Dalam penelitian ini, dosis optimal k-karagenan untuk pembentukan trombus di

vena ekor tikus pada awalnya ditentukan menggunakan dosis k-karagenan dalam
rentang 0,2 hingga 1,1 mg / kg . Dengan meningkatnya dosis k-karagenan, panjang
trombus di vena ekor tikus juga meningkat, hingga 0,9 mg / kg ( Gambar 1 ) . Dengan
peningkatan lebih lanjut dalam dosis k-karagenan dengan dosis lebih dari 0,9 mg / kg
tidak ditemukan peningkatan panjang trombus pada ekor tikus ( Gambar 1 ) . Sehingga
dapat disimpulkan bahwa dosis optimal k-karagenan untuk pembentukan trombus di
vena ekor tikus adalah sebesar 0,9 mg / kg.

Gambar 1. Penentuan ukuran

trombus pada ekor tikus pada
berbagai konsentrasi dari k-karagenan
(0,2-1,1 mg / kg)

Dalam penelitian sebelumnya, sifat biokimia dan farmakologi dari protease serin
fibrinolitik (Brevithrombolase) dieksplorasi dan aktivitas trombolitik in vitro ditemukan
lebih unggul daripada plasmin atau SK. Penelitian dilanjutkan untuk menunjukkan
bahwa Brevithrombolase juga menunjukkan efek antikoagulan yang kuat dalam model
thrombus ekor yang diinduksi k-karagenan. Selain itu, efek trombolitik in vivo dari
Brevithrombolase menunjukan hasil yang sebanding dengan streptokinase dan plasmin
(Tabel 1).

Tabel 1. Perbandingan Aktivitas

Trombolitik Brevithrombolase,
Plasmin, dan Streptokinase
Setelah 24 Jam Pengobatan pada
Tikus Strain Wistar
Potensi In Vivo Trombolitik Brevithrombolase

Untuk menentukan apakah Brevithrombolase menunjukkan efek trombolitik

secara in vivo atau tidak , konsentrasi yang berbeda dari brevithrombolase disuntikkan
secara intravena dalam thrombus ekor tikus yang telah diinduksi k-karagenan yang .
Panjang rata-rata daerah infark ekor menurun secara signifikan dengan waktu dan
hampir menghilang setelah 24 jam
pemberian infus Brevithrombolase (Gambar
2). Sebaliknya, thrombus yang terbentuk di
vena ekor kelompok kontrol tikus tidak
berkurang seiring waktu (Gambar 2).
Potensi trombolitik in vivo dari
Brevithrombolase, streptokinase , dan
plasmin ditunjukkan pada Tabel 1. Pada
dosis 600 mg / kg, sifat penghancuran
thrombus dari Brevithrombolase,
Streptokinase, dan plasmin ditemukan
identik (Tabel 1). Oleh karena itu, peneliti
berasumsi bahwa, seperti obat trombolitik
yang saat ini tersedia (yaitu, plasmin dan streptokinase ), Brevithrombolase juga
memiliki sifat trombolitik secara in vivo , yang membuatnya cocok untuk digunakan
sebagai obat trombolitik. Khususnya, pada dosis 600 mg / kg .

Gambar 2 . Efek trombolitik dari Brevithrombolase dan perbandingan potensi trombolitik dengan
streptokinase dan plasmin setelah 24 jam pemberian intravena . (a) kelompok 1: k-karagenan (0,9 mg /
kg) (b) kelompok 2: k-karagenan (0,9 mg / kg) dan 200 mg / kg Brevithrombolase; (c) kelompok 3: k-
karagenan (0,9 mg / kg) dan 400 mg / kg Brevithrombolase; (d ) kelompok 4: k-karagenan dan 600 mg /
kg Brevithrombolase ; (e) kelompok 5: k-karagenan (0,9 mg / kg) dan 600 mg / kg streptokinase ; dan (f)
kelompok 6: karagenan (0,9 mg / kg) dan 600 mg / kg plasmin .

