LAPORAN PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI VIROLOGI
PEWARNAAN VIRUS

Disusun Oleh :
Novita Adhariani

( 19133880A )

Maria Kusumawati ( 19133890A )

Prasdian Nur Choiri ( 19133891A )
Aprilia Saputri

( 19133892A )

Teori 3 F

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SETIA BUDI
SURAKARTA
2015

I.

JUDUL
Pewarnaan virus

II.

TUJUAN
Melakukan pemeriksaan virus rabies dan vaccinia secara mikroskopis.

III.

DASAR TEORI
Virologi adalah suatu ilmu yang mempelajari tentang virus dan penyakitpenyakit yang disebabkannya. Virus adalah suatu jasad hidup terkecil (20-300 nm)
terdiri dari suatu inti yang tersusun dari asam nukleat yaitu Ribo Nucleic Acid
(RNA) atau Deoxy Ribo Nucleic acid (DNA) dan dikelilingi loeh suatu capsid yang
terdiri dari protein.
Virus merupakan parasit obligat intraseluluer yang akan berkembang biak di
dalam tubuh inang dan jika di luar tubuh akan inaktif.
jika virus memasuki sel hidup maka akan terjadi :
1

Membentuk inclution bodies (badan inklusi) yang letaknya bisa dalam sitoplasma
sel atau dalam inti sel atau dalam sitoplasma dan inti sel tergantung dari jenis
virusnya.

Merangsang sel yang dimasuki untuk membentuk suatu zat yang disebut
interferon.

Interferon

mempunyai

daya

mencegah

pemasukan

dan

perkembangbiakan virus lain meskipun virus kedua adalah virus yang sejenis.
3

Sel akan mengalami kemunduran atau degenerasi dalam metabolisme oleh

karena virus merubah metabolisme untuk membentuk virus baru yang akan
menuju ke arah kematian sel

Sel akan mengalami perubahan bentuk atau transformasi yang menjurus ke arah
pembentukan tumor (pembengkakan)

Sel yang tanpa mengalami transformasi ataupun degenerasi, akan membentuk

komponen baru yang diperlukan untuk pembentukan virus baru.

Sel dapat mengalami perubahan yang disebut cytopathogenic effect (CPE)

yaitu mula-mula sel berbentuk kumparan berinti,kemudian virus masuk ke

dalam sel tersebut, maka sel berubah menjadi bulat berkelompok dan intinya
menjadi besar, struktur inti menjadi kasar dan intinya kelihatan menjadi lebih
gelap bila dilihat di bawah mikroskop.
Hal ini merupkan tanda bahwa virus tersebut hidup di dalam sel tadi
Berbeda dengan mikroorganisme lain,virus tak dapat tumbuh dan berkembangbiak
pada media mati.pertumbuhan dan perkembangannya memerlukan sel hidup. Hal ini
karena komponen virus dibuat dengan bantuan peralatan sel hospes/penjamu yang
diserangnya. Karena itu virus merupakan parasit obligat intra sel.Pembentukan
komponen virus tersebut dimungkinkan karena virus yang merupakan parasit pada
tingkat genetis,setelah menginfeksi sel,genomnya akan mempengaruhi kontrol
mekanisme sintetik sel hospes.
Tubuh virus terdiri atas: kepala , kulit (selubung atau kapsid), isi tubuh, dan
serabut ekor. Gambar dan Penjelasannya sebagai berikut:

a. Kepala
Kepala virus berisi DNA dan bagian luarnya diselubungi kapsid.
b. Kapsid
Kapsid adalah selubung yang berupa protein, Kapsid terdiri atas bagian bagian yang disebut kapsomer, misalnya,kapsid pada TMV dapat terdiri atas satu
rantai polipeptida yang tersusun atas 2.100 kapsomer. Kapsid juga dapat terdiri
dari protein - protein monomer identik, yang masing - masing terdiri dari rantai
polipeptida.

