Pewarnaan negatif yaitu pewarnaan yang ditujukan terhadap bakteri yang sulit

diwarnai, dimana bakterinya tidak diwarnai melainkan latar belakangnya, metode

pewarnaan negatif merupakan suatu metode perwarnaan sederhana, dimana
digunakan larutan zat warna yang tidak meresap ke dalam sel-sel bakteri melainkan
melatar belakangi sehingga kelihatan atau nampak sebagai bentuk-bentuk kosong
tak berwarna (negatif). Pewarnaan sederhana merupakan satu cara yang cepat
untuk melihat morfologi bakteri secara umum.

Dalam pengecatan negatif dipergunakan larutan cat yang bersifat asam, dimana
kationnya tak mengecat bakteri (karena tak berwarna), kecuali pada pH yang sangat
rendah (sangat asam). Teknik ini berguna untuk menentukan morfologi dan ukuran
sel Pada pewarnaan ini merupakan pewarnaan tidak langsung karena yang di
warnai adalah latar belakangnya, sedangkan bakerinya sendiri tidak mengalami
pewarnaan. Metode ini menggunakan cat nigrosin, cengo red, india ink dan burri/
tinta cina, sehingga tampak bakteri tak berwarna dengan latar belakang kegelapan.

Pengecatan negatif tidak memerlukan proses fiksasi terlebih dahulu, karena

proses fiksasi dapat membuat sel menjadi mengkerut. Biasanya, pengecatan negatif
berfungsi untuk melihat bentuk, ukuran dan kapsul sel. Jika pada pengecatan negatif
dilakukan juga proses fiksasi, akan membuat perubahan pada ukuran sel sehingga
ukuran sel menjadi tidak akurat. Lagipula, salah satu fungsi dari proses fiksasi
adalah untuk membuat proses pewarnaan bakteri menjadi lebih baik. Sementara itu,
pengecatan negatif hanya mewarnai latar belakang dan tidak akan mewarnai
permukaan sel sehingga proses fiksasi tidak perlu dilakukan

Ciri-ciri bakteri gram negatif yaitu:

 Struktur dinding selnya tipis, sekitar 10 – 15 mm, berlapis tiga atau multilayer.
 Dinding selnya mengandung lemak lebih banyak (11-22%), peptidoglikan
terdapat didalam
 lapisan kaku, sebelah dalam dengan jumlah sedikit ± 10% dari berat kering,
tidak mengandung asam tekoat.
 Kurang rentan terhadap senyawa penisilin.
 Pertumbuhannya tidak begitu dihambat oleh zat warna dasar misalnya kristal
violet.
 Komposisi nutrisi yang dibutuhkan relatif sederhana.
 Tidak resisten terhadap gangguan fisik.
 Resistensi terhadap alkali (1% KOH) lebih pekat
 Peka terhadap streptomisin
 Toksin yang dibentuk Endotoksin