perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.

id

SKRIPSI

EKSPLORASI BAKTERIOFAGE VIRULEN

TERHADAP XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. CAMPESTRIS
ASAL TAWANGMANGU DALAM PENGENDALIAN
PENYAKIT BUSUK HITAM KUBIS

Oleh
Yulia Rahmawati
H0708161

PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2012

commit to user

i
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

EKSPLORASI BAKTERIOFAGE VIRULEN

TERHADAP XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. CAMPESTRIS
ASAL TAWANGMANGU DALAM PENGENDALIAN
PENYAKIT BUSUK HITAM KUBIS

SKRIPSI

Untuk memenuhi sebagian persyaratan

guna memperoleh derajat Sarjana Pertanian
di Fakultas Pertanian
Universitas Sebelas Maret

Oleh
Yulia Rahmawati
H 0708161

PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2012

commit to user

ii
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

SKRIPSI

EKSPLORASI BAKTERIOFAGE VIRULEN

TERHADAP XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. CAMPETRIS
ASAL TAWANGMANGU DALAM PENGENDALIAN
PENYAKIT BUSUK HITAM KUBIS

Yulia Rahmawati
H0708161

Pembimbing Utama Pembimbing Pendamping

Ir. Sri Widadi, MP Ir. Sumijati, MP

NIP. 195208231976112001 NIP. 195210101976122001

Surakarta, 21 September 2012

Mengetahui
Universitas Sebelas Maret
Fakultas Pertanian
Dekan,

Prof. Dr. Ir. H. Bambang Pujiasmanto. MS

NIP.195602251986011001

commit to user

iii
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

SKRIPSI

EKSPLORASI BAKTERIOFAGE VIRULEN

TERHADAP XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. CAMPETRIS
ASAL TAWANGMANGU DALAM PENGENDALIAN
PENYAKIT BUSUK HITAM KUBIS

yang dipersiapkan dan disusun oleh

Yulia Rahmawati
H0708161

telah dipertahankan di depan Tim Penguji

pada tanggal: 21 September 2012
dan dinyatakan telah memenuhi syarat
untuk memperoleh gelar Sarjana Pertanian
Program Studi Agroteknologi

Susunan Tim Penguji:

Ketua Anggota I Anggota II

Ir. Sri Widadi, MP Ir. Sumijati, MP Dr. Ir. Supyani, MP

NIP. 195208231976112001 NIP. 195210101976122001 NIP.196610161993021001

commit to user

iv
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

KATA PENGANTAR

Puji Syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah
melimpahkan segala rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat
menyelesaikan penelitian sekaligus penyusunan skripsi ini. Dalam penulisan
skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan berbagai pihak. Oleh karenanya,
penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada :
1. Prof. Dr. Ir. Bambang Pujiasmanto, MS., selaku Dekan Fakultas Pertanian
Universitas Sebelas Maret Surakarta.
2. Ir. Sri Widadi, MP, selaku pembimbing utama sekaligus pembimbing
akademik yang telah memberikan bimbingan untuk penulisan skripsi ini.
3. Ir. Sumijati, MP selaku pembimbing pendamping yang telah memberikan
koreksi, bimbingan dan saran dalam penulisan skripsi ini.
4. Dr. Ir. Supyani, MP selaku dosen pembahas yang telah banyak memberikan
masukan dan bimbingan dalam penulisan skripsi ini.
5. Ibunda dan ayahanda tercinta, yang telah memberikan kasih sayang yang tak
terhingga, doa, nasehat, dan dukungan.
6. Teman-temanku seperjuangan Agroteknologi Angkatan 2008 atas
kebersamaan yang telah kita lalui dengan penuh suka dan duka.
7. Segenap Laboran di Laboratorium Hama Penyakit Tanaman dan Biologi
Tanah Fakultas Pertanian yang telah banyak membantu dalam pelaksanaan
analisis laboratorium.
Penulis menyadari bahwa dalam pembuatan skripsi ini masih banyak
kekurangan. Oleh karena itu, saran dan kritik yang bersifat membangun sangat
diharapkan agar dapat lebih baik. Akhirnya penulis berharap semoga skripsi ini
dapat memberikan manfaat bagi penulis sendiri khususnya dan bagi para pembaca
pada umumnya. Amin.
Surakarta, Agustus 2012

commit to user Penulis

v
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... iii
KATA PENGANTAR ........................................................................................ v
DAFTAR ISI ...................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL ........................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... ix
RINGKASAN ..................................................................................................... x
SUMMARY ....................................................................................................... xi
I. PENDAHULUAN .......................................................................................... 1
A. Latar belakang ............................................................................................ 1
B. Rumusan Masalah....................................................................................... 3
C. Tujuan dan Manfaat Penelitian ................................................................... 3
II. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................ 5
A. Kubis ........................................................................................................... 4
B. Penyakit Busuk Hitam Kubis ..................................................................... 6
C. Bakteriofage................................................................................................ 8
D. Uji Plak ....................................................................................................... 8
III. METODE PENELITIAN ........................................................................... 10
A. Waktu dan Tempat Penelitian................................................................... 10
B. Alat dan Bahan Penelitian ........................................................................ 10
C. Cara Kerja Penelitian ................................................................................ 10
D. Peubah Pengamatan .................................................................................. 15
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................... 17
A. Banyaknya Bakteriofage........................................................................... 17
B. Saat Muncul Gejala .................................................................................. 18
C. Insiden Penyakit ....................................................................................... 20
D. Keparahan Penyakit .................................................................................. 21
V. KESIMPULAN DAN SARAN commit to user
................................................................... 25

vi
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

A. Kesimpulan .............................................................................................. 25
B. Saran ........................................................................................................ 25
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN

commit to user

vii
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

DAFTAR TABEL

Nomor Judul dalam Teks Halaman

1. Jumlah bakteriofage ................................................................................. 17

2. Saat muncul gejala busuk hitam kubis ..................................................... 19

Judul dalam Lampiran

3. Jumlah bakteriofage berdasarkan hasil uji Plak ....................................... 28

4. Saat muncul gejala penyakit busuk hitam kubis ...................................... 29
5. Nilai keparahan penyakit busuk hitam kubis ........................................... 30
6. Nilai insiden penyakit busuk hitam kubis ................................................ 31

commit to user

viii
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

DAFTAR GAMBAR

Nomor Judul dalam Teks Halaman

1 Hasil uji plak....................................................................................... 17

2 Rata-rata insiden penyakit busuk hitam kubis..................................... 20
3 Grafik keparahan penyakit busuk hitam kubis.................................... 22
4 Rata-rata keparahan penyakit busuk hitam kubis................................ 22

Judul dalam Lampiran

5 Pengambilan jaringan tanaman sakit sebagi sebagai sumber 35

Xanthomonas campestris pv. campestris............................................
6 Biakan murni Xanthomonas campestris pv. campestris...................... 35
7 Pengambilan sampel (sumber bakteriofage) dari daun, akar dan 35
tanah sekitar tanaman kubis sakit........................................................
8 Uji plak dan plak yang terbentuk ........................................................ 36
9 Persiapan aplikasi bakteriofage dan bakteri X. campestris................. 36