c. Isi tubuh
isi tubuh yang kering disebut virion adalah bahan genetik yakni asam
nukleat (DNA atau RNA), contohnya sebagai berikut:
d. Virus yang isi tubuhnya RNA dan bentuknya menyerupai kubus antara lain, virus
polyomyelitis, virus radang mulut dan kuku, dan virus influenza.
e. Virus yang isi tubuhnya RNA, protein, lipida, dan polisakarida, contohnya para
mixovirus.
f. Virus yang isi tubuhnya terdiri atas RNA, protein dan banyak lipida, contohnya
virus cacar.
g. Ekor
Ekor virus merupakan alat penancap ketubuh organisme yang diserangnya.
Ekor virus terdiri atas tabung bersumbat yang dilengkapi benang / serabut.
pada virus dijumpai asam nukleat yang diselubungi kapsid , disebut
nukleokapsid , ada dua macam :
h. Nukleokapsid yang telanjang, misalnya TMV, Adenovirus, dan virus kutil (warzer
virus).
i. Nukleokapsid yang diselubungi suatu membran pembungkus, misalnya pada virus
influenza dan virus herpes.
Pembuatan vaksin
Contoh kasus pada akhir tahun 1700,Edward Jenner seorang dokter asal

Inggris mengetahui dari pasien-pasien di pedesaan bahwa para pemerah susu yang
telah terkena acar sapi (penyakit ringan yang menginfeksi sapi) ternyata resisten
terhadap infeksi cacar sesudahnya. Dalam percobaannya, Jenner menggoreskan
jarum yang mengandung cairan dari luka seorang pemerah sapi yang telah terkena
cacar sapi ke seorang anak laki-laki. Anak tersebut ternyata resisten terhadap wabah
cacar. Virus cacar sapi dengan virus cacar sangat mirip sehingga sistem imun tidak
dapat membedakan adanya partikel asing. Selain vaksin cacar juga sudah ditemukan
vaksin lainnya, misalnya vaksin polio, vaksin rubela, vaksin campak dan vaksin
gondongan.

Rabies atau penyakit anjing gila adalah penyakit hewan yang disebabkan oleh
virus, bersifat akut serta menyerang susunan syaraf pusat hewan berdarah panas dan
manusia. Rabies bersifat zoonosa artinya penyakit tersebut dapat menular dari hewan
ke manusia dengan gejala yang sangat memilukan. Virus Rabies dikeluarkan bersama
air liur hewan yang terinfeksi dan disebabkan melalui gigitan atau jilatan.
Virus Rabies masuk ke dalam tubuh manusia atau hewan melalui :
a. Luka gigitan hewan penderita Rabies
b. Luka yang terkena air liur hewan atau manusia penderita Rabies
Tipe Rabies
Rabies Ganas :

Tidak menuruti lagi perintah pemilik

Air liur keluar berlebihan

Hewan menjaadi ganas, menyerang atau menggigit apa saja yang ditemui dan
ekor dilengkungkan ke bawah perut di antara dua paha

Kejang-kejang kemudian lumpuh, biasanya mati setelah 4 sampai 7 hari sejak

timbul gejala atau paling lama 12 hari setelah penggigitan
Rabies Tenang :

Bersembunyi di tempat gelap dan sejuk

Kejang-kejang berlangsung singkat bahkan sering tidak terlihat

Kelumpuhan, tidak mampu menelan, mulut terbuka dan air liur keluar
berlebihan

Kematian terjadi dalam waktu singkat

Perubahan umumnya terjadi di susunan syaraf pusat. Pada selaput otak tampak

padat dan biasanya ditemukan adanya oedema. Pada hewan yang terkena Rabies
apabila dibuka di daerah perut biasanya ditemukan benda asing seperrti kayu, batu
atau sepotong logam. Sedangkan dilihat di bawah mikroskop akan ditemukan

