PENENTUAN KONSENTRASI KAFEIN MENGGUNAKAN

SPEKTROFOTOMETRI UV
I. Tujuan Percobaan

1. Dapat mengetahui prinsip kerja spektrofotometer UV

2. Menentukan konsentrasi kafein dalam sampel

II. Dasar Teori

1. Spektrofotometri UV
Suatu sistem mempunyai variasi warna yang berubah dengan berubahnya
konsentrasi atau komponen. Hal diatas merupakan dasar dari analisis kolorimetri.
Warna tersebut biasanya disebabkan oleh pembentukan suatu senyawa berwarna
dengan ditambahnya pereaksi yang tepat atau warna dapat melekat dalam
senyawa penyusunnya. Kemudian intensitas warna dari senyawa yang
bersangkutan dibandingkan dengan warna dari larutan yang sudah diketahui
jumlah atau konsentrasinya.
Kolorimetri merupakan suatu cara penetapan konsentrasi suatu zat
(senyawa) dengan mengukur absorbansi relatif cahaya yang berhubungan dengan
konsentrasi dari zat (senyawa) tersebut. Dalam kolorimetri visual, cahaya putih
alamiah ataupun buatan, biasanya digunakan sebagai sumber cahaya, dan
penetapannya dilakukan dengan alat sederhanayang disebut kolorimeter atau
pembanding warna.
Apabila mata digantiakan dengan sel fotolistrik, maka alatnya disebut
kolorimeter fotolistrik, dimana cahayanya dibatasi dengan panjang gelombang
tertentu dengan cara melewatkan cahaya tersebut ke suatu filter-filter berupa
lempengan berwarna terbuat dari kaca atau gelatin, sehingga intensitas yang
diteruskan mempunyai daerah spektra yang terbatas.
Dalam analisis spektrofotometri digunakan suatu sumber radiasi pada
daerah ultraviolet-nampak yaitu daerah ultra violet dengan panjang gelombang
180-380 nm, sedangkan daerah sinar tampak pada panjang gelombang antara 380-
750 nm. Spektrum yang diperoleh akan ideal,yaitu dengan lebar pita kurang 1nm.
Hal ini dikarenakan instrumen yang digunakan (spektrofotometer) dilengkapi
dengan sistem optik (yang dapat menghasilkan sebaran/dispers radiasi

1
 elektromagnetik yang masuk) dan alat untuk mengukur intensitas radiasi yang
diteruskan.

Spektrofotometer UV-1700 Shimadzu

Sumber : www.distrodoc.com
Tabel 1. Hubungan antara warna dengan warna komplementer
Panjang gelombang Warna Warna komplementer
(mm)
400-435 Ungu Hijau Kekuningan
435-480 Biru Kuning
480-490 Biru Kehijauan Jingga
490-500 Hijau Kebiruan Merah
500-560 Hijau Ungu Kemerahan
560-580 Hijau Kekuningan Ungu
580-610 Jingga Biru Kehijauan
610-680 Merah Hijau Kebiruan
680-700 Ungu Kemerahan Hijau

Sumber : wanibesak.wordpress.com
Hukum dasar dari spektofotometer dan kolorimetri, diterapkan oleh
Lambert dan Beer, sehingga hukum atau persamaan yang digunakan dikenal
dengan Hukum Lambert-Beer

Bila cahaya jatuh pada suatu medium homogen, maka sebagian cahaya
terebut akan dipantulkan, sebagian diserap dalam medium dan sisanya diteruskan.
Jika intensitas cahaya yang masuk dinyatakan dengan I 0, insensitas cahaya yang
dipantulkan Ir, intensitas cahaya yang diserap Ia dan insensitas cahaya yang
diteruskan It, maka :
Io = Ia + Ir + It
Sumber : Petunjuk Praktikum Kimia Analitik Instrumen KKTK-1073, Polban
Untuk antar muka udara-kaca sebagai akibat penggunaan sel kaca, cahaya
yang dipantulkan hanya sekitar 4%, sehingga Ir biasanya terhapus dengan
penggunaan suatu control (misalnya dengan sel pembanding atau blanko), jadi :
I0 = Ia + It