10 Penempatan tanaman perlakuan di lahan............................................ 36

11 Aplikasi bakteriofage (kiri) dan bakteri X. campestris (kanan)........... 36

12 Tanaman kubis setelah aplikasi........................................................... 37

13 Gejala busuk hitam kubis..................................................................... 37

commit to user

ix
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

RINGKASAN

EKSPLORASI BAKTERIOFAGE VIRULEN TERHADAP

XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. CAMPETRIS ASAL
TAWANGMANGU DALAM PENGENDALIAN PENYAKIT BUSUK
HITAM KUBIS. Skripsi: Yulia Rahmawati (H0708161). Pembimbing: Sri
Widadi, Sumijati, Supyani. Program Studi: Agroteknologi, Fakultas Pertanian
Universitas Sebelas Maret (UNS) Surakarta.
Kubis merupakan jenis sayuran yang banyak dibudidayakan di daerah dataran
tinggi, salah satunya di daerah Tawangmangu. Namun produksi kubis di daerah
Tawangmangu sendiri masih rendah dikarenakan adanya kendala dalam
budidayanya. Salah satu kendala dalam budidaya kubis adalah penyakit busuk
hitam (Black rot) yang merupakan salah satu penyakit cukup penting pada
tanaman kubis-kubisan. Penyakit busuk hitam kubis ini disebabkan oleh bakteri
Xanthomonas campestris pv. campestris. Salah satu alternatif pengendalian
penyakit busuk hitam kubis adalah dengan penggunaan bakteriofage. Penelitian
ini bertujuan untuk mengeksplorasi bakteriofage serta mengetahui kemampuannya
dalam mengendalikan penyakit busuk hitam kubis.
Penelitian ini telah dilaksanakan di Laboratorium Hama dan Penyakit
Tumbuhan, Laboratorium Biologi Tanah Fakultas Pertanian Universitas Sebelas
Maret Surakarta dan di lahan Kebun Benih Hortikultura (KBH) Tawangmangu,
Jawa Tengah. Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan Maret sampai Juli
2012. Penelitian ini dilakukan dalam 2 tahap yakni (1) isolasi bakteriofage yang
dilakukan dengan uji plak, (2) pengujian bakteriofage pada tanaman kubis dalam
mengendalikan busuk hitam kubis di lahan. Percobaan disusun dengan
menggunakan rancangan acak lengkap (RAL). Perlakuan yang diberikan adalah
aplikasi bakteriofage dengan faktor asal isolat bakteriofage yang berbeda sebagai
berikut: kontrol, aplikasi bakteriofage asal daun sakit, akar sakit, dan tanah sekitar
tanaman sakit.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah bakteriofage (berdasarkan uji
plak) paling banyak berasal dari akar sakit. Pada pengamatan peubah saat muncul
gejala, tanaman kubis yang paling cepat menunjukkan gejala busuk hitam kubis
adalah pada perlakuan kontrol (tanpa aplikasi bakteriofage) yakni pada 1 HST.
Untuk pengamatan nilai insiden dan keparahan penyakit diketahui bahwa
perlakuan kontrol memiliki nilai insiden dan keparahan penyakit paling tinggi
dibandingkan dengan perlakuan lain (dengan aplikasi bakteriofage). Sebab tanpa
adanya bakteriofage, Xanthomonas campestris pv. campestris dapat leluasa
melakukan perkembangbiakan dan menimbulkan gejala busuk hitam kubis. Hal
ini mengindikasikan bahwa aplikasi bakteriofage mampu menekan serangan
penyakit busuk hitam kubis.

commit to user

x
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

SUMMARY

EXPLORATION OF BACTERIOPHAGE VIRULENT TO

XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. CAMPESTRIS ISOLATED FROM
TAWANGMANGU FOR CONTROLLING CABBAGE BLACK ROT
DISEASE. Thesis-S1: Yulia Rahmawati (H0708161). Advisers: Sri Widadi,
Sumijati, and Supyani. Study Program: Agrotechnology, Faculty of Agriculture,
University of Sebelas Maret (UNS) Surakarta.

Cabbage is a vegetable widely cultivated in the highlands, one of which is in

Tawangmangu. However, the production of cabbage in Tawangmangu is low due
to the difficulties in its cultivation. One of the constraints in the cultivation of
cabbage is black rot disease which is one of the important disease on cabbage
plants. Cabbage black rot disease is caused by bacterium Xanthomonas campestris
pv. campestris. One alternative to control cabbage black rot disease is to using
bacteriophage. The aims of this study are to explore and learn bacteriophage
ability to control black rot disease of cabbage.
This research has been conducted at Laboratory of Plant Pests and Diseases,
Soil Biology Laboratory of Faculty of Agriculture, University of Sebelas Maret
(UNS) Surakarta and on land Horticultural Garden Seeds (KBH) Tawangmangu,
Central Java. This study was conducted in March through July 2012. This
research was conducted in two phases: (1) bacteriophage isolation by plaque
assay, (2) testing bacteriophage on to control black rot of cabbage in field.
Experiments have been prepared using a complete randomized design (CRD). The
treatment is an application by a factor bacteriophage isolates of different origin as
consists of: control, application bacteriophage from diseased cabbage leaves,
diseased cabbage root, and diseased cabbage soil.
The results showed that the amount of bacteriophage (based on plaque assay)
at most of the diseased cabbage root. The observation of variable time symptoms
appear, the most rapid cabbage showing symptoms of black rot is in the control
treatment (without bacteriophage aplication) which is 1 DAP. For observation
incidence and severity, control treatments is highest the incidence and severity of
disease than other treatments (with application bacteriophage). Because without
the bacteriophage, Xanthomonas campestris pv. campestris can replicate and
cause symptoms of black rot of cabbage. This indicates that the application
bacteriophage able to suppress the attack of black rot disease of cabbage.

commit to user

xi
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
1

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Kubis merupakan jenis sayuran yang banyak dibudidayakan di daerah
dataran tinggi, salah satunya adalah di daerah Tawangmangu. Tawangmangu
merupakan salah satu sentra produksi kubis di Jawa Tengah. Kubis sebagai
sayuran mempunyai peran penting untuk kesehatan, sehingga permintaan akan
sayuran ini cukup tinggi. Berdasarkan data Badan Pusat Statistik (BPS) (2012),
produktivitas kubis di Jawa Tengah mencapai 18,56 ton/ha.
Namun produksi kubis di daerah Tawangmangu sendiri masih rendah
dikarenakan adanya kendala dalam budidayanya. Salah satu kendala dalam
budidaya kubis adalah adanya gangguan hama dan penyakit yang dapat merusak
tanaman dan dapat menurunkan produksi. Penyakit busuk hitam (Black rot)
merupakan salah satu penyakit yang cukup penting pada tanaman kubis-kubisan.
Penyakit busuk hitam kubis ini disebabkan oleh bakteri Xanthomonas campestris
pv. campestris.
Busuk hitam dapat menyerang seluruh tanaman kubis-kubisan. Bakteri ini
menyerang jaringan pengangkutan tanaman dan dapat berpindah secara sistematis
dalam jaringan pengangkutan tanaman tersebut. Hasna (2011) mengungkapkan,
tanaman kubis dapat terserang busuk hitam pada setiap tahap pertumbuhan. Bibit
yang terserang patogen penyebab busuk hitam, daunnya akan berwarna kuning
sampai coklat, layu, dan runtuh. Pada tanaman yang memasuki pertumbuhan
vegetatif lanjut akan menunjukkan gejala kerdil, layu, daun yang terinfeksi
berbentuk wilayah-V. Wilayah V ini kemudian membesar dan menuju dasar daun,
berwarna kuning sampai coklat, dan kering. Sehingga penyakit ini dapat
menurunkan produktivitas tanaman dan menimbulkan kerugian yang besar bagi
petani.
Pengendalian penyakit busuk hitam saat ini masih tergantung kepada
penggunaan pestisida kimia, karena cara ini mudah dilaksanakan dan belum
ditemukan alternatif pengendalian lain yang cukup efektif. Padahal kita ketahui
bahwa penggunaan pestisida kimiacommit
dapattomenimbulkan
user dampak bagi lingkungan

