Penyediaan Media

Media adalah bahan yang digunakan untuk membolehkan tisu tumbuhan anda bercambah, berakar dan
membersar. Terdapat beberapa perbezaan untuk ketiga-tiga peringkat media ini. Namun di sini diberikan
media asas (maka anda boleh mencari media-media yang lebih spesifik untuk peringkat-peringkat yang
lebih khusus). Apa yang membezakan media adalah kandungan bahan hormon (penggalak) yang
digunakan. Bahan-bahan penyediaan media adalah;
- 2 cawan air bersih
- cawan gula
- bahan baja: sudu makan baja NPK 10:10:10 yang cair di dalam 1 Liter air dan gunakan satu cawan
untuk satu bancuhan.
- tablet inositol (500 mg): tablet tablet karbohidrat dari jenis vitamin B.
- tablet vitamin dengan tiamine: tablet boleh juga menggunakan tablet multivatmin yang lain.
- serbuk agar-agar: 4 sudu besar.
Bahan-bahan di atas adalah bahan asas. Bagi tujuan percambahan dan pengalakan akar anda boleh
menambah cawan santan kelapa dan juga cawan malt (daripada barley). Santan kelapa ditukar
kepada cawan tomato puree hijau atau cawan perahan oren boleh menghasilkan jesan yang berbeza.
(Sebaiknya anda menggunakan bahan-bahan yang lebih spesisfik seperti hormon penggalak khusus
seperti yang diterangkan sebelum ini). Pastikan juga pH agar-agar yang anda sediakan adalah di antara 5
ke 6 dan pH boleh ditukar dengan menggunakan asid citric atau soda bikarbonat.
Masukkan kesemua bahan ke dalam periuk dan panaskan perlahan-lahan sehingga agar-agar cair dan
kacau dengan baik untuk mengelakkan agar-agar berketul dan berkumpul di bahagian bawah periuk.
Kemudian pindahkan ke dalam bekas botol setinggi 2 cm dan tutup (jangan tutup terlalu ketat kerana ia
kan pecah di dalam periuk tekanan). Kesemua botol-botol ini kemudiannya dimasukkan ke dalam periuk
tekanan dan dimasak selama 15 minit (atau sehingga tekanan dicapai apabila injap pada periuk
diaktifkan).
Pensterilan Peralatan Yang Digunakan
Pensterilan setiap peralatan yang digunakan perlu dilakukan menggunakan periuk tekanan. Manakala ia
juga boleh dilakukan menggunakan alkohol, pembakaran dengan pelita alkohol atau menggunakan klorin
(klorox).
Pastikan tuala pengelap yang digunakan juga adalah bersih dan diganti apabila perlu. Sekiranya anda
perlu menggunakan kertas juga ia perlulah disterilkan di dalam periuk tekanan. Masukkan ia ke dalam
beg kertas dan panaskan di atas aras air di dalam periuk tekanan. Beg kertas yang lembab boleh
dipanaskan di dalam ketuhar pada suhu 80 C sehingga kering.
**Tangan anda juga perlu disterilkan sebelum memulakan kerja-kerja pengendalian tunas dan
pemindahan ke dalam agar-agar. Pensterilan boleh dilakukan dengan menyembur alkohol dan ke
bahagian tangan atau sarung tangan yang anda gunakan.
Pensterilan Bahagian Tumbuhan
Setiap bahagian tumbuhan yang akan digunakan juga perlu diterilkan terlebih dahulu menggunakan
peluntur seperti klorox yang dicairkan ( cawan klorox + cawan air + setitik sabun pencuci bagi
mengurangkan rintangan air). Letakkan ia ke dalam larutan tersebut selama 10 20 minit. Goyangkan
bahan tumbuhan tersebut. Kemudian buangkan larutan yang digunakan dan bilas bahagian tumbuhan