2
 Lambert menjelaskan bahwa serapa cahaya merupakan fungsi ketebalan
medium, sedangkan Beer menjelaskan bahwa serapan cahaya sebagai fungsi
konsentrasi larutan yang bersangkutan.
A=kbc
Dengan, A adalah absorban, b adalah kettebalan medium, c adalah
konsentrasi larutan dan k adalah tetapan atau koefisien adsorpsi yang tergantung
pada satuan konsentrasi yang digunakan. k dinyatakan sebagai adsorptivitas
serapan (=a) jika konsentrasi larutan dalam satuan gram/liter dan k dinyatakan
sebagai adsortivits molar atau ekstingsi molar (=E), jika konsentrasi larutan dalam
satuan mol/liter :
A = a b c (gram/liter)
A = E b c (mol/liter)
Log I0 / It = A dan T = It/I0
(T adalah cahaya yang diteruskan atau transmitansi). Jadi, A = log 1/T
Dari persamaan Lambert-Beer di atas menunjukan bahwa adsorbansi (A)
bebanding lurus dengan konsentrasi larutan (c). Jika dibuat suatu kurva antara
absorbansi (A) lawan konsentrasi (c), maka akan diperoleh suatu kurva garis lurus
(linier). Kurva linier tersebut biasa dikenal dengan kurva kalibrasi atau kurva
standar, yang dapat digunakan untuk menentukan konsentrasi larutan uji (sampel)
setelah absorbansi dari larutan uji tersebut diukur.

2. Kafein
Sumber
Kafein :dikenal
Petunjuk Praktikum
sebagai Kimia Analitik
trimethylxantine Instrumen
dengan KKTK-1073,
rumus kimia C 8H10N4Polban
O2 dan
termasuk jenis alkaloida. Bentuk alami kafein adalah Kristal putih, prisma
heksagonal dan dan berbobot molekul 194,19 dalton. Kafein memiliki titik leleh
238oC dan mengalami sublimasi pada suhu 178oC. Kafein terdapat secara alami
pada biji kopi, biji coklat, daun teh serta cula nuts.
Stuktur kimia dari kafein:

3
 Sumber : Alipart.blogspot.com

Kadar kafein per 240 mL untuk berbagai jenis minuman adalah :

Produk Kadar
Minuman bersoda 23
Kopi 65-120
Minuman energy 70-85
Teh 20-90
Cokelat 5-35
Susu cokelat 1-15

Sumber : antaranews.com

III. Alat dan Bahan

Alat Bahan
1. Spektrofotometri Shimadzu UV 1. Larutan Induk kafein 100
1700 dan kuvet kuarsa ppm
2. Labu takar 2. Larutan HCl 0,1 N
3. Gelas kimia 3. Kertas saring whatman
4. Pipet tetes 4. Serbuk kopi
5. Spatula 5. aquadest
6. Batang pengaduk
7. Gelas ukur
8. Botol semprot
9. Corong gelas

4
 10. Corong pisah

IV. Prosedur Kerja

Membuat larutan HCl0,1 N

0,5 ml, 1 ml, 1,5 ml, 2 Labu takar

ml, 2,5 ml dan 3 ml Larutan HCl 0,1 N
25 ml
larutan kafein 100 ppm.