1
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
2

seperti kerusakan tanah dan mengganggu keseimbangan ekosistem. Selain itu

residu kimia yang terakumulasi pada produk pertanian akan berdampak pada
kesehatan. Dari kondisi tersebut Sastrosiswojo dan Oka (1997) mulai
mengenalkan konsep pengendalian hama terpadu (PHT). Di dalam konsep PHT,
penggunaan musuh alami dan potensi biologi lainnya merupakan komponen
utama. Musuh alami memiliki peran yang penting dalam penekanan populasi OPT
serta menjaga keseimbangan ekosistem. Ada berbagai jenis musuh alami yang
dapat digunakan dalam mengendalikan populasi OPT, misalnya dari kelompok
serangga, cendawan, bakteri, dan virus. Saat ini pengendalian dengan
menggunkan virus masih jarang dilakukan.
Dalam penggunaannya sebagai agens pengendali hayati, virus memiliki
beberapa kelebihan dibandingkan dengan agens lainnya. Virus memiliki spektrum
yang sempit dalam memilih organisme sasarannya. Artinya, kemungkinan virus
dalam menginfeksi organisme yang bukan sasaran amatlah kecil sehingga hanya
organisme yang kompatibel yang akan diinfeksi. Sehingga penggunaannya cukup
spesifik dalam mengendalikan OPT khususnya patogen penyebab penyakit
tanaman.
Salah satu virus yang dimanfaatkan sebagai agens hayati adalah
bakteriofage. Lang et al. (2007) mengungkapkan bahwa bakteriofage merupakan
inovasi dalam pengembangan agens pengendali hayati berupa virus yang bersifat
spesifik inang. Bakteriofage tersusun atas struktur ultra mikorskopis yang unik
sehingga mampu bereplikasi dalam inti sel inang. Bakteriofage telah berhasil
digunakan untuk mengelola beberapa penyakit tanaman oleh serangan bakteri
dalam upaya pengurangan residu kimia dalam penggunaan bakterisida selama ini.
Bakteriofage adalah virus yang sel inangnya berupa bakteri. Sel bakteri
digunakannya sebagai tempat memperbanyak partikel virus tersebut kemudian
akan lisis seiring dengan perkembangan partikel bakteriofage di dalam sel
inangnya. Atas dasar sifat ini diharapkan bakteriofage dapat dimanfaatkan dalam
mengendalikan populasi bakteri patogen tanaman, seperti Xanthomonas
campestris pv. campestris penyebab penyakit busuk hitam pada tanaman kubis.
committerhadap
Oleh sebab itu, diperlukan pengujian to user kemampuan bakteriofage dalam
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
3

mengendalikan patogen busuk hitam secara efektif dan efisien serta ramah
lingkungan.

B. Perumusan Masalah
Penyakit busuk hitam kubis yang disebabkan oleh bakteri Xanthomonas
campestris pv. campestris merupakan penyakit yang cukup penting pada
pertanaman kubis. Tawangmangu sendiri merupakan daerah endemi dari penyakit
busuk hitam kubis. Dalam rangka menekan penggunaan bahan kimia dalam
pengendalian patogen tanaman, diperlukan bahan alternatif yang ramah
lingkungan melalui peran musuh alami dari patogen. Berdasarkan permasalahan
tersebut maka rumusan masalah yang akan dikaji dalam penelitian ini antara lain:
1. Bagaimana eksplorasi dan isolasi bakteriofage yang menginfeksi Xanthomonas
campestris pv. campestris dari daerah Tawangmangu, Karanganyar?
2. Bagaimana kemampuan bakteriofage dalam mengendalikan penyakit busuk
hitam pada tanaman kubis?
3. Bagaimana pengaruh perbedaan asal bakteriofage (daun, daerah perakaran dan
tanah sekitar tanaman kubis sakit) terhadap pengendalian busuk hitam kubis?

C. Tujuan dan Manfaat Penelitian

1. Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk:
a. Mengeksplorasi dan mengisolasi bakteriofage yang menginfeksi
Xanthomonas campestris pv. campestris dari daerah Tawangmangu,
Karanganyar.
b. Mengetahui kemampuan bakteriofage dalam mengendalikan penyakit busuk
hitam pada tanaman kubis.
c. Mengetahui pengaruh perbedaan asal bakteriofage (daun, daerah perakaran
dan tanah sekitar tanaman kubis sakit) terhadap pengendalian penyakit
busuk hitam pada tanaman kubis.
2. Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan manfaat dalam

commitkhususnya
mengembangkan dunia pertanian, to user dalam bidang perlindungan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
4

tanaman. Informasi dan data mengenai keefektifan bakteriofage yang nantinya

dapat dimanfaatkan sebagai pengendali hayati yang dapat menekan populasi
patogen penyebab penyakit busuk hitam pada kubis. Bagi mahasiswa
diharapkan dapat menambah wawasan dan pengalaman dalam melakukan
penelitian serta mengetahui lebih jauh potensi bakteriofage sebagai agens
hayati dalam menekan pertumbuhan patogen tanaman khususnya bakteri.

commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
5

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Kubis
Kubis (Brassica oleracea L.) biasa dikenal oleh masyarakat awam sebagai
kol. Berdasarkan tata nama (sistematika) botani, kubis diklasifikasikan ke dalam:
Kerajaan : Plantae
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Dycotiledonae
Ordo : Brassicales (Rhoeadales)
Famili : Brassicaceae (Cruciferae)
Genus : Brassica
Spesies : Brassica oleracea var. capitata L. (Tjitrosoepomo 2002).
Kubis merupakan salah satu tanaman sayuran yang cukup dikenal di
Indonesia. Kubis dapat dikonsumsi sebagai sayuran segar maupun sebagai olahan.
Di Indonesia tanaman kubis secara nasional merupakan sayuran semusim yang
produksinya menempati urutan teratas yakni 1.432.814 ton dibandingkan dengan
produksi sayuran semusim lainnya BPS (2004). Kubis diduga berasal dari Italia,
dan kapan waktu introduksi ke Indonesia tidak diketahui dengan pasti, tetapi telah
dibudidayakan sebelum Perang Dunia II pada daerah-daerah pegunungan yang
benihnya dibawa dari Eropa, khususnya Belanda (Parmadi dan Sastrosiswojo
1993).
Kubis merupakan salah satu tanamana sayuran dari famili Brasicaceae
berupa tumbuhan berbatang lunak yang dikenal sejak jaman purbakala (2500-
2000 SM). Kubis termasuk tanaman yang dipuja dan dimuliakan oleh masyarakat
Yunani kuno. Awalnya kubis merupakan tanaman pengganggu (gulma) yang
tumbuh liar di sepanjang pantai Laut Tengah, di karang-karang pantai Inggris,
Denmark, dan pantai barat Perancis sebelah utara. Kubis mulai ditanam di kebun-
kebun Eropa serta ke Indonesia kira-kira abad ke 16 atau 17. Pada mulanya kubis
ditanam untuk diambil bijinya (Pracaya 1990).