Brevithrombolase Sebagai Potensi In Vivo Trombolitik Brevithrombolase\

Untuk mengevaluasi potensi terapi in vivo dari Brevithrombolase dalam

mengobati penyakit trombotik, kami meneliti aktivitas antikoagulannya dalam trombus
tikus model yang diinduksi k-karagenan. Ketika k-karagenan disuntikkan, pertama
terlihat bengkak dan memerah pada ekor. Brevithrombolase menghambat formasi
trombus yang diinduksi k-karagenan selama 15 menit infus intravena (dengan cara dosis
cepat). Perlakuan dengan dosis Brevithrombolase menunjukkan perpanjangan APTT
dan PT pada ex vivo (Gambar3A), dibandingkan dengan kelompok kontrol plasebo
tikus. Hasil menunjukkan bahwa penghambatan jalur intrinsik adalah untuk
pengurangan faktor koagulasi, seperti VIII, IX, XI, dan Faktor von Willebrand,
sedangkan PT yang tertunda menunjukkan jalur ekstrinsik yang terhalang karena adanya
pengurangan faktor koagulasi seperti V, VII, dan X. Brevithrombolase dapat memblokir
aktivasi kaskade koagulasi dan proses sinergis pembentukan trombus dengan
menghambat jalur ekstrinsik dan intrinsic.

Gambar 3. Waktu parsial tromboplastin

teraktivasi (APTT) dan waktu prothrombin (PT)
dari Brevithrombolase (200-600 mg / kg, 2 jam
setelah disuntikkan intravena [iv] diukur terhadap
platelet rendah sitrat pada plasma tikus dalam
koagulometer pada suhu 37 ° C

Brevithrombolase juga menunjukkan peningkatan signifikan pada konsentrasi

TT pada tikus yang diberi perlakuan, dibandingkan dengan kontrol tikus (Gambar 3B).
Selain itu, pengurangan signifikan dalam kadar Fg dalam plasma tikus menunjukkan
bahwa Brevithrombolase kurang baik dalam menurunkan Fg (data tidak ditampilkan)
yang telah dijelaskan sebelumnya. Hal ini menunjukkan bahwa hidrolisis thrombin dan /
atau faktor koagulasi lainnya oleh Brevithrombolase dapat merusak pembentukan fibrin
dalam kaskade koagulasi daripada penurunan Fg dalam plasma tikus yang diberi
Brevithrombolase. Selain itu, kesalahan dalam polimerisasi fibrin tidak hanya terlihat
dalam trombin dan PT tetapi juga terlibat dalam waktu rekalsifikasi berlanjut yang
disebabkan semakin meningkat Ca2þ pembekuan PPP oleh Brevithrombolase yang
bergantung pada konsentrasi (Gambar 4).

Gambar 4. Penentuan waktu rekalsifikasi PPP dari kontrol dan kelompok tikus yang
diberi perlakuan Brevithrombolase.

Penambahan heparin intravena ke t-PA memiliki potensi yang lebih baik bila
dibandingkan dengan aspirin. Meskipun semua obat antikoagulan dinyatakan baik,
tetapi masih terdapat komplikasi yang sering terjadi seperti antigenisitas, toksisitas, dan
cacat koagulasi, Brevithrombolase mengatasi kekurangan ini dalam hal toksisitas in
vivo dan kurangnya komplikasi perdarahan, seperti yang dijelaskan sebelumnya. Secara
keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa Brevithrombolase mungkin memiliki peran
ganda dalam aktivitas antitrombotik dan trombolitik. Oleh karena itu menyarankan
bahwa Brevithrombolase memiliki fungsi trombolitik in vivo yang sama efektif dengan
plasmin atau SK, dan karena sedikitnya toksisitas itu mungkin menjadi alternatif yang
menjanjikan untuk komersial obat trombolitik.