LABORATORIA PENGEMBANGAN

TEKNOLOGI INDUSTRI AGRO DAN BIOMEDIKA (LAPTIAB)

DEPUTI BIDANG TEKNOLOGI AGROINDUSTRI DAN BIOTEKNOLOGI
BADAN PENGKAJIAN DAN PENERAPAN TEKNOLOGI

INSTRUKSI KERJA

PELAKSANAAN VALIDASI
PENGUJIAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)
No. Dok. : IK. PGN. 22-02/LAPTIAB/BPPT

LAPTIAB TAB, BPPT

Kawasan PUSPIPTEK, Gedung LAPTIAB, Serpong, Tangerang Banten, 15314
Telp. : 021-7560536
Fax. : 021-7566922

TERKENDALI (SALINAN No. :

IK.PGN.22-02/LAPTIAB/BPPT

INSTRUKSI KERJA
PELAKSANAAN VALIDASI
ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

LEMBAR PENGESAHAN

No. Bagian

Halaman

1 dari 1

Revisi/Tanggal

01 / 08-08-2011

Edisi/Tanggal

02 / 08-07-2009

Tanggal Terbit

08-07-2009

INSTRUKSI KERJA

PELAKSANAAN VALIDASI
PENGUJIAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)
No. Dok. : IK. PGN. 22-02/LAPTIAB/BPPT

Dilarang mengutip dan atau mereproduksi dokumen ini tanpa ijin tertulis dari
Manajer Puncak LAPTIAB BPP Teknologi

Nama
Jabatan
Tanggal
Tanda
Tangan

Dibuat oleh:

Disetujui oleh:

Disahkan oleh :

Fatim Illaningtyas, MSi

Dra. Noer Laily, MSi

Ir. Trismillah, MSi

Deputi Manajer Teknis

08-07-2009

Manajer Teknis
08-07-2009

Manajer Mutu
08-07-2009

TERKENDALI (SALINAN No. :

IK.PGN.22-02/LAPTIAB/BPPT

INSTRUKSI KERJA
PELAKSANAAN VALIDASI
ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

LEMBAR PERUBAHAN

Perubahan
No.
1

Tanggal
08-07-2009

08-08-2011

3.

08-08-2011

Mencabut
Bagian
Seluruh
bagian
edisi 01
Bagian ii
revisi 00
Bagian i
revisi 00

Halaman
Seluruh
halaman
edisi 01
Halaman
1 dari 1
revisi 00
Halaman
1 dari 1
revisi 00

No. Bagian

ii

Halaman

1 dari 1

Revisi/Tanggal

01/08-08-2011

Edisi/Tanggal

02/08-07-2009

Tanggal Terbit

08-07-2009

Memasukkan
Bagian
Seluruh
bagian
edisi 02
Bagian ii
revisi 01
Bagian i
revisi 01

Halaman
Seluruh
halaman
edisi 02
Halaman
1 dari 1
revisi 01
Halaman
1 dari 1
revisi 01

Disetujui
Alasan Singkat
Penerbitan
edisi
baru
dokumen
mutu LAPTIAB
Perubahan revisi
01
Perubahan nomor
dokumen sesuai
PP Pengendalian
Dokumen No. :
PP.0202/DOK/LAPTIAB/
BPPT

(Manajer Mutu)

TERKENDALI (SALINAN No. :

IK.PGN.22-02/LAPTIAB/BPPT

INSTRUKSI KERJA
PELAKSANAAN VALIDASI
ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

LEMBAR DISTRIBUSI

No. Bagian

iii

Halaman

1 dari 1

Revisi/Tanggal

00/ 08-07-2009

Edisi/Tanggal

02 / 08-07-2009

Tanggal Terbit

08-07-2009

Klasifikasi Dokumen

Pemegang

Asli

Manajer Mutu LAPTIAB

Salinan No. 1

Manajer Teknis Bidang Pangan

Salinan No. 2

Deputi Manajer Teknis Mikrobiologi

INSTRUKSI KERJA
PELAKSANAAN VALIDASI
ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

No. Bagian

iv

Halaman

1 dari 1

TERKENDALI (SALINAN No. :

IK.PGN.22-02/LAPTIAB/BPPT

DAFTAR ISI

Halaman

Revisi/Tanggal

00/ 08-07-2009

Edisi/Tanggal

02 / 08-07-2009

Tanggal Terbit

08-07-2009

Judul Bagian

Jumlah halaman

i.

LEMBAR PENGESAHAN

ii.

LEMBAR PERUBAHAN

iii.

DAFTAR DISTRIBUSI

iv.

