PRAKTIKUM VI

Judul : Uji Ninhidrin

Tujuan : Membuktikan adanya asam amino bebas dalam protein
Dasar teori :
Protein merupakan komponen utama dalam sel hidup yang terbentuk dari asam-
asam amino melalui ikatan peptida dan memegang peranan penting dalam proses
kehidupan. Molekul protein mengandung unsure-unsur C, H, O, N dapat pula
mengandung S dan P (www.docstoc.com/docs//Laporan-Biokimia-Uji-Kuantitatif-
Protein)
Semua asam amino atau peptida yang mengandung asam -amino bebas akan
bereaksi dengan ninhidrin membentuk senyawa kompleks berwarna biru/ungu. Namun,
prolin dan hidroksiprolin menghasilkan senyawa berwarna kuning. (Buku penuntun
Biokimia untuk Mahasiswa Analis)

Gambar 1. Reaksi uji Ninhidrin pada protein

Bahan dan Alat

1. Larutan albumin 2%; gelatin 2%; kasein 0,5%; dan pepton 0.5%.
2. Pereaksi ninhidrin 0,1%
3. Alat pemanas atau penangas air
4. Pengatur waktu
5. Pipet ukur atau tetes
 Prosedur

1. Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih, lalu masing-masing isilah dengan larutan albumin,
gelatin, kasein, dan pepton sebanyak 2 ml.
2. Tambahkan 5 tetes pereaksi ninhidrin pada setiap tabung.
3. Kemudian, panaskan di atas penangas air hingga mendidih selama 5 menit.

Hasil Percobaan
No. Zat Uji Hasil Uji Asam Amino
Ninhidrin Bebas (+/-)
1 Albumin 2% Merah muda +
dengan endapan
putih
2 Gelatin 2% Bening -
3 Kasein 2% Bening (agak -
pekat)
4 Pepton 2% Ungu +

Gambar 2. Albumin Gambar 3. Gelatin Gambar 4. Kasein Gambar 5. Pepton

Pembahasan
Asam asam amino bereaksi dengan Ninhidrin untuk membentuk produk yang
disebut ungu ruhemann. Warna ungu pada larutan asam amino inilah yang menandakan
bahwa asam amino tersebut bereaksi positif terhadap uji Ninhidrin. Secara teori asam
amino atau peptida yang mengandung asam -amino bebas akan bereaksi dengan
Ninhidrin membentuk senyawa kompleks berwarna ungu. Namun, prolin dan
hidroksiprolin menghasilkan senyawa berwarna kuning.
 Untuk uji Ninhidrin, reagen ini memberikan warna spesifik ungu untuk asam amino.
Dari beberapa asam amino yang kami ujikan ternyata hanya satu yang memberikan warna
ungu yaitu Pepton.. Asam amino yang kami ujikan adalah pepton, kasein, gelatin dan
albumin yang berasal dari sampel berupa putih telur. Reagen Ninhidrin spesifik terhadap
asam amino yang mengandung gugus hidroksi.
Pada percobaan uji ninhidrin ini asam amino yang sudah ditetesi ninhidrin dan dipanaskan
akan mengalami denaturasi. Denaturasi disini artinya hilangnya sifat-sifat struktur lebih
tinggi terkacaunya ikatan hydrogen dan gaya-gaya sekunder lain yang mengutuhkan
molekul itu artinya hilangnya sifat biologis protein tersebut tetapi masih dapat diuji
apakah protein tersebut positif terhadap uji ninhidrin. Begitupun dengan putih telur yang
mengandung albumin. Pemanasan putih telur akan mengakibatkan albumin itu membuka
lipatan dan mengendap, dihasilkan suatu zat padat putih.

Kesimpulan
Dari pengamatan yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa hasil reagen ini
memberikan warna spesifik ungu dan endapan putih untuk asam amino. Serta Pepton dan
Albumin termasuk asam amino bebas.

Pertanyaan

1. Jelaskan apa yang dimaksud asam amino bebas?

2. Pada percobaan, manakah yang memberikan hasil positif pada uji ninhidrin? Mengapa?
3. Apakah reaksi ninhidrin dapat digunakan untuk menentukan asam amino secara
kuantitatif? Jelaskan!
4. Tuliskan struktur kimia asam amino prolin dan hidroksiprolin?

Jawaban :
1.
2. Pada percobaan pepton, karena pepton termasuk asam amino bebas, sehingga pada uji
Ninhidrin yang diperlakukan pada zat tersebut menghasilkan warna ungu.
3. Dapat. Semakin banyak ninhidrin pada zat uji yang dapat bereaksi, semakin pekat
warnanya. Hal ini juga mendasari bahwa uji Ninhidrin dapat digunakan untuk
menentukan asam amino secara kuantitatif.
4. Struktur kimia asam amino prolin dan hidroksiprolin :

Gambar struktur prolin Gambar strutur hidroksiprolin

Daftar Pustaka

Estein, Yasid dan Nursanti, Lisda. 2006. Penuntun Praktikum BIOKIMIA Untuk Mahasiswa
Analis. Yogyakarta : ANDI.
www.docstoc.com/docs//Laporan-Biokimia-Uji-Kuantitatif-Protein (diakses pada
tanggal 15 Oktober 2012)