LAPORAN PRAKTIKUM PARASITOLOGI

“PEMERIKSAAN MALARIA”

Nama : Kartika Candrasari

Nim : (10612056)
Fakultas : Kedokteran gigi
Kelompok : 2

LABORATORIUM PARASITOLOGI INSTITUT ILMU KESEHATAN BHAKTI WIYATA KEDIRI

2018
B.LATAR BELAKANG

Penyakit malaria adalah suatu penyakit menular yang banyak diderita oleh penduduk di
daerah tropis dan subtropics. Malaria merupakan penyakit infeksi yang disebabkan oleh protozoa
dari genus plasmodium yang ditularkan melalui gigitan nyamuk anopheles betina. Malaria pada
manusia dapat disebabkan oleh plasmodium falciparum ( P. Falciparum). Plasmodium vivax ( P.
Vivax), plasmodium ovale (P. Ovale), plasmodium Malariae ( P. Malariae) dan Palsmodium
Knowlesi ( P. Knowlesi ). Parasit yang terakhir disebutkan ini belum banyak dilaporkan di Indonesia
(Kemenkes, 2012).
Penyakit malaria masih menjadi salah satu masalah kesehatan masyarakat di Indonesia yang
penyebarannya cukup luas di Indonesia terutama di daerah Indonesia bagian timur. Banyak factor
yang menyebabkan terjadinya penularan penyakit malaria, antara lain pertumbuhan dan
pengembangan wilaya sejalan dengan peningkatan pertumbuhan penduduk; kepadatan penduduk
dan kecenderungan migrasi penduduk dari daerah non edemis ke daerah edemis malaria untuk
mencari pekerjaan dan penghidupan yang lebih layak; mengakibatkan rusaknya wilaya ekologi dan
lingkungan sehingga menyebabkan timbulnya tempat perkrmbangbiakan nyamuk malaria
Kepentingan untuk mendapatkan diagnosis yang cepat pada penderita yang di duga
menderita malaria merupakan tantangan untuk mendapatkan uji metode laboratorik yang tepat,
cepat, sensitif, mudah dilakukan, serta ekonomis. Maka dari itu digunakan dengan RDT ( Rapid
Diagnostcic Test ) yang memiliki hasil yang akurat dalam mendiagnosis seseorang menderita
malaria dan dengan mudah menetukan jenis plasmodium. Selain dengan menggunakan RDT dapat
dilakukan dengan membuat sediaan darah tebal dan sediaan darah tipis. Berdasarkan hal di atas
sehingga dilakukannya pemeriksaan laboratorium.
C.RUMUSAN MASALAH
Apakah dengan menggunakan sediaan darah tebal dan tipis dapat mengetahui adanya parasit di
dalam darah?

D.TUJUAN

1. Mengetahui pemeriksaan malaria dengan menggunakan hapusan darah tebal dan tipis
2. Mengetahui adanya parasit malaria di dalam darah menggunakan hapusan darah tebal
3. Mampu mengetahui spesies plasmodium menggunakaqn hapusan darah tipis
E.PROSEDUR PEMERIKSAAN

1. Pra-Analitik
A. Pengambilan sampel
Pada pemeriksaan malaria digunakan sampel berupa darah. Darah yang dapat digunakan
untuk diagnosis dapat darah perifer maupun darah vena. Darah perifer diambil
menggunakan blood lancet apalagi akan langsung dibuat sediaan hapusan darah,
sedangkan darah vena diperlukan apabila pembuatan sediaan darah dalam jumlah cukup
banyak dan berulang. EDTA dapat dipakai sebagai antikoagulan karena tidak berpengaruh
terhadap morfologi eritrosit dan lekosit serta mencegah trombosit bergumpal.
Pemeriksaan sebaiknya dilakukan dalam waktu kurang dari 2 jam. Tiap 1 ul EDTA
digunakan untuk 1 ml darah vena.
B. Persiapan Reagen
1. Larutan giemsa
harus dibuat pada saat akan digunakan untuk pengecatan sediaan, tidak diperbolehkan
menggunakan larutan giemsa yang telah dibuat sehari sebelumnya. Pengenceran larutan
giemsa dengan konsentrasi 5% yaitu perbandingan antara giemsa dan buffer adalah 1:20,
1 bagian giemsa dan 19 bagian buffer. Sedangkan larutan giemsa 10% memiliki
perbandingan 1:10, dan larutan giemsa 20% memiliki perbandingan 1:5.

