PRAKTIKUM LABORATORIUM REKAYASA HAYATI-I

Kinetika Pertumbuhan Sel

LAPORAN PRAKTIKUM
Oleh:
Kelompok 06
Adira Angelika (11215012)
Romario Joseph (11215013)
Dinda Ayu Islami (11215025)
Harryyanto Ishaq Agasi (11215035)
Noptaliana Zakiah (11215042)

Dosen : Dr. Erly Marwani

Asisten : Jessica
Tanggal Percobaan : 5 September 2017
Tanggal Pengumpulan : 16 Oktober 2017

LABORATORIUM REKAYASA HAYATI-I

PROGRAM STUDI REKAYASA HAYATI
SEKOLAH ILMU DAN TEKNOLOGI HAYATI
INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG
2017
 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI ............................................................................................................ i

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ ivi
DAFTAR TABEL .................................................................................................. iv
DAFTAR GRAFIK ................................................................................................ iv
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... vi
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ......................................................................................... 1
1.2 Tujuan ........................................................................................................ 2
1.3 Hipotesis.................................................................................................... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA........................................................................... 4
2.1 Chlorellla pyranoidosa ............................................................................ 4
2.1.1 Taksonomi ..................................................................................... 5
2.1.2 Morfologi ........................................................................................ 5
2.1.3 Kandungan ...................................................................................... 6
2.2 Kinetika pertumbuhan sel ...................................................................... 7
2.3 Metode Analisis untuk Mengukur Pengukuran Sel ......................... 10
2.3.1 Metode Langsung ................................................................. 10
2.3.2 Metode Tidak Langsung ....................................................... 14
2.4 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pertumbuhan Kultur Chlorella
pyrenoidosa ............................................................................................ 15
2.4.1 Intensitas Cahaya ................................................................... 15
2.4.2 Medium .................................................................................. 16
2.4.3 Faktor Lain ............................................................................. 19
BAB III METODE KERJA ................................................................................. 21
3.1 Alat dan Bahan ....................................................................................... 21
3.2 Cara Kerja ............................................................................................... 22
3.2.1 Kultivasi sel Chlorella pyrenoidosa ..................................... 22
3.2.2 Pengukuran laju pertumbuhan spesisfik (μ) kultur sel ......... 22
3.2.3 Doubling time kultur sel Chlorella pyrenoidosa. ................. 24
3.2.4 Estimasi perolehan biomassa (yield) kultur sel Chlorella pyre-

i
 noidosa. ................................................................................. 24
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................. 26
4.1 Hasil ......................................................................................................... 26
4.1.1 Kurva pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa ..................... 26
4.1.2 Laju pertumbuhan spesifik dan doubling time....................... 28
4.1.3 Yield Biomassa....................................................................... 29
4.1.4 Produk kultur sel Chlorella pyrenoidosa ............................... 29
4.2 Pembahasan ............................................................................................ 29
BAB V PENUTUP ................................................................................................ 34
5.1 Kesimpulan ............................................................................................. 34
5.2 Saran ........................................................................................................ 34
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 35
LAMPIRAN .......................................................................................................... 38

ii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Chlorella pyrenoidosa ......................................................................... 6

Gambar 2.2 Kurva pertumbuhan sel secara umum dalam sebuah kultur curah. (a)
fase eksponensial, (b) fase deselerasi, dan (c) fase deklinasi. ............. 8
Gambar 2.3 Pembelahan sel pada fase pertumbuhan eksponensial ........................ 9
Gambar 2.4 Grafik pengaruh intensitas cahaya pada kurva .................................. 16
Gambar 2. 5 Grafik pengaruh konsntrasi CO2 pada pH ........................................ 17
Gambar 2.6 Grafik pengaruh penghilangan kalsium dan suplemen A5 .............. 17
Gambar 2.7 Grafik peningkatan produktifitas kultur dengan ............................... 19
Gambar 2.8 Grafik pengaruh konsentrasi CO2 terhadap jumlah sel .................... 20
Gambar 3.1 Rangakaian alat kinetika pertumbuhan sel ....................................... 22

iii
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Komposisi kimia dari beberapa mikroalga ............................................. 7

Tabel 2.2 Ringkasan dari fase-fase pertumbuhan ................................................... 9
Tabel 2.3 Pengaruh biomassa Chlorella sp. terhadap medium N-8 dengan M-8 . 18
Tabel 3. 1 Alat dan bahan…………………………………………………...........21
Tabel 4.1 Data pengamatan kinetika pertumbuhan sel selama 28 hari…………..26
Tabel 4.2 Laju Pertumbuhan spesifik dan doubling time kultur sel Chlorella
pyrenoidosa pada berbagai metode ....................................................... 28
Tabel 4.3 Yield Biomassa kultur sel Chorella pyrenoidosa .................................. 29
Tabel 4.4 Perolehan produk kultur sel Chlorella pyrenoidosa. ............................ 29

iv
 DAFTAR GRAFIK

Grafik 4.1 Kinetika pertumbuhan sel Chorella pyrenoidosa berdasarkan

optical density ...................................................................................... 27
Grafik 4.2 Kinetika pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa berdasarkan berat
kering dan berat basah .......................................................................... 27
Grafik 4.3 Kinetika pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa berdasarkan kerapatan
sel .......................................................................................................... 28

v
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran A. Dokumentasi ................................................................................................ 39

Lampiran B. Pengolahan Data .......................................................................................... 40

vi
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Minyak bumi, batu bara, dan gas alam merupakan sumber daya
alam yang tidak dapat diperbarui. Sumber daya yang tidak dapat diperbarui
adalah sumber daya yang tidak sustainable (berkelanjutan). Sumber daya
seperti ini punya jangka waktu pakai tertentu sebelum habis terpakai.
Maka dari itu sumber daya non sustainable harus dimanfaatkan secara
bijak dan tepat. Kondisi ini menyebabkan manusia harus mencari sumber
lain yang lebih sustainable.
Tumbuhan dan sejenisnya merupakan organisme autotrof (dapat
membuat makanannya sendiri) karena memiliki kemampuan untuk
mengonversi bahan anorganik tertentu menjadi bahan organik yang dapat
dimanfaatkan untuk mmetabolisme. Tumbuhan dapat dimanfaatkan dalam
berbagai aktivitas pemenuhan kebutuhan manusia. Produk berbahan baku
tumbuhan merupakan salah satu jenis sumber daya yang dapat diperbarui.
Maka dari itu manusia mulai melakukan berbagai penelitian untuk
menggali potensi-potensi yang ada pada tumbuhan sehingga dapat menjadi
suatu produk yang bermanfaat.
Dewasa ini, manusia berangsur-angsur lebih suka mengonsumsi
produk yang berbahan baku dari tumbuhan. Produk seperti ini dinilai lebih
aman dan ramah lingkungan. Negara dengan varietas tumbuhan yang
tinggi sangat diuntungkan dalam kondisi seperti ini. Indonesia merupakan
negara dengan keanekarangaman terbesar nomor dua di dunia. Indonesia
memiliki 15,3% dari 5.131.100 keanekaragaman hayati di dunia (Bahtera,
2017). Angka tersebut menunjukkan bahwa banyaknya potensi produk
berbahan baku tumbuhan yang bisa dikembangkan di Indonesia. Indonesia
dapat menjadi negara biobased industry yang kuat dengan
keanekaragaman setinggi ini.

1
 Laju pertumbuhan penduduk serta perkembangan ilmu
pengetahuan dan teknologi yang pesat mengakibatkatkan penyempitan
lahan. Hal ini disebabkan bertambahnya jumlah penduduk selalu diiringi
dengan bertambahnya bangunan-bangunan pemukiman maupun
nonpemukiman. Penyempitan lahan yang terus terjadi menimbulkan
masalah lain terutama di bidang pertanian. Kebutuhan pangan dunia pun
terus meningkat seiring dengan pertumbuhan penduduk sedangkan luas
lahan pertanian semakin mengecil. Selain itu kebutuhan energi juga
semakin meningkat sedangkan bahan bakar fosil terus menipis. Maka dari
itu dibutuhkan suatu alternatif lain dalam pemenuhan pangan dan energi.
Chlorella pyrenoidosa merupakan spesies mikroalga uniselular
yang sering dimanfaatkan sebagai suplemen makanan di Jepang. Chlorella
pyrenoidosa juga punya manfaat sebagai fungsi imun. Selain itu C.
pyrenoidosa pun mengandung beberapa komponen kimia bermanfaat
seperti vitamin, mineral, dan asam amino (Chidley & Davison, 2017).
Chlorella pyrenoidosa sangat berpotensi sebagai bahan baku untuk
memproduksi berbagai macam bioproduk bernilai tinggi. Perbanyakan
Chlorella pun sangat mudah dan tidak membutuhkan lahan yang luas.
Namun, dalam produksi skala industri ada hal yang perlu dipertimbangkan
dalam memproduksi bioproduk dari C. pyrenoidosaseperti kandungan
metabolit yang diinginkan, cara paling efektif untuk memperoleh metabolit
yang diinginkan, serta nila jual produknya nanti. Maka dari itu
diperlukannya berbagai penelitian atau riset untuk mengetahui berbagai
karakteristik dari C. pyrenoidosa seperti kandungannya, laju pertumbuhan,
kondisi optimal untuk tumbuh dan berkembang, dan sebagainya. Hal ini
melatarbelakangi praktikum mengenai kinetika pertumbuhan sel.

