[TEKNOLOGI FARMASI III (STERIL] 2019

VALIDASI
Adi Setyawan1, Devy Dwiana Izzati1, Dwi Julyanti1, Marfina Yuniarti1, Nopita Eka
Rizna1
1
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Sriwijaya
Indralaya
Email: farmasiunsri2017@gmail.com

ABSTRAK
Sediaan steril memiliki tujuan utama yaitu mutlak tidak adanya kontaminasi mikroba.
Kontaminasi dapat berasal dari beberapa penyebab seperti sterilisasi media yang kurang,
lingkungan kerja dan pelaksanaan cara kerja yang tidak teliti. Maka dari itu perlu dilakukannya
validasi selama kegiatan berlangsung. Validasi merupakan suatu kegiatan untuk
menginformasikan bahwa suatu alat uji atau metode uji memenuhi persyaratan yang ditentukan
dengan maksud tertentu. Hal ini dilakukan dengan cara menguji alat uji dan metode uji tersebut
untuk melengkapinya dengan bukti-bukti yang objektif. Validasi menggambarkan sejauh mana
alat ukur bisa mengukur apa yang hendak diukur meliputi presisi, akurasi, kepekaan, batas
deteksi, selektivitas dan spesivitas. Untuk praktikum steril ini metode sterilisasi yang
memerlukan proses validasi seperti metode sterilisasi dengan autoklaf, validasi kotak aseptis,
metode sterilisasi oven serta gelas ukur. Dengan demikian validasi merupakan suatu upaya
untuk mengevaluasi kegunaan dan kelayakan tes untuk tujuan tertentu yang memerlukan
banyak sumber bukti. Hal ini diperlukan jika penggunaan tes harus dipertahankan untuk tujuan
tertentu sehingga bukti yang memadai dapat diajukan untuk mempertahankan penggunaan tes
untuk tujuan itu.

Kata kunci: autoklaf, kotak aseptis , oven, validasi

ABSTRACT
Sterile preparations have the primary goal that there is absolutely no microbial
contamination. Contamination can come from several causes such as lack of media
sterilization, work environment and the implementation of inaccurate work methods. Therefore
it is necessary to do validation during the activity. Validation is an activity to inform that a test
device or test method meets the requirements specified for a specific purpose. This is done by
testing the test equipment and test methods to supplement it with objective evidence. Validity
describes the extent to which the measuring instrument can measure what is to be measured
including precision, accuracy, sensitivity, detection limits, selectivity and specificity. For this
sterile practicum, the sterilization method requires validation processes such as the autoclave
sterilization method, aseptic box validation, the oven sterilization method and the measuring
cup. Thus validation is an attempt to evaluate the usefulness and feasibility of the test for a
particular purpose that requires a lot of sources of evidence. This is necessary if the use of the
test must be maintained for a particular purpose so that sufficient evidence can be presented
to maintain the use of the test for that purpose.