Cara pengencerannya larutan giemsa 5%:

 Dipipet buffer kedalam gelas ukur sebanyak 19 mL kemudian ditambahkan

geimsa sebanyak 1 mL
 Lakukan pewarnaan giemsa 5% waktu pendiaman adalah 30 – 45 menit
Catatan:
Buffer yang digunakan dalam pembuatan larutan giemsa biasanya adalah buffer phospat
dengan pH 6,4. Namun dilaboratorium \yang masih minim dalam ketersediaan bahan atau
reagen kerja dapat mengganti buffer dengan menggunakan Aquades dengan pH yang netral.
Perubahan pH dalam larutan giemsa dapat mempengaruhi hasil pengamatan morfologi sel
darah, contohnya jika pada pH yang kurang dari 6,0 morfologi lekosit akan memperlihatkan inti
yang kurang jelas.
 Pembuatan buffer (PBS)
Bahan:
NaCl 80 gr
KCl 2 gr
Na2HPO4 14,4 gr
KH2PO4 2,4
Aquabides 1L
- Campurkan seluruh bahan tersebut dalam aquabides 800 ml
- Tambahkan HCl setetes demi setets sampai pH larutan mencapai 7,4
- Tambahkan aquabides sampai sampai volume 1 liter
2. Methanol
3. Air kran

C. Pembuatan sediaan hapusan darah

1) membuat sediaan darah tebal
1. Disiapkan object glass yang bersih dan kering
2. Dilakukan samping vena
3. Diteteskan 200 µl pada object glass.
4. Diratakan melingkar dengan salah satu ujung cover glass
5. Ditunggu sampai kering
6. Kemudian dililiskan dengan air sampai warna
7. Dikeringkan kemudian dicat dengan geimsa
- Digenangkan dengan selama 30-45 (sesuaikan konsentrasi giemsa)
- Sediaan dicuci dengan air kran dengan cara meniriskan air kran
menggunakan tangan, kmudian dikeringkan dan diperiksa di bawah
mikroskop.
2) Membuat hapusan darah tipis
1. Disiapkan object glass yang bersih dan kering
2. Diteteskan 50 µl pada salah satu ujung obyek glass.
 3. Dengan cover glass darah dibuat apusan darah yang tipis (cover glass
dimiringkan dengan membentuk sudut 30⁰ C dan kemudian darah digeser
dengan cepat sehingga membentuk hapusan yang tipis dan merata).
4. Sediaan dikeringkan dan kemudian dicat dengan giemsa.
- Sediaan ditetesi dengan methanol selama 1-2 menit.
- Digenangi dengan cat giemsa selama 30 - 45 menit (sesuaikan
dengan konsentrasi giemsa).
- Sediaan dicuci dengan air kran yang ditiriskan menggunakan tangan
perlahan, kemudian dikeringkan dan diperiksa di bawah mikroskop.
2. Analitik
Prosedur pemeriksaan sediaan hapusan darah tebal dan tipis secara mikroskopik dengan
pembesaran 100x. identifikasi keberadaan parasite malaria di dalam RBC pada sediaan
darah tipis dan berada diluar sel pada sediaan darah tebal. Lakukan penghitungan
menyeluruh pada sediaan sampai dipastikan bahwa sampel negatif. Pada sediaan yang
terdapat parasit malaria, hitunglah derajat parasitemia.

Penghitungan parasitemia pada hapusan darah tebal

kualitatis

Penghitungan secara kualitatif dilaporkan dengan kode negative dan positif mengikuti kategori
berikut:
Negatif (-) : tidak ditemukan parasite dalam 100 lapang
Positif satu (+) : ditemukan 1 – 10 parasit dalam 100 lapang pandang
Positif dua (++) : ditemukan 11 – 100 parasit dalam 100 lapang pandang
Positif tiga (+++) : ditemukan 1 – 10 parasit dalam 1 lapang pandang
Positif empat (++++) : ditemukan 11 – 100 parasit dalam 1 lapang pandang

kuantitatif
- Dihitung per 200 leukosit atau 500 leukosit apabila pada penghitungan 200 leukosit belum
ditemukan parasit.
- Jumlah parasit yang ditemukan/200 leukosit dikalikan 40.
- Jumlah parasit yang ditemukan/500 leukosit dikalikan 16
 - Hitung jumlah parasit per-µl dengan rumus berikut.
- = Jumlah leukosit dalam 1 µl x jumlah parasit dalam 200 lp
200 leukosit

 Jumlah leukosit : 8000

Sediaan Darah Tipis
Sediaan Darah Tipis (thin smear)

- Identifikasi spesies plasmodium

- Hasil negatif ditentukan berdasarkan Pengamatan yang dilakukan pada 100 lapang
pandang (minimal), jika hasil negatif maka di amati pada 500 lapang pandang
- Penghitungan parasit per 1000 RBC
Contoh. dtemukan 65parasit/1000RBC
parasitemia = jumlah parasit / 1000 RBC x 100%