Pengenceran Larutan blanko

Larutan kafein standar 2

ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm,
10 ppm, dan 12 ppm

Spektrofotometer UV-1700 Shimadzu

A. Menyalakan Alat

5
B. Pengukuran Spektrum (Untuk Menentukan Panjang Gelombang
Maksimum)

6
C. Pengukuran Photometrik (Untuk mengukur A atau %T, jika panjang
gelombang maksimum sudah diketahui)

7
P i l i h m e n u p h o t o m e t r i c , y a i t u t e k a n 1 , g o t o W l ( w a v e l e n g t h ) , i s i k a n n i l a i p a n j a n g g e l o m b a n g

M a s u k k a n k u v e t y a n g b e r i s i l a r u t a n b l a n g k o ( k e d u a - d u a n y a ) p a d a s a m p l e c o m p a r t m e n t

T e k a n t o m b o l a u t o z e r o , t u n g g u s a m p a i d e n g a n A : 0 , 0 0 0 A ( a l a t

G a n t i k u v e t i s i b l a n g k o d e n g a n k u v e t y a n g b e r i s i l a r u t a n s a m p e l y a n g a k a n d i a n a l i s i s

T e k a n t o m b o l ' s t a r t '

G a n t i k u v e t s a m p e l d e n g a n l a r u t a n s a m p e l y a n g l a i n d a n t e k a n ' s t a r t '

M u n c u l t a b e l p h o t o m e t r i c

D. Pengukuran Quantitative
1. Pembuatan Kurva Kalibrasi

8
P i l i h m e n u ' q u a n t i t a t i v e ' d e n g a n c a r a t e k a n ( 3 ) , ( j i k a d a r i m e n u ' s p e c t r u m ' t e k a n ' r e t u r n ' l e b i h d a h u l u

A t u r p a r a m e t e r :

M a s u k k a n k u v e t i s i l a r u t a n b l a n g k o p a d a k e d u a s i s i ' r e f e r e n c e s a m p l e '

T e k a n t o m b o l ' A u t o z e r o ' , t u n g g u s a m p a i d e n g a n 0 , 0 0 0 A

T e k a n ' s t a r t ' , m a s u k k a n n i l a i k o n s e n t r a s i l a r u t a n s t a n d a r , t e k a n ' e n t e r ' ( p e k a r j a a n t e r s e b u t d i l a n j u t k a n / d i u l a n g s a m p a i s e l e s a i

M u n c u l t a m p i l a n : N O I C o n c I A B S

T e k a n ' m e a s ' ( 2 )

G a n t i k u v e t b l a n g k o ( b a g i a n d e p a n ) d e n g a n l a r u t a n s t a n d a r y a n g p e r t a m a

T e k a n ' s t a r t ' ; m a k a a k a n k e l u a r n i l a i A B S

G a n t i k u v e t d e n g a n l a r u t a n s t a n d a r y a n g b e r i k u t n y a , t e k a n ' s t a r t ' , d e m i k i a n s e t e r u s y a s a m p a i p e n g u k u r a n s e l e s a i

T e k a n ' c a l . c u r v e ' F 1 u n t u k m e l i h a t t a m i l a n k u r v a k a l i b r a s i

E. Pengukuran Konsentrasi Sampel (Setelah Tahap Pembuatan Kurva

Kalibrasi)

9
 TT
M
e
k
a
n

S
T
A
R
T

F. Mematikan Alat

SmM i e l e i m n c ag u o t a r
gts o o e m nl g b k o a l
dhn i mn g a g s au
lkc a o a y nm a r p a r
mkt m e e m e n n jb at a d i
lbc i ei r l ul

V. Data Pengamatan
A. Pengukuran Spektrum
N Konsentrasi (ppm) Abcis ( ) Absorbansi
o

10
 1 6 280,2 0,233
2 8 279,8 0,303
Rata-Rata 280 0,268

B. Pengukuran Photometric
No Sampel No ABS K x ABS
1 2 0,0680 0,068
2 4 0,1399 0,140
3 6 0,2301 0,230
4 8 0,3030 0,303
5 10 0,3833 0,383
6 12 0,4590 0,459