1.2 Tujuan
Adapun tujuan dari pengamatan kami adalah sebagai berikut,
1. Menentukan laju pertumbuhan spesifik (μ) serta doubling time(dt)
pada petumbuhan Chlorella pyrenoidosa.

2
 2. Menentukan berat segar dan berat keringyang diperoleh dari kultur
Chlorella pyrenoidosa.
3. Menentukan jumlah sel yang diperoleh dari suspensikultur Chlorella
pyrenoidosa menggunakan hemasitometer.
4. Menentukan yield biomassa terhadap konsumsi nitrat pada kultur
Chlorella pyrenoidosa.
5. Menentukan yield produk berupa klorofil a, klorofil b, dan karotenoid
dari kultur Chlorella pyrenoidosa.

1.3 Hipotesis
Parameter kinetika pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa dapat
dianalisis berdasarkan laju pertumbuhan spesifik (μ), doubling time, dan
perolehan yield biomassa di mana peningkatan jumlah biomassa
berbanding terbalik dengan jumlah substrat yang tersedia.

3
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Chlorellla pyranoidosa

Nama Chlorella berasal dari cat berwarna hijau (Chlorophyll) yang
juga berfungsi sebagai katalisator dalam proses fotosintesis (Steenblock,
2000). Kandungan klorofil dalam Chlorella dapat sampai melibihi
kandungan klorofil pada tumbuhan biasanya. Chlorella sp telah ada di
bumi sejak 2,5 milyar tahun yang lalu dengan sifat genetik yang tetap atau
tidak mengalami mutasi hingga sekarang (Wirosaputro,2002). Chlorella
sp. memiliki kelebihan yaitu tumbuh dan berkembang biak dengan cepat
(Anggraini, 2009). Hal ini juga yang menjadi penyebab mengapa
Chlorella sp. menjadi mikroalga hijau yang saat ini banyak diteliti.
Berdasarkan UU RI No.9 tahun 1985 tentang perikanan Chlorella
sp. tergolong tumbuhan renik air (Wirosaputro, 2002). Berdasarkan habitat
hidupnya, Chlorella sp. dapat dibedakan menjadi Chlorella air tawar dan
air laut. Chlorella air laut dapat mentolerir salinitas antara 33-40 ppt
sementara Chlorella air tawar dapat hidup dengan kadar salinitas hanya
sampai 5 ppt (Bold dan Wynne, 1985). Menurut Hirata (1981) beberapa
spesies Chlorella air laut dapat mentolerir kondisi lingkungan yang relatif
bervariasi. Tumbuh optimal pada salinitas 25-34 ppt sementara pada
salinitas 15 ppt tumbuh lambat dan tidak tumbuh pada salinitas 0 ppt dan
60 ppt. Contoh Chlorella yang hidup di air laut adalah Chlorella vulgaris,
Chlorella pyrenoidosa, Chlorella virginica dan lain-lain (Isnansetyo dan
Kurniastuty, 1995).
Umumnya Chlorella bersifat planktonis yang melayang di dalam
perairan, namun beberapa jenis Chlorella juga ditemukan mampu
bersimbiosis dengan hewan lain misalnya Hydra dan beberapa ciliate air
tawar seperti Paramaecium bursaria (Dolan, 1992).
.

4
2.1.1 Taksonomi
Adapun taksonomi dari Chlorella pyrenoidosa adalah sebagai
berikut (ITIS Taxonomy, 1996):
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Viridiplantae
Infrakingdom : Chlorophyta – green algae
Divisi : Chlorophyta – green algae, alguesvertes
Subdivisi : Chlorophytina
Kelas : Trebouxiophyceae
Ordo : Chlorellales
Famili : Oocystaceae Genus : Chlorella Beijerinck, 1890
Species : Chlorella pyrenoidosa Chick
2.1.2 Morfologi
Chlorella pyrenoidosa (Gambar 2.1) tergolong tumbuhan
tingkat rendah berukuran 3 – 15 mikron (wirosaputro, 2010).
Chlorella pyrenoidosa merupakan spesies mikroalga uniseluler
yang membutuhkan cahaya untuk pertumbuhan. Mikroalga ini
memiliki kloroplas berbentuk mangkuk. Perkembangbiakan spesies
terjadi secara vegetatif dengan membelah diri. Setiap selnya
mampu membelah diri dan menghasilkan empat sel baru yang tidak
mempunyai flagel. Mikroalga fotoautotrof ini umumnya dikultivasi
pada kolam terbuka ataupun pada fotobioreaktor (Patil et al.,
2005). Adapun morfologi dari Chlorella pyrenoidosa dapat dilihat
pada Gambar 2.1.

5
 Gambar 2.1 Chlorella pyrenoidosa
(Sumber : http://www.rbgsyd.nsw.gov.au, 2009)

2.1.3 Kandungan
Chlorella sp. dianggap sebagai spesies yang paling cocok
dalam produksi biofuel karena mampu mengakumulasi
triasilgliserida (TAGs) dalam kondisi kekurangan nutrien, serta
dalam lingkungan ekstrem dengan suhu tinggi, pH tingi, dan
intensitas cahaya yang tinggi (Shekh et al.,2016).
Pertumbuhan serta produktivitas organisme ini bergantung
pada kualitas dan kuantitas nutrien yang diberikan (Chiu et al.,
2015).. Mikroalga merupakan agen konversi yang sangat efisien
serta mampu memproduksi beragam metabolit (Chaumont, 2005).
TAGs yang terakumulasi dalam Chrolella sp. dikenal mengandung
asam lemak yang sejenis dengan diesel konvensional (Prˇibyl et al.,
2012, 2013; Blair et al., 2013). Sehingga, Chlorella sp cocok untuk
memproduksi energi alternatif. Komposisi kimia dari beberapa
mikroalga dapat dilihat pada Tabel 2.1.

6
 Tabel 2.1 Komposisi kimia dari beberapa mikroalga
(Sumber : Sumber : Demirbas & Demierbas, 2011)
Spesies Protein Karbohidrat Lipid Asam
nukleat
Scenedesmus 50–56 10–17 12–14 3–6
obliquus
Scenedesmus 47 – 1.9 –
quadricauda
Scenedesmus 8–18 21–52 16–40 –
dimorphus
Chlamydomonas 48 17 21 –
rheinhardii
Chlorella 51–58 12–17 14–22 4–5
vulgaris
Chlorella 57 26 2 –
pyrenoidosa
Spirogyra sp. 6–20 33–64 11–21 –
Dunaliella 49 4 8 –
bioculata
Dunaliella salina 57 32 6 –
Euglena gracilis 39–61 14–18 14–20 –
Prymnesium 28–45 25–33 22–38 1–2
parvum
Tetraselmis 52 15 3 –
maculate
Porphyridium 28–39 40–57 9–14 –
cruentum
Spirulina 46–63 8–14 4–9 2–5
platensis
Spirulina maxima 60–71 13–16 6–7 3–4.5
Synechoccus sp. 63 15 11 5
Anabaena 43–56 25–30 4–7 –
cylindrical

2.2 Kinetika pertumbuhan sel

Pertumbuhan sel merupakan serangkaian proses kompleks yang
melibatkan reaksi-reaksi anabolisme dan katabolisme. Salah satu metode
untuk menentukan karakteristik pertumbuhan sel yang terisolasi adalah
dengan menempatkan sel tersebut dalam medium cair dengan komposisi
nutrien tertentu dengan kondisi lingkungan yang dapat dikontrol. Jika
nutrien dan parameter lingkungannya optimal, peningkatan jumlah sel

7
dapat diukur sebagai fungsi waktu untuk memperoleh kurva pertumbuhan
(Maier et. al 2009). Beberapa fase pertumbuhan dapat diobservasi dalam
sebuah kurva pertumbuhan. Fase-fase pertumbuhan sel pada suatu kurva
pertumbuhan sel terhadap waktu ditunjukkan pada Gambar 2.2

Gambar 2.2 Kurva pertumbuhan sel secara umum dalam

sebuah kultur curah. (a) fase eksponensial, (b) fase
deselerasi, dan (c) fase deklinasi.
(Sumber: Uzir dan Mat, 2007)

Secara umum, gambar di atas menunjukkan peningkatan jumlah sel

sejak awal proses kultivasi dimulai. Keberadaan nutrien yang memadai
memungkinkan sel untuk tumbuh. Namun, seiring dengan berjalannya
waktu, jumlah nutrien dalam medium tersebut akan menurun karena
dikonsumsi oleh sel. Fase lag terjadi ketika awal kultivasi dimulai, pada
fase ini tidak terlihat penambahan jumlah sel. Sintesis protein terjadi
dalam fase ini, peningkatan massa sel dapat terjadi tetapi tidak dalam
jumlah signifikan. Setelah melalui fase lag, jumlah sel akan meningkat
secara signifikan pada fase eksponensial (Uzir dan Mat, 2007). Adapun
mekanisme pembelahan yang terjadi pada fase eksponensial ditunjukan
pada Gambar 2.3.