yang akan digunakan sebanyak dua kali mengunakan air yang telah disterilkan. Proses ini bagi
memastikan bahagian yang digunakan juga bebas daripada bakteria. kulat dan organisma lain yang boleh
menjejaskan proses tumbesaran.
Proses Pemindahan Ke Dalam Media
Kerja-kerja pemindahan perlu dilakukan dengan teliti dalam persekitaran yang bersih. Jadi anda mesti
memastikan teknik-teknik pensterilan telah dilakukan dengan sempurna dan langkah persediaan seperti
berikut:
- Ikat rambut anda dengan baik (gunakan penutup rambut sekiranya perlu), tanggalkan semua barangan
perhiasan, singkat baju anda dan cuci dan nyah jangkitan tangan anda dengan cecair nyah kuman (atau
alkohol). Anda juga boleh menggunakan sarung tangan getah dan gunakan alkohol pada sarung tangan
tersebut.
- Sterilkan juga tempat kerja anda. Anda perlu menyediakan Sterile Cabinet biasanya kotak kecil untuk
melindungi dari persekitaran, bagi mengurangkan jangkitan.
- Sediakan peralatan dan bahan-bahan yang akan digunakan berhampiran dengan kawasan kerja tersebut
bagi mengurangkan pendedahan kepada jangkitan.
- Kerja-kerja penyediaan bahan tumbuhan dan pemindahan perlu dilakukan dengan teliti. Elakkan
daripada menyentuh bahan tumbuhan dengan tangan sebaliknya gunakan forcep (yang telah dicelupkan
ke dalam alkohol atau dibakar di atas pelita alkohol). Potong bahagian tumbuhan dalam beberapa saiz 2
3 cm dan masukkan ke dalam agar agar. Tutup bekas dengan kemas dan letakkan ia di kawasan bersuhu
bilik dan tidak terdedah kepada cahaya matahari. Ia mengambil masa selama lebih kurang 1 bulan.
Pada masa yang sama beberapa perkara mungkin berlaku antaranya. Sesetengah tumbuhan mungkin
mati akibat pendedahan kepada klorin, manakala ia juga mungkin dijangkiti oleh mikrob. Namun
sekiranya ia berjaya bercambah, akar dan pucuk-pucuk baru mula kelihatan. Asingkan semua tumbuhan
dan medium yang dijangkiti.
Penggalakan Akar
Pokok akan terus membesar di dalam bekas-bekas yang berjaya dan perlu dipindahkan. Lakukan proses
yang sama menggunakan medium penggalak akar dan proces percambahan yang berterusan.
*Anda boleh gunakan medium dengan santan kelapa sekiranya anda suka.
- Ulangi proses yang sama dengan memindahkan pokok yang berjaya bercambah di dalam botol yang
disediakan lebih awal.
- Gunakan peralatan yang disterilkan dengan sempurna termasuk tuala kertas, scalpels dan forcep.
- Gunakan forcep untuk mengeluarkan tunas pokok daripada botol dan potong bahagian-bahagian
bercambah di atas tuala kertas (lembabkan bagi mengelakkan kerosakan kepada tunas). Ia kemudiannya
boleh dipindahkan ke dalam bekas-bekas yang baru.
- Simpan semula tunas-tunas seperti mana langkah pertamanya.
Proses percambahan ini dilakukan beberapa kali sehingga anda memiliki jumlah pokok yang diinginkan.
Proses percambahan akan terus berlaku dalam tempoh antara 3 4 minggu. Sekiranya anda mengalami
jangkitan pada peringkat ini, mungkin keadaan udara adalah tidak bersih. Jadi cuba pastikan aliran udara
adalah lebih baik.
Pembentukan Akar

Apabila anda mempunyai jumlah pokok yang cukup dan biarkan sehingga ia mencapai saiz 2 cm, maka
pokok sedia untuk ke peringkat seterusnya iaitu pembentukan akar. Pada masa ini gunakan medium
untuk menggalakkan akar (santan dan malt) dan 5 pokok boleh diletakkan di dalam satu bekas. Akar
akan membentuk dalam tempoh 2 4 minggu.

BAB 2 : PENYEDIAAN LARUTAN STOK DAN MEDIUM PERTUMBUHAN

MEDIUM PERTUMBUHAN
KOMPONEN PENTING MEDIA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Makronutrie
Mikro
Vitamin
Sukrosa
Pengawal atur Tumbuhan atau hormon
pH idea media
Agen pepejal
Arang teraktif

Makro
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Nitrogen
Phosphorus
Poltasium
Kalium
Magnesium
Sulfphur

Mikro
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Ferum
Mangan
Zink
Boron
Copper
Mollidenum
Kobolt

Vitamin
Sebagai pemangkin dalam tindak balas enzim, kuantiti kecil
1. Thiamine (vitamin B1)
2. Asid nikotinik Piridoksina ( vitamin B6)
3. Mio-inositol

Pengawal atur tumbuhan

1.Auksin (akar)

Memanjangkan sel dan membengkakkan tisu

Membentuk kalus
Membentuk akar

2.Sitokinin

Pembentukan pucuk dan tunas

Sumber karbon
Keperluan sumber luar kerana kultur tisu tidak dapat karbohidrat secara fotosintesis
dengan sempurna
1. Contoh sumber : Sucrose dan mallose

pH media
1. pH ukuran keasidan dan kealkalian sesuatu larutan
2. rendah daripada pH idea media : IN NaOH
3. tinggi daripada pH idea media : IN HCL
Agen pepejal
Mempengaruhi pertumbuhan kultur digunakan dalam medium pepejal
Mengekalkan konsistensi media dan tidak dihadam dengan enzim
Ia menggunakkan serbuk agar

8.

Arang teraktif
o Keupayaan penyerapan yang menggalakkan pertumbuhan
o Menyerap sebatian toksik

o Medium pengakaran, tidak memerlukan hormon. Kos elektrik sebagai

penambah.
o Nak atau tak nak letak pun tak apa agar-agar

PENYEDIAAN MEDIUM MS

1.

Prosedur untuk 1 liter

2.

Tambah 800 ml air suling ke dalam konokal flask berukuran 2 liter

3.

Tambah larutan stok menggunakkan pipette dan kacau sehingga sebati

4.

Tambah sukrosa dan kacau sehingga sebati

5.

Semak nilai pH

6.

Selaraskan pH pada (5.7 5.8)

7.

Tambah 1 liter air suling

8.

Tambah agar 7-8 gram per liter (agar tidak larut)

9.
Tutup lubang konikal flask dengan dua lapisan aluminium foil dan letakkan
pelekat
autoklaf yang berlabel dikoniflas. Autoklaf selama 20minit dengan
suhu 121c 15 PSI
10. Sejukkan sehingga suhu 60c
11. Secara aseptiknya guna pipette atau tuangkan larutan media yang suam ke
dalam bekas kultur yang telah disterilkan. Gel akan terbentuk dalam masa 1 jam
berikutnya
12. Media MS yang telah sejuk sepenuhnya diletakkan di dalam peti sejuk atau
bilik inkubasi.