commit to user

5
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
6

Kubis adalah sumber dari meniral seperti mangan, kalsium dan kalium. Selain itu,
mineral yang terkandung dalam kubis antara lain zat besi, fosfor, dan magnesium.
Kubis juga merupakan sumber dari serat, folat dan omega-3 yang sangat baik.
Kandungan lainnya adalah, natrium, seng dan tembaga. Kubis merupakan sumber
dari vitamin C, thiamin (vitamin B1 ), riboflavin ( vitamin B2 ), niasin, vitamin
B6, vitamin k, folat, vitamin A dan protein.100g kubis bisa mengandung 25
kalori. Kubis juga merupakan makanan rendah lemak jenuh, kolesterol dan
merupakan sumber makanan yang kaya akan serat dan folat. sebagian besar yang
terkandung dalam kubis adalah karbohidrat (Syafirudin 2012).
Pada umumnya kubis ditanam dengan pola tanam secara monokultur atau
tumpangsari. Waktu tanam kubis yang paling baik adalah pada awal musim hujan
atau awal musim kemarau. Meskipun demikian, kubis dapat ditanam sepanjang
musim atau tahun asalkan kebutuhan airnya terpenuhi. Cara budidaya tanaman
kubis adalah pengolahan tanah atau pembersihan gulma, penyulaman,
pemupukan, pemanenan, dan pergiliran tanaman (Rukmana 1994).
Keadaan iklim yang sesuai untuk pertanaman kubis adalah daerah yang
relatif lembab dan dingin. Kelembaban yang diperlukan tanaman kubis adalah 80
- 90 %, dengan suhu berkisar 15 - 20C serta cukup mendapatkan sinar matahari.
Varietas-varietas kubis untuk dataran tinggi yang ditanam di daerah yang bersuhu
di atas 25C akan gagal membentuk krop. Pertanaman kubis yang kurang
mendapatkan sinar matahari akan kurang baik pertumbuhannya dan mudah
terserang penyakit. Beberapa varietas kubis yang dapat dikembangkan di dataran
rendah (temperatur di atas 25C) diantaranya adalah KR-Cross dan KY-Cross
yang dapat memberikan hasil setara dengan tanaman kubis di dataran tinggi
(Kartapradja 1988).

B. Penyakit Busuk Hitam Kubis

Penyakit busuk hitam adalah salah satu penyakit yang paling merusak
tanaman kubis-kubisan. Kembang kol brokoli, kecambah brussels, kubis cina,
collard, kohlrabi, mustard, rutabaga, lobak dan kale juga merupakan tanaman
yang cukup rentan terhadap penyakit busuk hitam. Beberapa gulma silangan juga
commit to user
dapat menjadi inang patogen. Penyakit ini biasanya paling sering terjadi di daerah
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
7

yang rendah dan dimana tanaman tetap basah untuk waktu yang lama. Kondisi
yang menguntungkan untuk tersebarnya bakteri menyebabkan kerugian total
tanaman crucifer (Pracaya 2001).
Penyebab penyakit busuk hitam adalah Xanthomonas campestris pv.
campestris. Bakteri ini bersel tunggal, berbentuk batang, 0,7-3,0 x 0,4-0,5 m,
membentuk rantai, berkapsula, tidak berspora, bersifat gram negatif, bergerak
dengan satu flagel polar. Bakteri dapat masuk ke daun dalam 8 sampai 10 jam.
Luka pada daun yang disebabkan oleh serangga dan luka mekanik pada akar juga
juga dapat menjadi tempat masuknya bakteri ke tanaman. Gerakan bakteri ke
tanaman melalui hidatoda dibatasi dalam varietas tahan. Akibatnya, ada situs
infeksi yang lebih sedikit dan atau bagian yang terkena jauh lebih kecil dalam
varietas tahan daripada varietas rentan (Hasna 2011).
Adapun klasifikasi bakteri penyebab busuk hitam kubis yakni
Xanthomonas campestris pv. campestris menurut Dye et al. (1980) adalah sebagai
berikut:
Kerajaan : Bacteria
Filum : Proteobacteria
Kelas : Gamma Proteobacteria
Ordo : Xanthomonadales
Famili : Xanthomonadaceae
Genus : Xanthomonas
Species : Xanthomonas campestris
Trinomial name: Xanthomonas campestris pv. campestris
Penyakit busuk hitam yang disebabkan oleh X. campestris pv. campestris
dicirikan dengan adanya bercak kuning menyerupai huruf V di pinggir daun
mengarah ke tengah daun. Tulang-tulang daun berwarna cokelat tua atau hitam.
Penyaluran air pada bagian yang bergejala terhambat sehingga daun membusuk
dan berwarna hitam. Serangan patogen terjadi mulai dari persemaian kemudian di
lapangan, hingga pada pasca panen. Bakteri masuk ke dalam tanaman kubis
melalui pori air (hidatoda) pada ujung-ujung berkas pembuluh di tepi daun
(Semangun 2000). commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
8

Bakteri Xanthomonas campestris pv. campestris ini dapat menyebar ke

jaringan pengangkutan tanaman dan dapat berpindah secara sistematis dalam
jaringan pengangkutan tanaman tersebut. Jaringan angkut yang terserang
warnanya menjadi kehitaman yang dapat dilihat sebagai garis hitam pada luka
atau bisa juga diamati dengan memotong secara melintang pada batang daun atau
pada batang yang terkena infeksi. Busuk hitam juga dapat menyebabkan
terjadinya busuk lunak (Hasna 2011).

Sumber utama bakteri penyebab penyakit busuk hitam kubis adalah dari
benih, bahan tanaman terinfeksi, dan gulma silangan yang terinfeksi. Bakteri ini
disebarkan saat panen terutama oleh angin, percikan air, oleh para pekerja, mesin,
dan kadang-kadang oleh serangga. X. campestris dapat bertahan hidup pada
permukaan daun selama beberapa hari sampai tersebar ke hidatoda atau luka di
mana infeksi dapat terjadi. Bakteri masuk ke daun melalui hidatoda melalui pori-
pori di tepi daun pada malam hari saat terdapat tetes-tetes air. Air ditarik kembali
ke dalam jaringan daun pada pagi hari sehingga bakteri dapat masuk ke daun
(Soeroto 1994).

C. Bakteriofage
Penggunaan bakteriofage merupakan inovasi dalam pengembangan agens
pengendali hayati berupa virus yang bersifat spesifik inang. Bakteriofage tersusun
atas struktur ultra mikroskopis yang unik sehingga mampu bereplikasi dalam inti
sel inang. Bakteriofage telah berhasil digunakan untuk mengelola beberapa
penyakit tanaman oleh serangan bakteri dalam upaya pengurangan residu kimia
dalam penggunaan bakterisida selama ini (Lang et al. 2007).
Seperti kebanyakan virus, bakteriofage biasanya hanya membawa
informasi genetik yang diperlukan untuk replikasi asam nukleat dan sintesis
protein mantel mereka. Ketika fage menginfeksi sel inang mereka, pekerjaan yang
dilakukannya adalah untuk meniru asam nukleat dan untuk menghasilkan
selubung protein pelindung mereka. Namun, mereka tidak bisa melakukannya
sendirian. Mereka membutuhkan prekursor, pembangkit energi dan ribosom yang

commit
dipasok oleh sel inang bakteri mereka to user 2011).
(Setiawan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
9

Penggunaan bakteriofage merupakan inovasi dalam bidang agens

pengendali hayati dimana bakteriofage tersebut merupakan virus yang sangat
spesifik inang, ukurannya sangat mikroskopis, dan memiliki kemampuan untuk
melakukan replikasi pada tubuh inang (pada inti sel) (Klement 1959).