8
 Gambar 2.3 Pembelahan sel pada fase pertumbuhan eksponensial
(Sumber : Uzir dan Mat, 2007)

Laju pertumbuhan maksimum dengan peningkatan secara konstan

akan terjadi di fase linear, yaitu di antara fase eksponensial dan fase
deselerasi. Fase selanjutnya adalah fase stasioner ketika populasi sel
mencapai jumlah maksimum. Fase terakhir adalah fase kematian, fase ini
terjadi ketika jumlah sel menurun secara eksponensial karena ketersediaan
nutrien yang sudah habis. (Uzir dan Mat, 2007) Ringkasan untuk masing-
masing fase dapat dilihat pada Tabel 2.2.

Tabel 2.2 Ringkasan dari fase-fase pertumbuhan

(Sumber : Uzir dan Mat, 2007)
Fase Laju Pertumbuhan Keterangan
Lag Nol Inokulum mulai beradaptasi
lingkungan barunya
Eksponensial Meningkat Nutrien melimpah sehingga
pertumbuhan sel meningkat
Linear Konstan Pertumbuhan maksimum dengan

9
 pertambahan yang konstan
Deselerasi Menurun Ketersediaan nutrien mulai
menurun
Stasioner Nol Nutrien berada pada ambang
kehabisan
Deklinasi Negatif Laju penurunan meningkat
Kematian Negatif Sel-sel mengalami lisis karena
nutrient dalam medium sudah
habis

2.3 Metode Analisis untuk Mengukur Pengukuran Sel

Pertumbuhan mikroorganisme dapat diukur berdasarkan
konsentrasi sel (jumlah sel per satuan isi kultur) ataupun destilasi sel (berat
kering dari sel-sel persatuan isi kultur). Dua parameter ini tidak selalu
sama karena berat kering sel rata-rata bervariasi pada tahap berlainan
dalam pertumbuhan kultur, kedua para meter tersebut juga tidak bermakna
sama dalam penelitian mengenai biokimia mikroorganisme atau gizi
mikroorganisme. Densitas sel adalah kuantitas yang lebih bermakna,
sedangkan dalam penelitian mengenai inaktivitas mikroorganisme,
kosentrasi sel adalah kuantitas yang bermakna (Pratiwi,
2008).Pertumbuhan mikroorganisme dapat diukur dengan dua cara, yaitu
secara langsung dan tidak langsung.

2.3.1 Metode Langsung

2.3.1.1 Metode Total Count
Pada metode ini sampel ditaruh di suatu ruang
hitung (seperti hemasitometer) dan jumlah sel dapat
ditentukan secara langsung dengan bantuan mikroskop
(Hadioetomo, 1993).Jika setetes kultur dimasukkan
kedalam wadah (misalnya hemasitometer) yang diketahui
volumenya, maka jumlah sel yang dapat dihitung. Akan
tetapi cara tersebut memiliki keterbatasan, yaitu tidak dapat
membedakan sel hidup atau mati dan tidak dapat digunakan

10
 pada jumlah sel yang sangat sedikit (kurang dari
102 sel/ml) (Purwoko, 2007).
Kelemahan lainnya ialah sulitnya menghitung sel
yang berukuran sangat kecil seperti bakteri karena
kekebalan hemositometer tidak memungkinkan
digunakannya lensa objektif celup minyak. Hal ini dibatasi
dengan cara mencernai sel sehingga menjadi lebih mudah
dilihat. Kelemahan lain lagi ialah kadang-kadang cenderung
bergerombol sehingga sukar membedakan sel-sel individu.
Cara mengatasinya ialah mencerai-beraikan gerombolan
sehinggga tersebut dengan menambahkan bahan anti
gumpalan seperti dinatrium etilanadiamina tetra
asetat dan tween-80 sebanyak 0,1%. Keuntungan metode
ini ialah pelaksanaannya cepat dan tidak memerlukan
banyak peralatan (Hadioetomo, 1993).
2.3.1.2 Metode Turbidimetrik
Bila kita harus memeriksa kosentrasi sel jumlah
besar biakan, maka metode cawan bukanlah pilihan yang
baik karena tidak hanya memakan waktu tetapi juga
memerlukan media dan pecah-belah dalam jumlah besar.
Untuk kasus demikian tersedia metode yang lebih cepat dan
praktis, yaitu pengukuran kekeruhan biakan dengan
fotokilometer (Hadioetomo, 1993).Secara rutin jumlah sel
bakteri dapat dihitung dengan cara menghitung kekeruhan
(turbiditas) kultur. Semakin keruh suatu kultur, semakin
banyak jumlah sel. Prinsip dasar metode turbidimeter
adalah jika cahaya mengenai sel, maka sebagian cahaya
diserap dan sebagian cahaya diteruskan. Jumlah cahaya
yang diserap propisional (sebanding lurus dengan jumlah
sel bakteri). Ataupun jumlah cahaya yang diteruskan
berbanding terbalik dengan jumlah sel bakteri.Semakin

11
 banyak jumlah sel, semakin sedikit cahaya yang diteruskan.
Metode ini memiliki kelemahan tidak dapat membedakan
antara sel mati dan sel hidup (Purwoko, 2007).
2.3.1.3 Metode Berat Kering
Cara yang paling cepat mengukur jumlah sel adalah
metode berat kering. Metode tersebut relatif mudah
dilakukan, yaitu kultur disaringan atau disentrifugasi,
kemudian bagian yang disaring atau yang mengendap hasil
sentrifugasi dikeringkan. Pada metode ini juga tidak dapat
membedakan sel yang hidup dan mati. Akan tetapi
keterbatasan itu tidak mengurangi manfaat metode tersebut
dalam hal mengukur efesiensi fermentasi, karena
pertumbuhan diukur dengan satuan berat, sehingga dapat
diperhitungkan dengan parameter konsumsi substrat dan
produksi senyawa yang diinginkan (Purwoko, 2007).
2.3.1.4 Metode Elektronic Counter
Pada pengukuran ini, suspensi mikroorganisme
dialirkan melalui lubang kecil (orifice) dengan bantuan
aliran listrik. Elektroda yang ditempatkan pada dua sisi
orifice mengukur tekanan listrik (ditandi dengan naiknya
tekanan) pada saat bakteri melalui orifice. Pada saat inilah
sel terhitung. Keuntungan metode ini adalah hasil bisa
diperoleh dengan lebih cepat dan lebih akurat, serta dapat
menghitung sel dengan ukuran besar. Kerugiannya metode
ini tidak bisa digunakan untuk menghitung bakteri karena
adanya gangguan derbit, filamen, dan sebagainya, serta
tidak dapat membedakan antara sel hidup dan sel mati
(Pratiwi, 2008).
2.3.1.5 Metode Plating Techique
Metode ini merupakan metode perhitungan jumlah
sel tampak (visible) dan di dasarkan pada asumsi bahwa

12
 bakteri hidup akan tumbuh, membelah dan memproduksi
satu koloni tunggal. Satuan perhitungan yang dipakai
adalah CFU (colony forming unit) dengan cara membuat
seri pengenceran sampel dan menumbuhkan sampel pada
media padat. Pengukuran dilakukan pada plat dengan
jumlah koloni berkisar 25-250 atau 30-300. Keuntungan
metode ini adalah sederhana, mudah dan sensitif karena
menggunakan colony counter sebagai alat hitung dapat
digunakan untuk menghitung mikroorganisme pada sampel
makanan, air ataupun tanah. Kerugiannya adalah harus
digunakan media yang sesuai dan perhitungannya yang
kurang akurat karena satu koloni tidak selalu berasal dari
satu individu sel (Pratiwi, 2008).
2.3.1.6 Metode filtrasi membran
Pada metode ini sampel dialirkan pada suatu sistem
filter membran dengan bantuan vaccum. Bakteri yang
terperangkap selanjutnya ditumbuhkan pada media yang
sesuai dan jumlah koloni dihitung. Keuntungan metode ini
adalah dapat menghitung sel hidup dan sistem
perhitungannya langsung, sedangkan kerugiannya adalah
tidak ekonomis (Pratiwi, 2008).
2.3.1.7 Spektrofotometri
Metode analisa spektrofotometer ini didasarkan
kepada kekeruhan yang ditimbulkan oleh koloni bakteri
yang tumbuh dan berkembang di suatu media . Prinsip kerja
yang terdapat pada alat spektrofotometer ini adalah apabila
ada cahaya (monokromatik maupun campuran) jatuh pada
suatu medium yang homogen,dan sebagian dari sinar
masuk akan dipantulkan, sebagian di serap dalam medium
itu, dan sisanya diteruskan. Nilai yang keluar dari cahaya
yang diteruskan dinyatakan dalam nilai absorbansi karena

13
 memiliki hubungan dengan konsentrasi sampel. Studi
tentang spektrofotometri biasa dianggap juga sebagai
perluasan suatu pemeriksaan visual yang lebih mendalam
dari absorbsi energi (Gibsen, 1996).