Keywords: autoclave, aseptic box, oven, validation

1. PENDAHULUAN
 [TEKNOLOGI FARMASI III (STERIL]
Sediaan steril memiliki beberapa
sifat bentuk takaran yang unik, seperti
bebas dari mikroorganisme priogen dan
bebas dari partikulat serta memiliki standar
yang sangat tinggi dalam hal kemurnian
dan kualitas. Tujuan utama pembuatan
sediaan steril adalah mutlak tidak adanya
kontaminasi mikroba. Kontaminasi dapat
berasal dari beberapa penyebab seperti
penanaman eksplan, molekul-molekul atau
benda-benda asing berukuran kecil yang
jatuh atau masuk ke dalam botol kultur
setelah penanaman dan ketika diletakkan
dalam ruangan (Agalloco dan Carleton,
2008).
Ruangan steril adalah tempat yang
disiapkan secara khusus , terbuat dari
bahan-bahan dan tata bentuk yang harus
sesuai dengan Cara Pembuatan Obat yang
Baik (CPOB). Menurut CPOB ruangan
steril dikategorikan menjadi ruang kelas A,
B dan C atau disebut juga dengan white area
dengan persyaratan jumlah mikroba dan
partikel yang telah ditetapkan. Ruangan A
merupakan ruangan di bawah aliran udara
laminar, sedangkan kelas B dan C tergolong
ke dalam ruangan steril. Ruangan A dan B
memiliki efisiensi saringan HEPA (High
Effieciency Particulate Air) filter 99,995%
pada H14 sedangkan suatu ruangan
dikategorikan tipe C jika memiliki efisiensi
dengan HEPA H13 dengan filter 99,95%
(Lukas,2006).
Ruangan steril dapat diperoleh
dengan berbagai cara , salah satunya yang
paling umum digunakan adalah
menggunakan disinfektan seperti alcohol,
klorin (natrium hipoklorit), glutaraldehid,
hydrogen peroksida, formaldehid, fenol,
klorheksidin dan lain-lain. Disinfektan
proses sterilisai dapat dilakukan dengan
metode fogging atau pengasapan.
Komposisi dari cairan fogging tersebut
sendiri itu umumnya mengandung
formicaldehid, didecyldimetilammonium-
klorida, dan dimetikon. Cara penyinaran
dengan UV juga telah terbukti efektif dalam
sterilisasi ruangan. Proses penyinaran UV
umumnya dilakukan tidak kurang dari 24
2019
jam untuk menjamin sterilitas ruang
(Lukas,2006).
Validasi adalah suatu kegiatan
untuk menginformasikan bahwa suatu alat
uji atau metode uji memenuhi persyaratan
yang ditentukan untuk maksud tertentu,
dengan cara menguji alat uji dan metode uji
tersebut serta melengkapinya dengan bukti-
bukti yang objektif. Pendekatan yang biasa
dilakukan untuk validasi alat uji dan
metode uji meliputi presisi, akurasi,
kepekaan, batas deteksi, selektivitas dan
spesivitas. Laboratorium pengujian yang
mengadopsi peratran SNI 1705-1005
mensyaratkan data hasil uji dinyatakan sah
apabila presisi dan akurasi yang baik.
Akurasi dalam analisis kimia adalah ukuran
perbedaan atau kedekatan antara rerata
hasil uji yang diperolah (Purwanto,2007).
Validitas menggambarkan sejauh
alat ukur (tes) benar-benar mengukur apa
yang hendak diukur. Menetapjan validitas
sebuah test atau instrument test sangat sulit,
terutama karena variable-variabel psikologi
biasanya adalah konsep-konsep ini tidak
memiliki realitas konkret sehingga
eksistensinya harus diinferensi melalui
sarana tidak langsung . Ada tiga jenis
validitas yaitu content validity,
criteuonvalidituy , dan construct validity.
Validitas bukan semata-mata sebagai
sebuah tes, sebaliknya ini mengacu pada
penggunaan tes untuk tujuan tertentu.
Dengan demikian, validitas merupakan
upaya peneliti untuk mengevaluasi
kegunaan dan kelayakan tes untuk tujuan
tertentu yang memerlukan banyak sumber
bukti. Hal ini diperlukan jika penggunaan
tes harus dipertahankan untuk tujuan
tertentu, sehingga bukti yang memadai
dapat diajukan untuk mempertahankan
penggunaan tes untuk tujuan itu. Selain itu
evaluasi validitas untuk mempertahankan
penggunaan tes untuk tujuan itu. Selain itu,