D. Uji plak
Plaque assay adalah suatu teknik yang digunakana untuk mengisolasi dan
memurnikan virus dan untuk menentukan titer virus (konsentrasi terendah virus
yang mengakibatkan terjadinya infeksi). Sebuah uji plak awalnya disebut tes
virologi, selanjutnya dikembangkan untuk mengukur dan menghitung infektivitas
bakteriofage (Maulana 2012).
Salah satu metode yang digunakan untuk mengetahui unit infeksi virus
diantaranya adalah plaque assay. Pada saat partikel virus memulai infeksinya
pada lapisan sel inang yang tumbuh menyebar di permukaan medium, zona lisis
atau zona hambat akan muncul sehingga akan terlihat wilayah yang terang pada
lapisan sel inang. Wilayah terang ini dinamakan sebagai plaque yang diasumsikan
bahwa setiap plaque berasal dari satu partikel virus (Kusnadi dkk. 2003).
Bakteriofage menempel pada suatu tempat yang spesifik dipermukaan
dinding sel bakteri dan kemudian menyuntikan DNA ke dalam sel bakteri (inti
sel). Bakteriofage berkembang di dalam sel bakteri sehingga pada suatu saat sel
tersebut akan mengalami lisis. Pada isolasi bakteriofage, dalam medium agar di
petri, lisis terungkapkan sebagai zona jernih yang disebut plak (plaque). Plak
dapat dilihat apabila bakteriofage ditumbuhkan bersama dengan inang
bakterinya pada lapisan yang tipis dalam media agar. Dengan demikian adanya
plak mencerminkan adanya kompatibilitas antara bakteriofage dan bakteri yang
bersangkutan (Balogh et al. 2003).

commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
10

III. METODE PENELITIAN

A. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Hama dan Penyakit
Tumbuhan, Laboratorium Biologi Tanah Fakultas Pertanian Universitas Sebelas
Maret Surakarta dan di lahan Kebun Benih Hortikultura (KBH) Tawangmangu,
Jawa Tengah. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret sampai Juli 2012.

B. Bahan dan Alat Penelitian

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: daun kubis,
perakaran kubis, serta tanah sekitar perakaran tanaman kubis yang terinfeksi
Xanthomonas campestris pv. campestris dari daerah Tawangmangu Karanganyar,
media YPG (Yeast Peptone Glukose), YPG cair (YPG tanpa agar), agar air 0,6%,
chloroform, aquadest, air steril, KOH 30%, bibit kubis, polybag, media tanam,
suspensi bakteriofage 10 ml/tanaman, serta suspensi bakteri Xanthomonas
campestris pv. campestris 10 ml/tanaman.
Adapun alat yang digunakan antara lain: pisau, gunting, sekop, alat tulis,
label, kantong plastik, sungkup, termos pendingin, petridish (9 mm), miliphore
ukuran 0,22 m, 1 set hand pipet dan tip, timbangan, alat penggerus steril,
sentrifuse, tabung mikrosentrifus, shaker, tabung, vortex, mini hand sprayer,
kamera digital, dan alat-alat pendukung lainnya.

C. Cara Kerja Penelitian

1. Perancangan Penelitian
Penelitian ini dilakukan dalam 2 tahap yakni purifikasi bakteriofage
yang dilakukan secara deskriptif sehingga tanpa rancangan peneltian dan
pengujian bakteriofage pada tanaman kubis dalam mengendalikan busuk hitam
kubis di lahan. Unit percobaan disusun dengan menggunakan rancangan acak
lengkap (RAL) pada keadaan lingkungan yang seragam. Perlakuan yang
diberikan adalah aplikasi bakteriofage dengan faktor asal isolat bakteriofage
yang berbeda sebagai berikut: commit to user

10
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
11

1) Kontrol menggunakan aquadest :K

2) Bakteriofage asal daun tanaman kubis sakit : DS
3) Bakteriofage asal perakaran tanaman kubis sakit : AS
4) Bakteriofage asal tanah sekitar tanaman kubis sakit : TR
Sebagai satu unit perlakuan adalah sebuah tanaman kubis seragam
berumur 30-40 HST varietas midori dengan unit sampel berupa 3 daun pada
tiap tanaman. Tanaman kubis ditanam pada sebuah polibag berdiameter 50 cm.
Masing-masing perlakuan diulang sebanyak 6 kali sehingga jumlah perlakuan
seluruhnya ada 24 tanaman.
2. Analisis Data
Analisa data menggunakan Uji F (Fisher Test) taraf 5% dan dilanjutkan
dengan Uji Stepwise untuk data yang normal.
3. Pelaksanaan Penelitian
a. Eksplorasi dan Isolasi Bakteri X. campestris pv. campestris dari lapang
Daun kubis yang bergejala busuk hitam kubis diambil dari wilayah
endemi penyakit busuk hitam kubis yakni dari daerah Tawangmangu,
Karanganyar. Eksplorasi dilakukan dengan mencari tanaman kubis yang
menunjukkan gejala penyakit busuk hitam kubis. Isolasi diawali dengan
proses sterilisasi daun kubis dengan clorox kemudian dibuat suspensi
dengan air steril. Bakteri diisolasi pada media YPG dalam petridish.
b. Kultur Bakteri Pada Media Buatan
Bakteri dikulturkan pada media YPG di dalam petridish berdiameter 9
cm. Kultur diinkubasikan pada suhu ruang kurang lebih selama 96 jam
hingga muncul koloni bakteri. Selanjutnya dilakukan identifikasi terhadap
koloni bakteri yang terbentuk. Identifikasi X. campestris pv. campestris
dilakukan melalui pengamatan morfologis koloni bakteri. Karena bakteri X.
campestris pv. campestris merupakan bakteri gram negatif, maka dilakukan
pengujian gram menggunakan larutan KOH 30% untuk memastikan bahwa
koloni yang terbentuk merupakan bakteri X. campestris pv. campestris.
Koloni bakteri Xcc kemudian dipindahkan pada media agar miring dan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
12

diinkubasikan selama 72 jam pada suhu ruang guna mendapatkan biakan

murni X. campestris pv. campestris.
c. Isolasi Bakteriofage dari Lapangan
Bakteriofage diisolasi dari daerah endemi busuk hitam kubis di
Tawangmangu, Karanganyar. Bakteriofage diisolasi dari tiga sumber yakni:
jaringan tanaman kubis sakit, daerah perakaran tanaman sakit, serta tanah
disekitar tanaman kubis sakit. Dari tiap bahan (jaringan tanaman sakit,
perakaran tanaman sakit, tanah sekitar tanaman sakit) yang di ambil,
masing-masing diambil sekitar 50 g (satu unit sampel).
d. Kultur fage dalam media cair
Isolat X. campestris pv. campestris ditumbuhkan dalam 3 medium
YPG cair masing-masing 300 ml secara aerob dengan cara diinkubasikan
selama 24 jam pada suhu kamar menggunakan shaker-inkubator. Sampel
daun kubis sakit, akar kubis sakit, dan tanah rizosfer kubis sakit masing-
masing ditimbang 50 g kemudian dimasukkan ke dalam YPG cair yang
berisi Xcc yang telah diinkubasi selama 24 jam. Selanjutnya diinkubasikan
kembali selama 24 jam pada suhu kamar dengan cara digojok menggunakan
shaker-incubator. Setelah masa inkubasi, diamkan sejenak hingga endapan
terbentuk dan supernatant berwarna kuning bening. Supernatan kemudian
diambil dan disentrifuse dengan kecepatan 12.000 rpm selama 10 menit
kemudian bakteri disaring menggunakan miliphore berukuran 0,22 m.
Supernatan dibagi dua, salah satunya ditreatment dengan menggunakan
kloroform guna pendeteksian bakteriosin. Fage diencerkan per sepuluh kali
hingga pengenceran 10-5(masing-masing 2 ulangan).
e. Uji Plak
Menyiapkan medium YPG pada cawan petri sebanyak 60 buah
(masing-masing 20 buah untuk tiap asal isolat) kemudian dibiarkan
mengental selama semalam (sebagai lapisan dasar). Agar air 0,6% dicairkan
dalam waterbath hingga agar mencair, kemudian suhu didalam waterbath
diturunkan hingga 50C. Bakteriofage pada masing-masing asal isolat pada
tiap tingkat pengenceran commit
diambiltosebanyak
user 100l menggunakan pipet
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
13

