Laporan Praktikum KI-3261

Metabolisme dan Informasi Genetika

Percobaan 6
Induksi β-galaktosidase

Nama : Elvan Sumaryadi Centaury

NIM : 10516057
Kelompok :5
Tanggal Percobaan : 4 April 2019
Tanggal Pengumpulan: 11 April 2019
Asisten : Murni Fitria

LABORATORIUM BIOKIMIA
PROGRAM STUDI KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG
2019
 Daftar Isi

DAFTAR ISI ................................................................................................................................................... 2

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................................................................ 3

DAFTAR TABEL ............................................................................................................................................. 4

INDUKSI Β-GALAKTOSIDASE ......................................................................................................................... 5

1 TUJUAN PERCOBAAN .......................................................................................................................... 5

2. DASAR TEORI ....................................................................................................................................... 5

1.1 REGULASI GEN ...................................................................................................................................... 5

1.2 SISTEM LAC-OPERON.............................................................................................................................. 5
1.2.1 Gen Struktural Lac-Operon ........................................................................................................... 5
1.2.2 Gen Regulator Sistem Lac-Operon ................................................................................................ 6
1.3 REGULASI DARI SISTEM LAC-OPERON DENGAN SENYAWA INDUCER DAN PENENTUAN AKTIVITAS Β-GALAKTOSIDASE.... 6

2 DATA PENGAMATAN ........................................................................................................................... 6

2.1 PENGAMATAN ABSORBANSI SETELAH DILAKUKANNYA REAKSI DENGAN ONPG SEBAGAI SUBSTRAT PADA WAKTU
TERTENTU. ......................................................................................................................................................... 6
2.2 REAGEN YANG DIGUNAKAN ...................................................................................................................... 7

3 PENGOLAHAN DATA ............................................................................................................................ 7

3.1 PENENTUAN NILAI OPTICAL DENSITY .......................................................................................................... 7

3.2 PENENTUAN NILAI ABSORBANSI TERKOREKSI ............................................................................................... 7
3.3 PENENTUAN AKTIVITAS ENZIM .................................................................................................................. 7
3.3.1 Penentuan aktivitas enzim dari data absorbansi langsung .......................................................... 7
3.3.2 Penentuan aktivitas Enzim dari nilai absorbansi Terkoreksi ......................................................... 8

4 PEMBAHASAN ................................................................................................................................... 10

4.1 FUNGSI PERLAKUAN DALAM PROSEDUR DAN FUNGSI REAGEN ...................................................................... 10

4.2 PERBANDINGAN PENGAMATAN DAN PENGOLAHAN DATA TERHADAP TEORI ..................................................... 11
4.3 REGULASI SUATU GEN DAN REGULASI TRP-OPERON ................................................................................... 12
4.4 ANALISIS HASIL.................................................................................................................................... 12

5 KESIMPULAN ..................................................................................................................................... 13

6 DAFTAR PUSTAKA.............................................................................................................................. 14
 Daftar Gambar

Kurva 4.1 Nilai absorbansi terhadap waktu untuk setiap media ......................................................... 8
Kurva 4.2 Kurva aktivitas enzim terhadap waktu .............................................................................. 9
Kurva 4.3 Absorbansi terhadap waktu(terkoreksi).............................................................................. 9
Kurva 4.4 Aktivitas terhadap waktu(terkoreksi) ................................................................................. 9
 Daftar Tabel

Tabel 3.1 Pengamatan Absorbansi senyawa pada waktu tertentu ....................................................... 6

Tabel 4.1 Pengamatan Absorbansi ...................................................................................................... 7
Tabel 4.2 Pengamatan Absorbansi Terkoreksi .................................................................................... 7
Tabel 4.3 Hasil Penentuan nilai aktivitas enzim ................................................................................. 8
Tabel 4.4 Hasil Penentuan nilai aktivitas enzim terkoreksi ................................................................ 8
 Induksi β-galaktosidase

1 Tujuan Percobaan
1. Menentukan aktivitas β-galaktosidase pada ekspresi gen sistem lac-operon dengan
metode spektrofotometri UV-Vis (kolorimetri).

