Buku Petunjuk Praktikum Stikes

1
TATA TERTIB PRAKTIKUM PADA LABORATORIUM BIOKIMIA
Mahasiswa diharuskan :
1. Mempelajari acara praktikum dan menyusun rencana kerja sebelum melakukan
praktikum demi kelancaran dan kecepatan kerja selama praktikum
2. Setiap praktikum akan diawali dengan pre test dengan materi acara yang akan
dipraktikumkan pada hari tersebut.
3. Datang di laboratorium 15 menit sebelum praktikum dimulai, dengan membawa :
a. Jas laboratorium
b. Kain serbet yang bersih
c. Lembaran rencana kerja.
d. Pipet tetes.
4. Berpakaian sopan, bersepatu.selalu menjaga kebersihan, ketertiban dan
ketenangan selama jalannya praktikum
5. Praktikan dilarang makan, minum dan merokok di ruang laboratorium.
6. Memperhatikan petunjuk-petunjuk dari asisten, tidak boleh melakukan
pekerjaan-pekerjaan yang tidak ada hubungannya dengan praktikum
7. Memberitahukan pada asisten apabila terjadi kekurangan alat praktikum yang
harus disediakan oleh laboratorium
8. Hindarkan kecerobohan untuk menjaga terjadinya hal-hal yang tidak dikehendaki
9. Mencatat semua hasil pengamatan selama praktikum dan membuat laporan
sementara yang harus disetujui pembimbing setelah selesai praktek
10. Menyerahkan laporan resmi dari setiap acara praktikum yang telah dilakukan,
laporan resmi diserahkan selambat-selambatnya 7 hari (sebagai syarat untuk
mengikuti acar praktek selanjutnya)
11. Membersihkan semua alat yang telah dipakai sebelum meninggalkan laboratorium
dan bertanggung jawab apabila ada alat yang hilang atau rusak
12. Mengikuti semua acara praktikum dan harus memberitahukan kepada asisten
secara tertulis apabila terpaksa tidak dapat mengikuti salah satu acara
praktikum dan menunjukkan surat keterangan dokter.
/conversion/tmp/scratch/393191908.doc
2
TEST / PENGUJIAN PENCERNAAN
A. FUNGSI SALIVA MULUT
Daya Amilolitik saliva
1. Kumurlah mula-mula dengan air bersih, kemudian dengan 20 ml 0,2 % NaCl.
2. Kumuran tersebut ditampung dalam sebuah labu, gojok dam saringlah (Saliva
encer)
3. Isiah 3 buah tabung reaksi yang tersedia dengan 5 ml saliva encer tersebut.
4. Tabung pertama (1) didihlah lalu dinginkan segera dan tambahkan ke dalamnya 5
ml 1 % amilum.
5. Tabung kedua (2) diberi 5 ml HCL encer kemuadian 5 ml amilum 1 %.
6. Yang ketiga (3) ditambahkan 5 ml amilum 1 %.
7. Ketiga tabung dipanaskan melalui penangas dengan suhu 37o celcius.
8. Ujilah tiap menit sekali dengan setetes cairan tabung nomor 3 dengan larutan yod.
Jika pengujian diatas tida lagi menunjukkan reaksi positif, hentikan perlakuan
diatas dan kerjakan uji Benedict. Bila positif lakukan uji Osazon terhadap ketiga
tabung diatas.
9. Catat hasil pengujiannya.
B. PENCERNAAN DALAM LAMBUNG.
Hidrolisis protein oleh pepsin
1. Tiga buah tabung reaksi diisi masing-masing dengan 1 ml larutan pepsin.
2. Tambahkan ke dalam tabung nomor satu (satu) 1 ml HCL 0,4 % dan 2 potong fibrin
karman (fibrin yang diberi warna karmen).
3. Tabung nomor 2 ditambah dengan 1ml air dan 2 potong fibrin karman.
4. Tabung nomor tiga, didihkan selama 1 menit, segera dinginkan, lalu tambahkan
dengan 1 ml HCL 0,4 % dan 2 potong fibrin karmen.
5. Ketiga tabung panaskan dengan penangas suhu 37o celcius.
6. Catatlah hasil pengamatan pada ketiga tabung reaksi.
3
C. PENCERNAAN OLEH PANKREAS.
1. HIDROLISIS PROTEIN.
1. Kedalam tiga tabung reaksi masing-masing dituangkan :
 Tabung 1 : 1 ml ekstrak pankres netral, 2 tetes Na2Co3 2 % dan 2 potong
kongo merah fibrin.
 Tabung 2 : sama dengan (1) ditambah dengan 2 tetes larutan empedu.
 Tabung 3 : diisi dengan 1 ml air, 2 tetes Na2 CO3 dan 2 potong kongo merah
fibrin.
2. Ketiga tabung panaskan dengan penangas suhu 37o celcius.
3. Warna merah berarti terjadi pencernaan.
2. HIDROLISIS AMILUM.
1. Campurkan 5 ml larutan amilum dengan 1 ml ekstrak pankreas netral.
2. Inkubasikan pada suhu 37o celcius.
3. Ujilah perubahannya dengan yod dan lakukan pengujian benedict.
3. Hidrolisis Lemak.
1. Kedalam tiga tabung reaksi masing-masing dituangkan :
 Tabung 1 : 2 ml air susu dan 1 ml ekstrak pankreas netral.
 Tabung 2 : sama dengan (1) ditambah dengan 2 tetes larutan empedu.
 Tabung 3 : diisi dengan 2 ml air susu dan 1 ml air,
2. Masing-masing tabung ditambahkan 4 tetes Fenol merah dan Na2 CO3 sampai
larutan menjadi merah.
3. Inkubasikan pada suhu 37o celcius.
4. Amati perubahan warna dari merah menjadi kuning.
FUNGSI EMPEDU
1. Percobaan Penurunan Tegangan muka oleh garam kholat.
1. Isilah dua tabung reaksi masing-masing dengan air dan larutan empedu encer.
2. Taburkan serbuk belerang di atas permukaan cairan.
3. Amati keadaan serbuk itu.
4
2. Percobaan Oliver
1. Asamkan 3 ml larutan empedu dengan 2 tetes asetat glasial, kemudian saringlah
hingga jernih.
2. Tambahkan larutan pepton sama banyak, yang sebelumnya telah diasamkan dengan
asam asetat dan saring sampai jernih.
3. Catatlah timbulnya kekeruhan (reaksi antara protein dan asam kholat).
3. Pigmen-pigmen empedu (Fouchet)
1. Kedalam tabung erlenmeyer dimasukkan 15 ml larutan empedu, kemudian
dimasak.
2. Tambahkan 2 tetes larutan MgSO4 jenuh dan 5 ml NaCl 10%, masak lagi dan
biarkan terbentuknya endapan, selanjutnya disaring.
3. Tetesilah endapan pada kertas saring itu dengan 1-2 tetes pereaksi Fouchet.
4. Catatlah warna (hijau) yang timbul pada endapan itu.
4. Pigmen-pigmen empedu (Gmelin)
1. Kedalam tabung reaksi yang telah berisi dengan 3 ml HNO3 pekat dituangkan 1
ml larutan empedu encer (hati-hati mealui dinding tabung) sehingga terjadi 2
lapisan.
2. Catatlah warna yang timbul pada bidang batas lapisan tadi.
5
PENENTUAN KADAR GLUKOSA URINE
(METODE BENEDICT)
Prinsip
Reagensia benedict kuantitatif yang mengandung CuSO4 dalam larutan alkali
dapatdireduksi oleh glukosa. Cu2O yang terbentuk bereaksi dengan KCNS
membentuk presipitat (kekeruhan) berwarna putih dari cup rous thiocyanate dan
mencegah terbentuknya endapan yang berwarna merah atau kuning,bila seluruh
CuSO4 telah direduksi, larutan yang berwarna biru akan menjadi tidak berwarna.
Reagensia
1. Reagen Benedict kuantitatif.
2. Na2CO3 kristal.
Pengenceran :
Bila perlu urine dapat diencerkan, bila dibutuhkan antara 5-15 ml untuk mereduksi 10
ml reagen benedict. Caranya yaitu mula-mula 5,0 ml reagen benedict kuantitatif
Ditambahkan 8 tetes urin dan dipanaskan sampai mendidih lalu dinginkan :
 Bila terjadi presipitat hijau  encerkan 1 : 2
 Bila terjadi presipitat kuning  encerkan 1 : 5
 Bila terjadi presipitat merah bata  encerkan 1 : 10
Prosedur
1. Pipet 10,0 ml reagen benedict kuantitatif, masukkan ke dalam labu ukur 100,00 ml
2. Tambahkan 20 ml aquadest dan 5 gram Na2CO3 kristal serta sedikit pecahan
porselin.
3. Labu ukur dipanaskan (diatas hot plate stirer)
4. Urin yang diperiksa (bilaperlu telah diencerkan) dimasukkan ke dalam buret untuk
titran.
5. Mula-mula teteskan urin dari buret secara cepat sampai terbentuk presipitat
berwarna putih. Kemudian tetesan diperlambat dengan interval 10 detik ( labu
ukur tetap dipanaskan sambil digojok).
6. Titrasi dihentikan bila warna biru tepat hilang, lalu dicatat jumlah urine yang
dipakai.
6
Perhitungan :
Misalkan dibutuhkan X ml urine untuk titrasi dengan pengenceran 1 : a ( jika tidak
diencerkan, maka a=1)
0,02 x 100 2a
------------- x a = ------- = ……. gram %
= X X
Contoh :Miasal dibutuhkan 12.8 ml urin dengan pengenceran 1 : 5
2a 2x5
------------- = ------- = 0.78 gram %
X 12.8
7
PENENTUAN KADAR GLUKOSA DARAH
(METODE HOGENDOREN-JENSEN)
Prinsip :
Protein darah diendapkan dahulu dengan Zink Hidroxida (Zn(OH)2) agar tidak
mengganggu, lalu disaring. Glukosa mereduksi kalium ferricianida membentuk
ferrocyanida, dan kelebihan kalium ferricianida ditentukan secara yodometri.
Reaksi
ZnSO4 + 2 NaOh ---------------- Zn (OH)2 + Na2SO4
(Zn(OH2) yang terbentukakan mengendapkan protein agar tidakmenggangu)
Penambahan K3Fe(CN)6 secara berlebihan :
K3Fe(CN)6 ------ K4Fe(CN)6