evaluasi validitas bukan kejadian statis satu
kali, namun merupakan proses yang terus-
menerus (Sireci,2007).
2. METODOLOGI PENELITIAN
2.1 Tempat dan Waktu
 [TEKNOLOGI FARMASI III (STERIL]
Tempat : Laboratorium Teknologi
Farmasi, Jurusan Farmasi, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sriwijaya.
Waktu : 19 Agustus 2019
2.2 Alat dan Bahan
2.2.1 Alat
Peralatan yang digunakan antara lain
baskom, oven, autoklaf, gunting, pengemas
ampul, pengemas vial, peralatan logam,
beaker gelas, gelas ukur, erlenmeyer,
timbangan analitik, anak timbangan (2gr,
5gr, 10gr, 50gr, 100gr, dan 200gr) dan
batang pengaduk.
2.2.2 Bahan
Bahan yang digunakan antara lain
water for injection (WFI), detergen, asam
klorida encer, natrium karbonat, akuades,
etanol 70%, arang aktif, agar-agar,
alumunium foil, benang kasur, kertas kopi,
selotip bening, kapas, dan kasa.
2.3 Prosedur Kerja
2.3.1 Pembuatan Media Agar
Pembuatan media agar dilakukan
dengan melarutkan serbuk agar-agar
dengan sedikit air. selanjutnya panaskan air
sebanyak 100 ml ke dalam erlenmeyer.
Setelah cukup mendidih masukkan agar
yang sudah dilarutkan ke dalam sedikit air.
Biarkan larutan agar mendidih. Selanjutnya
angkat erlenmeyer dan dinginkan sebentar.
2.3.2 Pembuatan Water for Injection
Pembuatan water for injection
diawali dengan timbang arang aktif
sebanyak 1 gram dan dimasukkan ke dalam
oven selama 5 menit. Kemudian timbang
arang aktif yang telah dipanaskan lalu
masukkan kembali kedalam oven.
Dilakukan sampai bobot arang aktif
menjadi konstan . Selanjutnya larutkan
arang aktif yang bobotnya sudah konstan
tersebut ke dalam air sebanyak 100 ml.
Didihkan arang aktif. Setelah mendidih,
saring arang aktif menggunakan kertas
saring sehingga terpisah dari air yang
dididihkan. Proses penyaringan dilakukan
2019
berulang-ulang agar air benar-benar bersih
dari serbuk arang aktif.
2.3.3 Kalibrasi timbangan analitik
Proses sterilisasi alat dan pengemas
diawali dengan mensortir alt berdasarkan
kategorinya (kaca, plastik, dan logam).
Selanjutnya lakukan pencucian pada ketiga
jenis kategori alat. Alat-alat gelas
dibersihkan dengan cara mencucinya denga
asam klorida encer, lalu rendam dalam
larutan detergen 1% dan natrium karbonat
0,1%, didihkan dalam air panas selama 15
menit dan amati hingga cairan jernih, jika
belum jernih ulangi proses pendidihan dan
bilas dengan akuades. Alat-alat logam
dibersihkan dengan dididihkan dalam
larutan detergen 1% selama 10 menit, lalu
direndam dalam larutan natrium karbonat
0,1% selama 5 menit dan bilas dengan
akuades panas. Alat-alat karet dibersihkan
dengan cara yang sama dengan alat gelas
namun yang membedakan adalah pada alat
karet menggunakan asam klorida 2% dan
etanol 70% sebagai pembilas akhir. Setelah
dicuci alat-alat tersebut dikeringkan. Alat
yang tahan panas dikeringkan dalam oven
100-105°C selama 10 menit. Alat yang
tidak tahan panas dikeringkan dengan tisu.
Setelah dikeringkan, bungkus alat-alat yang
tersebut menggunakan kertas kopi atau
alumunium foil. Alat-alat yang memiliki
mulut harus disumbat dahulu dengan kapas.
Selanjutnya sterilkan alat yang sudah
dibungkus. Alat yang tahan panas
disterilkan menggunakan metode panas
kering, alat yang tidak tahan panas
diterilkan dengan metode panas basah,
sedangkan alat karet disterilkan dengan
merendamnya ke dalam alkohol 70%. Alat-
alat pengemas yang sudah steril dibilas
dengan water for injection steril, lalu
teteskan pada media agar dan inkubasi
selama 24 jam. Hal terakhir yang dilakukan
adalah menghitung nilai D value dan Z
value.
2.3.4 Kalibrasi Autoklaf
Pengujian mikroba yang bersifat
termofilik dan memiliki endospora yaitu
Bacillus stearothermophilus. Media agar
 [TEKNOLOGI FARMASI III (STERIL] 2019