2. Dasar Teori
1.1 Regulasi Gen
Reguasi gen pada suatu organisme dibagi menjadi dua bagian utama, yaitu regulasi
positif dan regulasi negatif. Dalam proses transkripsi dari suatu gen dalam makhluk hidup,
proses regulasi dapat dikatakan negatif bila dalam proses pembentukan dari suatu gen
dalam suatu siklus ekspresi gen dalam transkripsi menyebabkan terjadinya perubahan
dalam regulasi gen lain dimana gen lain menjadi terhambat proses regulasinya. Sedangkan
pada regulasi positif akan menyebabkan ekspresi gen dalam suatu sistem menjadi lebih
cepat dalam proses regulasinya. Dalam regulasi gene dalam proses transkripsi, promoter
merupakan suatu bagian dalam proses dimana terjadi proses mulainya dari regulasi dari
suatu gen dalam proses transkripsi, sedangkan operator merupakan suatu bagian dalam
ekspresi gen yang mengatur jalannya suatu regulasi dalam sel. Proses transkripsi dari suatu
gen terjadi pada inti sel.

1.2 Sistem Lac-Operon

Pada sistem lac-operon, terdapat 2 jenis gen, yaitu gen regulator dimana gen tersebut
meregulasi dari suatu ekspresi gen struktural dan juga terdapat gen struktural, yaitu gen
yang dimana pembentukannya ditujukan untuk membentuk struktur dari suatu gen tertentu
dalam proses regulasi suatu senyawa dalam sistem lac-operon. Gen regulasi dalam sistem
lac operon dibentuk dari 2 komponen, yaitu: LacI yang terkoneksi dengan suatu molekul
pirophosphate yang dimana dari proses regulasinya akan membentuk suatu protein represor
dalam sistem Lac-operon.

Dalam sistem Lac-operon, represor merupakan suatu senyawa yang menghambat

regulasi gen struktural.

1.2.1 Gen Struktural Lac-Operon

Berikut ini, beberapa Gen struktural pembentuk sistem Lac-Operon:

- LacZ, sebagai gen pengkode β-galaktosidase

 - LacY, sebagai gen pengkode β-galaktosidase permease yang akan membuat
molekul β-galaktosidase (dan juga laktosa) dapat melewati lapisan semi permeabel
dari membran dalam sel (membran inti).
- LacA, merupakan gen pengkode β-galaktosidase transasetilase, dimana akan
memindahkan gugus asetil dari suatu molekul laktosa menjadi senyawa allolaktosa
dalam sistemnya.

1.2.2 Gen Regulator Sistem Lac-Operon

Pada sistem ini yang menjadi gen regulator pada sistem percobaan adalah LacI dengan
adanya suatu molekul kofaktor Pi. Dalam sistem Lac I akan menghasilkan suatu gugus
represor sebagai pengatur laju kerja enzim β-galaktosidase.

1.3 Regulasi dari sistem Lac-Operon dengan senyawa Inducer dan penentuan aktivitas β-
galaktosidase.
Senyawa allolaktosa pada sistem Lac-operon berperan sebagai inducer dari suatu
molekul protein represor dalam percobaan. Adanya suatu inducer akan mendorong reaksi
β-galaktosidase menjadi lebih cepat karena bagian operator dalam sistem Lac-operon yang
dekat dengan bagian gen struktural tidak terhalang oleh represor. Proses yang terjadi antara
allolaktosa dengan suatu molekul represor adalah induksi (induced fit) dimana dengan
proses induksi tersebut dapat merubah konformasi dari molekul protein represor dalam
sistem. Penentuan aktivitas dari suatu enzim β-galaktosidase dapat ditentukan dengan
melakukan pereaksian dengan senyawa yang mengandung substrat berupa galaktosa untuk
menghasilkan suatu molekul β-galaktopiranosa. Dalam percobaan yang dilakukan
digunakan molekul ONPG (orto-nitrophenilgalaktopiranosa) yang akan menghasilkan ONP
dalam sistemnya setelah dilakukannya pereaksian dengan molekul enzim β-galaktosidase
berwarna kuning. Perubahan warna tersebut dapat diamati, sehingga dari sistem tersebut
dapat ditentukan aktivitas enzim berdasar jumlah produk yang terbentuk dengan metode
analisis spektrofotometri sinar tampak.