Glukosa
2 K3Fe(CN)6 + 2 KI -- 2 K4Fe(CN)6 + I2
2 K4Fe(CN)6 + 3 ZnSO4 - K2Zn2Fe(CN) + 3 K2SO4
I2 + 2Na2S2O3 -- 2NaI + Na2S4O6
Reagensia
1. NaOH 0,1 N
2. ZnSO4 0,45%
3. K3Fe(CN)6 0,005 N
4. KI 20 %
5. K2Cr2O7 0,005 N
6. Asam asetat 3 %.
7. Amilum 1 %.
8. Na-thio Sulphate 0,005 N.
9. HCL 6 N
10. Plasma darah.
8
Prosedur :
1. Pipet 1 ml NaOH 0,1 N, masukkan ke dalam tabung reaksi.
2. Tambahkan 5 ml ZnSO4 0,45% dan kocok sampai rata.
3. Tambahkan 1,0 ml plasma (yang telah diencerkan 10x).
4. Masukkan tabung reaksi tersebut kedalam penangas air mendidih selama 4
menit.
5. Dinginkan, dan saring. Filtratnya ditampung dalam erlenmeyer.
6. Tambahkan 2 ml alkali Kalium Ferricyanida kedalam erlemeyer tersebut.
7. Panaskan ke dalam penangas air selama 15 menit.
8. Dinginkan dan tambah 3 ml KI 20 %.
9. Tambahkan 2 ml asam asetat.
10. Tambahkan 1 ml amilum 1 %.
11. Titrasi dengan Na-tio samapi terjadi perubahan warna. Titrasi sampel = s ml.
12. Buat blangko dengan prosedur yang sama, kecuali nomor 3 diganti dengan
aquades. Misal titrasi terhadap blangko = b ml.
13. Lakukan standarisasi Larutan Na-tio 0,005 N dengan larutan K2Cr2O7 0,005 N.
Perhitungan : Mgrek Na-tio = mgrek kalium bikromat.
V1. N1 = V2 . N2.
N Na-tio = 0,00y N.
( b ml – s ml ) . 0.00y
-------------------------- = Z ml
0,005 N
Selanjutnya kadar glukosanya di baca pada tabel
Misal : Z ml = 0.44 ml, maka kadar glukosanya adalah 282 mg % per 100 ml.
Bila sampel yang dipakai plasma, maka harus dihitung dalam darah dahulu. Sebab
tabel glukosa tersebut untuk sampel darah.
Misal hasil perhitungan sampel = 0.242 ml
Maka ml glukosa dalam darah adalah (karena tiap 100 ml darah mengadung 55
plasma), maka perhitungannya sbb :
100 ml
-------- x 0.242 = 0.44 ml  lihat tabel, sehingga kadar glukosda darah = 282 mg %.
55 ml
9
TABEL GLUKOSA DARAH

ml Na2S2O3 0,005 N used and mg Glukosa percent per 100 ml
blood
ml 0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09
0.0 385 382 379 376 373 370 367 364 361 358
0.1 355 352 350 340 345 343 341 338 336 333
0.2 331 329 327 325 323 321 318 316 314 312
0.3 310 308 306 304 302 300 298 296 294 292
0.4 290 288 286 284 282 280 278 276 274 272
0.5 270 268 266 264 262 260 259 257 255 253
0.6 251 249 247 245 243 241 240 238 236 234
0.7 232 230 228 226 224 222 221 219 217 215
0.8 213 211 209 208 206 204 202 200 199 197
0.9 195 193 191 190 188 186 184 182 181 179
1.0 177 175 173 172 170 168 166 164 163 161
1.1 159 157 155 154 153 150 148 146 145 143
1.2 141 139 138 136 134 132 131 129 127 125
1.3 124 122 120 119 117 115 113 111 110 108
1.4 106 104 102 101 99 97 95 93 92 90
1.5 88 86 84 83 81 79 77 75 74 72
1.6 70 68 66 65 63 61 59 57 56 54
1.7 52 50 48 47 45 43 41 39 38 36
1.8 19 15 14 12 10 8 7 5 3 2
10
GLUKOSA URIN
Prinsip
CuSO4 alkalis dalam suasana panas direduksi dengan glukosa. Warna biru hilang
karena CuSO4 berubah menjadi Cu2O. Ini dapat mengganggu titik akhir titrasi. Untuk
mencegah gangguan tersebut perlu ditambahkan kalium ferro sianida yang mengikat
Cu2O menjadi ikatan komplek yang larut (coklat).
Reaksi Alkali, panas
CuSO4 ------------------------ Cu2O

Glukosa mereduksi
Cu2O + K4Fe(CN)6 ---------- senyawa komplek warna coklat
Reagen
1. Glukosa 0.5 %
2. Campuran urin : gukosa 0.5 % (perbandingan 2 : 1)
3. Larutan CuSO4 (35 gr CuSO4 + 5 ml H2SO4 pekat per-liter)
4. kalium ferro sianida (K4Fe(CN)6) 5 %
5. Larutan Signette ( 150 K-Na –Tartrat + 90 gr NaOH perliter) sebagai pembuat
alkalis.
Prosedur
1. Pipet 10.0 ml CuSO4 masukkan dalam Erlenmeyer
2. Tambahkan 10 ml larutan Signette.
3. Tambahkan 5 ml kalium ferro sianida (K4Fe(CN)6) 5 %
4. Panaskan sampai mendidih dan dalam keadaan mendidih dititrasi dengan larutan
glukosa 0.5 %. Pada saat titrasi terjadi perubahan warna biru  hijau  kuning.
Pada saat warna kuning titrasi dilakukan tetes demi tetes sampai warna coklat.
5. Buat campuran urin : glukosa 0.5 (2 : 1)
6. Buat campuran seperti nomor 1 s/d 3.
7. Panaskan sampai mendidih dan titrasi dengan campuran urin glukosa sampai titik
akhir titrasi no.4.
11
Perhitungan :
Misal :
Hasil titrasi glukosa 0.5 % = 8.93 ml.
Hasil titrasi campuran urin : glukosa 0.5 % = 11.75 ml.
Cara I :
0.5 gr
Berat glukosa dalam glukosa 0.5 % = ------- x 8.93 ml = 0.04465 gr
100
Berat glukosa dalam campuran urin adalah : 1/3 x 11.75 ml =
1/3 x 11.75 x 0.5 gr

-------------------------- = 0.01958
100 ml
Volume urin yang dipakai adalah = 2/3 x 11.75 ml = 7.833 ml
Kadar glukosa dalam urin =
Berat glukosa dalam glukosa 0.5 % - berat glukosa dalam campuran 0.04465 – 0.01958
----------------------------------------------------------------------- x 100 % = ------------------------x 100 =0.3201 %
Volume urin saja (2/3 x 11.75 ml) 7.833
Cara II
Kadar glukosa dalam campuran urin glukosa = kadar glukosa dalam 0.5 %
N1 x V2 = N2 x V2
0.5 x 8.93 ml
N1 X 11.75 ml = 0.5 % x 8.93 ml  N1 = ----------------- = 0.38 %
11.75 ml
Perbandingan urin : glukosa 0.5 % = 2.1

Kadar glukosa dalam urin glukosa = kadar glukosa dalam urin + kadar gula dalam glukosa 0.5 %
0.38 % = 2/3 . x + 1/3 . 0.5 %
0.38 % = 2.x + 0.5 %

