Gambar 1.1
Gambar 2
Sabouraud Dextrose
Gambar 3
Sabouraud Dextrose
Agar (SDA)
4. Nutrient agar
Nutrient Agar adalah media kultur dengan tujuan umum, media nutrisi yang
digunakan untuk mengkultur mikroba. Nutrient agar populer karena dapat untuk
mengkultur berbagai jenis bakteri dan jamur, dan mengandung banyak nutrisi yang
dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri.
Komposisi nutrient Agar :
0,5% Peptone
Pepton adalah sumber utama dari nitrogen organik untuk bakteri
berkembang.
0,3% ekstrak daging sapi / ekstrak ragi
Zat yang larut dalam air yang membantu dalam pertumbuhan
bakteri, seperti vitamin, karbohidrat, senyawa nitrogen organik dan
garam.
1,5% agar
Adalah agen pemadat.
0,5% NaCl
Kehadiran natrium klorida dalam nutrien agar mempertahankan
konsentrasi garam dalam media yang mirip dengan sitoplasma
mikroorganisme.
Distillited water
Air sangat penting bagi pertumbuhan dan reproduksi mikro-
organisme dan juga menyediakan media sehingga nutrisi dapat
diangkut.
pH netral (7,4) pada 25 ° C.
Gambar 4
Nutrient agar
5. Manitol Salt Agar
Mannitol salt agar atau disingkat MSA merupakan media selektif dan
diferensial untuk identifikasi staphylococcus aureus. Media ini mengandunng garam
natrium klorida 7,5% sehingga media ini menjadi media selektif. Karena sebagian
besar bakteri tidak dapat tumbuh pada konsenterasi garam7,5% kecuali
staphylococcus . Selain itu MSA mengandung manitol dan indikator PH phenol red
yang membuat media ini menjadi media diferensial. Staphylococcus Aureus akan
menghasilkan koloni kuning dengan zona kuning karena dapat memfermentasi
manitol menjadi asam yang kemudian merubah warna indikator phenol red dari merah
menjadi kuning, sedangkan Staphylococcus jenis lainnya menghasilkan koloni merah
muda kecil atau koloni merah dengan tidak ada perubahan warna medium karena
tidak dapat memfermentasi manitol.
Komposisi :
Prinsip
Interpretasi hasil
S. aureus menunjukan koloni kuning atau putih dikelilingi oleh zona kuning.
Koagulase-negatif Staphylococcus membentuk berwarna kecil untuk koloni merah
dengan tidak ada perubahan warna medium.
Gambar 5
Komposisi :
7. Sabouraud Dextrose Agar (SDA) tabung dan Sabouraud Dextrose Agar (SDA) + oil
tabung
Sabouraud Dextrose Agar (SDA) adalah media selektif terutama digunakan untuk
isolasi dermatophyta, jamur lain dan ragi, tetapi juga dapat tumbuh bakteri seperti
Nocardia. PH asam dari media ini (pH sekitar 5,0) menghambat pertumbuhan bakteri
tetapi memungkinkan pertumbuhan dari ragi dan kebanyakan jamur berfilamen. Agen
antibakteri juga dapat ditambahkan untuk meningkatkan efek antibakteri.
Penambahan minyak (olive oil) digunakan untuk mengkultur Malassezia furfur.
Malassezia furfur tumbuh di media SAB yang dilapisi dengan lapisan tipis minyak
zaitun. Minyak zaitun kaya akan asam lemak. M.furfur akan tumbuh dan
menghasilkan koloni di sekitar atau di dekat tetesan minyak di mana ia dapat
memperoleh nutrisi.
Prinsip : SDA media terdiri dari enzimatik digest kasein dan jaringan hewan
yang menyediakan sumber nutrisi asam amino dan senyawa nitrogen untuk
pertumbuhan jamur dan ragi. Dextrose adalah karbohidrat yamg difermentasi dalam
konsentrasi tinggi sebagai sumber karbon dan energi. Agar adalah agen pemadat.
Antibiotik seperti kloramfenikol dan / atau tetrasiklin bertindak sebagai antimikrobial
spektrum luas untuk menghambat pertumbuhan berbagai bakteri gram positif dan
gram negatif. Gentamisin ditambahkan untuk lebih menghambat pertumbuhan bakteri
gram negatif. Penambahan minyak digunakan untuk mengkultur jamur Malassezia
furfur. Sifat Malassezia yang lipofilik dan bergantung pada lipid memerlukan media
khusus yang mengandung lipid. Spesies Malasseziatidak dapat tumbuh pada
medium agar Sabouraud dekstrosa (SDA) biasa karena spesies Malassezia
memiliki sifat afinitas yang tinggi terhadap lemak dan pertubuhannya memerlukan
lemak untuk tumbuh.