2 Data Pengamatan
2.1 Pengamatan absorbansi setelah dilakukannya reaksi dengan ONPG sebagai substrat
pada waktu tertentu.
Tabel 3.1 Penga matan Absorbansi senyawa pada waktu tertentu

waktu
Tabung Blanko(OD) 0 10 20 30 40
NB 0,066 0,111 0,071 0,23 0,093 0,099
NBL 0,066 0,036 1,358 1,371 1,37 1,377
 NBLG 0,064 0,03 0,094 0,281 0,416 0,52

2.2 Reagen yang digunakan

- Volume total 0,5 mL.
- Volume buffer Z total 15 mL
- Volume kultur pakai 5 mL (untuk setiap media)
- Volume kloroform 250 μL
- Volume SDS 0,1% 100 μL
- Volume ONPG 1 mL
- Volume Na2CO3 1M 2mL

3 Pengolahan Data
3.1 Penentuan nilai Optical Density
Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan dalam percobaan, optical density yang
didapatkan hanya dari nilai blanko sistem, maka dilakukan pengolahan atas dasar
percobaan yang telah dilakukan sebelumnya;
Tabel 4.1 Penga matan Absorbansi

Waktu
Tabung Blanko(OD)
0 10 20 30 40
NB 0,066 0,111 0,071 0,23 0,093 0,099
NBL 0,066 0,036 1,358 1,371 1,37 1,377
NBLG 0,064 0,03 0,094 0,281 0,416 0,52

3.2 Penentuan nilai Absorbansi Terkoreksi

Dan untuk nilai data absorbansi terkoreksi;
Tabel 4.2 Penga matan Absorbansi Terkoreksi

Waktu
Tabung Blanko
0 10 20 30 40
NB 0,066 0,111 -0,04 0,119 -0,018 -0,012
NBL 0,066 0,036 1,322 1,335 1,334 1,341
NBLG 0,064 0,03 0,064 0,251 0,386 0,49

3.3 Penentuan aktivitas Enzim

3.3.1 Penentuan aktivitas enzim dari data absorbansi langsung

Maka dari data tersebut dapat ditentukan aktivitas enzim;
𝐴
𝐴𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝐸𝑛𝑧𝑖𝑚 =
𝑡 × 𝑂𝐷600 × 𝑉𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
 -
Untuk data pertama dan terkoreksi pertama,
0,071 0,21515
𝐴𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝐸𝑛𝑧𝑖𝑚 = =
10 𝑚𝑒𝑛𝑖𝑡 × 0,066 × 0,5 𝑚𝐿 𝑚𝑒𝑛𝑖𝑡 𝑚𝐿
−0,040 − 0,1212
𝐴𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝐸𝑛𝑧𝑖𝑚 = =
10 𝑚𝑒𝑛𝑖𝑡 × 0,066 × 0,5 𝑚𝐿 𝑚𝑒𝑛𝑖𝑡 𝑚𝐿
Dengan cara yang sama, maka didapatkan nilai aktivitas enzim dalam percobaan, adalah:
Tabel 4.3 Hasil Penentuan nil ai aktivitas enzim

Absorbansi OD Volume Aktivitas

Waktu NB NBL NBLG NB NBL NBLG total NB NBL NBLG
0 0,111 0,036 0,03 0,066 0,066 0,064 0,5 3,364 1,091 0,938
10 0,071 1,358 0,094 0,215 579,599 2,163
20 0,23 1,371 0,281 0,348 180,632 6,405
30 0,093 1,37 0,416 0,094 446,399 9,489
40 0,099 1,377 0,52 0,075 421,488 11,801

3.3.2 Penentuan aktivitas Enzim dari nilai absorbansi Terkoreksi

Dari hasil percobaan yang dilakukan dan penentuan nilai absorbansi terkoreksi, maka dapat
ditentukan pula aktivitas enzim dari data absorbansi terkoreksi, yaitu:

Tabel 4.4 Hasil Penentuan nilai aktivitas enzim terkoreksi

Volume
Absorbansi OD total Aktivitas
0 0,111 0,036 0,03 3,364 0,162 2,891
10 -0,04 1,322 0,064 -0,12121 4,006061 0,2
20 0,119 1,335 0,251 0,066 0,066 0,064 0,5 0,180303 2,022727 0,392188
30 -0,018 1,334 0,286 -0,01818 1,347475 0,297917
40 -0,012 1,341 0,49 -0,00909 1,015909 0,382813