3
3 x 0.38 % = 2.x + 0.5 %
2x = 1.14 % - 0.5 %
x = 1.14 % - 0.5 % = 0.32 %

2
12
PEMISAHAN PROTEIN PLASMA
Dasar
Plasma darah mengandung albumin, fibrinogen dan bermacam-macam globulin.
Globulin beta dan alfa mengandung lipoprotein-lipoprotein, sedangkan aktivitas
imunologis dipusatkan pada globulin gama. Ammonium sulfat mungkin merupakan
garam terbaik, untuk pemisahan protein pada umumnya. Kelarutannya yang tinggi dan
tidak bereaksi. Metode tersebut tidak dapat digunakan jika kemudian kadar
proteinnya akan ditentukan dengan metode Kjeldahl atau biuret dan Folin-Lowry.
Untuk maksud tersebut sebagai gantinya dapat digunakan natrium sulfat atau
natrium sulfit.
Protein plasma Mengendap pada kadar akhir Kadar (g/100 ml)

Na2 SO3 Dalam plasma orang normal
Fibrinogen 12% 0,2 – 0,4
Globulin alfa 15% 0,6 – 1,2
Globulin beta 20% 0,6 – 1,3
Globulin gama 20% 0,6 – 1,5
Albumin Jenuh 3,5 – 4,5
Total 6,0 – 7,5
Pengendapan pada suhu kamar lebih efektif dengan natrium sulfit, maka garam ini
digunakan dalam percobaan. Pengendapan dengan garam bukan merupakan cara
terbaik untuk penentuan berbagai protein plasma, karena banyaknya tergantung pada
keadaan lingkungan mengerjakannya, derajat keasaman (pH), suhu, pengocokan, umur
larutan garam, kecepatan penambahan garam dan waktu kontaknya protein dengan
larutan garam semuanya berpengaruh pada derajat pengendapan. Oleh karena itu
ada baiknya membandingkan hasil-hasil dari kelompok lain dengan hasil Saudara.
Untuk menguji efisiensi metode pengendapan untuk memisahkan protein plasma
dapat dikerjakan elektroforesis. Penambahan metanol pada plasma menyebabkan
pengendapan globulin-globulin, dan cara ini dapat dibandingkan dengan pemisahan
albumin dan globulin dengan pengendapan garam.
Bahan :
1. Larutan Natrium Sulfit 12,6 g/100 ml
2. Larutan Natrium Sulfit 15,8 g/100 ml
3. Larutan Natrium Sulfit 21 g/100 ml
4. Plasma darah manusia
13
Cara Kerja :
1. 0,5 ml plasma ditambah 9,5 ml larutan Na Sulfit, dicampur dengan baik dan
biarkan 10-15 menit pada suhu kamar.
2. Gunakan Na Sulfit dengan tiga macam kadar tersebut dan kumpulkan endapan-
endapan dengan sentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 menit.
14
PENENTUAN KADAR PROTEIN SERUM
Prinsip :
Senyawa-senyawa Nitrogen yang terdapat dalam plasma didestruksi (dicerna)
dengan H2SO4 pekat menjadi amonium sulfat ((NH 4)2SO4). Amonium sulfat yang
terbentuk dalam proses destilasi akan dipanaskan dengan NaOH pekat, dan amonia
yang terjadi disuling di dalam sejumlah asam borat berlebihan dengan normalitas
tertentu. Untuk mengetahui jumlah asam borat yang menangkap amonia maka
dititrasi dengan H2SO4 standar (Normalitasnya ditentukan secara standarisasi acidi-
alkalimetri)
Prosedur Kerja :
A. Tahap Destruksi
1. Pipet 2,0 ml serum tepat, masukkan ke dalam labu kjeldahl
2. Tambahkan ke dalamnya 1 g K2SO4, 40 mg HgO, dan 2 ml H2SO4 pekat
3. Lakukan destruksi (di dalam lemari asam) sampai jernih. Kemudian dinginkan
4. Tambahkan 2 ml aquades dan panaskan lagi
B. Tahap Destilasi
1. Pipet 10,0 ml asam borat 2% (larutan penangkap), masukkan dalam erlenmeyer
dan tambahkan 3 tetes indikator mix (warnanya berubah kuning kecoklatan)
2. Pasang erlenmeyer tersebut hingga ujung pipa destilasi (kondensor) tercelup ke
dalam larutan penangkap
3. Masukkan destroat (hasil destruksi) ke dalam wadah sampel, bilasi dengan
aquades sebanyak 3 kali masing-masing dengan 1,5 ml /pembilasan
4. Masukkan dalam wadah sampel NaOH-Na tio 8-10 ml. Tambahkan indikator PP
5. Panaskan generator uap. Warna larutan penangkap berubah biru. Tunggu sekitar
10 menit.
6. Untuk memastikan akhir dari proses destilasi maka larutan penangkap dilepas dulu
dan periksa pH tetesan yang keluar dari ujung pipa destilasi menggunakan kertas
pH stick. Bila masih basa belum selesai dan bila sudah netral berarti selesai
7. Ambil larutan penangkap, bilasi ujung pipa destilasi dengan aquades
15
C. Tahap Titrasi
1. Titrasi larutan penangkap dengan H 2SO4 standar 0,1 N sampai warna biru tepat
hilang
2. Catat hasil titrasi
Perhitungan :
1 N asam 1 liter  14,008 gram Nitrogen
1 N asam 1 ml  0,014008 gram Nitrogen
Kadar Nitrogen serum dalam 100 ml =
ml titrasi H2SO4 X Normalitas H2SO4 X 100 = Y gr

2
Kadar Protein serum dalam 100 ml =

Y x 6,25 = ………… g / dl
Nilai normal protein serum = 6,0 - 8,4 g / dl
16
PENENTUAN KADAR PROTEIN URINE
Prinsip :
Senyawa-senyawa Nitrogen yang terdapat dalam urine didestruksi (dicerna) dengan
H2SO4 pekat menjadi amonium sulfat ((NH 4)2SO4). Amonium sulfat yang terbentuk
dalam proses destilasi akan dipanaskan dengan NaOH pekat, dan amonia yang terjadi
disuling di dalam sejumlah asam borat berlebihan dengan normalitas tertentu. Untuk
mengetahui jumlah asam borat yang menangkap amonia maka dititrasi dengan H 2SO4
standar (Normalitasnya ditentukan secara standarisasi acidi-alkalimetri)
Prosedur Kerja :
A. Tahap Destruksi
1. Pipet 0,2 ml urine tepat, masukkan ke dalam labu kjeldahl
2. Tambahkan ke dalamnya 1 g K2SO4, 40 mg HgO, dan 2 ml H2SO4 pekat
3. Lakukan destruksi (di dalam lemari asam) sampai jernih. Kemudian dinginkan
4. Tambahkan 2 ml aquades dan panaskan lagi
B. Tahap Destilasi
1. Pipet 10,0 ml asam borat 2% (larutan penangkap), masukkan dalam
erlenmeyer dan tambahkan 3 tetes indikator mix (warnanya berubah kuning
kecoklatan)
2. Pasang erlenmeyer tersebut hingga ujung pipa destilasi (kondensor) tercelup
ke dalam larutan penangkap
3. Masukkan destroat (hasil destruksi) ke dalam wadah sampel, bilasi dengan
aquades sebanyak 3 kali masing-masing dengan 1,5 ml /pembilasan
4. Masukkan dalam wadah sampel NaOH-Na tio 8-10 ml. Tambahkan indikator PP
5. Panaskan generator uap. Warna larutan penangkap berubah biru. Tunggu
sekitar 10 menit.
6. Untuk memastikan akhir dari proses destilasi maka larutan penangkap dilepas
dulu dan periksa pH tetesan yang keluar dari ujung pipa destilasi
menggunakan kertas pH stick. Bila masih basa belum selesai dan bilai sudah
netral berarti selesai
7. Ambil larutan penangkap, bilasi ujung pipa destilasi dengan aquades
17
C. Tahap Titrasi
1. Titrasi larutan penangkap dengan H2SO4 standar 0,1 N sampai warna biru
tepat hilang
2. Catat hasil titrasi
Perhitungan :
1 N asam 1 liter  14,008 gram Nitrogen
1 N asam 1 ml  0,014008 gram Nitrogen
Kadar Nitrogen urin dalam sehari =
ml titrasi H2SO4 x Normalitas H2SO4 x 1500 = Y gr

0,2
Kadar protein urin sehari = Y x 6,25
Nilai normal protein urin = 10 – 20 g per hari
18
PENENTUAN KADAR KREATININ URINE
Prinsip :
Kreatinin dengan asam pikrat alkalis membentuk kreatinin pikrat yang berwarna
merah. Intensitas warna merah menunjukkan kadar kreatinin. Intensitas warna
merah dibaca pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 540 nm
Bahan/Reagen :
1. Sampel urin
2. Pikrat alkalis  NaOH 10% dicampur dengan asam pikrat 1% dengan perbandingan
5:1
3. Stok standar kreatinin 1 gr / 500 ml
Prosedur kerja :
1. Pipet tepat 1,0 ml urine, encerkan sampai 100 ml
2. Pipet 2,0 ml larutan urin encer untuk pembacaan spektro
3. Pembuatan larutan WS
 Nilai normal kreatinin urine 1 – 2 g per hari (rata-rata urine sehari = 1500 ml)
atau rata-ratanya 1,5 g per hari
 1,5 g / 1500 ml  1500 mg / 1500 ml  1 mg / ml  1000 g / ml
 1,0 ml urin diencerkan menjadi 100 ml  kadarnya 1000 g / 100 ml
 yang digunakan untuk pembacaan spektro 2,0 ml  kadarnya 2/100 X 1000 g =
20 g
 supaya nilainya jatuh di tengah-tengah antara WS1 – WS5 maka dibagi dengan
2,5  hasilnya 8 g (digunakan sebagai kadar WS1)
 stok standar kreatinin yang tersedia kadarnya 1 g / 500 ml  1000 mg / 500 ml
 2000 g / ml, maka untuk membuat larutan WS dengan kadar 8 g / ml
larutan stok standar harus diencerkan dulu
4. Urutan penambahan reagen adalah sebagai berikut :
Reagen Blangko WS1 WS2 WS3 WS4 WS5 Sp1 Sp2

