mengikat XII dan XI.24,28,33 ,
36,37 Dalam model murine glomerulonefritis berbasis kekebalan tubuh,
perekrutan trombosit dalam beberapa menit tergantung pada GPVI platelet tetapi
independen GPIb, sementara platelet daripada endotel P-selectinwas penting
untuk

neutrofil

recruitment.38

Namun,

kedua

trombosit

dan

neutrofil

menunjukkan saling ketergantungan untuk respon maksimal dalam model ini,

menunjukkan interaksi dua arah antara sel-sel pembuluh darah tersebut.
Trombin dapat mengaktifkan trombosit langsung dengan mengikat GPIb, 39 atau
dengan mengikat GPIb sebagai kofaktor untuk aktivasi tergantung trombin dari
G protein-coupled protease-diaktifkan reseptor, PAR-1.35 Urutan sulfat dari
GPIb mengikat ke exosite bermuatan positif (II ) pada trombin, tumpang tindih
wilayah yang mengikat trombosit heparin.40 Activated lebih mempromosikan
koagulasi dengan ekspresi phosphatidylserine pada permukaan membran,
melokalisasi kompleks prokoagulan mengarah ke trombin generation.41 Sebuah
fitur trombosit adalah kemampuan mereka untuk degranulasi cepat pada stimulasi,
dan secretome trombosit manusia mengandung faktor prokoagulan, seperti
polifosfat bermuatan negatif yang mengaktifkan FXII / FXI-dependent generasi
trombin, 18,41-45 dan sitokin dan faktor-faktor lain yang mampu mengaktifkan
neutrophils.46-48 agonis neutrofil tambahan ditemukan di sheddome platelet ,
yaitu,

protein

larut

dilepaskan

dari

trombosit

diaktifkan

oleh

metalloproteinases.49 CD40L adalah salah satu protein, 49,50 dan baru-baru ini
terbukti up-mengatur ekspresi dari M2 aktif pada neutrofil pada model tikus
dari sepsis.51 Akhirnya, peran bakteri dalam perakitan langsung faktor koagulasi
intrinsik, atau pelepasan polifosfat bakteri, juga dapat mengubah keseimbangan
normal dari sistem koagulasi di pathology.41 penyakit

6. Heparin
Heparin adalah sangat sulfat alami glikosaminoglikan sering diberikan sebagai
antikoagulan. Modus kerjanya terutama dengan mengikat / mengaktifkan
antitrombin III, tetapi memiliki banyak interaksi lainnya. Heparin, polyanion, juga
mengikat daerah positivelycharged dari P-selectin52 dan VWF A1-domain, 53 dan
blok interaksi histon bermuatan positif dengan platelets.5 Dengan cara ini, efek
antikoagulan heparin pada menghambat trombin / faktor Xa, juga bisa melibatkan
mengikat histon kationik dalam jaring, sehingga mengurangi efek prokoagulan
trombosit-dimediasi.

7. Histones
Nets bisa meningkatkan aktivitas protein yang terkait seperti histon, dengan
menghadirkan beberapa molekul bersama untai DNA menciptakan ligan
multivalent. Dibandingkan dengan histone terisolasi sendirian, kompleks histone /
DNA adalah aktivator kuat trombosit manusia (melalui interaksi dengan tolseperti reseptor-2 dan -4), dan menyebabkan percepatan generasi trombin dan
coagulation.54,55 Histones juga berinteraksi dengan A1-domain dari VWF.56
manusia Sementara dimurnikan histone memiliki efek minimal terhadap VWF
mengikat platelet GPIb dalam kondisi statis, efek pada VWF bisa relevan pada
laju geser tinggi, dan ketika histone disajikan dalam kompleks makromolekul
dengan DNA, atau jika histone VWF -associated dalam jaring melokalisasi adhesi
platelet GPIb-dimediasi. Histon dalam jaring menginduksi sitotoksisitas sel

endotel, 57 sementara jaring yang terdeteksi dalam plasma dari model murine
aterosklerosis, 58 dan secara tidak langsung dapat mempromosikan trombosis
dengan meningkatkan kerusakan pembuluh darah.

8. jaring dan trombosis

Studi tentang peran jaring dalam model eksperimental deep vein thrombosis
(DVT) memberikan informasi baru tentang inisiasi dan perkembangan
pembentukan gumpalan dan dampak spesifik NETs.7,8 Dalam satu model,
trombus vena mengandung citrullinated histone H3,7 tanda tangan administrasi
NETs.59 intravena histon eksogen dipercepat pembentukan bekuan, sedangkan
sebaliknya, DNase signifikan menunda timbulnya DVT. Studi tersebut pada tikus,
6-8 serta studi klinis yang menghubungkan risiko trombosis vena untuk jumlah
leukosit tinggi, 60,61 dukungan itu, peran awal yang penting untuk neutrofil di
trombosis vena, yang sebelum timbulnya coagulation.4
Vena dan pembentukan trombus arteri berbeda dalam tingkat geser (shear rate
arteri mungkin sampai ~ 100 kali lipat lebih tinggi dari sirkulasi vena, atau lebih
dari 1000 kali lipat lebih tinggi di pembuluh pulmonalis) 0,62-64 Perbedaan
rheologi bisa menjelaskan mengapa ada adalah peran yang lebih menonjol untuk
trombosit (dan GPIb) di arteri (kaya platelet "putih" trombus), daripada di
pembekuan vena (kaya eritrosit "merah" trombus). Dalam model DVT, histon dan
DNA didominasi di daerah daripada kaya platelet-kaya eritrosit dari thrombus.7
Dalam kondisi rendah-geser, stasis atau gangguan lokal dari aliran darah,
dikombinasikan dengan aktivasi sel endotel, juga dapat memulai ekstrinsik
(factordependent jaringan) koagulasi. Asosiasi faktor jaringan dengan jaring bisa
menargetkan generasi trombin dan fibrin bekuan pembentukan di situs aktivasi
infeksi / neutrofil, 8 dengan trombin aktif yang menyebabkan aktivasi trombosit
meningkat.