dimasukkan kedalam autoklaf dan 3.1 Data Hasil

disterilkan, inkubasi selama 24 jam. Jika 3.1.1 Kalibrasi Anak Timbangan
media tetap bening maka autoklaf bekerja A. Anak Timbangan 2 gram
secara baik. Bobot (gram)
1,99 1,98
2.3.5 Kalibrasi Oven 1,98 1,99
Masukkan media agar kedalam oven 1,98
1,97
lakukan sterilisasi inkubasi selama 24 jam
1,97 1,97
lihat pertumbuhan bakteri pada media.
1,97 1,98
1,98 1,99
2.3.6 Validasi Metode Sterilisasi
(Validasi Konkuren) 1,99 1,99
Masing-masing sediaan berupa 1,98 1,97
aquadest dibuat di botol vial dan ampul. 1,97 1,97
Sediaan di autoklaf pada suhu yang sama 1,98 1,97
(1210C) selama 15 menit. Lalu preparasi ∑ = 39,56 gram
sediaan pada kotak aseptis sediaan
x = 1,979 gram
dikeluarkan dari autoklaf. Sterilisasi
aquadest dalam tiap wadah dicek dengan SD = 0,00767
media agar, dengan meneteskan M =
secukupnya pada permukaan. Inkubasi = 0,005
media agar yang berisisampel selama 24
jam. Cek ada tidaknya pertumbuhan bakteri C= M - ( x M - x Z)
pada media agar. C = 2 - (0,005 - 0)
C = 2 - 0,005
2.3.7 Validasi Kotak Aseptis C = 1,995
Media agar dletakkan di sumber
udara pada kotak aseptis. Untuk validasi B. Anak Timbangan 5gram
bagian dalam kotak aseptis menggunakan
Bobot (gram)
kertas saring yang sudah disterilisasi
kemudian digosokkan pada bagian dalam 5 5,01
kotak aseptis. Kertas saring dimasukkan ke 5,02 5,01
dalam media agar lalu inkubasi media agar 5,01 5,01
selama 24 jam. Cek ada tidaknya 5,02 5,02
pertumbuhan bakteri pada media agar. 5 5,01
5,01 5,01
2.3.8 Validasi Metode Sterilisasi dengan 5,01 5,01
Oven (panas kering) 5,01 5,02
Wadah vial, ampul, gelas beker 5,01 5,01
dibungkus dengan aluminium foil lalu 5 5,01
disterilkan dengan oven dengan suhu yang
∑ = 100,2 gram
sama (1800C) selama 30 menit. Tiap wadah
dibilas dengan WFI pada bagian dalamnya, x = 5,01 gram
hasil bilasan dimasukkan ke dalam media SD = 0,043
agar. WFI yang tidak dimasukkan ke dalam M =
wadah digunakan sebagai control. Inkubasi = 0,005
media agar selama 24 jam pada suhu 370C
lalu lakukan pengecekan sterilisasi media
agar. C= M - ( x M - x Z)
3. DATA HASIL PENGAMATAN C = 5 - (0,005 - 0)
 [TEKNOLOGI FARMASI III (STERIL] 2019