Larutan sampel - - - - - - 2,0 2,0
Larutan WS - 1 2 3 4 5 - -
Pikrat alkalis 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Aquadest 10,0 9,0 8,0 7,0 6,0 5,0 8,0 8,0
Absorbansi
Kadar kreatinin
19
Perhitungan kadar kreatinin :
a. Berdasarkan grafik hubungan absorbansi dengan kadar larutan WS grafik
b. Berdasarkan rumus :
Kadar kreatinin urin dalam 2,0 ml larutan urin encer =
Rata-rata absorbansi sampel x Rata-rata kadar larutan WS1-5 = Y
Rata-rata absorbansi larutan WS1-5
Kadar kreatinin urin dalam 100 ml larutan urin encer  1,0 ml urin = Y x 100/2 = A
Kadar kreatinin urin sehari = A x 1500
20
PENENTUAN KADAR KREATININ PLASMA
Prinsip :
Protein plasma dihilangkan terlebih dahulu. Kreatinin dengan asam pikrat alkalis
membentuk kreatinin pikrat yang berwarna merah. Intensitas warna merah
menunjukkan kadar kreatinin. Intensitas warna merah dibaca pada
spektrofotometer dengan panjang gelombang 540 nm
Bahan/Reagen :
1. Sampel plasma
2. Na Wolframat
3. H2SO4 6 N
4. Pikrat alkalis  NaOH 10% dicampur dengan asam pikrat 1% dengan
perbandingan 5 : 1
5. Stok standar kreatinin 1 gr / 500 ml
Prosedur kerja :
1. Pipet tepat 5,0 ml plasma, masukkan dalam labu volum 50 ml
2. Tambahkan 2,5 ml Na wolframat, 2,5 ml H 2SO4 6 N dan aquadest sampai tanda
batas
3. Saring dengan kertas saring
4. Pipet 10,0 ml larutan plasma encer untuk pembacaan spektro
5. Pembuatan larutan WS
 Nilai normal kreatinin plasma 0,7 – 1,4 mg/100 ml atau rata-ratanya 1,1 mg
 1,1 mg / 100 ml  1100 g / 100 ml  11 g / ml
 5,0 ml plasma diencerkan menjadi 50 ml  kadarnya 55 g / 50 ml
 yang digunakan untuk pembacaan spektro 10,0 ml  kadarnya 10/50 X 55 g =
11 g
 supaya nilainya jatuh di tengah-tengah antara WS1 – WS5 maka dibagi
dengan 2,5  hasilnya lebih kurang 4 g (digunakan sebagai kadar WS1)
 stok standar kreatinin yang tersedia kadarnya 1 g / 500 ml  1000 mg / 500
ml  2000 g / ml, maka untuk membuat larutan WS dengan kadar 4 g / ml
larutan stok standar harus diencerkan dulu
21
5. Urutan penambahan reagen adalah sebagai berikut :
Reagen Blangko WS1 WS2 WS3 WS4 WS5 Sp1 Sp2

Larutan sampel - - - - - - 10,0 10,0
Larutan WS - 1 2 3 4 5 - -
Pikrat alkalis 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Aquadest 10,0 9,0 8,0 7,0 6,0 5,0 - -
Absorbansi
Kadar kreatinin
6. Perhitungan kadar kreatinin :
a. Berdasarkan grafik hubungan absorbansi dengan kadar larutan WS grafik
b. Berdasarkan rumus :
Kadar kreatinin dalam 10,0 ml larutan plasma encer =
Rata-rata absorbansi sampel X rata-rata kadar larutan WS = Y

Rata-rata absorbansi larutan WS
Kadar kreatinin dalam 50,0 ml larutan plasma encer  5,0 ml plasma =Y x 50/10 = A
Kadar kreatinin plasma dalam 100 ml = A x 100/5
22
ANALISA BIOKIMIA LIPID
 Lipid / lipoid, ialah senyawa-senyawa yang tidak larut dalam air, namun larut
dalam zat pelarut lemak, yaitu alkohol, benzen, chloroform, eter.
 Termasuk kelompok lipid, ialah senyawa-senyawa sebagai berikut:
1) Lemak Netral
 senyawa gliserol dengan asam lemak. Lemak netral mengandung 1 molekul gliserol
dan 3 mol asam lemak.
2) Lipid Majemuk
 senyawa asam lemak, gliserol atau senyawa yang bertautan, base mengandung N
dan sering gugus fosfat. Fosfolipid-fosfolipid (fosfotid) mengandung lesiti, 1
mol gliserol, 2 ml asam lemak dan 1 mol kolin. Serebrosid-serebrosid
mengandung galaktose, asam-asam lemak dan base N, tanpa gliserol dan tanpa
fosfat.
3) Lemak hidrolisat
 yang terjadi oleh hidrolisis lemak, gliserol, asam lemak, dan sabun (lemak). Sabun
ialah garam-garam asam lemak yang terjadi oleh hidrolisis (menyabun) lemak-
lemak dalam lingkungan alkalis.
4) Bahan-bahan yang larut dalam zat pelarut lemak.
 Termasuk disini sterol-sterol (steroid), kolesterol, hormon kelamin, dan hormon
korteks supra-renalis. Kolesterol terdapat dalam plasma, sebagian sebagai
ester asam-asam lemak (kolesteride).
Dalam darah terdapat lipid terutama sebagai lipoprotein, yaitu lipid yang terjadi
pada protein globulin.
Klasifikasi Lipid, menurut Bloor, yaitu:
1) Lipid Sederhana
 Yaitu ester asam lemak dengan alkohol berupa gliserol, membentuk
triasilgliserol atau alkohol monohidrat yang lebih tinggi membentuk lilin.
2) Lipid Gabungan
 Yaitu selain ester asam lemak dengan alkohol masih terdapat komponen
lainnya seperti fosfat (fosfolipid); karbohidrat (glikolipid); sulfat (sulfolipid);
amino (aminolipid); dan protein (lipoprotein).
23
3) Produk Lipid
 Yaitu komponen produk hidrolisis kedua golongan lipid tersebut di atas.
KOLESTEROL (3-OH-5,6-Kolesten)
 Tidak dijumpai dalam jaringan tanaman, hanya dalam jaringan hewan dan manusia.
 Jaringan yang mampu mensintesis kolesterol antara lain di: hati, korteks adrenal,
usus, testes, kulit, aorta. Sintesis kolesterol berlangsung di bagian sitosol dan
mikrosom sel jaringan.
 Kolesterol yang disintesis merupakan bagian terbesar dari kolesterol di dalam
tubuh, sedangkan sebagian kecil saja kolesterol berasal dari kolesterol yang
terdapat dalam makanan.
 Kolesterol hanya dapat disintesis didalam tubuh hewan dan manusia, dan tidak
dapat disintesis di dalam tanaman, sehingga sumber kolesterol dalam makanan
adalah makanan yang berasal dari hewan (daging, hati, otak, dan kuning telur).
 Kolesterol diekskresi dari tubuh, melalui:
a) Empedu sebagai asam empedu yang dikeluarkan ke lumen usus halus
b) Empedu sebagai sterol netral yang dikeluarkan ke lumen usu halus
24
PENENTUAN KADAR KOLESTEROL TOTAL
A. METODE LIEBERMANN-BURCHARD
Dasar:
Kolesterol dengan asam cuka anhidrid dan asam sulfat pekat akan membentuk
senyawa berwarna biru-hijau, kemungkinan ada reaksi esterifikasi gugus
hidroksi pada posisi 3 maupun penyusunan kembali dalam molekul.
Instensitas warna dibaca dengan OD (absorbansi) 630 nm, koefisien variansi
2,5 %
Reagan
1) Reagan Lieberman-Burchard
a. 150 ml Asam Cuka Glasial + 300 ml Asam Cuka Anhidrit + 50 ml Asam
Sulfat, selama pencampuran didinginkan di dalam bake es!!!
b. Tambahkan 10 gram Natrium Sulfat Anhidrous; dibirkan dalam suhu
kamar.
2) Larutan Standart Kolesterol (sama yang digunakan pada Zlatkis-Zak)
Prosedur Kerja Penentuan Kolesterol Metode Liberman Burchard