2.3.2 Metode Tidak Langsung

2.3.2.1 Metode Viable Count
Viable count method adalah cara penghitungan
bakteri secara tidak langsung yang dilakukan dengan
menghitung koloni sel bakteri yang terdapat di media
secara langsung. Kultur diencerkan sampai batas yang di
inginkan. Kultur encer ditumbuhkan kembali pada media,
sehingga di harapkan setiap sel tumbuh menjadi 1 koloni
beberapa saat berikutnya, biasanya 4-12 jam. Akan tetapi
cara ini memiliki keterbatasan, yaitu jumlah sel terhitung
biasanya lebih dari sebenarnya (kemungkinan besar 1
koloni dapat berasal dari 2 sel) dan tidak dapat di
aplikasikan pada bakteri yang tumbuh lambat. Pada metode
tersebut yang perlu diperhatikan adalah jumlah sel bakteri
harus mendekati kelipatan 10 pada setiap pengencerannya.
Jika tidak pengenceran di anggap gagal. Misalnya cawan
yang dapat dihitung jumlah selnya adalah yang mempunyai
jumlah sel sekitar 2-4 untuk sampel pengenceran (10-x ),
20-40 untuk sampel pengenceran (10(x+1)) dan 200-400
untuk sampel pengenceran (10-(x+2)) (Purwoko, 2007).
2.3.2.2 Metode Aktivitas Metabolik
Metode ini di dasarkan pada asumsi bahwa produk
metabolit tertentu, misalnya asam atau CO2, menunjukkan
jumlah mikroorganisme yang terdapat di dalam media.
Misalnya pengukuran produksi asam untuk menentukan

14
 jumlah vitamin yang di hasilkan mikroorganisme (Pratiwi,
2008).
2.3.2.3 Plate Count
Plate count/viable count meupakan suatu metode
yang didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel-sel
mikroorganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh
menjadi satu koloni bakteri setelah ditumbuhkan dalam
suatu media pertumbuhan dan lingkungan yang sesuai.
Setelah diinkubasi, jumlah koloni yang bisa tumbuh
tersebut dihitung dan merupakan perkiraan atau juga
dugaan dari suatu jumlah mikroorganisme yang ada
didalam suspensi. Koloni-koloni bakteri yang tumbuh tidak
selalu berasal dari satu sel mikroorganisme karena beberapa
mikroorganisme tertentu cenderung membentuk kelompok
atau berantai. Berdasarkan hal tersebut digunakan ,maka
biasa disebut dengan istilah Coloni Forming Units (CFU’s)
per ml (Fardiaz, 1993).

2.4 Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pertumbuhan Kultur Chlorella

pyrenoidosa
2.4.1 Intensitas Cahaya
Cahaya yang diserap oleh kultur meningkat secara terus-
menerus pada kurva tumbuh sampai mencapai 100 % penyerapan
tercapai. Peningkatan jumlah sel mengakibatkan pencahayaan rata
dari sel pada kultur terus berkurang karena sel saling menutupi.
Kultur dengan cahaya berintensitas tinggi memungkinakan
pertumbuhan yang cukup besar terjadi sebelum sel dengan jumlah
yang signifikan tidak dapat menerima intensitas cahaya jenuh. Pada
periode ini tidak ada pembatasan cahaya, namun setelah jumlah
signifikan dari sel berada di bawah nilai cahaya pembatas untuk

15
 fotosintesis, maka laju fotosintesis dan laju pertumbuhan berkurang
(Myers, 1944). Pengaruh intensitas cahaya terhadap pertumbuhan
tanaman tapat dilihat pada Gambar 2.4.

Gambar 2.4 Grafik pengaruh intensitas cahaya pada kurva

pertumbuhan
(Sumber : Myers, 1944)

2.4.2 Medium
Semakin lama C. pyrenoidosa tumbuh, semakin basa
medium kultur (grafik 2.4.2). Pada konsentrasi karbon dioksida
3.5% pH berhenti betambah pada pH 7, namun pada konsntrasi
CO2 rendah (0.03%) pH tetap bertambah. Karbon dioksida tidak
terionisasi pada pH 4.5; namun terionisasi 50% pada pH 6.5 dan
75% pada pH 7.0. Pada medium baru (pH ± 4,5) pH tidak
terpengaruh oleh konsentrasi udara yang dipompakan ke medium,
namun pada daerah pH 7.0 pH ditekan oleh konsentrasi karbon
dioksida 3.5 sampai 5 persen (Myers, 1944). Pengaruh konsentrasi
CO2 terhadap pH dapat dilihat pada Gambar 2.5.

16
 Gambar 2. 5 Grafik pengaruh konsntrasi CO2 pada pH
(Sumber : Myers, 1944)

Pengurangan kalsium pada medium menyebabkan

pertumbuhan yang sangat rendah. Penambahan medium A5
(mengandung mikroelemen boron, copper, manganese,
molybdenum dan zinc) sebagai suplemen medium. C. pyrenoidosa
memiliki toleransi yang cukup lebar pada senyawa A5 (Myers,
1944).

Gambar 2.6 Grafik pengaruh penghilangan kalsium dan

suplemen A5
(Sumber : Myers, 1944)

17
 Medium N-8 memiliki kekurangan pada besi, magnesium,
sulfur dan nitrogen pada sel C. vulgaris dengan kepadatan tinggi
(Mandalam, 1998). Kandungan menurut Chlorella memiliki
rentang yang cukup kecil pada nitrogen dan sulfur (6.2 – 7.7 persen
dan 0.28 – 0.39 persen berurutan (Oh-Hama, T. dan Miyachoi, S.
(1998)) , sehingga dapat disimpulkan bahwa Chlorella pyernoidosa
juga mengalami kekurangan paling tidak dua nutrisi di atas.
Sebagai perbandingan, pengaruh biomassa Chlorella sp. terhadap
medium dapat dilihat dalam Tabel 2.3

Tabel 2.3 Pengaruh biomassa Chlorella sp. terhadap medium N-8

dengan M-8
(Sumber : Myers, 1944)
Element Biomass % (v/v)
N-8 medium M-8 medium
Nitrogen 0.69* 2.08
Phosphorus 4.24 4.24
Potassium 14.42 33.49
Magnesium 0.25* 1.98
Sulfur 0.70* 6.63
Iron 0.11* 2.02
Calcium 1.78 1.78
Zinc 5.78 5.78
Copper 4.55 4.55
Manganese 14.26 14.26
*Limiting element.

M-8 yang mengalami perbaikan dari N-8 sehingga 4

senyawa tersebut setimbang sacara stoikiometri (Mandalam, 1998),
menyebabkan peningkatan pada kandungan senyawa tersebut
dalam biomassa dan kalium, namun penambahan salah satu dari

18
 empat nutrisi tersebut tidak menmberikan pengkatan (Mandalam,
1998). Medium M-8 juga menyebabkan peningkatan 3 sampai 5
kali lipat klorofil per volume kultur dibandingkan medium N-8
(Mandalam, 1998). Peningkatan produktifitas kultur dengan
penambahan medium ditunjukan pada Gambar 2.7.