C = 5- 0,005 C = 20 - (0,0085 – 0)
C = 4,995 C = 20 - 0,0085
C = 19,9915

C. Anak Timbangan 10 gram E. Anak Timbangan 50 gram

Bobot (gram) Bobot (gram)
10,02 10,02 50 50
10,02 10,02 50,01 50,01
10,02 10,03 50 49,99
10,02 10,03 Bobot (gram)
10,01 10,02
10,02 10,02 50 50
10,02 10,01 50,01 50
10,03 10,02 50 50,01
10,03 10,02 50 50
10,02 10,02 50,01 50,01
∑ = 200,42 gram 50 50,01
x = 10,021 gram 50 50
SD = 0,005252 ∑ = 1000,06 gram
M = x = 50,003 gram
= 0,008 SD = 0,0823
M =
C= M - ( x M- x Z) = 0,005
C = 10 - (0,008 - 0)
C = 10 - 0,008 C= M - ( x M - x Z)
C = 9,992 C = 50 - (0,005 – 0)
C = 5- 0,005
D. Anak Timbangan 20 gram C = 49,995
Bobot (gram)
19,98 19,99 F. Anak Timbangan 100 gram
19,98 19,98 Bobot (gram)
19,98 19,98 99,91 99,91
19,98 19,99 99,91 99,92
19,99 19,98 99,91 99,91
19,99 19,98 99,91 99,91
19,98 19,99 99,91 99,91
19,98 19,99 99,90 99,91
19,97 19,98 99,91 99,91
19,98 19,98 99,90 99,92
∑ = 399,66 gram 99,91 99,91
x = 19,983 gram 99,91 99,91
SD = 0,00571 ∑ = 1998,18 gram
M = x = 99,909 gram
= 0,0085 SD = 0,00447
M =
C= M - ( x M - x Z)
 [TEKNOLOGI FARMASI III (STERIL] 2019

= 0,004 Percobaan validasi metode sterilisasi

dilakukan dengan metode autoklaf, kimia,
C= M - ( x M- x Z) panas (oven), dan validasi kotak aseptik.
C = 100 - (0,004 – 0) Validasi sendiri bertujuan untuk
C = 100 - 0,004 mengidentifikasi parameter kritis,
C = 99,996 menetapkan batas toleransi yang dapat
diterima dari setiap parameter kritis dan
3.1.2 Validasi Autoklaf menyediakan metode pengendalian
A. Sebelum Sterilisasi terhadap parameter. Percobaan ini juga
Jumlah Koloni menggunakan validasi zat kimia yang biasa
No Nama Alat digunakan untuk mensterilkan alat yang
Media NA PDA
tidak tahan panas, yaitu Etanol 70% .
1 Ampul 6 3 Validasi dilakukan untuk melihat
2 Botol Gelap 8 0 apakah peralatan sterilisasi yang digunakan
3 Botol Terang 2 2 memenuhi syarat dan berfungsi dengan
4 Infus 7 2 benar. Selain itu, kalibrasi juga dilakukan
5 Vial 3 0 pada autoklaf, oven dan ruang aseptik yang
biasa digunakan. Air yang digunakan dalam
B. Sesudah Sterililsasi alat ini akan divalidasi baik oven atau
Jumlah Koloni autoclave diharapkan akan diambil
No Nama Alat sampelnya dalam uji sterilisasi, selain itu
Media NA PDA
aquadest yang digunakan juga WFI (air
1 Ampul 1 1
untuk injeksi) untuk flushing vial dan
2 Botol Gelap 2 1 ampul, serta air bilasan juga digunakan
3 Botol Terang 1 0 sebagai sampel.
4 Infus 0 0 Kalibrasi anak timbangan seluruhnya
5 Vial 2 0 didapatkan ketidakvalidasian. Semua anak
timbangan yang diujikan yakni ukuran 2 gr,
3.1.3 Validasi Oven 5 gr, 10 gr, 20 gr, 50 gr, dan 100 gr memiliki
A. Sebelum Sterilisasi nilai Standar Deviasi (SD) yang lebih kecil
Jumlah Koloni daripada nilai C nya. Hal ini dikarenakan
No Nama Alat faktor timbangan yang mengalami error
Media NA PDA
pada perhitungan penimbangannya atau
1 Tutup Botol 5 0
juga bias terjadi pada anak timbangannya
yang mulai mengalami korosi sehingga
B. Sesudah Sterilisasi mengurangi nilai anak timbangan tersebut.
Jumlah Koloni Validasi metode sterilisasi panas
No Nama Alat
Media NA PDA kering, oven digunakan. Metode sterilisasi
1 Tutup Botol 3 0 panas kering ini dilakukan untuk alat-alat
yang terbuat dari kaca. Dalam percobaan,
digunakan botol, infus, vial, dan ampul
yang dibungkus dengan kertas kopi
3.1.4 Validasi Kotak Aseptis sementara tutup botol dibungkus dengan
Jumlah dua lapis aluminium foil. Ini dilakukan
No Tempat Validasi
Koloni untuk mencegah kontaminasi
1 Dekat sumber udara 0 mikroorganisme setelah sterilisasi.
2 Dinding kotak aseptis 0 Parameter penting dalam oven adalah suhu
dan waktu. Suhu digunakan 180 ° C selama
30 menit. Uji sterilitas dilakukan dengan
membilas wadah dengan WFI kemudian
3.2 PEMBAHASAN
 [TEKNOLOGI FARMASI III (STERIL] 2019