Tabung Reaksi
N
Nama Bahan Sampel (ml) Std 1 Std 2 Std 3
o Blangko
1 2 (ml) (ml) (ml)
1 Plasma / Serum - 0,1 0,1 - - -
2 H2O 0,1 ml - - - - -
3 Lar. Standart :
Std 1  100 mg/dl - - - 0,1 - -
Std 2  200 mg/dl - - - - 0,1 -
Std 3  400 mg/dl - - - - - 0,1
4 Lar Liberman 5,0 ml 5,0 ml 5,0 ml 5 ,0ml 5,0 ml 5,0 ml
Burhard
Dimasukkan dalam Waterbard 250C selama 25 ~ 30 menit
( terbentuk warna biru-hijau)
OD 630 nm 0,00
B. ZLATKIS DAN ZAK (di Modifikasi)
 Nilai Normal : 180~280 mg%
 Sampel darah yang diuji: Serum (plasma darah tanpa anti koagulan), atau Plasma
(dengan antikoagulan: Li-Heparin, EDTA, dsb). Sebaiknya sample diambil dari
praktikan yang puasa
25
Dasar:
Kolesterol dengan ferichloride dalam campuran cuka-es dan asam sulfat akan
memberikan warna ungu, instensitas warna merupakan ukuran jumlah kolesterol. OD
560 nm
Bahan:
1) Larutan ferichloride-cuka es
a. Larutan ferichloride 10%  10 gr FeCl dalam 100 ml H2O
b. 0,5 ml lar. FeCl3 10% dalam 100 ml CH3COOH es
2) H2SO4 pekat (pa)
3) Larutan Kolesterol standart ( Kolesterol-cuka es)
a. 100 mg %
b. 200 mg %
c. 400 mg %
Prosedur Penentuan Kolesterol Metode Zlatkis-Zak
Tabung Reaksi
N
Nama Bahan Sampel
o Blangko Std 1 Std 2 Std 3
1 2
1 Plasma / Serum - 0,1 ml 0,1 ml - - -
2 H2O 0,1 ml - - - - -
3 Lar. Standart :
Std 1  100 mg/dl - - - 0,1 ml - -
Std 2  200 mg/dl - - - - 0,1 ml -
Std 3  400 mg/dl - - - - - 0,1 ml
4 Lar FeCl3 - CH3COOH 6,0 ml 6,0 ml 6,0 ml 6,0 ml 6,0 ml 6,0 ml
5 H2SO4 pa 96% 4,0 ml 4,0 ml 4,0 ml 4,0 ml 4,0 ml 4,0 ml
Setelah 10 menit dari penambahan H2SO4 (setelah dingin) baru kemudian dibaca:
OD 560 nm 0,000 0, … 0, … 0, … 0, … 0, …
Catatan:
1) penambahan lar FeCl3-Cuka es dilakukan setelah No 1 sd no 3 selesai.
2) penambahan H2SO4 dilakukan setelah penambahan lar FeCl3
3) setiap kali penambahan Reagan selalu dihomogenkan.
PENENTUAN LIPID DALAM SERUM ATAU PLASMA
 Kadar Lipid Normal: 500~800 mg%
 Sampel darah yang diuji: Serum (plasma darah tanpa anti koagulan), atau Plasma
(dengan antikoagulan: Li-Heparin, EDTA, dsb). Sebaiknya sample diambil dari
praktikan yang puasa.
26
Dasar Penentuan Kadar Lipid Total:
1) Serum diawa-proteinasi dengan alcohol absolute bebas lemak  Lipid akan
terlarut pada alcohol.
2) Filtrat (yang mengandung lipid) diuapkan, sisa penguapan diekstraksi dengan
Petroleum-eter (PE).
3) Petroleum-eter diuapkan, sisanya ditimbang
4) Lipid Total: Kolesterol, Trigliserida, free fad acid (FFA), dan fosfolipid
Bahan:
1) Catatan: seluruh alat gelas, pipet semua bebas lemak.
2) Alkohol bebas lemak  diperoleh dengan menyuling dua kali etanol 96%.
3) Petroleum Eter bebas lemak ( titik didih 400 ~ 600 C)  sda.
Prosedur:
1) Sediakan Labu Volume 100 ml berisi ± 70 ml Alkohol; kemudian masukkan 5 ml
Serum dan digojog (dihomogenkan) dengan baik kemudian setelah didiamkan 10
menit tambahkan Alkohol sampai batas marka.
2) Larutan Serum-alkohol disaring; filtrate dipipet 80 ml dimasukkan dalam cawan
porselin dikeringkan hati-hati dengan penangas air. Catatan:
80 ml
X 5 ml serum = 4 ml Serum
100 ml
Catatan: Cawan porselin, cruss, gelas, atau alat gelas yang akan dipakai untuk
tempat menguapkan harus sudah diketahui berat awalnya terlebih dahulu !!!
3) Sisa yang tertinggal dilarutkan / dibilas dengan Petroleum Eter, setiap kali
sebentar ditempatkan pada penanggas air mendidih.
4) Larutan disaring dalam botol timbang kecil yang sudah ditimbang, sesudah corong
dibilas dengan PE, cairan dalam botol timbang diupkan pada penanggas air.
Kemudian botoltimbang ditmpatkan dalam eksikator untuk mendinginkan dan
ditimbang.
5) Perbedaan penimbangan sebelum dan sesudah penentuan memberikan jumlah
lipid. Dengan dikalikan 25, kadar lemak diperoleh dalam mg%
Catatan: angka 25 dari 100 ml / 4 ml
27
PENENTUAN LIPID, LIPID FOSFOR, KADAR KOLESTEROL TOTAL, KADAR
KOLESTEROL BEBAS DALAM PLASMA ATAU SERUM
1) Penentuan Lipid
 Nilai normal : 500 sd 800 mg%
 Cara Pengambilan darah :
Serum atau plasma heparin, utamanya pada perut kosong
 Dasar
Serum diawa-proteinasi dengan alkohol  lipid-lipid larut. Filtrat diuapkan, sisa
penguapan diekstraksi dengan petroleum-eter (PE); sesudah PE diuapkan
sisanya ditimbang. Yang ditentukan disini kadar lipid total, dengan pengertian
bahwa yang ditimbang sebenarnya semua bahan yang larut dalam zat untuk
ekstraksi.
 Bahan & Alat
a) Alkohol bebas lemak ( diperoleh dengan menyuling dua kali etanol 96% )
b) Petroleum-eter bebas lemak ( titik didih 40 sd 60 0C ), diperoleh dengan
menyuling dua kali PE.
c) Alat gelas yang digunakan seluruhnya bebas lemak ( pipet 5 ml, labu ukur 100
ml, corong gelas, cawan porselin, botol timbang kecil ); penangas air,
eksikator
 Perhitungan
Perbedaan penimbangan sebelum dan sesudah penentuan memberikan jumlah
lipid, dengan dikalikan 25, kadar lemak diperoleh dalam mg%.
2) Penentuan Lipid Fosfor
 Nilai normal : 7 sd 12 mg% fosfor
 Cara Pengambilan darah :
Serum atau plasma heparin
 Dasar
Lipid yang terikat fosfor diekstraksi dari plasma dengan campuran alkohol-eter
 Protein-protein mengendap  ekstrak dikeringuapkan, dan diperabukan
dengan H2SO4 pekat. Fosfat larut sebagai ion fosfat, dengan bantuan reaksi
molibden biru untuk fosfor dalam plasma, jumlah fosfor dapat ditentukan
28
secara kolorimetris (660 sd 720 nm; dibaca setelah 10 menit dari penambahan
fero-asam molibdat).
 Bahan & Alat
a) Campuran alkohol-eter menurut Bloor,
 campuran 75 bagian etanol 96% dengan 25 bagian dietil eter.
b) H2SO4 p.a. 96 % (pekat)
c) H2O2 (Perhidrol)
d) NaOH 40 % (10 N)
e) Larutan fenolftalein alkoholis 1 %