Gambar 2.7 Grafik peningkatan produktifitas kultur dengan

penambahan medium
(Sumber : Myers, 1944)

2.4.3 Faktor Lain

Secara teoritis, terdapat empat kondisi yang mungkin
menjadi penghambatan pertumbuhan alga: (1), produksi senyawa
racun oleh sel; (2) laju karbon dioksida yang terbatas; (3)
perubahan atau kekurangan beberapa komponen dari senyawa
garam mineral; atau (4) terbatasnya energi (Myers, 1944). Pada
bagian 2.4.1 telah dibahas poin nomor 4 dan pada bagian 2.4.2 poin
nomor 3. Keterbatasan laju karbon dioksida sulit untuk dilihat

19
efeknya. Pada saat fototsintesis tekanan karbon dioksida pada
permukaan sel alga tidak boleh sama dengan lingkungannya karena
gradien difusi harus tetap ada. Tekanan karbin dioksida dalam
medium merupakan fungsi kompleks dari tekanan parsial pada fasa
gas, luas permukaan pertemuan fasa cair dan gas, laju aerasi dan
laju pengambilan karbon dioksida oleh alga. Walaupun pada kultur
tiga faktor pertama dibuat konstan, perbanyakan alga akan
meningkatkan penggunaan karbon dioksida, sehingga mengurangi
tekanan karbon dioksida di medium secara terus menerus.
Konstrasi karbon dioksida tinggi (3% – 5%) pada fasa gas (dan
aerasi yang cukup) terlihat bahwa konsntrasi karbon dioksda di
medium cair tidak pernah berada di bawah nilai karbon dioksida
jenuh fotosintesis (±0.1%). Pada konsentrasi karbon dioksida
rendah pada fasa gas (±0.03%, seperti pada udara) ada
kemungkinan pembatasan laju pertumbuhan akibat kekurangan
karbon dioksida terjadi. Jika karbon dioksida konsentrasi rendah
(±0.03%) dengan laju yang cukup tinggi (5 ml/sec), maka
kekurangan karbon dioksida akan bergantung pada posisi kurva
tumbuh (Myers, 1944). Adapun perngaruh konsentrasi CO2
terhadap jumlah sel dapat dilihat pada Gambar 2.8.

Gambar 2.8 Grafik pengaruh konsentrasi CO2 terhadap jumlah sel

(Sumber : Myers, 1944)

20
 BAB III
METODE KERJA

3.1 Alat dan Bahan

Alat dan bahan yang digunakan dalam pengamatan kinetika
pertumbuhan Chlorella pyreonidosa dapat dilihat pada Tabel 3.1.

Tabel 3. 1 Alat dan bahan

Alat Bahan
Botol kultur KNO3 (1000 mg.L-1)
pH-meter KH2PO4 (720 mg.L-1)
Flowmeter Na2HPO4.2H2O (260 mg.L-1)
Light meter CaCl2.2H2O (13 mg.L-1)
Spektrofotometer Fe-EDTA (10 mg.L-1)
Hemasitometer Etanol 95%
Oven MgSO4.7H2O (50 mg.L-1)
Sonikator MnCl2.4H2O (12,98 mg.L-1)
Botol semprot CuSO4.5H2O (1,83 mg.L-1)
Desikator Akuades
Neraca analitis dan kasar Biakan Chlorella pyrenoidosa
Gelas kimia 500 mL, 250 mL, dan Tisu
100 mL
Gelas ukur 500 mL, 25 mL, dan Alkohol
10 mL
Batang pengaduk Aluminium foil
Cawan petri HCl
Sentifuga
Falcon tube
Kuvet spektrofotometer
Mikroskop dan cover glass
Tally-counter
Spatula
Mikropipet dan pipet tetes
Tabung reaksi
Pompa

Adapun rangkaian alat yang digunakan pada praktikum ini

ditunjukkan pada Gambar 3.1.

21
 Gambar 3.1 Rangakaian alat kinetika pertumbuhan sel

3.2 Cara Kerja

3.2.1 Kultivasi sel Chlorella pyrenoidosa

Medium cair untuk pengkulturan Chlorella pyrenoidosa
dibuat dengan komposisi yang ada pada Tabel A.1 sebanyak 800
ml dengan pH 6-7. Medium cair dimasukkan kedalam botol kultur
1L. Lalu, sebanyak 325 ml biakan Chlorella pyrenoidosa
dikulturkan kedalam botol tersebut hinggal volume suspense sel
800 ml. Selanjutnya, kultur diberikan aerasi dengan laju alir 1,5
L/menit dan diberikan cahaya dari lampu ataupun sinar matahari
dengan intensitas 5000-10000 lux yang diukur menggunakan
lightmeter. Lalu, kultur diadaptasikan pada botol tersebut untuk
selama 3-7 hari. Setelah satu minggu, kultur Chlorella pyrenoidosa
ditempatkan pada medium baru berisi larutan medium yang sama
di dalam botol kultur berukuran 1 L lain untuk kemudian diukur
pertumbuhannya.

3.2.2 Pengukuran laju pertumbuhan spesisfik (μ) kultur sel

Pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa diamati dan hitung
pertumbuhannya dalam medium cair tersebut selama 28 hari, dengan
interval waktu pengamatan 3,5 hari, berdasarkan parameter pertumbuhan
berupa berat basah cuplikan, berat kering cuplikan, optical density, dan

22
jumlah sel dengan Haemacytometer. Adapun cara kerja pada masing-
masing parameter adalah sebagai berikut :
3.2.2.1 Berat basah cuplikan
Sebanyak 12,5 ml kultur sel Chlorella pyrenoidosa
dimasukkan dalam falcon yang telah ditimbang bobot kosong
sebelumnya. Lalu, kultur sel di sentrifugasi dengan kecepatan
5000 rpm selama 15 menit. Setelah disentrifugasi, supernatan
dipisahkan dengan endapan. Selanjutnya, falcon yang berisi
endapan ditimbang. Berat falcon berisi endapan yang dikurangi
dengan berat falcon kosong merupakan berat endapan atau berat
basah cuplikan. Berat basah cuplikan hanya dilakukan saat awal
dan akhir pengkulturan.
3.2.2.1 Berat basah cuplikan
Falcon yang berisi endapan, sisa dari parameter berat
basah cuplikan, diambil endapannya lalu dimasukkan kedalam
cawan petri berlapis kertas saring yang telah ditimbang bobot
kosongnya. Cawan petri tersebut dimasukkan dalam oven yang
bersuhu ±60oC selama 30 menit. Setelah 30 menit, cawan petri
dimasukkan dalam desikator dan setelah dingin ditimbang
dengan neraca digital. Selanjutnya, cawan petri di masukkan
kembali dalam oven selama 15 menit dan ditimbang kembali
hingga mencapai bobot tetap dengan perbedaan maksimal
(±0,0005g). Berat kering cuplikan di dapat dari pengurangan
berat cawan petri dan endapan setelah didapat bobot tetap dengan
berat cawan petri kosong. Berat kering cuplikan hanya dilakukan
saat awal dan akhir pengkulturan.
3.2.2.3 Optical Density
Kultur sel Chlorella pyrenoidosa diambil sebanyak 10
ml dengan gelas ukur. Lalu diukur absorbansinya dengan
Spektrofotometer pada λ680 sebanyak tiga kali.
3.2.2.4 Jumlah sel dengan Hemasitometer
Hemasitometer disiapkan dan dipastikan dalam
keadaan bersih. Untuk membersihkannya, dapat dicuci lalu
disemprotkan dengan alkohol 70%. Selanjutnya, suspensi sel

23
 Chlorella pyrenoidosa yang telah dikulturkan diambil 0,1 ml
(100 μL) menggunakan mikropipet. Lalu, diteteskan kedalam
hemasitometer dengan posisi ujung pipet diantara gelas objek
dengan kaca penutup hemasitometer. Jika lerapatan sel dalam
kultur suspensi sel terlalu tinggi, maka suspensi sel diencerkan
dengan menambahkan aquadest. Sebanyak 0,1 ml (100 μL)
suspensi sel dimasukkan kedalam gelas ukur, lalu diencerkan
dengan aquadest hingga volumenya menjadi 1 ml. Setelah itu,
larutan dihomogenkan dan didiamkan selama kurang lebih
satu menit. Kemudian, larutan dimasukan kembali kedalam
hemasitometer yang telah dibersihkan. Setelah itu, suspensi
sel diamati di bawah mikroskop dengan perbesaran 10x (lensa
okuler) dan 10x lensa objektif. Selanjutnya, jumlah sel
Chlorella pyrenoidosa yang berada pada kotak W dihitung
dan total jumlah sel/mL-nya didapatkan dari mengalikan rata-
rata jumlah sel pada tiap grid dengan 104. Perhitungan jumlah
sel dilakukan saat hari ke tujuh dan akhir pengkulturan.
Selanjutnya, dari hasil pengamatan dan perhitungan
parameter tersebut dibuat kurva pertumbuhan sel (ln Biomassa
terhadap waktu). Lalu, didapat laju pertumbuhan dari slope kurva
dan dihitung laju pertumbuhan spesifik dengan rumus yang ada
pada Lampiran B.