membilas air dimasukkan ke dalam

medium agar.
Medium agar yang digunakan terdapat
dua yaitu media nutrien agar yang
mengandung pepton, agar, Nacl dan bahan
lain yang berguna untuk media
pertumbuhan bakteri. Kemudian terdapat
media agar PDA ( Potato Dextrose
Agar)yang mengandung ekstrak kentang,
dekstosa dan agar yang berguna sebagai
media pertumbuhan jamur. Kedua media
ini paling umum digunakan untuk melihat
biakkan jamur dan bakteri.
Hasil yang di dapatkan dari validasi
oven dapat dilihat bahwa oven lebih banyak
terkontaminasi bakteri daripada jamur, hal
ini bisa dilihat dari koloni yang ditemukan
pada media nutrien agar dan tidak
ditemukannya hifa jamur pada media PDA.
Begitu juga dengan metode validasi pada
oven , tidak ditemukannya hifa jamur pada
PDA tetapi masih ditemukannya koloni
bakteri pada nutrien agar. Hal ini
menandakan bahwa validasi belum berhasil
sepenuhnya karena masih terdapat
kontaminan.
4.2 Saran
Sebelum melakukan praktikum validasi
ini hendaknya kita mempelajari terlebih
dahulu tata cara pratikum ini dengan
baik sehingga pada saat melakukan
pratikum tidak kebingungan lagi.
DAFTAR PUSTAKA
Agolloco, James & Carleton. 2008,
Validation of Pharmaceutical
Process, Informa Healthcare Inc,
USA.
Lukas, Stefanus. 2007, Formulasi Sediaan
Steril, CV. Andi Offset, Yogyakarta,
Indonesia.
Purwanto. 2007, Reabilitas dan Validitas
ed.III, Pustaka Ilmu, Yogyakarta,
Indonesia.
Sireci, Stephen G. 2007, On Validity
Theory and Test Validation, The
College Board, Philadelphia, USA.

4. KESIMPULAN DAN SARAN

4.1 Kesimpulan
1. Validasi dilakukan untuk memastikan
proses, bahan, prosedur, aktivitas,
sistem, peralatan, dan mekanisme
mencapai hasil yang diinginkan.
2. Prinsip-prinsip validasi meliputi
kualifikasi (personil, peralatan, dan
sistem), kalibrasi (instrumen dan alat
ukur), dan validasi (prosedur dan
proses).
3. Metode sterilisasi yang digunakan
dalam proses validasi meliputi metode
panas kering, panas basah, dan bahan
kimia.
4. Sterilisasi ruangan steril dilakukan
dengan memberikan disinfektan atau
bisa menggunakan alkohol 70 %.
5. Proses kalibrasi dilakukan pada skala
analitis, oven, dan autoklaf.
6. Nilai SD dari masing-masing anak
timbangan lebih kecil daripada nilai C
dari masing-masing anak timbangan.