cytoplasmic inclusion bodies (Negri bodies) pada sel-sel syaraf. Pada umumnya
banyak ditemukan di dalam hypocampus tetapi kadang-kadang juga ditemukan di
ganglia.
Diagnosa Laboratorium
Rabies dapat didiagnosa melalui tanda-tanda klinis pada hewan yang terjadi di
lapangan dan melalui pemeriksaan laboratoris dengan memeriksa spesimen. Cara
yang paling sederhana untuk menentukan Rabies secara laboratorium adalah dengan
menemukan Negri bodies (typical inclusion bodies) pada preparat ulas jaringan
otak(hypocampus) yang telah diwarnai dengan pewarnaan Sellers.
prinsipnya sampel diletakkan di atas object glass lalu dihapuskan dengan
object glass lain (deep preparat), lalu difiksasi dengan menggunakan metanol,
kemudian diwarnai dengan pewarnaan Sellers dan diamati dengan menggunakan
mikroskop perbesaran 100x adanya Negri bodies.
Penyakit Cacar
Cacar adalah infeksi virus yang terdapat di seluruh dunia, dengan
kecenderungan untuk menyebar sebagai epidemi, tetapi terutama dijumpai di daerah
tropis dan subtropis. Pada saat ini penyakit cacar sudah dapat diberantas dan dunia
dinyatakan bebas dari cacar.
Penyebab Cacar
Virus cacar termasuk kelompok virus kecil, terdapat dalam 2 bentuk yaitu
bentuk yang ganas (variola major) dan bentuk yang kurang ganas (variola minor).
Terdapat juga jenis yang ketiga, yaitu vaccina yang tidak patogen untuk manusia dan
digunakan untuk menginfeksi sapi dalam usaha mendapatkan vaksin terhadap cacar.
Penyebaran Penyakit Cacar
Infeksi terjadi melalui saluran pernapasan dan penyebaran virus berasal dari
sekresi dan bahan-bahan yang berasal dari lesi kulit. Penyakit juga bisa ditularkan
secara bebas melalui pakaian dan kertas yang tercemar serta debu yang beterbangan di
udara. Kedua jenis kelamin mempunyai kemungkinan yang sama untuk menderita
sakit, sedangkan di daerah dengan penduduk yang tidak mendapatkan vaksinasi anakanak umumnya lebih banyak menderita sakit dibandingkan orang dewasa.

Masa inkubasi berlangsung antara 6-20 hari dengan perjalanan awal penyakit
yang mendadak. Penderita mengeluh sakit kepala dan nyeri punggung yang hebat
serta gejala-gejala lain yang mirip influensa. Dua tiga hari kemudian ruam kulit (rash)
mulai timbul. Selama erupsi kulit berjalan, efek toksis dari virus mereda, digantikan
oleh infeksi sekunder pada lesi kulit. Terdapat suhu bifasik. Ruam kulit yang
sebenarnya, dimulai di daerah dahi dan pergelangan tangan, kemudian menjalar ke
lengan bawah dan kaki serta badan bagian belakang. Penyebaran berlangsung secara
sentrifugal, dan dalam waktu 48 jam meliputi seluruh tubuh kecuali aksila.
Mula-mula lesi berbentuk makula, berwarna kemerahan mirip kelainan kulit
pada morbili (campak). Kemudian dengan cepat berubah menjadi papula, vesikel dan
akhirnya pustula. Papula berbentuk bulat, keras dan dalam, pada umumnya terpisahpisah meskipun kadang-kadang saling berhubungan. Pada infeksi yang berat,
perdarahan dapat terjadi di dalam lesi kulit. Vesikel berbentuk kubah, tidak mudah
pecah dan jika pecah tidak mengempis. Pustula kadang-kadang cekung di tengah
(umbilicated) yang jika mengering meninggalkan kerak. Bila kerak lepas maka bekas
cacar menjadi cekung. Kerak biasanya lepas pada hari ke-14.
Lesi kulit pada variola major ini secara umum perkembangannya berlangsung
dalam waktu yang sama, sehingga stadium lesi kulit adalah sama. Waktu yang
diperlukan dari stadium makula sampai terjadi pustula lebih kurang adalah antara 5-7
hari. Pada infeksi yang berat lesi kulit saling berhubungan. Bila terdapat infeksi
sekunder dapat menimbulkan kematian penderita. Selain terjadi lesi kulit, mukosa
mulut, faring, laring dan trakea juga dapat membentuk vesikel yang bila pecah akan
membentuk ulkus yang dangkal. Vesikulasi di dalam rongga mulut dapat terjadi
sebelum kelainan tersebut terjadi di kulit.
Adenitis umum yang ringan terjadi juga pada penyakit cacar ini. Pada infeksi
dengan virus cacar pada umumnya juga terjadi konjungtivitis dan fotofobi. Selain itu
pustula dapat terbentuk pada konjungtiva dan kornea yang diikuti oleh keratitis dan
ulserasi kornea. Akibat komplikasi ini, maka penderita mengalami gangguan
penglihatan yang menetap. Berat ringannya penyakit tergantung pada virulensi virus
dan ada tidaknya infeksi sekunder. Di daerah yang tidak dilindungi dengan vaksinasi
angka kematian pada anak beusia di bawah 5 tahun dapat mencapai 50 persen. Makin
berat lesi kulit, makin buruk prognosis cacar.