9. lebih luas NET patologi

NET produksi juga bisa berkontribusi untuk situasi patologis potensial lainnya,
misalnya dalam pengaturan dari prothrombotic merugikan reaksi obat, heparininduced trombositopenia (HIT), dalam memicu microangiopathies trombotik, dan
cedera paru akut transfusi terkait (trali). Di HIT, faktor trombosit imunogenik (PF)
kompleks 4 / heparin memulai produksi anti-PF4 / heparin antibodi, dan kompleks
imun

memicu

aktivasi

melalui

keterlibatan

imun

kompleks

FcRIIa

receptors.65,66,67 Situasi ini dapat berkembang menjadi thrombosis meskipun

penghapusan segera heparin sekali HIT diduga dalam individu, sebagai jumlah
trombosit kembali normal tetapi antibodi patologis berlanjut. Satu penjelasan yang
mungkin untuk perkembangan penyakit dengan tidak adanya heparin adalah
bahwa makromolekul polyanion lain seperti polisakarida sulfat pada permukaan
bacteria65 atau DNA / jaring dapat menggantikan heparin dan mengikat PF4
membentuk kompleks antigen. Yang penting, HIT sangat umum dalam pengaturan
inflamasi pada individu yang menderita trauma atau sepsis, situasi di mana
beredar kompleks protein DNA dan histon telah terbukti sangat elevated.68
Demikian pula, infeksi ringan sering mendahului mikroangiopati trombotik akut
dan DNA ekstraseluler dan histon dirilis selama respon inflamasi bisa
memberikan pukulan kedua, yang mengendap microangiopathy trombotik akut
pada pasien dengan risiko factors.69 jaring yang sudah ada yang terdeteksi di
paru-paru dan sirkulasi pasien trali dan perlindungan dari efek akut trali dicapai
pada model binatang dari trali dengan memblokir NET formation70,71 dan
activation.71 trombosit

10. Kesimpulan: saat ini dan masa depan perawatan dan jaring sebagai biomarker?
Risiko tromboemboli vena (VTE), termasuk DVT dan emboli paru, pada pasien
rawat inap meningkat dengan imobilitas, stasis vena, obesitas, peradangan,
keganasan aktif, atau mewarisi states.4 pengobatan sekarang prothrombotic
sebagian besar menargetkan koagulasi melalui penggunaan heparin atau yang

derivatif, atau warfarin. Berdasarkan studi dari jaring, terapi baru berpotensi
menargetkan jalur aktivasi neutrofil yang mengarah ke jaring, destabilisasi jaring
berdasarkan kepekaan terhadap DNAse, disekresikan protease dan / atau faktor
nuklir

seperti

histones.2,5-7,10

berdasarkan

kemampuan

heparin

untuk

menghambat interaksi histone, dan penggunaan aptamers DNA atau RNA untuk
selektif menargetkan PAR-1 atau heparin / GPIb mengikat exosites pada trombin
sebagai strategi antikoagulan reversibel, 72,73 mengganggu interaksi elektrostatik
terjadi dalam jaring menggunakan pendekatan ini bisa layak. Pengembangan
lanjutan dari pengukuran yang dapat diandalkan, direproduksi dan standar
fragmen DNA dan histon dalam darah melalui peningkatan assay enzymelinked
immunosorbent,

kuantitatif

polymerase

chain

reaction,

dan

pendekatan

fluorimetric akan membantu pengambilan keputusan klinis, menilai saat NET

intervensi akan paling bermanfaat untuk pengobatan penyakit manusia . Yang juga
diperlukan adalah analisis biokimia untuk mendefinisikan situs interaktif, efek
ofNET-asosiasi pada fungsi histon, VWF, faktor jaringan dan patogen / sel
pembuluh darah, dan pemahaman yang lebih baik tentang bagaimana pengamatan
dalam model eksperimental digunakan untuk tanggal berkorelasi dengan manusia
penyakit. Adapun pembentukan kompleks patologis-HIT terkait, 74 stoikiometri
komponen jaring, trombosit / neutrofil dan koagulasi faktor kemungkinan menjadi
penting dalam menentukan tingkat patogenisitas pada individu. Peningkatan kadar
bahan nuklir beredar dalam plasma dari pasien dengan kanker, infark miokard,
trauma, stroke, infeksi atau penyakit autoimun, yang dihasilkan dari produksi
sitotoksisitas jaring, atau causes.67 Penelitian lebih lanjut yang berpotensi lainnya
trombosis manusia dijamin, tidak hanya untuk memvalidasi target terapi tetapi
juga untuk mengevaluasi neutrofil / jaring protein sebagai biomarker, selama
perkembangan penyakit atau respon terhadap pengobatan dalam kaitannya dengan
perubahan temporal dalam koagulasi, platelet-aktivasi dan spidol lainnya.