= 65/1000 x 100%

= 6,5%
Bila jumlah RBC/ µl =5000000
Maka jumlah parasit/mL = 65 x 5000000

= 325000000/µl
 3) Pasca Analitik

Pencatatan hasil penghitungan parasitemia

Keterangan:

Species: Plasmodium Malariae

Stadium : Merozoid

Jumlah/lp :110

Derajat Parasitemia

Sediaan Darah Tebal Kualitatif ++++

Sediaan Darah Tebal Kuantitatif 50.000.000/µl

CATATAN :

 Malaria adalah suatu penyakit menular yang disebabkan oleh parasit darah dari filum
protozoa, klas sporozoa, subklas plasmodidae, genus plasmodium dan ditularkan oleh
gigitan nyamuk anopheles betina yang terkena infeksi.
 Macamnya pemeriksaan malaria yaitu:
1. Sediaan tetes darah tebal (screening test)
Darah yang digunakan : darah segar tanpa antikoagulant (darah kapiler).

Tujuan : untuk mengetahui ada tidaknya parasit malaria pada penderita.

Laporan : + (positif) / - (negatif)Keuntungan :

- Pemeriksaan lebih cepat.

- Pemeriksaan sederhana.
- Parasit mudah untuk ditemukan, apabila dalam darah hanya ada sedikit parasit.
Kerugian :

- Tidak dapat untuk menentukan jenis spesiesnya.

Syarat-syarat sediaan tetes darah tebal :

- Darah / eritrosit harus lisis.

- Tidak boleh dikeringkan di bawah lampu.
- Tidak boleh ada kotoran cat yang menempel pada sediaan.

2. Sediaan darah tipis / apusan darah

Keuntungan :

- Dapat menentukan jenis spesiesnya.

- Darah yang diperlukan sedikit.
- Mudah dalam pemeriksaan (bentuk tropozoit).
Kerugian :

- Karena volume darah sedikit jarang ditemukan bentuk / stadium dari gametosit dan
schizont.
Syarat-syarat sediaan tetes darah tipis / apusan darah :

- Penyebaran sel eritrosit merata.

- Ada bagian tipis dan tebal.
- Sediaan tidak boleh berlubang-lubang atau ada lemak.
F. HASIL

Keterangan:

Species: Plasmodium Malariae

Stadium : Merozoid

Jumlah/lp :110

Derajat Parasitemia

Sediaan Darah Tebal Kualitatif ++++

Sediaan Darah Tebal Kuantitatif 50.000.000/µl

Penjelasan:

- Spesies : Plasmodium Malariae

- Stadium : Merozoid
- Jumlah RBC yang terinfeksi : 10
- Jumlah RBC total : 110
- Derajat Parasitemia
 Kualitatif :++++
 Kuantitatif :
=Jumlah parasit x 100%
1000RBC
= 10 x 100%
1000 RBC
=1%
 Bila jumlah RBC/µl = 5.000.000
Maka jumlah parasit/µl = 10 x 5.000.000
=50.000.000
G. PEMBAHASAN

Malaria adalah suatu penyakit menular yang disebabkan oleh parasit darah dari filum protozoa,
klas sporozoa, subklas plasmodidae, genus plasmodium dan ditularkan oleh gigitan nyamuk
anopheles betina yang terkena infeksi.
Malaria menyebabkan gejala yang biasanya termasuk demam, kelelahan, muntah, dansakit
kepala. Dalam kasus yang parah dapat menyebabkan kulit kuning, kejang, koma, atau kematian.
Gejala biasanya muncul sepuluh sampai lima belas hari setelah digigit. Jika tidak diobati, penyakit
mungkin kambuh beberapa bulan kemudian. Pada mereka yang baru selamat dari infeksi, infeksi
ulang biasanya menyebabkan gejala ringan. resistensi parsial ini menghilang selama beberapa
bulan hingga beberapa tahun jika orang tersebut tidak terpapar terus-menerus dengan malaria.

Dari hasil praktikum yang telah dilakukan menunjukkan bahwa sediaan darah yang diteliti
positif terdapat parasit malaria. Dan pada saat dilihat di bawah mikroskop hasil yang ditemukan
terdapat parasit yaitu jenis plasmodium malarie dengan stadium dalam tubuh manusia sudah
dalam stadium Merozoid. Dilihat pada mikroskop terdapat 10 RBC yang terinfeksi parasit dengan
total keseluran RBC adalah 110