Media agar Slant (dalam tabung) yang berguna untuk menjaga
pertumbuhan bakteri / jamur selama jangka waktu yang lama tanpa
pengeringan. Sedangkan pada Cawan Petri memungkinkan pengamatan, akses
mudah, dan isolasi; tetapi rentan terhadap pencemaran lingkungan dan
pengeringan.
Composition of media:
Mycological peptone (enzymatic digest of casein and animal tissues) 10 Gm/L
Dextrose 40 Gm/L
Agar 15 Gm/L
pH adjust to 5.6 at 250 C
Gambar 8
Gambar 7
Sabouraud Dextrose
Sabouraud Dextrose
Agar (SDA) + oil
Agar (SDA)
B. Uji biokimia bakteri
1. Uji TSIA
Tujuan dari tes ini adalah untuk mengetahui kemampuan bakteri untuk
memfermentasikan karbohidrat. Pada media TSIA berisi 3 macam karbohidrat yaitu
glukosa, laktosa dan sukrosa. Indikatornya adalah phenol red yang menyebabkan
perubahan warna dari merah orange menjadi kuning dalam suasana asam.
Glukosa berada di dasar media sedangkan laktosa dan sukrosa berada di
bagian lereng. Selain menggunakan media TSIA dapat pula digunakan media KIA
(Kligers Iron Agar), bedanya adalah pada media KIA hanya berisi 2 macam
karbohidrat yaitu glukosa dan laktosa.
Komposisi
0,1% Glukosa
1,0% laktosa
1,0% sukrosa
Besi: Ferrous sulfat: Indikator pembentukan H2S
Phenol red: Indikator pengasaman (kuning dalam kondisi asam dan
merah pada kondisi basa).
Interpretasi Hasil :
Hanya memfermentasi glukosa : Bila pada dasar (butt) media berwarna
kuning (bersifat asam) dan lereng (slant) berwarna merah (bersifat basa)
Memfermentasi semua karbohidrat : Bila pada dasar (butt) media berwarna
kuning (bersifat asam) dan lereng (slant) berwarna kuning (bersifat asam)
Tidak memfermentasi semua karbohidrat : Bila pada dasar (butt) media
berwarna merah (bersifat basa) dan lereng (slant) berwarna merah (bersifat
basa)
Fermentasi pada TSIA juga disertai dengan pembentukan gas CO2 yang dapat
dilihat dari pecahnya dan terangkatnya agar.
Media TSIA juga dapat digunakan untuk mengetahui pembentukan H2S yaitu
melihat apakah kuman memfermentasi metionin dan sistein (Asam amino yang
mempunyai gugus S). Pada media TSIA terdapat asam amino metionin dan sistein,
jika kuman memfermentasi kedua asam amino ini maka gugus S akan keluar dan
gugus S akan bergabung dengan H2O membentuk H2S. Selanjutnya H2S bergabung
dengan Fe2+ membentuk FeS berwarna hitam dan mengendap.
Gambar 9
Tes TSIA
2. Uji indol
Uji indole digunakan untuk mengetahui kemampuan suatu organisme untuk
mengubah asam amino tryptophan untuk membentuk senyawa indol. Tryptophan
dihidrolisis oleh tryptophanase untuk menghasilkan tiga kemungkinan produk akhir -
salah satunya adalah indole. Produksi indol terdeteksi oleh reagen Kovac atau Ehrlich
yang berisi 4 (p) benzaldehida -dimethylamino, ini bereaksi dengan indol untuk
menghasilkan senyawa berwarna merah
Uji indole adalah tes biokimia yang umum digunakan (misalnya dalam IMViC
tes, SIM uji dll). Uji indole membantu untuk membedakan Enterobacteriaceae dan
genera lainnya.
Reagen : Kovacs
Interpretasi :
Positif: terbentuk cincin merah setelah penambahan reagen yang
sesuai
Negatif: tidak terbentuk cincin merah setelah penambahan reagen
yang sesuai
Gambar 10
Uji indol
3. Methyl Red
Methyl Red (MR) tes untuk menentukan apakah mikroba melakukan fermentasi
glukosa sehingga menghasilkan asam. Jenis dan proporsi produk fermentasi yang
dihasilkan oleh fermentasi anaerob glukosa adalah salah satu karakteristik taksonomi
kunci yang membantu untuk membedakan berbagai bakteri enterik.
Reagen : Methyle red
Interpretasi
MR Positif: Ketika media kultur berubah merah setelah penambahan metil red,
karena pH pada atau di bawah 4,4 hasil dari fermentasi glukosa.