Dari data tersebut dapat diplotkan nilai hasil dalam kurva;

2

1.5

1
A

0.5

0
0 10 20 30 40 50
t(menit)

Kurva 4.1 Nilai absorbansi terhadap waktu untuk setiap media

 700.000

600.000

aktivitas(/menit.mL)
500.000

400.000

300.000

200.000

100.000

0.000
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
t(menit)

Kurva 4.2 Kurva aktivitas enzim terhadap waktu

1.6
1.4
1.2
1
0.8 Absorbansi NB
A

0.6 Absorbansi NBL

0.4 absorbansi NBLG
0.2
0
-0.2 0 10 20 30 40
t(menit)

Kurva 4.3 Absorbansi terhadap waktu(terkoreksi)

5.000

4.000
Aktivitas(/menit.mL)

3.000
Aktivitas NB
2.000
Aktivitas NBL
1.000 Aktivitas NBLG

0.000
0 10 20 30 40
-1.000
t(menit)

Kurva 4.4 Aktivitas terhadap waktu(terkoreksi)

4 Pembahasan
4.1 Fungsi Perlakuan dalam Prosedur dan Fungsi Reagen
Dalam percobaan ini, dilakukan penentuan dariaktivitas enzim β-galaktosidase dengan
substrat ONPG dalam percobaan yang dilakukan menggunakan metode analisis
spektrofotometri dengan analit ONP dalam sistem yang dibentuk. Molekul ONP berwarna
kuning, sedangkan molekul ONPG berwarna bening pada percobaan yang dilakukan.
Dalam percobaan yang dilakukan, digunakan beberapa reagen, yaitu buffer Z mengandung
β-mercaptoetanol yang digunakan untuk dapat membantu melisiskan membran dari kultur
E.coli dengan cara mengganggu ikatan disulfida pada residu asam amino sistein dalam
membran pembentuknya. Pada percobaan, pencucian dari residu yang telah digunakan
bufer Z dilakukan 3 kali untuk memaksimalkan dari proses pelemahan dari ikatan disulfida
pada membran yang didapatkan, selain itu juga bufer Z dapat melarutkan kembali pelet
kultur dalam sistem dan memisahkan pengotor dari peletnya. Sentrifugasi dilakukan untuk
dapat mempercepat proses pereaksian antara bufer dan kultur juga dapat pula membantu
buffer Z untuk penetrasi ke dalam sel yang menyebabkan proses lisis menjadi lebih cepat.
Selanjutnya pellet setelah 2 kali sentrifugasi ditambahkan SDS sebagai surfaktan dimana
akan mempermudah dalam proses denaturasi membran sel dari sisa protein yang masih
tersisa dalam sistem, dan ditambahkan kloroform sebagai pelarut organik dimana kloroform
akan memisahkan antara lapisan organik dengan kloroformnya itu sendiri yang berisi
media kultur yang memang terpisah dari pengotornya. Kloroform dalam hal ini juga
berperan sebagai pengekstrak dari organel sel dalam sistem yang dibentuk. Larutan
campuran antara buffer, SDS dan kloroform selanjutnya divortek untuk mempercepat
reaksi dalam sistemnya. Setelah dilakukan pengadukan dengan vorteks, selanjutnya
dilakukan inkubasi dalam waterbath dengan tujuan untuk dapat mengaktivasi kerja enzim,
dimana kerja optimum enzim adalah pada suhu 37oC. Setelah diinkubasi 1 menit,
selanjutnya campuran ditambahkan substrat ONPG selanjutnya diinkubasi sesuai waktu
yang telah ditentukan. Untuk waktu 0 menit, substrat yang dimasukkan selanjutnya
langsung ditambahkan natrium karbonat, lalu dikocok dan dimasukkan ke penangas es.
Natrium karbonat dalam sistem bersifat basa, sehingga dengan adanya penambahan
molekul natrium karbonat akan menyebabkan suasana menjadi basa dan pada keadaan basa
proses reaksi yang diperbantukan oleh β-galaktosidase menjadi berhenti karena enzim aktif
dalam keadaan sedikit asam. Setelah itu dilakukan kembali sentrifugasi setelah pendinginan
ditujukan untuk mencairkan kembali dari keadaan dingin sistem dan memisahkan bagian
organik dengan kloroform dalam sistem, setelah itu dilakukan pengamatan dan analisis
terhadap larutan yang telah dibuat selanjutnya.