f) Larutan Asam molibdat.
 50 gr (NH4)8MO7O24.4H2O), dilarutkan dalam 500 ml H2SO4 10 N.
g) Larutan fero-asam molibdat (dibuat selalu)
 10 ml larutan As.Molibdat (lar: f) + 90 ml H 2O yang mengandung Mohr
(FeSO4)NH4O2SO4.6H2O
h) Larutan standar, yang mengandung 0,5 mg P / ml
 2,196 g K2HPO4 anhidrous p.a. / 1 liter air suling
 Sebelum digunakan diencerkan 1:100 & 1:200 dengan H 2O
 Perhitungan
Dengan metode di atas standar P 0,5 mg/ml,
 Pengenceran 1:100 sesuai dengan kadar fosfolipid dalam plasma aslinya
sebesar 15 mg %
 Dan pengenceran 1:200 sesuai dengan 7,5 mg %
 Pada kurva tera kadar fosfolipid plasma dapat langsung dibaca
3) Penentuan Kadar Kolesterol Total, menurut Zlatkis dan Zak (modifikasi)
 Cara Pengambilan darah : Serum atau plasma heparin
 Dasar
Kolesterol dengan ferichloride-cuka es dan H 2SO4  memberikan warna
merah-ungu. Intensitas warna merupakan ukuran jumlah kolesterol. Dapat
ditentukan secara kolorimetrik (560 nm), pembacaan segera setelah
penambahan H2SO4 .
 Bahan & Alat
a) Larutan ferichloride-cuka es
29
 0,5 ml larutan ferichloride (10% Fe) dengan 100 ml cuka-es pro-analisis
 Larutan Fe 10% dapat diperoleh dari 20 gr FeCl 3 p.a. dalam 50 ml H20.
b) H2SO4 p.a. 96 % (pekat)
c) Larutan kolesterol standar-cuka es, 200 mg% dan 400 mg%. Dibuat dengan
dipanasi dalam cuka es p.a. dan disimpan dalam botol coklat.
 Perhitungan
Dibuat garis tera dengan bantuan larutan standar kolesterol yang mengandung
200 dan 400 mg%
4) Penentuan Kadar Kolesterol Total, dengan bantuan reaksi Libermann-
Burchard
 Dasar
 Plasma diawa-proteinasi dengan bantuan alkohol, kalau perlu alkohol sampai
50 % diganti dengan eter.
 Pada proses ini kolesterol dan ester kolesterol diekstraksi. Jumlah
kolesterol ditentukan kolorimetris dengan menerapkan reaksi Libermann-
Burchard dan dibandingkan dengan larutan standar kolesterol yang
diketahui. (620 nm), Pembacaan setelah 30 menit dari penambahan
Chloroform.
 Kolesterol dengan Asam Cuka anhidrit dan H 2SO4 pekat  membentuk
senyawa berwarna biru-hijau (dari hasil reaksi esterifikasi gugus hidroksi
pada posisi 3 maupun penyusun kembali dalam molekul )
 Bahan & Alat
a) Alkohol 96 % p.a.
b) Eter
c) Chloroform
d) Asam cuka anhidride
e) H2SO4 p.a. 96 % (pekat)
f) Larutan kolesterol standar dalam chloroform 10 mg% dan 20 mg%. disimpan
dalam botol coklat.
30
 Perhitungan
 Andaikan untuk penentuan plasma diperoleh ekstingsi a dan standar 20 mg%
ekstensi b, maka plasma mengandung kolesterol total a/b x 200 mg%
Catatan:
 Bila ekstrak plasma memberikan ekstengsi terlalu tinggi, dapat diencerkan
dengan campuran 5 bagian Chloroform 2 bagian Anhidride cuka dan 0,1
bagian H2SO4 p.a. 96 % (pekat)
 Ekstrak harus sampai tepat menguap kering saja, karena bila tidak akan
terjadi kehilangan-kehilangan.
5) Penentuan Kadar Kolesterol bebas, menurut: Brown, Zlatkis, Zak, dan Boyle .
 Nilai normal :  40 % dari jumlah total kolesterol
 Dasar
Kolesterol total diekstraksi dari serum dengan bantuan campuran alkohol-
aseton. Kolesterol bebas diendapkan dengan digitonin, bersama-sama dengan
pembentukan endapan aluminiumhidrokside. Endapan dicuci dengan alkohol yang
mengandung HCl.
Pada proses ini aluminiumhidrokside larut. Dengan bantuan reaksi warna yang
diberikan untuk penentuan total kolesterol dengan ferichloride dalam cuka es
dan as. Sulfat, jumlah kolesterol dalam endapan ditentukan.
 Bahan & Alat
a) Campuran alkohol absolut-aseton (1:1)
b) Larutan digitonin 0,5 %, 500 mg digitonin / 100 ml ( Alkohol : H 2O = 1 : 1 )
c) Larutan Aluminiumchloride 5 % (5 gr AlCl3.6H2O / 95 H2O)
d) Amonium pekat
e) Alkohol 50 %
f) HCl 6N ( 10 ml HCl pekat diencerkan menjadi 20 ml )
g) Asam cuka pekat
h) Larutan ferichloride-cuka es (0,5 lar. ferikloride dengan 100 ml cuka es p.a.)
i) Larutan kolesterol standar 100 ml% (pelarut alkohol)
31
 Perhitungan
Dikonstruksi kurve tera dengan berturut-turut 0,5 ml, 0,1 ml, dan larutan
kolesterol standart 100 mg%, diperlakukan sama seperti untuk plasma, kecuali
bahwa ke dalam labu 10 ml sewaktu ekstraksi ditambahkan 0,5 ml air suling
sebelum dipenuhi. Pada kurva ini kolesterol bebas serum dibaca langsung.
32
PENENTUAN KADAR KALSIUM DALAM DARAH
DASAR :
Pada serum atau plasma ditambahkan amonium oksalat, kalsium diendapkan sebagai
kalsium oksalat. Kalsium oksalat dilarutkan dengan H 2SO4 encer, asam oksalat yang
dibebaskan dititrasi dengan larutan kalium permanganat encer.
BAHAN :
1. Larutan amonium oksalat 4 % dalam akuades.
2. Larutan asam sulfat encer (1+4)
3. Larutan KMnO4 0,01 N dalam keadaan baru, karena bersifat labil.
4. Termometer
5. Kertas saring
CARA KERJA :
1. Siapkan tabung sentrifus ujung lancip bebas calsium.
2. Masukkan berturut-turut 2,0 ml serum/plasma, 2 ml akuades, dan 1 ml
amonium oksalat.
3. Tabung digojog sampai homogen, lalu didiamkan selama 1 (satu jam).
4. Tabung disentrifus selama 10 menit, kemudian dengan hati-hati supernatan
dibuang disaring dengan kertas saring.
5. Endapan pada tabung sentrifus diencer dengan 10 ml asam sulfat encer panas
dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer, kertas saring juga dimasukkan kedalam
erlenmeyer.
6. Tambahkan 10 ml akuades pada erlenmeyer dan dipanaskan sampai (70 – 80) o
C.
7. Titrasi dengan KMnO4 0,01 N, sampai warna merah jambu menetap.
8. Ulangi cara kerja di atas untuk Blanko, dengan mengganti plasma dengan
akuades
33
PERHITUNGAN :
Jika tirasi untuk sampel adalah “a” dan titrasi untuk blanko adalah “b”, maka kadar
kalsium pada penentuan di atas adalah :
( a – b ) X Normalitas KMnO4 X 0,2 mg