Gambar 11
Gambar 12
5. Uji urease
Banyak organisme terutama yang menginfeksi saluran kemih, memiliki enzim
urease yang mampu mengubah urea dengan adanya air untuk menghasilkan amonia
dan karbon dioksida. Amonia bergabung dengan karbon dioksida dan air untuk
membentuk amonium karbonat bersifat alkali, mengubah indikator fenol merah dari
warna asli kuning oranye untuk pink cerah.
Media yang digunakan untuk uji urease: urea, agar-agar atau kaldu
Indikator yang digunakan dalam uji urease: Phenol red
Interpretasi :
Positif : pink cerah
Negatif : tidak terjadi perubahan warna
Gambar 13
Uji urease
6. Uji sitrat
Uji yang membedakan antara anggota keluarga Enterobacteriaceae
berdasarkan metabolisme oleh produk mereka. Uji sitrat digunakan untuk mengetahui
kemampuan bakteri untuk hanya memanfaatkan natrium sitrat sebagai sumber karbon
dan sebagai sumber nitrogen tunggal.
Ketika suatu asam organik seperti sitrat (ingat siklus Krebs) digunakan sebagai
sumber karbon dan energi, karbonat alkali dan bikarbonat yang diproduksi pada
akhirnya. Selain itu, amonium hidroksida dihasilkan ketika garam amonium dalam
medium yang digunakan sebagai sumber nitrogen tunggal.
Interpretasi :
Positif: perubahan akan menjadi biru. Karbonat alkali dan bikarbonat
diproduksi sebagai oleh-produk dari katabolisme sitrat menaikkan pH medium
di atas 7,6, menyebabkan bromothymol bles untuk mengubah dari warna hijau
asli untuk biru.
Negatif : tidak ada perubahan warna akan terlihat.
Gambar 14
Uji Citrat
Gambar 15
Uji SIM
C. Reitz Serum
Disebut juga bubur jaringan ,diambil dengan melakukan sayatan dengan scalpel pada
permukaan kulit dan mengambil cairannya yang diduga terinfeksi Mycobacterium
leprae penyebab penyakit lepra atau kusta.
HASIL PRAKTIKUM
NAMA BAKTERI :
KBB GRAM POSITIF
MATERIAL :
KULTUR
BENTUK :
PENGECATAN :
GRAM
SIFAT :
GRAM POSITIF
MIKROSKOP : 1000X
Nama bakteri :
KBB GRAM POSITIF
BERSPORA
Material :
KULTUR
Bentuk bakteri :
BATANG BERSPORA
Pengecatan :
GRAM
Sifat :
GRAM POSITIF
Perbesaran :
1000X
Contoh spesies:
Bacillus antraxis
NAMA BAKTERI :
KBB GRAM POSITIF
BERSPORA.
MATERIAL :
KULTUR
BENTUK BAKTERI:
BATANG BERSPORA
PENGECATAN :
GRAM
SIFAT :
GRAM POSITIF
PERBESARAN : 1000X
CONTOH SPESIES :
Clostridium perfringens
NAMA BAKTERI :
Mycobacterium sp.
MATERIAL :
REIZ SERUM
BENTUK BAKTERI :
BATANG WARNA MERAH
PENGECATAN :
ZN / ZIEHL NELSEEN
SIFAT :
BTA
PERBESARAN : 1000X
CONTOH SPESIES :
Mycobacterium leprae
Proteus mirabilis pada media
Blood agar.
Koloni swarming/
bergelombang.
Makroskopis Clostridium
perfringens pada Cooked meat
medium.
Kiri = control.
Spesies saccharolytic
fermentasi glycogen otot
dengan produksi asam dan gas,
media menjadi kemerahan dan
bau asam (contoh: Clostridium
perfringens).
Spesies proteolytic daging
terurai dengan membentuk H₂S
berwarna menjadi hitam
dengan bau busuk (contoh:
Clostridium histolyticum).
CANDIDIASIS DAN PITYRIASIS VERSICOLOR
Keterangan
UJI GERM TUBE JAMUR Candida
albican
Keterangan :
Plasma +koloni jamur diinkubasi
37˚C selama 3-4 jam
Gambar makroskopis Staphylococcus aureus
Tes Katalase +
Tes Koagulase +
Tes Sensitivitas
MRSA MSSA
2) Streptococcus pyogenes
Uji Bacitracin
Tes Katalase ( - )
3) Contoh Klinis
DERMATOPITA
1) Tricophyton rubrum
Gambar mikroskopis Tricophyton rubrum
Gambar makroskopis Tricophyton rubrum
2) Aspergillus fumigatus
Gambar mikroskopis Aspergillus fumigatus
6) Contoh klinis