ependorf, kemudian dituangkan kedalam agar air yang telah mencair (pada
suhu 50 C). Selanjutnya membuat suspensi X. campestris pv. campestris
menggunakan 10 ml aquadest ditambahkan biakan murni X. campestris pv.
campestris sebanyak 3 gores. Suspensi tersebut ditambahkan pada agar air
yang telah berisi bakteriofage tadi sebanyak 100 l. Campuran tersebut
dihomogenkan menggunakan vortex hingga bakteriofage dan X. campestris
pv. campestris. terdistribusi merata pada agar air. Campuran tersebut
dituangkan (secara aseptis) ke permukaan medium YPG (lapisan dasar) dan
selanjutnya diinkubasikan pada suhu kamar selama 24 jam. Setelah masa
inkubasi amati terbentuknya plak berupa zona bening yang muncul pada
media YPG dan menghitung jumlah plak yang terbentuk pada masing-
masing tingkat pengenceran.
f. Preparasi X. campestris pv. campestris dan Bakteriofage untuk
Perlakuan
Untuk aplikasi pada tanaman bakteriofage harus diambil dari plak
(zona bening) yang terbentuk. Plak (zona bening) yang terbentuk diambil
dengan cara dipisahkan dari media dan langsung dimasukkan ke dalam
nutrient broth selanjutnya dihomogenkan. Kemudian mengambil sebanyak
10 ml untuk dilakukan sentrifugasi selama 5 menit dengan kecepatan 12.000
rpm hingga didapatkan supernatan. Supernatan yang terbentuk kemudian
dapat dipindahkan ke dalam mini hand sprayer untuk diaplikasikan pada
tanaman.
Begitu pula dengan bakteri X. campestris pv. campestris, bakteri
dipanen dengan cara pembuatan suspensi bakteri dengan 10 ml nutrient
broth. Suspensi tersebut disentrifugasi selama 5 menit dengan kecepatan
12.000 rpm. Hasil sentrifugasi tersebut dipindahkan dalam mini hand
sprayer kemudian dapat diaplikasikan tanaman pada tanaman.
g. Uji Kinerja Bakteriofage yang Telah Diperoleh untuk Mengendalikan
Penyakit Busuk Hitam Kubis
Percobaandilakukan di lahan Kebun Benih Hortikultura
commitkubis
Tawangmangu. Bibit tanaman to user(varietas midori) yang seragam
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
14

berumur 30 HST ditanam pada polybag berdiameter 50 cm dengan media

taman berupa campuran antara tanah dan kompos. Rancangan lingkungan
menggunakan Rancangan Acak Lengkap dengan 6 kali ulangan. Adapun
perlakuan yang diberikan adalah aplikasi bakteriofage pada tanaman kubis
dengan asal bakteriofage sebagai berikut:
1. Kontrol menggunakan aquadest :K
2. Bakteriofage asal daun tanaman kubis sakit : DS
3. Bakteriofage asal perakaran tanaman kubis sakit : AS
4. Bakteriofage asal tanah sekitar tanaman kubis sakit : TR
Perlakuan dimulai saat tanaman berdaun lima helai. Perlakuan dimulai
dengan penyemrotan suspensi bakteriofage sebanyak 10 ml tiap tanaman. Dua
jam kemudian, tanaman disemprot dengan suspensi bakteri sebanyak 10 ml
tiap tanaman. Tanaman disungkup dengan kantong plastik untuk menjaga
kelembaban. Pengamatan terhadap intensitas serangan dilakukan mulai 2 hari
setelah inokulasi.
Adapun denah penempatan tanaman di lahan sebagai berikut:

KU2 TRU6 DSU5 KU5 DSU6 TU5

DSU1 KU3 ASU6 TRU1 KU6 ASU5

TRU2 ASU4 DSU3 ASU2 TRU4 KU4

ASU1 TRU3 KU1 DSU2 ASU3 DSU4

D. Peubah Pengamatan
a. Banyaknya Bakteriofage
Pada saat partikel bakteriofage memulai infeksinya pada lapisan sel
X. campestris pv campestris yang tumbuh menyebar di permukaan medium,
zona lisis atau zona hambat akan muncul sehingga akan terlihat wilayah
yang terang pada lapisan sel inang. Wilayah terang ini dinamakan sebagai
plak yang diasumsikan bahwa setiap plak berasal dari satu partikel
bakteriofage.
commit to user
b. Saat Muncul Gejala
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
15

Variabel saat muncul gejala ini diamati setelah perlakuan aplikasi

bakteriofage dan bakteri Xanthomonas campestris pv. campestris.
Pengamatan mencakup kapan pertama kali gejala muncul dan pada
perlakuan yang mana gejala penyakit busuk hitam muncul.
c. Insiden penyakit
Kejadian/ insiden penyakit merupakan persentase jumlah daun yang
terserang patogen (n) dari total daun yang diamati (N). Pengamatan pada
kubis dilakukan setelah inokulasi yakni dengan pengamatan terhadap 3 daun
sebagai unit pengamatan berbeda yang menimbulkan gejala pada tiap
tanaman. Insiden penyakit dihitung berdasarkan rumus:
I =

n
(nxv)
x100%
NxV

IP = x100% (Zadoks dan Schein, 1979)

N
Dimana:
IP = Insiden penyakit (%)
n = jumlah daun yang terserang (menunjukkan gejala)
N = jumlah daun yang diamati
d. Keparahan Penyakit
Pengamatan pada kubis dilakukan mulai 2 hari setelah inokulasi
terhadap intensitas serangan. Pada tiap-tiap tanaman, gejala bercak daun
dihitung dari 3 daun yang berbeda. Keparahan penyakit dihitung
berdasarkan nilai scooring dengan rumus:

KP =
(nxv) x100%
NxV
Dimana:
KP = Keparahan penyakit (%)
n = sampel yang diamati
v = skor penyakit
N = jumlah sampel yang diamati
V = skor penyakit tertinggi
Skala untuk setiap kategori kerusakan :
commit
0 = tidak ada serangan pada daun to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
16

1 = luas daun terserang (X1) = 0% < X1 20%

3 = luas daun terserang (X3) = 20% < X3 40%
5 = luas daun terserang (X5) = 40% < X5 60%
7 = luas daun terserang (X7) = 60% < X7 80%
9 = luas daun terserang (X9) = 80% < X9 100%

commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
17

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Banyaknya Bakteriofage
Banyaknya bakteriofage dapat diketahui dengan menghitung jumlah plak
yang terbentuk pada hasil uji plak. Plak merupakan wilayah terang yang terbentuk
pada lapisan atas media yang merupakan zona lisis atau zona hambat saat partikel
bakteriofage menginfeksi lapisan sel X. campestris pv campestris (Gambar 1.).
Diasumsikan bahwa setiap plak yang terbentuk berasal dari satu partikel
bakteriofage.