H.DISKUSI
1. Jelaskan penjaminan mutu pada pemeriksaan malaria!
Jawab : Penjaminan mutu dalam pemeriksaan malaria salah satunya dengan penjaminan mutu
mikroskop yang digunakan. Dengan adanya penjaminan mutu mikroskop
malaria,pengukuuran dan pemeriksaan laboratorium akan didapatkan data ilmiah yang tajam.
Pengobatan malaria dapat diberikan untuk penjaminan pemeriksaan agar menurunkan angka
kesakitan dan kematian malaria.
2. Jelaskan perbedaan morfologi Plasmodium falciparum dan Plasmodium vivax apabila dilihat
dari sediaan apusan darah tipis!
 Bentuk Plasmodium Falciparum pada sediaan darah tipis:
a) Bentuk cincin : ukuran 1/5 dari eritrosit, accole ( sitoplasma ditepi eritrosit), seringkali cincin
mempunyai 2 inti,
b) tropozhoit : eritrosit tidak membesar, terdapat titik Maurer, sitoplasma biru pucat
c) skizon : hampir memenuhi eritrosit, bentuk padat, pigmen ditengah (hitam)
d) Mikrogametosit dan Makrogametosit : Mikrogamet berbentuk pisang dan kromatin
bertaburan sedangkan pada makrogamet bentuknya bulan sabit dan kromatin padat
ditengah.
Bentuk Plasmodium Vivax pada sediaan darah tipis:
a) Bentuk cincin : ukuran 1/3 eritrosit, bentuk cincin tebal, kromatin halus,tidak ada pigmen
b) tropozhoit : eritrosit membesar, vakuola jelas, sitoplasma bentuk ameboid, pigmen halus,
warna coklat kekuningan, terdapat titik schufner’s
c) skizon immature : hampir mengisi seluruh eritrosit, bentuk ameboid, pigmen tersebar
d) Skizon mature : hampir memenuhi eritrosit, bentuk bersegmen, merozoit ada 14-24 (rata-
rata 16), pigmen berkumpul ditengah (kuning cokelat)
e) Mikrogametosit dan Makrogametosit : waktu timbul 3-5 hari, jumlah dalam darah banyak,
ukuran mengisi eritrosit yang membesar, bentuk bulat/ovale, sitoplasma biru pucat/merah
muda untuk mikrogametosit sedangkan pada makrogametosit sitoplasma berwarna biru
gelap.
3. Pada pemeriksaan apusan darah tebal, ditemukan Plasmodium falciparum sebanyak 5 parasit
pada penghitungan 500 leukosit. Tentukan jumlah parasit dalam 1 µL darah!
Jawab : 80µL
4. Pada pemeriksaan apusan darah tipis, ditemukan Plasmodium falciparum sebanyak 38 parasit
pada penghitungan 1000 RBC. Tentukan jumlah parasit dalam 1 µL darah!
Jawab: 1.900.000µL
5. Sebutkan faktor-faktor yang mempengaruhi buruknya sediaan!
Jawab: (1) Terdapat debu atau kotoran yang menempel pada objek glass (2)Darah tidak
menyebar dengan rata di atas objek glass, (3) Terdapat bentuk tidak sempurna sisi dari objek
glass yang berguna untuk menghapus hapusan (maksud dari bentuk tidak sempurna yaitu
pinngirannya bergelombang)
6. Jelaskan kemungkinan munculnya positif palsu pada pemeriksaan malaria!
 Jawab: terdapat kesalahan pada sel darah manusia yang akan diteliti
7. Sebutkan metode lain dalam menunjang diagnosis malaria!
Jawab : diagnose sample monitoring dan teknik dip-stick parasit

I.KESIMPULAN
Setelah melakukan praktikum pemeriksaan malaria kita mengetahui apa itu penyakit alaria.Jadi
penyakit malaria adalah suatu penyakit menular yang banyak diderita oleh penduduk di daerah
tropis dan subtropics. Malaria merupakan penyakit infeksi yang disebabkan oleh protozoa dari
genus plasmodium yang ditularkan melalui gigitan nyamuk anopheles betina. Malaria pada
manusia dapat disebabkan oleh plasmodium falciparum ( P. Falciparum). Plasmodium vivax ( P.
Vivax), plasmodium ovale (P. Ovale), plasmodium Malariae ( P. Malariae). Untuk mengetahui
seseorang terinfeksi penyakit ini salah satu caranya adalah dengan melakukan pengetesan sel
darah (eritrosit) . Metode yang digunakan adalah dengan menggunakan sedian darah tebal untuk
mencari adanya parasit malaria dalam darah dan dengan menggunakan sediaan darah tipis untuk
mengetahui spesies dari Plasmodium yang merupakan parasit penyebab malaria. Kemudian
sediian tersebut diteliti menggunakan mikroskop.
DAFTAR PUSTAKA

P.N.Harijanto (Ed), Agung Nugroho (Ed), dan Carta A. Gunawan (Ed). Malaria dari molekuk ke
klinis.2012.Penerbit: EGC
DOKUMENTASI PRAKTIKUM