C. Kurva Kalibrasi

11
VI. Pengolahan Data
A. Pengenceran Larutan Standar
1. 2 ppm 14. V1 x N1 = V2 x N2
2. V1 x N1 = V2 x N2 15. V1X 100 = 25 X 8
3. V1X 100 = 25 X 2
16. V1 = 2 ml
4. V1 = 0.5 ml
17. 10 ppm
5. 4 ppm 18. V1 x N1 = V2 x N2
6. V1 x N1 = V2 x N2 19. V1X 100 = 25 X 10
7. V1X 100 = 25 X 4
20. V1 = 2.5 ml
8. V1 = 1 ml
21. 12ppm
9. 6 ppm 22. V1 x N1 = V2 x N2
10. V1 x N1 = V2 x N2 23. V1X 100 = 25 X 12
11. V1X 100 = 25 X6
24. V1
12. V1 = 1.5 ml
= 3 ml
13. 8 ppm

12
 25.
B. Penentuan Konsentrasi Sampel
0.5

0.45
f(x) = 0.04x - 0.01
0.4 R = 1

0.35

0.3

Absorban 0.25
si 0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 2 4 6 8 10 12 14
26.
27. Konsentrasi (ppm)
28.
29. Konsentrasi sampel berdasarkan perhitungan :
30. y = 0,038x 0,006 R = 0,9999 (y: absorbansi, dan x:
konsentrasi)
31. Sampel Abs = 0,268 y = 0,038x 0,006
32. 0,268 = 0,038x 0,006
0,268+0,006
x= =7,2105 ppm
33. 0,038

34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
VII. Pembahasan
45. Pada praktikum spektrofotometri-UV, dilakukan analisa konsentrasi kafein
dengan menggunakan Spektofotometer UV-1700 Shimadzu. Kafein merupakan
senyawa yang berasal dari alam yang tersebar luas dan tergolong dalam senyawa
Alkaloid dengan rumus molekul C8H10N4O2, termasuk basa lemah berbentuk serbuk
putih yaitu kristal-kristal panjang, rasanya pahit dan memiliki titik leleh sebesar 234-
239C serta menyublim pada temperatur 180-200C. Gelombang maksimum kafein
adalah 210 nm (Oxford Higher Education, 2005). Kafein mampu menyerap sinar UV
karena mempunyai gugus fungsi kromofor (bahasa latin chromophorus yang berarti
pembawa warna).
46.
47. Sampel yang dianalisa dibandingkan dengan larutan standar kafein yang
telah diketahui konsentrasinya. Pembuatan larutan standar kafein 2, 4, 6, 8, 10 dan 12
ppm dibuat dengan mengencerkan larutan baku standar 100 ppm dengan
menggunakan HCl 0,1 N. Digunakan pelarut HCl karena kafein cenderung mudah
larut dalam HCl dibandingkan dengan aquades (air dingin), HCl juga bersifat asam
sehingga dapat membuat suasana kafein menjadi asam, kafein dibuat pada suasana
asam karena pada suasana asam panjang gelombang yang dihasilkan kafein
maksimum. Panjang gelombang yang maksimum memiliki kepekaan tinggi karena
terjadi perubahan absorbansi yang paling besar serta apabila dilakukan pengukuran
ulang maka kesalahan yang disebabkan oleh pemasangan ulang panjang gelombang
akan kecil. Dalam pembuatan larutan standar ini haruslah tepat dan teliti karena
larutan standar kafein akan menjadi kurva klibrasi pada penentuan sampel, jika pada
pembuatan larutan standar tidak dilakukan secara teliti dan tepat maka penentuan
kadar sampel pun akan terjadi kesalahan.
48. Media yang digunakan untuk pengukuran adalah kuvet. Sebelum proses
pengukuran dilakukan, kuvet yang dipergunakan dibilas terlebih dahulu dengan
larutan yang akan diukur. Setelah dibilas, larutan yang akan diukur dimasukan
secukupnya ke dalam kuvet, kuvet tidak diisi terlalu penuh,untuk meminimalisasi
larutan akan jatuh pada alat. Kuvet dilap dengan menggunakantisu khusus lensa yang
memiliki serat halus sehingga tidak merusak permukaan luar dari kuvet. Kuvet dilap
sampai permukaan kuvet bersih, agar cahaya yang terserap oleh larutanmaksimal.
49. Larutan blanko (berupa HCl 0,1 N dan tidak mengandung kafein)
dimasukkan kedalam kedua kuvet dan dimasukkan ke dalam alat. Hal ini bertujuan
untuk mengatur absorbansi larutan yang tidak mengandung kafein menjadi 0 atau
 semua sinar diteruskan menuju detektor sehingga % Transmitansi nya menjadi 100%.
Sehingga pada saat pengukuran, alat akan membandingkan absorbansi, baik deret
larutan standar maupun sampel, dengan larutan blanko yang memiliki absorbansi 0.
Selanjutnya, menentukan panjang gelombang maksimum.
50. Pada pengukuran panjang gelombang maksimum dipilih larutan standar
kafein 6 ppm dan 8 ppm karena absorbansinya antara 0,2 0,8 dan pada absorbansi
tersebut adalah daerah absorbansi yang baik. Tidak samanya panjang gelombang
maksimum kafein dari literatur dengan yang didapat adalah karena tidak samanya
konsentrasi yang dipilih untuk penentuan panjang gelombang maksimum. Menurut
litreratur panjang gelombang maksimum kafein adalah 210 nm (Oxford Higher
Education, 2005). Akan tetapi nilai panjang gelombang maksimum yang didapat
sebesar 280 nm.
51. Pengukuran kurva larutan standar menghasilkan kurva yang memiliki
regresi linier sebesar 0,999 maka kurva standar ini layak sebagai kurva standar untuk
penentuan konsentrasi/kadar sampel. Kurva yang berbentuk linear absorbansinya
memiliki korelasi dengan konsentrasi dan merupakan suatu fungsi.
52. Tujuan pembuatan kurva manual adalah untuk menentukan konsentrasi
sampel berdasarkan absorbansi yang didapat dalam perhitungan manual, dan di
cocokan dengan konsentrasi hasil dari perhitungan alat. Hasil yang didapat dari kurva
manual tidak terlalu jauh berbeda dengan hasil yang dibuat oleh alat.
53. Konsentrasi sampel yang didapat dari perhitungan adalah 7,2105 ppm.
Sedangkan yang diperoleh dari pengukuran sebesar 6,4281 disebabkan karena
larutanyang telah terkontaminasi.
54.
55.
56.
VIII. Kesimpulan
1. Panjang gelombang maksimum berdasarkan praktikum adalah 280 nm.
2. Absorban yang didapat berdasarkan praktikum