Keterangan : a. Plak yang terbentuk berupa zona bening

b. Koloni bakteri Xcc yang tidak mengalami lisis
Gambar 1. Hasil uji plak
Menurut Pratiwi (2010), partikel virus keluar dari sel yang diserangnya
dengan memecahkan sel tersebut sehingga sel inang mati (lisis). Plak yang
terbentuk dari suatu kultur bakteri yang ditumbuhkan di cawan petri merupakan
satu parameter penting dari adanya fage pada siklus litik. Plak tersebut terlihat
bening yang menandakan adanya zona kerusakan sel. Setiap plak berasal dari satu
partikel fage sama seperti setiap koloni berasal dari satu sel bakteri. Satu plak
berasal dari satu partikel virus sehingga seluruh partikel virus yang terdapat pada
plak tersebut seharusnya juga memiliki sifat genetik yang sama.
Tabel 1. Jumlah Bakteriofage
Asal Bakteriofage Jumlah Plak per 100 l Nilai PFU/ml
Daun Sakit 2.780 27.800
Akar sakit 2.059.980 20.599.800
Tanah Sakit 170.834 1.708.340
Sumber : Analisis Laboratorium Hama dan Penyakit
commit to userTanaman Fakultas Pertanian UNS
2012.

17
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
18

Berdasarkan Tabel 1. dapat diketahui bahwa bakteriofage dapat diisolasi

dari tiga sumber yang berbeda, yakni daun sakit, tanah sekitar tanaman sakit, serta
perakaran tanaman sakit. Artinya pada ketiga sumber tersebut terdapat
bakteriofage yang dapat menginfeksi Xanthomonas campestris pv. campestris.
Data di atas menunjukkan jumlah bakteriofage dari tiap sumber berbeda. Pada uji
plak, bakteriofage asal akar menunjukkan jumlah plak yang terbentuk adalah
paling banyak yakni 20.599.800 PFU/ml.

B. Saat Muncul Gejala

Saat muncul gejala merupakan waktu yang menunjukkan kapan pertama
kalinya tanaman kubis menunjukkan gejala penyakit busuk hitam kubis. Soeroto
(1994), menyebutkan bahwa X. campestris dapat bertahan hidup pada permukaan
daun selama beberapa hari sampai tersebar ke hidatoda atau luka di mana infeksi
dapat terjadi. Bakteri masuk ke daun melalui hidatoda saat memancarkan air
melalui pori-pori di tepi daun pada malam hari, ditarik kembali ke dalam jaringan
daun pada pagi hari.
Menurut Semangun (2000), penyakit busuk hitam yang disebabkan oleh X.
campestris pv. campestris dicirikan dengan adanya bercak kuning menyerupai
huruf V di pinggir daun mengarah ke tengah daun. Tulang-tulang daun berwarna
cokelat tua atau hitam. Penyaluran air pada bagian yang bergejala terhambat
sehingga daun membusuk dan berwarna hitam.
Hasna (2011) mengemukakan bahwa bibit kubis yang terserang patogen X.
campestris pv. campestris akan berwarna kuning sampai coklat, layu, dan runtuh.
Daun muda yang terinfeksi mengalami pertumbuhan yang terhambat, warna
kuning sampai coklat, layu, dan mati sebelum waktunya. Kadang-kadang,
tanaman yang terserang penyakit daunnya rontok dan menjadi gundul.

commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
19

Tabel 2. Saat Muncul Gejala Busuk Hitam Kubis

Perlakuan Ulangan Saat Muncul Gajala (HST)
1 2
2 -
Kontrol 3 1
(Dengan aplikasi 4 1
aquadest) 5 6
6 2
1 -
2 -
Bakteriofage Asal Daun 3 -
Kubis Sakit 4 2
5 -
6 2
1 2
2 -
3 -
Bakteriofage Asal Akar 4 4
Kubis Sakit 5 2
6 2
1 -
2 6
Bakteriofage Asal 3 2
Tanah Sekitar Kubis 4 -
Sakit 5 -
6 2
Sumber: Pengamatan Tanaman Perlakuan di Lahan
Tabel 2. menunjukkan bahwa tidak semua perlakuan menunjukkan gejala
penyakit busuk hitam kubis. Gejala penyakit busuk hitam kubis paling banyak
muncul pada perlakuan K (kontrol). Dari 6 ulangan, 5 ulangan menunjukkan
gejala penyakit busuk hitam kubis. Dari 4 perlakuan yang diberikan, rata-rata
gejala penyakit busuk hitam muncul pada 1-2 HST. Menurut Soeroto (1994),
bakteri masuk ke daun melalui hidatoda saat memancarkan air melalui pori-pori di
tepi daun pada malam hari, ditarik kembali ke dalam jaringan daun pada pagi hari.
Bakteri dapat masuk ke daun dalam 8 sampai 10 jam, dan gejala yang terlihat layu
secepat 5-15 jam kemudian.
Berdasarkan Tabel 2. Terlihat bahwa pada perlakuan kontrol pada hari
pertama sudah ada yang menunjukkan gejala penyakit busuk hitam. Hal ini
dimungkinkan karena tidak adanya bakteriofage yang dapat menghambat infeksi
dari bakteri. Sehingga lebih cepat memunculkan gejala busuk hitam kubis.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
20

C. Insiden Penyakit
Insiden Penyakit (IP) merupakan persentase jumlah daun yang terserang
patogen (n) dari total daun yang diamati (N). Menurut Zadoks dan Schein (1979),
pengukuran intensitas penyakit tanaman dapat dinyatakan dalam istilah
keterjadian penyakit dan keparahan penyakit. Intensitas penyakit dinyatakan
dengan insiden/keterjadian penyakit apabila penyakitnya bersifat sistemik atau
adanya serangan patogen cepat atau lambat akan menyebabkan kematian atau
tidak berproduksi misalnya penyakit yang disebabkan oleh virus.
60

50
Insiden Penyakit (%)

40

30

20

10

0
K DS AS TR
IP (%) 50 11.11 33.33 22.22

Keterangan: 1.) K: kontrol, DS: bakteriofage asal daun kubis sakit, AS: bakteriofage asal
akar kubis sakit, TR: bakteriofage asal tanah sekitar kubis sakit
2.) K merupakan perlakuan yang paling berpengaruh terhadap IP
berdasarkan uji regresi stepwise
Gambar 2. Rata-rata insiden penyakit busuk hitam kubis
Gambar 2. memperlihatkan bahwa pada perlakuan kontrol menunjukkan
rata-rata nilai insiden penyakit yang paling tinggi dibandingkan dengan perlakuan
lain. Pada perlakuan kontrol, nilai insiden penyakit pada pengamatan terakhir
(hari ke-8) mencapai 50%. Sedangkan dengan aplikasi bakteriofage menunjukkan
nilai insiden penyakit yang relatif lebih rendah yakni 11,11% untuk aplikasi
bakteriofage asal daun sakit, 33,33% untuk aplikasi bakteriofage asal akar sakit,
dan 22,22% untuk aplikasi bakteriofage asal tanah sekitar tanaman sakit. Dari
uraian tersebut dapat dikatakan bahwa bakteriofage mampu meminimalisir
commit
kejadian penyakit busuk hitam kubis. Haltoini
user
sesuai dengan pernyataan Flaherty
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
21

et al. (2000), yang mengemukakan bahwa aplikasi bakteriofage konsisten

mengurangi kejadian penyakit dan keparahan penyakit bercak bakteri yang
disebabkan oleh Xcv.
Berdasarkan uraian diatas terlihat bahwa aplikasi bakteriofage
mempengaruhi tingkat insiden penyakit busuk hitam pada tanaman kubis.
Terbukti bahwa nilai insiden penyakit pada perlakuan kontrol (tanpa perlakuan
bakteriofage) nilainya paling rendah. Namun berdasarkan uji Fisher (Lampiran 2)
menunjukkan bahwa perlakuan aplikasi bakteriofage tidak berpengaruh nyata
terhadap variabel insiden penyakit. Diduga hal tersebut disebabkan karena jumlah
bakteriofage yang diaplikasikan lebih rendah dibandingkan jumlah Xcc yang
diinokulasikan. Sehingga meskipun terjadi mekanisme hambatan bakteriofage
terhadap Xcc, hambatan tersebut kurang berpengaruh dan Xcc masih mampu
menginfeksi tanaman dan bereplikasi serta menimbulkan gejala penyakit busuk
hitam. Selain itu replikasi dan ketahanan Xcc juga tidak hanya dipengaruhi oleh
bakteriofage. Menurut Goto (1992), bakteri yang rentan terhadap bakteriofage
sekalipun, mereka juga memiliki banyak mekanisme untuk melindungi diri dari
dari ketahanan inang dan stres lingkungan. Misalnya Xanthomonas, menghasilkan
ekstraseluler polisakarida tebal (xantan) yang melindungi sel dari infeksi
bakteriofage, yang mungkin telah terjadi.