4.2 Perbandingan Pengamatan dan Pengolahan data Terhadap teori

Pada percobaan ini didapatkan nilai aktivitas enzim β-galaktosidase dimana nilai
tertinggi didapatkan pada sistem dengan komposisi media NB+L, lalu NB+LG dan terakhir
NB saja. Berdasarkan komponennya, suatu media dengan jumlah laktosa banyak, akan
menyebabkan nilai aktivitas enzim meningkat pesat dalam sistem percobaan yang
dilakukan. Dalam percobaan yang dilakukan ini, nilai suatu sistem dengan laktosa bernilai
tinggi karena keberadaan laktosa dalam sistem berperan sebagai inducer dari suatu molekul
represor, sehingga ketika jumlah laktosa yang selanjutnya laktosa tersebut mengalami
perubahan ikatan glikosidiknya dari 1,4 menjadi 1,6 akan dapat menginduksi molekul
represor dimana molekul represor yang dihasilkan oleh LacI akan mengalami perubahan
konformasi dalam percobaan, sehingga dapat dengan mudah terlepas dengan suatu gugus
operator dalam sistem.Karena sebenarnya ikatan antara bagian operator dengan suatu
molekul represor tidak terlalu kuat dan dapat lepas, maka dimungkinkan terjadinya proses
pelepasan molekul represor dan reaksipun berjalan, namun akan lebih lambat. Hal tersebut
sesuai dengan hasil yang didapatkan dalam percobaan. Pada sistem NB+LG aktivitasnya
lebih rendah dalam percobaan. Hal tersebut terjadi karena pada sistemnya ketika jumlah
glukosa dalam sistem tinggi, maka akan menyebabkan produksi ATP meningkat, dan siklik
AMP akan ada dalam jumlah yang sangat sedikit. Karena jumlahnya sedikit, maka akan
menyebabkan senyawa CAP akan terinduksi molekul gula bukan cAMP. Akibatnya CAP
yang berfungsi untuk membantu mempercepat dari proses pembentukan ONP akan sedikit
lebih lambat ketimbang sistem tanpa adanya molekul glukosa. Karena suatu molekul
represor dalam sistem Lac-operon selalu dibentuk, maka dalam percobaan yang dilakukan
laktosa akan mengambil peranan yang lebih penting ketimbang senyawa glukosa. Hal
tersebut memungkinkan bahwa ketika jumlah glukosa sedikit dan jumlah laktosa banyak
akan menyebabkan nilai hasil dari percobaan yang dilakukan aktivitas enzimnya sangat
tinggi ketimbang jumlah laktosa dan glukosa yang berimbang.

4.3 Regulasi Suatu Gen dan Regulasi Trp-Operon

Dalam percobaan ini yang hendak dilihat adalah pengaruh dari adanya induksi molekul
glukosa dan juga laktosa dalam percobaan yang dilakukan. Dalam percobaan ini, juga
ditinjau pengaruh dari regulasi gen dalam sel yang diamati. Regulasi suatu gen dalam sel
dinilai sangat penting karena regulasi memegang peranan penting dalam suatu ekspresi gen
dari proses metabolisme dalam sel itu sendiri dan mengatur kebutuhan sel akan
keseimbangan jumlah suatu senyawa dalam suatu sel. Bila dalam suatu organisme, tidak
diketemukannya suatu sistem regulasi, maka akan terjadinya gangguan dalam sistem
metabolisme sel dan juga proses perkembang biakan sel. Sistem Lac-operon merupakan
salah satu bentuk regulasi sel, dimana dalam proses regulasi selnya diatur oleh suatu
molekul represor dan juga inducer yang sebelumnya telah dibahas. Regulasi dalam suatu
sel tidak hanya Lac-operon saja, namun terdapat pula beberapa bentuk regulasi dalam sel
yang lain salah satunya sistem regulasi Trp-operon. Trp-operon diekspresikan ketika
jumlah triptophan dalam jumlah yang sedikit dan dihentikan ketika jumlah triptofan dalam
sel jumlahnya banyak. Molekul represor yang berperan dalam sistem trp-operon adalah trp
represor dimana ketika terikat dengan suatu mmolekul triptofan akan menghalangi proses
expresi dari sistem trp-operon. Dalam sistem operon terdapat beberapa gen, yaitu
regulatory gen yang merupakan gen yang meregulasi kemungkinan suatu proses regulasi
berlangsung atau tidak dalam sel. Selain itu juga ada inducible gene yang merupakan gen
yang terbentuk yang berperan untuk dapat menginduksi gen ain sehingga proses regulasi
dapat berjalan atau tidak. Dan juga ada suatu gen konstitutif, yaitu suatu gen dimana akan
ditranskripsi dalam suatu sel jika diperlukan saja, sehingga dalam proses regulasinya tidak
diproduksi secara terus menerus dalam suatu sel namun jumlah yang dihasilkannya harus
konstan sesaui dengan kebutuhan dari sel.