IV.

ALAT DAN BAHAN

A. PEWARNAAN GISPEN
Alat dan bahan
-

Jarum ose

Lampu spiritus

Coupling ajar

Gelas benda

sampel

Erlenmeyer 100 ml

Larutan A
Asam asetat glasal 1 ml
Formalin 40%

2 ml

Aquadest
-

100 ml

Larutan B
Fenol

1 gr

Tanin

5 gr

Aquadest

NH4OH 1 % dan 25 %

AgNO3 10 %

Larutan perak

Xylol

100 ml

Pembuatan larutan perak

-

Bersihkan erlenmeyer 100 ml lalu buang airnya maka akan

ada sisa air yang tertinggal

Tetesi NH4OH 25 sebanyak 1 ose

Masukkan 0,5 ml AgNO3 10%

Tambahkan akuadest 20 ml maka akan terbentuk endapan

putih (AgOH)

Encerkan endapan dengan aquadest

Titrasi dengan NH4OH 1 % (biasanya 1.4 1,8 ml) sampai

larutan jernih

Tambahkan 1 gtt AgNO3 10% sehingga terbentuk warna

perak

B. PAWARNAAN SELLER
Alat dan bahan
-

Jarum ose

Pinset

Gelas benda

Sampel

Pewarna seller yang terdiri dari campuran 1 bagian larutan A

dan 2 bagian larutan B lalu disaring
Larutan A basic fuchsin 1 % dalam alkohol
Larutan B metylen blue 1 % dalam alkohol
Ataw campuran lain yaitu 3 bagian larutan A dan 1 bagian l
bagian larutan B kemudian disaring
Larutan A metilen blue 2 % dalam alkohol
Larutan B basic fuchsin 4 % dalam alkohol

V.

CARA KERJA
A. CARA KERJA PEWARNAAN GISPEN

Buat

preparat

hapus

dari

sampel

yang

ada,

kering

udarakan

Tetesi dengan larutan A biarkan 1 menit

Cuci debgan air dan kering udarakan

Masukka preparat dalam coupling jar yang berisi xylol dan

biarkan 5 menit

Kering udarakan, bila perlu cuci dengan akuadest

Tetesi dengan larutan B, lalu panaskan sampai keluar uap

dan biarkan 1 menit

Cuci dengan air kran dan bilas dengan aquadest

Tetesi larutan perak lalu panaskan sampai keluar asap dan

biarkan 2 menit

Cuci dengan air mengalir, kering udarakan

Amati dengan perbesaran kuat

B. Cara Kerja Pewarnaan Seller

VI.