DAFTAR ISI

PENDAHULUAN

PROSEDUR KERJA

REFERENSI

INSTRUKSI KERJA
PELAKSANAAN VALIDASI
ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

No. Bagian

Halaman

1 dari 1

TERKENDALI (SALINAN No. :

IK.PGN.22-02/LAPTIAB/BPPT

PENDAHULUAN

Revisi/Tanggal

00/ 08-07-2009

Edisi/Tanggal

02 / 08-07-2009

Tanggal Terbit

08-07-2009

1. Pendahuluan
Instruksi kerja ini merupakan prosedur untuk mengkonfirmasi bahwa metode yang
dipakai dalam pengujian ALT merupakan unjuk kerja yang konsisten, serta memberikan
hasil yang mendekati nilai benar atau memenuhi kriteria penerimaan. Dengan demikian
metode tersebut bisa digunakan untuk analisa rutin laboratorium.
Tujuan dari Instruksi kerja ini adalah untuk mengetahui nilai ripitabilitas serta
akurasi dari metode pengujian ALT sebagai dasar untuk mengkonfirmasi konsistensi hasil
pengujian ALT yang dilakukan oleh Laboratorium

INSTRUKSI KERJA
PELAKSANAAN VALIDASI
ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

No. Bagian

Halaman

1 dari 2

TERKENDALI (SALINAN No. :

IK.PGN.22-02/LAPTIAB/BPPT

PROSEDUR KERJA

Revisi/Tanggal

00/ 08-07-2009

Edisi/Tanggal

02 / 08-07-2009

Tanggal Terbit

08-07-2009

2. Prosedur Kerja :
a. Presisi
Timbang 25 g sampel secara aseptis, kemudian masukkan dalam wadah steril
Tambahkan 225 ml PW/BPW 0,1% ke dalam wadah steril yang berisi sampel
homogenkan dengan dihancurkan dengan waring blender atau dengan tangan selama
2 menit. Ini merupakan larutan dengan pengenceran 10 -1.
Inokulasikan bakteri acuan (Escherichia coli ATCC 25922) dengan konsentrasi 100500 cfu/25 g
Lakukan pengujian ALT dengan 10 kali ulangan. Masing-masing ulangan dilakukan
duplo (2 cawan petri).
Hasil pengujian dianalisa statistika untuk mengetahui nilai presisi dari metode
pengujian (presisi intermediet ) dan presisi dari masing-masing Analis (presisi
personal ). Presisi dapat diketahui dari nilai RSD= Relative Standard Deviation
(Simpangan Baku Relatif=SBR). Rumus SBR adalah sebagai berikut:

RSD/SBR = [ 1/2P (log ai log bi )/ xi)2 ] 12

dimana :
ai dan bi : hasil pengujian ke-i (1,2,3,...n)
xi = rata-rata = 1/n (log ai + log bi)
P = jumlah sampel yang diuji
CV/KV = Koefisien variasi = 100 x SBR
NB: Standar nilai RSD/SBR tidak boleh lebih dari 0,1 (5 10 kali lipat dari perhitungan
kultur murni). Jika lebih dari 0,1 menunjukkan adanya permasalahan dalam
pelaksanaan pengujian.

INSTRUKSI KERJA
PELAKSANAAN VALIDASI
ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

No. Bagian

Halaman

2 dari 2

TERKENDALI (SALINAN No. :

IK.PGN.22-02/LAPTIAB/BPPT

PROSEDUR KERJA

Revisi/Tanggal

00/ 08-07-2009

Edisi/Tanggal

02 / 08-07-2009

Tanggal Terbit

08-07-2009

b. Akurasi

siapkan suspensi bakteri Eschericia coli ATCC 25922 (bakteri acuan) yang telah
diketahui konsentrasinya. (NB: untuk mengetahui konsentrasi E coli ATCC 25922,
sebelumnya telah dilakukan pengujian ALT dari suspensi E coli tersebut, mulai
pengenceran 100 sampai 1015)

siapkan sampel uji. Sampel akan dibagi menjadi bagian yang sama banyak (25 g
untuk masing-masing jenis sampel)

sampel A adalah sampel + bakteri uji konsentrasi sedang (10-50 cfu/25 g)

sampel B adalah suspensi bakteri uji konsentrasi sedang (10-50 cfu/25 g)

sampel C adalah sampel + bakteri uji konsentrasi tinggi (100-500 cfu/25 g)

sampel D adalah suspensi bakteri uji konsentrasi tinggi (100-500 cfu/25 g)

Selanjutnya lakukan uji ALT pada masing-masing sampel secara duplo, 3 ulangan

Nilai Recovery dari metode ini dapat dihitung dengan rumus :

Recovery (%) = (Ca Cc)/C * 100%

dimana:
Ca
Cc

= hasil pengujian (total mikroba sampel + konsentrasi bakteri acuan yang

ditambahkan)
= total mikroba sampel

= konsentrasi bakteri acuan yang ditambahkan

NB: Standar nilai Recovery adalah 100 110%.

TERKENDALI (SALINAN No. :

IK.PGN.22-02/LAPTIAB/BPPT

INSTRUKSI KERJA
PELAKSANAAN VALIDASI
ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT)

REFERENSI

No. Bagian

Halaman

1 dari 1

Revisi/Tanggal

00/ 08-07-2009

Edisi/Tanggal

02 / 08-07-2009

Tanggal Terbit

08-07-2009

4. Referensi :
Method Validation of Microbiological Methods, guidance note : C & B and ENV 002,
Singapore Accreditation Council, July 2002
Metode Pengujian Cemaran Mikroba dalam daging, telur dan susu, serta hasil olahannya.
SNI 2897:2008