3.2.3 Doubling time kultur sel Chlorella pyrenoidosa.

Setelah mendapat nilai laju spesifik, doubling time kultur sel
Chlorella pyrenoidosa dapat ditentukan dengan menggunakan
rumus yang ada pada Lampiran B.
3.2.4 Estimasi perolehan biomassa (yield) kultur sel Chlorella pyre-
noidosa.
Dengan persamaan yang terdapat pada Lampiran B
perolehan biomssa (yield) kultur sel Chlorella pyrenoidosa dapat
ditentukan. Perhitungan konsentrasi nitrat dapat dilakukan

24
 berdasarkan metode SNI. Konsentarsi nitrat diukur pada awal percobaan
dan di akhir percobaan. Sisa supernatan dari parameter berat basah
cuplikan di tambahkan 0.25 mL HCl 1 N. Lalu, supernatan tersebut
didiamkan selama 10 menit. Setelah 10 menit, supernatan diukur dengan
Spektrofotometer λ220 dan λ275. Konsetrasi nitrat dihitung berdasarkan
kurva standar serapan dari konsentrasi nitrat yang sudah dibuat
sebelumnnya.
3.2.5 Produk (Konsentrasi klorofil a, b, dan karotenoid) kultur sel Chlorella
pyrenoidosa.
Sebanyak 5 ml kultur Chlorella sp. dimasukkan kedalam tabung
falcon. Lalu, sampel disentrifuga selama 10 menit pada 5000 rpm .
Selanjutnya, sel-sel Chlorella sp. ditempatkan pada tabung reaksi dan
ditambahkan 10 ml aseton (80%). Tabung tersebut dibiarkan di
pendingin (pada es) semalaman. Lalu besoknya ditempatkan pada
‘ultrasonic bath’ selama 90 detik. Dilanjutkan dengan disentrifugasi
selama 10 menit pada 5000 rpm. Supernatan diambil dengan hati-hati
lalu diukur absorbansinya pada panjang gelombang 470 nm, 647 nm and
663 nm . Konsentrasi klorofil a, klorofil b, dan karotenoid dihitung
berdasarkan rumus yang terdapat pada Lampiran B.

25
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil

4.1.1 Kurva pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa

Pada percobaan kinetika pertumbuhan sel yang dilakukan
selama 28 hari, didapatkan data pengamatan optical density kultur
sel. Kemudian Nilai Optical density tersebut dibandingkan dengan
kurva baku optical density terhadap berat kering, berat basah dan
kerapatan sel sehingga diperoleh berat kering, berat basah dan
kerapatan sel Chlorella pyrenoidosa selama 28 hari yang dapat
dilihat dalam Tabel 4.1

Tabel 4.1 Data pengamatan kinetika pertumbuhan sel selama 28

hari

T Optical Berat Berat Kerapatan sel

(hari) density kering (g) basah (g) (g/ml)
(g/ml)
0 1,174 0.2434 0.61 23257066
3.5 1,934 0.46 0.95 38767270
7 3.21 0.73 1.54 58500000
10.5 2.92 0.67 1.4 52570660
14 6.43 1.42 3 124815560
17.5 2.9 0.66 1.39 52162500
21 1.76 0.42 0.88 28897190
24.5 2.08 0.49 1.02 35427800
28 2.91 0.67 1.4 52366580

Data pada Tabel 4.1 ditransformasikan kedalam kurva

kinetika pertumbuhan selama 28 hari dengan sumbu x waktu (hari)
dan sumbu y optical density, berat kering, berat basah, dan
kerapatan sel. Kurva kinetika pertumbuhan berdasarkan optical
density dapat dilihat pada Grafik 4.1.

26
 7
14, 6.46

Optical density (gr/ml)

6
5
4
3 7, 3.21 10.5, 2.92 17.5, 2.9 28, 2.91
2 3.5, 1.934 24.5,
21, 1.76 2.08
1 0, 1.174
0
0 5 10 15 20 25 30
Waktu (hari)

Grafik 4.1 Kinetika pertumbuhan sel Chorella pyrenoidosa

berdasarkan optical density

Selain dari optical density ditentukan juga kurva

pertumbuhan berdasarkan berat kering dan berat basah kultur sel
Chlorella pyrenoidosa selama 28 hari. Adapun kurva kinetika
pertumbuhan berdasarkan berat kering dapat dilihat pada Grafik 4.2.

3.5

3 14

2.5
Berat (g)

1.5 7 Berat kering

10.5 14 17.5 28, 1.4
1 24.5 Berat basah
3.5 21
7 10.5 17.5 28, 0.67
0.5 0
3.5 21 24.5
0
0
0 10 20 30

Waktu (hari)

Grafik 4.2 Kinetika pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa

berdasarkan berat kering dan basah

27
 Pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa dapat diteliti
dengan perhitungan kerapatan sel (g/ml) secara hemasitometer.
Adapun kurva kinetika pertumbuhan berdasarkan kerapatan sel
(g/ml) dapat dilihat pada Grafik 4.3.

140000000
120000000
Kerapatan sel (g/ml)

100000000
80000000
60000000
40000000
20000000
0
0 5 10 15 20 25 30
Waktu (hari)

Grafik 4.3 Kinetika pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa

berdasarkan kerapatan sel

4.1.2 Laju pertumbuhan spesifik dan doubling time

Berdasarkan grafik diatas, diperoleh nilai laju pertumbuhan
spesifik, dan doubling time saat fase eksponensial. Perhitungan laju
pertumbuhan spesifik dan doubling time dapat dilihat dalam
Lampiran B.2. Adapun laju pertumbuhan spesifik dan doubling
time sel Chlorella pyrenoidosa dapat dilihat pada Tabel 4.2

Tabel 4.2 Laju Pertumbuhan spesifik dan doubling time kultur sel
Chlorella pyrenoidosa pada berbagai metode
Metode
Berat Berat Jumlah sel Optical
kering basah Density
Laju 0.000060 0.000060 0.000068 0.000063
pertumbuhan
spesifik

28
 (μ)(s-1)
Doubling 0.314 0.314 0,118 0.127
time (hari)

4.1.3 Yield Biomassa

Yield Biomassa diperoleh dari perbandingan selisih berat
kering atau basah sel Chlorella pyrenoidosa dengan selisih
konsentrasi nitrat awal dan akhir pengkulturan (Lampiran B.2).
Adapun hasil perhitungan yield biomassa tersebut dapat dilihat
pada Tabel 4.3.

Tabel 4.3 Yield Biomassa kultur sel Chorella pyrenoidosa

Yield Biomassa 0.07%

4.1.3 Produk kultur sel Chlorella pyrenoidosa

Produk kultur sel Chlorella pyrenoidosa yang berupa
klorofil a, b, dan karotenoid dapat diperoleh dengan menggunakan
persamaan yang ada di Lampiran B.1. Adapun hasil perolehan
produk kultur tersebut dapat dilihat pada Tabel 4.4

Tabel 4. 4 Perolehan produk kultur sel Chlorella pyrenoidosa.

Produk Perolehan
Klorofil a 0.06
Klorofil b 0.299
Karotenoid -0.002

4.2 Pembahasan
Parameter kinetika pertumbuhan sel Chlorella pyrenoidosa dapat
dianalisis berdasarkan laju pertumbuhan spesifik (μ), doubling time, serta
perolehan yield biomassa di mana peningkatan jumlah biomassa
berbanding terbalik dengan jumlah substrat yang tersedia