------------------------
0,01
Catatan :
- Setiap kebutuhan KMnO4 0,01 N setara dengan 0,2 mg kalsium

- Setiap 100 ml darah mengandung 55 ml plasma
34
PEMERIKSAAN URINE
Pemeriksaan urine akan memberikan gambaran tentang ada tidaknya penyakit di
dalam ginjal, saluran pembuangannya, dan dapat memperoleh data penting tentang
penyakit-penyakit yang terdapat ditempat lain dalam tubuh kita. Hasil-hasil
pemeriksaan urine akan mempunyai arti apabila diketahui periode atau waktu urine
tersebut diambil.
1. Untuk pemeriksaan rutin urine, bila mungkin digunakan urine agi, keuntungannya
ialah :
a. Tidak ada kekeruhan yang mengganggu karena perubahan kimia karena
bakteri.
b. Tidak ada oksidasi, sehingga beberapa bahan akan lebih mudah dan lebih
cepat ditentukan.
c. Kadar spontan maksimal, sehingga penetapan berat jenis mempunyai makna
untuk menilai fungsi ginjal.
d. Tidak ada pengaruh perubahan siang hari.
2. Dalam kasus tertentu, urine diambil pada siang hari, hal ini dilakukan pada kasus-
kasus tertentu.
a. Albuminuria ortostatis : harus dibandingkan kadar protein urin pagi sebelum
bangun dengan urin sesudah bangun.
b. Pada pengaturan diet diabetes, urin dikumpulkan 3-4 bagian selama 24 jam
3. Untuk semua penetapan kuantitatif, urine dikumpulkan dalam 24 jam, dan sampel
diambil dari kumpulan itu.
CARA MENGAMBIL URINE :
Untuk pemeriksaan, urine diambil dengan cara urine yang dikeluarkan awal dibuang,
dan baru diambil bagian tengah dan akhir.
ANALISA URINE KUALITATIF
1. WARNA
Zat warna normal urine berasal dari metabolisme endogen yang ditunjukkan
zat warna darah empedu. Urine segar yang normal mempunyai warna sitrun
35
sampai warna kuning batu ambar. Dapat dikatakan bahwa warna urine
tergantung pada kadar zat yang terlarut didalamnya. Warna gelap berhubungan
dengan berat jenis yang tinggi, sedangkan warna terang berhungan dengan
berat jenis yang rendah.
Pada fungsi ginjal yang terganggu, warna urine menjadi lebih muda kecuali
dalam urine terdapat banyak benda-benda padat. Urin asam biasanya berwarna
gelap dari pada urine basa. Tetapi urine basa yang mengandung fenol atau
alkapton akan menjadi gelap bila didiamkan diudara terbuka.
Bahan-bahan abnormal yang dapat dijumpai dalam urine adalah sebagai berikut :
a. Darah dan zat warna
Adanya hematuria, warna urine menjadi merah sampai coklat, karena adanya
butir-butir darah. Hemoglobinuria karena adanya zat warna darah yang
terlarut. Pada kasus hematuria, urin tidak tembus cahaya, sedangkan dalam
kasus hemoglobinuria, urine menjadi tembus cahaya.
b. Urobilin
Urin yang mengandung urobilin akan berwarna kayu mahoni.
c. Bilirubin
Urine akan berwarna kuning sampai coklat tua dan sesudah digojog terlihat
buaih berwarna kuning yang tahan lama. Sesudah disimpan lama urin akan
menjadi hijau coklat sampai hijau., karena bilirubin teroksidasi menjadi
biliverdin.
d. Porfirin
Adanya porfirin maka urine akan berwarna merah anggur. Bila ada
porfirinogen maka warna urin normal, tetapi setelah didiamkan dengan
pengaruh cahaya dan udara lambat laun menjadi gelap.
Cara Kerja :
1. Siapkan urine segar kedalam tabung reaksi.
2. Segera amati warna dari urine tersebut.
3. Catat warna dari urine yang Saudara amati.
36
2. KEJERNIHAN
Urine normal segar terlihat jernih tembus terang penuh. Urine segar jernih
dapat menjadi keruh oleh pendinginan karena endapan urat, perubahan derajat
keasaman oleh endapan fosfat, alkalis karena adanya bakteri.
Jika urine keruh, maka :
a. Bila kekeruhan dapat melewati filter, maka menunjukkan adanya bakteri.
Dalam urine segar keadaan ini patologis.
b. Urin keruh dan alkalis
Bila kekeruhan menghilang dengan penambahan asam cuka 6% maka :
- tanpa adanya gas menunjukkan adanya posfat
- terbentuk gas menunjukkan adanya karbonat
Bila hilang dengan penambahan HCl, maka menunjukkan adanya kalsium
oksalat.
c. Urin keruh dan asam
Kekeruhan hilang setelah dipanaskan, maka menunjukkan adanya asam urat,
garam urat. Bila kekeruhan tidak hilang dengan pemanasan dan juga tidak
hilang dengan penambahan alkalis maka menunjukkan adanya bahan organik,
seperti : nanah, epitel, dan sebagainya. Kekeruhan menghilang setelah
ditambah eter menunjukkan adanya butir-butir lemak.
Cara Kerja :
1. Masukkan urine segar kedalam beker glass 100 ml sampai ¾ penuh
2. Dengan menggunakan kertas yang dilubang, kemudian beker glass disorot
dengan lampu senter.
3. Amati dan catat hasilnya.
3. BAU
Urin normal mempunyai bau khas. Dalam keadaan patologis urine segar dapat
berbau menyimpang dari biasanya, yaitu urin pekat dan baunya keras (bau amoniak).
Bila bau seperti buah-buahan maka menunjukkan adanya diabetes. Bila urine segar
baunya busuk maka urine tercampur feses (fistel vesica urinaria-kolon).
37
Cara Kerja :
1. Masukkan urine segar kedalam beker glass secukupnya.
2. Kemudian segera dicium baunya.
3. Catat hasilnya.
4. DERAJAT KEASAMAN
Untuk mengukur derajat keasaman dapat digunakan kertas lakmus yang
mempunyai daerah perubahan warna antara pH 5,4 (merah) dan pH 7,8 (biru).
Perubahan lambat menjadi merah menunjukkan bahwa urine bersifat asam lemah,
bila perubahan merah menjadi cepat, maka urine bersifat asam kuat. Pada penentuan
tadi urine yang digunakan adalah urine segar, karena setelah dibiarkan lama urine
cenderung bersifat basa.
Cara Kerja :
1. Masukkan urine segar kedalam beker glass secukupnya.
2. Celupkan kertas lakmus sampai sepertiga bagian.
3. Amati perubahan warnanya.
4. Catat hasilnya.
5. BERAT JENIS
Penetapan berat jenis urin pagi sangat membantu menaksir fungsi ginjal. Bila
berat jenisnya diatas 1,020, maka dapat disimpulkan bahwa tidak ada gangguan
fungsi ginjal.
Cara Kerja :
1. Timbang 25,0 ml urine
2. Catat hasilnya
3. Hitung berat urine dalam 1000,0 ml
4. Buat kesimpulannya
38
PENENTUAN Fe SERUM DAN KAPASITAS IKAT Fe TIDAK JENUH
Penentuan Fe Serum
Dasar :
 Fe yang terikat pada globulin akan dilepaskan apabila senyawa tersebut
diinkubasi dalam keadan asam lemah.
 Fe yang sudah terlepas akan direduksi oleh senyawa pereduksi ( Hidroquinon)
 Fe terreduksi berkombinasi dengan Orthophenantrolin akan membentuk
senyawa kompleks berwarna merah.
 Intensitas warna dibaca dengan Spektrofotometer. OD 500 nm
Larutan
1) HCl 0,35 N  30 ml HCl pekat dalam 1000 ml Aquadest
2) Larutan Asam Trichloroasetat 20 %  20 gram As. Trichloroasetat / 100 ml
3) Larutan K-Asetat 50%  50 gram K-Asetat / 100 ml
4) Larutan Hidroquinon 1 %  1 gram / 100 ml atau 10 mg / ml atau 50 mg / 5 ml
Catatn: larutan harus selalu dibuat baru saat akan digunakan.
5) Larutan Orthophenantrolin-HCl 0,1%  100 mg Orthophenantrolin / 100 ml
6) Larutan Fe standar: 1 mg Fe/100 ml ~ 0,01 mg Fe/ml
Prosedur:
1) 1 ml Serum dlm tabung reaksi + 1 ml H2O + 1 ml HCl 0,35 N  dicampur &
didiamkan pd suhu ruang ± 1 jam.
2) Kemudian : Tambahkan 1 ml Lar. As. Trichloro As. Asetat,  dicampur &
didiamkan pd suhu ruang ± 15 menit.
3) Sentrifus pada 2000 RPM selama 15 menit
4) 2 ml Supernataan dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian berturut-
turut:
a. 3 ml  H2O
b. 0,25 ml  Lar. K-Asetat 50 %
c. 0,15 ml  lar. Hidroquinon 1 %
d. 0,5 ml  lar. Orthophenantrolin 1 %
5) Diamkan 20 menit, baru kemudian dibaca serapannya pd OD 500 nm
6) Blangko: 0,0 ml, 0,5 ml, 1,5 ml, 2.
39
Prosedur pembuatan Working Standard (WS):
Normal Fe-serum:
 Laki-laki : 37 ~ 148 µg/dl   0,37 ~ 1,48 µg/ml
 Permpuan : 59 ~ 158 µg/dl   0,59 ~ 1,58 µg/ml
Stock Standard Fe:
Konsentrasi 1 mg/ml atau 1000 µg/ml  dibuat 1 µg/ml
1 ml Serum  4 ml (setara 1 µg/ml)  diambil 2 ml (2/4 x 1 µg/ml = 0,5
µg/ml),
0,5 µg/ml x 2/5 = 1/5 µg/ml atau 0,2 µg/ml; jadi dari Stock 1 µg/ml dibuat 6 WS, sbb:
WS Konsentrasi Volume OD 500
WS 0 2 ml H2O 0 µg/ml 2 ml 0,000
WS 1 2 ml x 0,2 µg/ml 0,4 µg/ml 2 ml