D. Keparahan Penyakit
Keparahan penyakit (KP) didefinisikan sebagai persentase luasnya
jaringan tanaman yang terserang patogen dari total luasan yang diamati. KpP
adalah keparahan penyakit; n adalah jumlah jaringan terserang pada setiap
kategori (skor); v adalah kategori (skor) serangan; Z adalah kategori serangan
tertinggi; dan N adalah total dari jumlah jaringan yang diamati (Agrios 1997).
Pengamatan keparahan penyakit dilakukan secara berkala yakni 2, 4, 6,
dan 8 HST. Pengamatan dilakukan secara deskriptif dengan melihat gejala
serangan penyakit busuk hitam pada daun kemudian menentukan persentase
serangan dengan skor yang telah ditentukan. Keparahan penyakit busuk hitam
kubis mengalami perkembangan (Gambar 3.). Namun pada perlakuan DS (dengan
commit to user
aplikasi bakteriofage asal daun sakit), gejala penyakit cenderung tidak
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
22

berkembang.
16 TR: bakteriofage
14 14.19 asal tanah sekitar
kubis sakit
Keparahan Penyakit

12 AS: bakteriofage
10 10.49 asal akar sakit
8.76
8 8.02
(%)

6.79 DS: bakteriofage

6 6.17 asal daun sakit
4.94
4 3.7 3.08 K: kontrol
2 1.85
1.23 1.23 1.23 1.23
0 0
0 2 4 6 8
hari ke-

Gambar 3. Grafik keparahan penyakit busuk hitam kubis

Gambar 3. memperlihatkan bahwa pada perlakuan kontrol menunjukkan
nilai keparahan yang paling tinggi dibandingkan dengan perlakuan lain. Pada
perlakuan pengamatan hari ke-2 rata-rata keparahan penyakit mencapai 6,79%
dan terus mengalami peningkatan hingga pada pengamatan hari ke-8 sebesar
14,19%. Perlakuan kontrol merupakan perlakuan tanaman kubis diberi aplikasi
bakteri Xanthomonas campestris pv. campestris dan aquadest (tanpa aplikasi
bakteriofage). Tanpa adanya bakteriofage, bakteri dapat melakukan pembelahan
secara cepat karena tidak terhambat oleh aktivitas dari bakteriofage.
16
14
Keparahan Penyakit (%)

12
10
8
6
4
2
0
K DS AS TR
KP (%) 14.19 1.23 8.64 6.17

Keterangan: 1.) K: kontrol, DS: bakteriofage asal daun kubis sakit, AS: bakteriofage asal
akar kubis sakit, TR: bakteriofage asal tanah sekitar kubis sakit
2.) K merupakan perlakuan yang paling berpengaruh terhadap KP
berdasarkan uji regresi stepwise
commit to user
Gambar 4. Rata-rata keparahan penyakit busuk hitam kubis
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
23

Gambar 4. menunjukan rata-rata keparahan penyakit busuk hitam kubis

pada tiap perlakuan. Berdasarkan uji regresi stepwise (lampiran 3, stepwise
regression) menunjukkan perlakuan kontrol merupakan perlakuan yang paling
berpengaruh terhadap nilai keparahan penyakit. Pada kontrol terlihat bahwa rata-
rata keparahan penyakit cukup tinggi yakni 14,19%. Hal ini disebabkan karena
tidak adanya bakteriofage yang menghambat infeksi dari bakteri Xanthomonas
campestris pv. campestris. Sehingga gejala penyakit bususk hitam kubis dapat
berkembang.
Gambar 4. memperlihatkan bahwa untuk perlakuan aplikasi bakteriofage
yang berasal dari 3 sumber yang berbeda (daun kubis sakit, akar tanaman sakit,
tanah sekitar kubis sakit) menunjukan nilai keparahan penyakit yang relatif
berbeda. Pada tanaman kubis dengan aplikasi bakteriofage asal daun sakit nilai
keparahan penyakit sebesar 1,23%, tanaman kubis dengan aplikasi bakteriofage
asal akar sakit nilai keparahan penyakit sebesar 8,64%, dan tanaman kubis dengan
aplikasi bakteriofage asal tanah sekitar tanaman sakit nilai keparahan penyakit
sebesar 6,17%. Berdasarkan nilai keparahan penyakit tersebut diduga tempat
eksplorasi bakteriofage (daun sakit, akar sakit, dan tanah sekitar tanaman sakit)
mempengaruhi tingkat replikasi serta daya hambat bakteriofage terhadap bakteri
Xanthomonas campestris pv. campestris.
Meskipun secara deskriptif keberadaan bakteriofage mampu menghambat
gejala penyakit, namun berdasarkan uji Fisher (Lampiran 3) menunjukkan bahwa
perlakuan aplikasi bakteriofage tidak berpengaruh nyata terhadap variabel
keparahan penyakit. Hal ini diduga karena bakteriofage yang diaplikasikan tingkat
kerapatannya lebih rendah dibandingkan dengan bakteri Xcc yang
8
diaplikasikanyakni dibawah 10 CFU/ml. Sehingga bakteriofage hanya dapat
menginfeksi sebagian Xcc saja. Sedangkan Xcc yang tidak terinfeksi oleh
bakteriofage tetap dapat bereplikasi dan menyebabkan munculnya gejala busuk
hitam kubis. Selain itu dimungkinkan faktor lingkungan juga berpengaruh
terhadap ketahanan bakteriofage di lapangan. Menurut Lang et al. (2007), faktor
lingkungan seperti kelembapan dan suhu, limpasan akibat penyemprotan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
24

inokulum dengan volume yang terlalu tinggi mempengaruhi penurunan jumlah

bakteriofage di lapangan.

commit to user
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

V. KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat diambil kesimpulan sebagai berikut:
1. Bakteriofage dari Xanthomonas campestris pv. campestris dapat diisolasi dari
daun tanaman, akar tanaman, dan tanah sekitar tanaman yang terserang busuk
hitam kubis.
2. Bakteriofage memiliki kemampuan dalam menekan serangan penyakit busuk
hitam kubis.
3. Infeksi bakteriofage terhadap Xanthomonas campestris pv. campestris
dipengaruhi oleh perbedaan asal bakteriofage (daun tanaman, akar tanaman,
dan tanah sekitar tanaman yang terserang busuk hitam kubis).

B. Saran
Saran yang dapat diberikan dalam penelitian ini yakni perlu adanya
pengkajian tentang mekanisme aplikasi bakteriofage di lapangan serta formulasi
bakteriofage yang tepat sehingga dapat dimanfaatkan oleh petani dalam
mengendalikan penyakit busuk hitam kubis.

commit to user

25