Buat preparat sentuh atau preperat hapus

Fiksasi dengan metanol selama 5 menit

Cuci dengan air mengalir

Celupkan dalam zat warna seller selama 3-7 menit

Cuci dengan air mengalir, kering udarakan

Amati dengan perbesaran kuat

HASIL PENGAMATAN

Nama Virus

Pengecatan

Gambar

Keterangan

Inti sel saraf : ungu

Virus Rabies Sellers

IB. Rabies (nigri

bodies) (merah chery)

Elementeri Bodies
Virus
Vaccinia

VII.

Ukuran : 1/3 coccus

Gutstein

Warna : Ungu
Susunan : Menyebar

PEMBAHASAN
Virus bersifat aseluler (tidak memiliki sel) dan tidak memiliki organel-organel sel.
Virus memiliki ukuran yang sangat kecil, bahkan lebih kecil daripada bakteri yang
berukuran paling kecil. Virus bersifat parasit obligat sehingga infeksi pada sel atau
jaringan inang dapat diamati secara mikroskopis. Virus sukar diwarnai sehingga
memerlukan pengecatan-pengacatan khusus untuk mengidentifikasinya. Sebenarnya
virus tidak dapat dilihat, tetapi untuk membantu diagnosa klinik yang dilihat adalah
perubahan-perubahan dalam jaringan, kelainan-kelainan intracelluler dan sitoplasma.
Kelainan-kelainan jaringan ini dapat dijumpai sebagai Inclusion body dan
Elementair body.
Pada praktikum virus yang diperiksa adalah virus rabies dan virus vaccinia.
Rabies merupakan infeksi akut dari susunan saraf pusat yang berakibat fatal.Virus
rabies ditularkan ke manusia melalui gigitan dan kadang melalui jilatan (air liur)
hewan yang terinfeksi rabies. Hewan yang dapat menularkan penyakit rabies antara
lain anjing, kucing, kera, dan kelelawar. Virus rabies menpunyai inclution body
disebut Negri- body. Cara pemeriksaan rabies secara laboratoris dapat dilakukan
dengan mikroskopis untuk melihat dan menemukan badan negri, yakni pewarnaan
cepat Sellers. Jika positif virus rabies maka Negri Bodies berwarna merah chery
dengan inti sel saraf berwarna ungu.
Virus Vaccinia merupakan salah satu virus penyebab penyakit cacar. Cacar adalah
penyakit virus sistemik dengan gejala khas adanya erupsi kulit. Penyakit muncul
mendadak dengan gejala demam, tidak nafsu makan, sakit kepala, badan lemah, sakit

pinggang berat, kadang-kadang sakit perut dan muntah. Sesudah 2 4 hari, demam
mulai turun dan timbul ruam yang berisi virus yang infectious kemudian berkembang
menjadi makula, papula, vesikula, pustula dan menjadi krusta yang akan rontok lepas
setelah 3 4 minggu.Virus vaccinia mempunyai Elementeri body yang disebut
Paschen

Bodies

Adanya

Elementeri

Body

ini

dimanfaatkan

untuk

mengidentifikasi virus tersebut. Pemeriksaan virus vaccinia secara mikroskopis

dilakukan dengan pengecatan gutstein, dengan pengecetan ini akan terlihat
Elementeri Body

virus vaccinia berbentuk 1/3 cocus, berwarna ungu dengan

susunan yang menyebar.

VIII. KESIMPULAN
Inclution Body rabies Negri Bodies dengan pengecatan sellers berwarna merah
cherry dan inti sel saraf berwarna ungu.
Elementeri Body Vaccinia Paschen Bodies dengan pengecatan gutstein berwarna
ungu, berbentuk 1/3 cocus, dan susunannya menyebar.

IX.

DAFTAR PUSTAKA

Johnson, G. C., A. F. Barbet, P. K. Anderson and T. C. McGuire. 1983. Preferential

Immune Response to Virion Surface Glycoproteins by Caprine Arthritis-Enchepalitis
Virus-Infected Goats. Infection and Immunity. Vol. 41

Tim Mikrobiologi Virologi. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Virologi. Fakultas

Farmasi Universitas Setia Budi; 2015.