29
 Kurva pertumbuhan terbagi dalam beberapa fase, antara lain fase
lag, fase eksponensial, fase stasioner, dan fase kematian. Kurva
pertumbuhan ditunjukkan pada Grafik 4.1, 4.2 dan 4,3 yang berturut-turut
berdasarkan berat kering, berat basah, dan jumlah sel (sumbu-y) kultur sel
Chlorella pyrenoidosa terhadap waktu dalam satuan hari (sumbu-x).
Ketiga kurva tersebut menunjukkan pola yang sama dengan fase lag yang
terjadi pada hari ke-0 hingga hari ke-10,5. Jika dilihat pada Grafik 4.1, 4.2,
dan 4.3, fase lag pada ketiga kurva tersebut langsung menunjukkan
aktivitas pertumbuhan sedangkan seharusnya pada fase lag belum terjadi
peningkatan jumlah biomassa sel. Fase lag adalah fase yang terjadi ketika
awal kultivasi dimulai, pada fase ini tidak terlihat penambahan jumlah sel.
Sintesis protein terjadi dalam fase ini, peningkatan massa sel dapat terjadi
tetapi tidak dalam jumlah signifikan (Uzir dan Mat, 2007). Lalu fase
eksponensial terjadi di hari ke-10,5 hingga hari ke-14. Setelah fase
eksponensial langsung menuju ke fase kematian (death phase) dari hari ke-
14 hingga hari ke-21. Setelah itu terjadi fase lag lagi mulai dari hari ke-21
hingga hari ke-28. Pada ketiga kurva tidak terdapat fase stasioner. Hal ini
disebabkan oleh jumlah hari dalam satu periode pengukuran yang cukup
lama, yaitu selama 3 hari. Seharusnya pengukuran dilakukan minimal tiap
satu hari sekali. Hal ini seperti yang dilakukan oleh Danquah et al. (2009)
dalam membuat kurva pertumbuhan Chlorella sp.
Laju pertumbuhan spesifik diambil dari kurva pertumbuhan
Chlorella pyrenoidosa pada fase stasioner yaitu pada T10,5 dan T14.
Penentuan fase stasioner dari kurva tumbuh adalah dengan melihat data
yang peningkatannya sangat tinggi. Kurva tumbuh yang ditinjau ada 4
yaitu kurva jumlah sel terhadap waktu, optical dendity terhadap waktu, dry
weight terhadap waktu, dan fresh weight terhadap waktu. Dari keempat
grafik tersebut tidak ada satupun yang membentuk kurva sigmoid sehingga
sulit untuk menentukan fase-fasenya termasuk mencari fase stasioner.
Selanjutnya pada suspensi sel Chlorella pyrenoidosa didapat hasil laju
pertumbuhan spesifiknya sebesar 0,000063/sec untuk laju pertumbuhan

30
spesifik berdasarkan optical density, 0,000068/sec untuk laju pertumbuhan
spesifik berdasarkan jumlah sel terhadap waktu, 0,000060/sec untuk laju
pertumbuhan spesifik berdasarkan berat basah dan berat kering terhadap
waktu. Nilai laju pertumbuhan spesifik yang didapat dai 4 kurva baku
tidak semuanya sama, akan tetapi nilai laju pertumbuhan spesifik dari 4
kurva tersebut berkisar 0,000060/sec. Jika di konversi kedalam satauan
hari, laju spesifiknya menjadi 0.216/hari. Laju spesifik yang diperoleh
lebih kecil disbanding dengan penelitian Hirata et al, (1981) yang sebesar
0.51/hari. Laju pertumbuhan spesifik yang berbeda disebabkan oleh
perbedaan kondisi lingkungan saat pengkulturan. Secara teoritis, terdapat
empat kondisi yang mungkin menjadi penghambatan pertumbuhan alga:
(1), produksi senyawa racun oleh sel; (2) laju karbon dioksida yang
terbatas; (3) perubahan atau kekurangan beberapa komponen dari senyawa
garam mineral; atau (4) terbatasnya energi (Myers, 1944).
Setelah diketahui nilai dari laju pertumbuhan spesifik, doubling
time dapat ditentukan melalui persamaan yang ada di Lampiran B.
Berdasarkan hasil perhitungan yang ada pada Tabel 4.2 didapatkan
doubling time Chlorella pyrenoidosa berdasarkan berat kering sebesar
0.314/hari, berat basah sebesar 0.314/hari, kerapatan sel sebesar
0,118/hari, dan optical density sebsar 0.127/hari. Hal ini menunjukkan
bahwa doubling time sel Chlorella pyrenoidosa berkisar antara 0.3/hari
hingga 0.1/hari. Kisaran doubling time yang didapatkan pada penelitian ini
lebih kecil daripada doubling time pertumbuhan Chlorella sp. yang
didapatkan pada penelitian Hirata et al. (1981) yaitu sebesar 1.36/hari. Hal
ini dikarenakan oleh kondisi lingkungan yang berbeda saat pengkulturan
sama seperti alasan kenapa laju spesifiknya berbeda.
Pada kultur sel mikroalga Chlorella pyrneoidosa tersebut,
digunakan nitrat sebagai sumber nitrogen. Pada awal periode kultur, pH
kultur berkisar pada nilai 6,99. Dalam rentang pH 7 sampai dengan 9,
terdapat dua kemungkinan pemanfaatan nitrogen dari medium, yaitu dalam
bentuk ammonium maupun nitrat (Eustance et. al, 2013). Prabowo (2009)

31
menyatakan bahwa reaksi biokimia yang terjadi pada pemanfaatan nitrat
sebagai sumber nitrogen adalah sebagai berikut:

106HCO3- + 16NO3- + HPO42- + 16H20 + 124H+  Protoplasma + 138O2

Berdasarkan penelitian yang dilakukan, yield biomassa Chlorella

pyrenoidosa terhadap konsentrasi substrat (dalam hal ini nitrat) diperoleh
sebesar 0.07%. Yield tersebut menunjukan peningkatan jumlah biomassa
terhadap konsumsi nirat. Pada awal kultivasi, konsentrasi nitrat yang
terdapat pada medium sebesar 0,7 mM. Seiring dengan berjalannya waktu,
nitrat tersebut dikonsumsi oleh sel Chlorella pyrenoidosa sebagai nutrien
untuk memenuhi kebutuhan metabolismenya. Dengan demikian, pada
akhir kultivasi konsentrasi nitrat yang terdapat pada medium telah habis.
Konsentrasi nitrat pada awal dan akhir periode kultur diperoleh
menggunakan spekrtofotometer untuk melihat nilai absorbansinya pada λ
= 220 nm dan λ= 275 nm. Metode penentuan konsentrasi nitrat ini
dilakukan secara tidak langsung dengan membuat kurva standar melalui
metode SNI. Berdasarkan kurva standar yang diperoleh, didapat
persamaan regresi linier y = -0,2537x + 0,1987 dengan R2 sebesar 0,9726.
Selisih data absorbansi pada T=0 dan T=28 yang telah diperoleh
sebelumnya untuk masing-masing λ = 220 nm dan λ= 275 nm kemudian
disubsitusi sebagai variabel y ke persamaan regresi tersebut. Dengan
demikian, dapat diperoleh konsentrasi nitrat untuk T = 0 dan T = 28 yang
masing-masing nilainya adalah 0,7 mM dan -0,771 x 10-4M.
Produk yang dihasilkan pada kultur sel Chlorella pyrenoidosa
adalah klorofil a, b, dan karotenoid. Besar perolehan produk kultur sel ini
adalah 0.06 untuk perolehan klorofil a, 0.299 untuk perolehan klorofil b,
dan -0.002 untuk perolehan karotenoid. Menurut literatur, klorofil a adalah
jenis pigmen yang ada pada semua organisme autotrof. Klorofil b adalah
pigmen yang ditemukan di Chlorophyta dan tanaman darat (Tangguna,
dkk., 2015). Dari hasil perolehan kloofil a dan b dapat disimpulkan bahwa

32
sel Chlorella pyrenoidosa memiliki pigmen klorofil dan termasuk
mikroalga autotrof. Menurut Tangguna, dkk, (2015) kandungan klorofil
dalam Chlorella sp. akan sebanding dengan pertumbuhan jumlah sel .
Semakin tinggi kepadatan sel alga, kadar klorofil akan lebih tinggi pula.
Berdasarkan percobaan yang dilakukan oleh Tanguna,dkk., (2015)
kerapatan sel yang diperoleh sebesar 2.333.333 sel/ml, laju pertumbuhan
spesifik sebesar 0,7677, dan kadar klorofil a 86,1568 mg/m3, dan klorofil
b sebesar 2.9000 mg/m3.Kerapatan sel yang didapat dari percobaan
kelompok ini pada hari pertama adalah 23.257.066 sel/ml dan perolehan
klorofil a pada hari pertama sebesar 2.418 mg/m3dan kadar klorofil b pada
hari pertama sebesar 0.996 mg/m3.Kemudian kerapatan sel yang didapat
dari percobaan kelompok ini pada hari terakhir adalah 53.266.580 sel/ml
dan perolehan klorofil a pada hari terakhir sebesar 2.801 mg/m3dan kadar
klorofil b pada hari terakhir sebesar 2.849 mg/m3. Berdasarkan hasil
pengujian kadar klorofil pada hari pertama dan terakhir dapat dilihat
bahwa kadar klorofil meningkat seiring dengan meningkatnya juga
kerapatan sel Chlorella pyrenoidosa.