4.4 Analisis Hasil

Dalam percobaan dihasilkan nilai hasil yang cukup aneh dimana dihasilkannya aktivitas
dari sistem ketika waktu sama dengan nol. Hal tersebut dapat terjadi karena dalam proses
pereaksiannya terdapat selang waktu ketika pencampuran dari moelkul substrat dengan
molekul kultur mengandung enzim dalam percobaan dengan penambahan natrium
karbonat, sehingga akan menghasilkan sedikit nilai aktivitas. Selain itu juga tidak
dilakukannnya proses pengocokan dalam siatem yang dilakukan yang sebenarnya ditujukan
untuk menghomogenkan sistem yang dibentuk dalam percobaan yang dilakukan. Dalam
percobaan pula disinyalir terdapat kesalahan dalam proses penentuan nilai Optical density
dalam percobaan. Berdasarkan hasil percobaan yang dilakukan, ternyata hanya
dilakukannya pengukuran blanko saja tanpa dilakukannya proses analisis terhadap media
yang digunakan sebagai media percobaan bukan blanko. Hal ini menyebabkan nilai optical
density yang sangat kecil akan memberikan nilai dari perhitungan aktivitas yang tidak
sesuai dengan nilai seharusnya, sehingga perlu dilakukannya pengukuran ulang terutama
untuk media yang dipakai dalam percobaan. Berdasarkan hasil percobaan yang telah
dilakukan, didapatkan nilai aktivitas yang sangat tinggi pada hasil percobaan yang
dilakukan yang menunjukkan kesalahan dalam pengambilan data yang dilakukan dalam
percobaan. Namun berdasarkan nilai yang didapatkan dalam percobaan dan hasil plot
absorbansi dan juga aktivitas dari enzim yang digunakan dengan suatu senyawa analit
dalam spektrofotometri yaitu ONP menunjukkan nilai yang bersesuaian dengan teori,
dimana nilai aktivitasnya berturut-turut NBL, NBLG, dan NB.

5 Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan dihasilkan bahwa aktivitas dari enzim β-
galaktosidase dalam sistem nilainya akan meningkat seiring dengan lamanya waktu reaksi
dalam sistem dan dipengaruhi oleh adanya suatu zat inducer, yaitu laktosa dan juga glukosa
yang mengurangi keaktifan enzim dalam sistem kerja enzim. Urutan aktivitas enzimnya
adalah pada media NB berturut turut dari keaktifan tertinggi dengan komposisi
mengandung laktosa, lalu laktosa dan glukosa dan tanpa adanya tambahan laktosa ataupun
glukosa.
6 Daftar Pustaka
Berg, J.M, Tymoczko, J.L, and Stryer, L. 2006. Biochemistry 6th Ed. W.H. Freemann
and Company: New York.

https://khanacademy.ac.com/Lac-Operon-Regulation/ .Diakses pada 7 April 2014. Pukul

21.22.56.

Lehninger, A.L. 2004. Principles of Biochemistry. Worth Publisher, Inc: New York.

Purba, M. 2006. Kimia. Erlangga: Jakarta. hlm 71-83.