WS 5 2 ml x 1 µg/ml 2 µg/ml 2 ml
Atau, dibuat 4 WS
WS Konsentrasi + H2O Volume OD 500
WS 0 2 ml H2O 0 µg/ml - 2 ml 0,000
WS 1 0,5 ml x 1 µg/ml 0,5 µg/ml 1,5 ml 2 ml
WS 2 1,5 ml x 1 µg/ml 1,5 µg/ml 0,5 ml 2 ml
WS 3 2 ml x 1 µg/ml 2 µg/ml - 2 ml
Kemudian dilanjutkan 2 ml Volume diatas dimasukkan kedalam tabung reaksi,
kemudian berturut-turut, ditambahkan:
a. 3 ml  H2O
b. 0,25 ml  Lar. K-Asetat 50 %
c. 0,15 ml  lar. Hidroquinon 1 %
d. 0,5 ml  lar. Orthophenantrolin 1 %
Diamkan 20 menit, baru kemudian dibaca serapannya pd OD 500 nm
40
PENENTUAN KADAR HAEMOGLOBIN (Hb)
Metode Penentuan Kadar Hb, antara lain:
1) Metode Talquist
 prinsip kadar Hb ditentukan dengan menggunakan Haemoglobin Scale dalam
prosentase (%). Darah diambil dengan pipet sahli (0,02 ml) ditetes pada kertas
saring Haemoglobin Scale, ditunggu beberapa detik sampai kering, kemudian
dicocokkan pada warna di Haemoglobin Scale. Metode ini tidak akurat.
2) Metode Sahli
 banyak di lakukan di seluruh pelayanan medis di Indonesia. Disini darah di
larutkan pada larutan HCl standart akan terbentuk hematin ( hematin asam).
Prosedur darah diambil dengan pipet sahli dan dimasukkan pada tabung
Haemometer Sahli, kemudian tetes dengan HCl Standard sedikit demi sedikit
sampai warna sama dengan warna standart di Haemometer Sahli. Kadar Hb
terbaca dengan melihat sekala yang terdapat pada Haemometer.
Kelemahan Metode Sahli: alat tidak dapat dikalibrasi dan tidak semua jenis
Haemoglobin diubah menjadi hematin asam, seperti: karboksi-Hb,
Methemoglobin, dan Sulfhemoglobin.
3) Metode Cyanmethemoglobin
 Prinsip: darah dicampur dengan larutan Diluen-Drabkin. Ferrisianida akan
mengoksidasi Hemoglobin menjadi Met-Hb. Met-Hb akan berikatan dengan
Sianida menjadi Cyanmeth-Hb. Cyanmeth-Hb akan mengabsorbsi sinar pada 540
nm. Catatan: Sulfhemoglobin tidak bisa dioksidasi dengan metode ini.
 Larutan drabkin, dalam 1 Liter berisi:
 Na-bikarbonat (NaHCO3) 1 gr
 K-cyanida (KCN) 0,05 gr
 K-ferricyanida (K3Fe(CN)6) 0,2 gr
Larutan ini disimpan dalam botol berwarna gelap dan di lemari es/suhu dingin,
Reagan rusak bila sudah tampak adanya endapan.
 Prosedur: 5 ml larutan drabkin + 0,02 ml darah  Homogenkan dan diamkan ±
10 menit (waktu terbentuknya Cyanmeth-Hb)  kemudian dibaca dengan
Spektrofotometer dengan OD 540 nm. Jangan lupa di buat blngko (5 ml
drabkin). Hasil yang diperoleh dikalikan 36,8
 Hb Laki-laki: 13,5 ~ 18 dan Wanita 11,5 ~ 16,5 g/dl
41
DAFTAR PUSTAKA
1) Anonimus, A. Manual of Laboratory Techniques. Nutrition Reasearch
Laboratories. Indian Council of Medical Research. Tarnaka, Hyderabad, India
2) Dawiesah (1988), Penentuan Nutrient dalam Jaringan dan Plasma Tubuh , Pusat
Antar Universitas Pangan dan Gizi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta,
Yogyakarta
3) Gorter, E. en De Graaf, W.C. (1955). Klinische Diagnostiek, 7 druk, Deel I.H.E.
Stenfert Kroese N.V. Leiden.
4) Harper, H.A. (1979), The Blood, Lymph, & Cerebrospinal Fluid. Dalam Harper A.
Rodwell.V.M. Maver. P.A. Review of Physiological Chemistry; 17 th Ed. Lange
Medical Publications. Maruzen Asia (Pte) Ltd.
5) Metode otto Schales dari Standard methods of clinical chemistry. Vol. II,
Americans Association of Chemists-Academic Press 1958, dalam: Manual of
Laboratory Techniques, Nutr. Res. Labs, Indian Council of Medical Resc.
Hyderabad, India
42
Laporan Sementara Kelompok Praktikum Biokimia
A. Acara :
B. Hari / Tanggal ;
C. Kelompok :
D. Anggota kelompok yang hadir :
1. ………………………………………
2. ……………………………………..
3. ………………………………………
4. ………………………………………
5. ……………………………………….
E. Acara : …………………………………………………….
F. Tujuan Acara : ……………………………………………
G. Diagram Prosedur pelaksanaan :
H. Hasil (Tabel Pengamatan)
Mengetahui dan Mengesahkan

Dosen Pembimbing praktek
( ………………………………………. )
43
Laporan Resmi Kelompok Praktikum Biokimia

A. Acara :
B. Hari / Tanggal ;
C. Kelompok :
D. Anggota kelompok yang hadir :
1. ………………………………………
2. ……………………………………..
3. ………………………………………
4. ………………………………………
5. ……………………………………….
E. Acara : …………………………………………………….
F. Tujuan Acara : ……………………………………………
G. Diagram Prosedur pelaksanaan :
H. Hasil (Tabel Pengamatan)
I.Reaksi
J. Tinjauan Teori
K. Pembahasan
L. Kesimpulan
Mengetahui dan Mengesahkan Notulis

Dosen Pembimbing praktek
( ---------------------------------) ( ----------------------------------- )
44
( ………………………………………. ) ( ……………………………………………………………. )
45

Buku Petunjuk Praktikum Stikes

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Buku Petunjuk Praktikum Stikes

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

1

TATA TERTIB PRAKTIKUM PADA LABORATORIUM BIOKIMIA

1. Mempelajari acara praktikum dan menyusun rencana kerja sebelum melakukan

praktikum demi kelancaran dan kecepatan kerja selama praktikum

dipraktikumkan pada hari tersebut.

3. Datang di laboratorium 15 menit sebelum praktikum dimulai, dengan membawa :

b. Kain serbet yang bersih

c. Lembaran rencana kerja.

4. Berpakaian sopan, bersepatu.selalu menjaga kebersihan, ketertiban dan

ketenangan selama jalannya praktikum

5. Praktikan dilarang makan, minum dan merokok di ruang laboratorium.

6. Memperhatikan petunjuk-petunjuk dari asisten, tidak boleh melakukan

pekerjaan-pekerjaan yang tidak ada hubungannya dengan praktikum

7. Memberitahukan pada asisten apabila terjadi kekurangan alat praktikum yang

harus disediakan oleh laboratorium

8. Hindarkan kecerobohan untuk menjaga terjadinya hal-hal yang tidak dikehendaki

9. Mencatat semua hasil pengamatan selama praktikum dan membuat laporan

sementara yang harus disetujui pembimbing setelah selesai praktek

laporan resmi diserahkan selambat-selambatnya 7 hari (sebagai syarat untuk

mengikuti acar praktek selanjutnya)

praktikum dan menunjukkan surat keterangan dokter.

TEST / PENGUJIAN PENCERNAAN

A. FUNGSI SALIVA MULUT

Daya Amilolitik saliva

1. Kumurlah mula-mula dengan air bersih, kemudian dengan 20 ml 0,2 % NaCl.

5. Tabung kedua (2) diberi 5 ml HCL encer kemuadian 5 ml amilum 1 %.

6. Yang ketiga (3) ditambahkan 5 ml amilum 1 %.

7. Ketiga tabung dipanaskan melalui penangas dengan suhu 37o celcius.

9. Catat hasil pengujiannya.

B. PENCERNAAN DALAM LAMBUNG.

Hidrolisis protein oleh pepsin

1. Tiga buah tabung reaksi diisi masing-masing dengan 1 ml larutan pepsin.

karman (fibrin yang diberi warna karmen).

dengan 1 ml HCL 0,4 % dan 2 potong fibrin karmen.

5. Ketiga tabung panaskan dengan penangas suhu 37o celcius.

6. Catatlah hasil pengamatan pada ketiga tabung reaksi.

C. PENCERNAAN OLEH PANKREAS.

1. Kedalam tiga tabung reaksi masing-masing dituangkan :

 Tabung 1 : 1 ml ekstrak pankres netral, 2 tetes Na2Co3 2 % dan 2 potong

kongo merah fibrin.

 Tabung 2 : sama dengan (1) ditambah dengan 2 tetes larutan empedu.

2. Ketiga tabung panaskan dengan penangas suhu 37o celcius.

3. Warna merah berarti terjadi pencernaan.

1. Campurkan 5 ml larutan amilum dengan 1 ml ekstrak pankreas netral.

2. Inkubasikan pada suhu 37o celcius.

3. Ujilah perubahannya dengan yod dan lakukan pengujian benedict.

1. Kedalam tiga tabung reaksi masing-masing dituangkan :

 Tabung 1 : 2 ml air susu dan 1 ml ekstrak pankreas netral.

 Tabung 2 : sama dengan (1) ditambah dengan 2 tetes larutan empedu.

 Tabung 3 : diisi dengan 2 ml air susu dan 1 ml air,

larutan menjadi merah.

3. Inkubasikan pada suhu 37o celcius.

4. Amati perubahan warna dari merah menjadi kuning.

1. Percobaan Penurunan Tegangan muka oleh garam kholat.

2. Taburkan serbuk belerang di atas permukaan cairan.

3. Amati keadaan serbuk itu.

1. Asamkan 3 ml larutan empedu dengan 2 tetes asetat glasial, kemudian saringlah

asam asetat dan saring sampai jernih.

3. Catatlah timbulnya kekeruhan (reaksi antara protein dan asam kholat).

3. Pigmen-pigmen empedu (Fouchet)

1. Kedalam tabung erlenmeyer dimasukkan 15 ml larutan empedu, kemudian

biarkan terbentuknya endapan, selanjutnya disaring.

4. Catatlah warna (hijau) yang timbul pada endapan itu.