58. Sam 59. 60.

pel A K
No
62. 2 63. 64.
0 0
 66. 4 67. 68.
0 0

70. 6 71. 72.

0 0

74. 8 75. 76.

0 0

78. 10 79. 80.

0 0

82. 12 83. 84.

0 0

85. Konsentrasi sampel berdasarkan perhitungan adalah 7,2105 ppm.

3. Semakin besar nilai absorbansi maka semakin besar pula konsentrasi sampel yang
didapat.
4. Semakin pekat larutan maka semakin besar konsentrasi zat pada larutan tersbut.
5. Metode spektrofotometri memerlukan larutan standar yang telah diketahui
konsentrasinya.
IX. Daftar Pustaka

86. Anonim, 2012. Spektrofotometri. http://wwkhusnul.blogspot.com/2012/06/spekt

rofotometri.html. Diunduh 18 Maret 2016.

87. Basset, J., 1994, Vogel. Buku Teks Kimia Analisis Kuantitatif Anorganik, Edisi ke-
4, Buku Kedokteran EGC: Jakarta.

88. Mentari, Sri Rahayu. 2012. http://www.scribd.com /doc/95126973/m Absorbansi.

Absorbansi. Diunduh 18 Maret 2016

89. No name. t.t. www.distrodoc.com. Diunduh pada 18 maret 2016.

90. No name. t.t. Alipart.blogspot.com. Diunduh pada 18 maret 2016.
91. No name. t.t. antaranews.com. Diunduh pada 18 maret 2016.
92. No name. t.t. wanibesak.wordpress.com. Diunduh pada 18 maret 2016.
93.