33
 BAB V
PENUTUP

5.1 Kesimpulan
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan diperoleh kesimpulan
sebagai berikut :
1. Laju pertumbuhan spesifik (μ) Chlorella pyrenoidosa yang diperoleh
berdasarkan parameter yang berbeda yaitu optical density, berat
kering, berat basah, dan hemasitometer, berturut-turut adalah
0,000068/sec 0,000060/sec, 0,000060/sec dan 0.000063/sec.
2. Doubling time Chlorella pyrenoidosa yang diperoleh berdasarkan yaitu
optical density, berat kering, berat basah, dan hemasitometer, berturut-
turut adalah 0,127.hari, 0,118/hari, 0,314/hari, 0,314/hari.
3. yield biomassa Chlorella pyrenoidosa yang diperoleh sebesar 0.07%.
4. yield produk berupa klorofil a, klorofil b, dan karotenoid dari kultur
Chlorella pyrenoidosa yang diperoleh secara berturut-turut sebesar
0.06, 0,299 dan -0,002

5.2 Saran
Seharusnya pengukuran dilakukan minimal tiap satu hari sekali.
Hal ini seperti yang dilakukan oleh Danquah et al. (2009) dalam membuat
kurva pertumbuhan Chlorella sp..

34
 DAFTAR PUSTAKA

Anggraini, N. (2009). Penentuan Parameter Pertumbuhan Chlorella vulgaris.

Disertasi. Bandung : ITB
Bahtera, E. (2017, Oktober 8). Terbesar Kedua di Dunia, Keanekaragaman
Hayati Indonesia Baru Tergarap 5%. Retrieved from News UNPAD:
http://news.unpad.ac.id/?p=36173
Bold, H.C. dan Wynne, M.J. (1985). Introduction to the Algae, Second Edition.
New York : Prentice-Hall Mc. Engelwood Cliffs.
Blair, M. F., Kokabian, B., & Gude, V. G. (2014). Light and growth medium
effect on Chlorella vulgaris biomass production. Journal of environmental
chemical engineering, 2(1), 665-674.
Chaumont, D. (1993). Biotechnology of algal biomass production: a review of
systems for outdoor mass culture. Journal of Applied Phycology, 5(6),
593-604.
Chidley, C., & Davison, G. (2017). The efect of Chlorella pyrenoidosa
supplementation on immune responses to 2 days of intensifed training.
European Journal of Nutrition, 1-8.
Chiu, S. Y., Kao, C. Y., Chen, T. Y., Chang, Y. B., Kuo, C. M., & Lin, C. S.
(2015). Cultivation of microalga Chlorella for biomass and lipid
production using wastewater as nutrient resource. Bioresource technology,
184, 179-189.
Chlorella pyrenoidosa. (2009). Diakses dari Royal Botanic Garden :
http://www.rbgsyd.nsw.gov.au pada 08 Oktober 2017 pukul 12.00
Danquah, Gladman, Moheimani, & Forde.(2009). Dewatering of microalgae
culture for biodiesel production : exploring polymer flocculation and
tangention flow filtration. Journal of Chemical Technology and
Biotechnology, 84 (7), 1078-1083
Demirbas, A., & Demirbas, M. F. (2011). Importance of algae oil as a source of b
iodiesel. Energy conversion and management, 52(1), 163-170.

35
Dolan J. (1992). Mixotrophy in ciliates: a review of Chlorella symbiosis and
chloroplast retention. Mar. Microb. Food Webs 6, 115–132.
Fardiaz, S. (1993). Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Penerbit PT. Raja
Grafindo Persada. Halaman 74.
Gibson, J. M. (1996). Mikrobiologi dan Patologi Modern Untuk Perawat.
Diterjemahkan dari buku Modern Microbiology and Patology for Nurses
oleh I.K.G. Soma Prasada. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Hadioetomo, R.S. (1993). Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek : Teknik dan
Prosedur Dasar Laboratorium. Jakarta : PT Gramedia Pustaka Utama.
Jakarta.
Hirata. (1981). Effect of Salinity and Temperature on The Growth of The Marine
Phytoplankton Chlorella saccharophila. Japan: Kagoshima University.
Isnansetyo A, Kurniastuty. (1995). Teknik Kultur Phytoplankton dan Zooplankton.
Pakan Alami untuk Pembenihan Organisme Laut. Yogyakarta: Kanisius.
Maier, R. M., Pepper, I. L., & Gerba, C. P. (2009). Environmental microbiology.
United States : Academic press.
PadM. A. Borowitzka and L. J. Borowitzka. (n.d). Microalgal biotechnology. Vambridge
: Cambridge University Press.
Mandalam, R. K. (1998). Elemental Balancing of Biomass and Medium
Composition Enhances Growth Capacity in High-Density Cholorella
vulgaris Cultures. Biotechnology and Bioengineering 59(5) , 605-611.
Myers, J. (1944). The Growth of Chlorella Pyrenoidosa Under Various Culture
Conditions. Plant Physiol. 19(4) , 579-589.
Oh-Hama, T., Miyachi, S. (1988). Chlorella. Cambridge : Cambridge University
Press
Patil, V., Reitan, K. I., Knutsen, G., Mortensen, L. M., Källqvist, T., Olsen, E., ...
& Gislerød, H. R. (2005). Microalgae as source of polyunsaturated fatty
acids for aquaculture. Plant Biology, 6.
Pratiwi, ST. (2008). Mikrobiologi Farmasi. Yogyakarta: Penerbit Erlangga.
Halaman 176.

36
Přibyl, P., Cepák, V., & Zachleder, V. (2012). Production of lipids in 10 strains of
Chlorella and Parachlorella, and enhanced lipid productivity in Chlorella
vulgaris. Applied microbiology and biotechnology, 94(2), 549-561.
Přibyl, P., Cepák, V., & Zachleder, V. (2013). Oil overproduction by means of
microalgae. In Algal Biorefineries (pp. 241-273).
Purwoko. T. (2007). Fisiologi Mikroba. Jakarta : PT Bumi Aksara.
Shekh, A. Y., Shrivastava, P., Krishnamurthi, K., Mudliar, S. N., Devi, S. S.,
Kanade, G. S., & Chakrabarti, T. (2016). Stress enhances poly-
unsaturation rich lipid accumulation in Chlorella sp. and Chlamydomonas
sp. Biomass and Bioenergy, 84, 59-66.
Uzir, M. H., & Mat Don, M. (2007). Biochemical engineering—a concise
introduction. Penang: Universiti Sains Malaysia.
Wirosaputro,S, (2002), Chlorella,Untuk Kesehatan Global, teknik Budidaya dan
Pengolahan. Yogyakarta : Gadjah Mada University Press.

37
LAMPIRAN

38
 Lampiran A. Dokumentasi

Gambar A.1 Suspensi sel Chlorella pyrenoidosa

39
 Lampiran B. Pengolahan Data

B.1 Hasil
B.1.1 Optical Density
Suspensi kultur sel Chlorella pyrenoidosa dilihat Optical
Densitynya setiap 3,5 hari sekali selama 28 hari. Adapun nilainya
dapat dilihat pada pada Tabel B.1.

Tabel B.1 Data pengamatan Optical Density Chlorella pyrenoidosa

Waktu Optical Faktor

(hari) Density Pengenceran
T0 1.174 1
T3.5 1.934 1
T7 0.321 10
T10.5 0.292 10
T14 0.646 10
T17.5 0.290 10
T21 0.176 10
T24.5 0.208 10
T28 0.291 10

B.1.2 Berat kering (Dry Weight)

Pada hari pertama pengukulturan, diamati berat kering
kultur sel Chlorella pyrenoida. Berat kering ini didapatkan dari
pengeringan yang dilakukan berulang setiap 30 menit hingga
diperoleh bobot tetap. Adapun data berat kering tersebut dapat
dilihat pada Tabel B.2.

Tabel B. 2 Data pengamatan berat kering dan basah kultur sel

Chlorella prenoidosa pada T0
Metode Berat sampel (g)
Berat Kering 0.0602
Berat Basah 0.2434

B.1.3 Absorbansi produk kultur suspensi sel Chlorella pyrenoidosa

40
 Pada hari pertama dan terakhir pengukulturan, diamati
klorofil a, klorofil b, dan karotenoid pada kultur sel Chlorella
pyrenoida. Adapun data absorbansi tersebut dapat dilihat pada
Tabel B.3.

Tabel B. 3 Absorbansi klorofil a, klorofil b, dan karotenoid

T (hari) Absorbansi
663 nm 647 nm 470 nm
0 0.222 0.104 0.279
28 0.279 0.210 0.443
0.276 0.212 0.448
Rata-rata : 0.278 Rata-rata : 0.211 Rata-rata : 0.446
SD : SD : SD :
0.002121 0.001414 0.003536

Konsentrasi produk awal dan akhir diperoleh dengan

memasukan nilai absorbansi T0 dan T28 dalam persamaan yang ada
pada Lampirab B.3 sehingga didapat konsentrasi produk yang
ditunjukan pada Tabel B.4.

Tabel B.4 Konsentrasi klorofil a, b, dan karotenoid pada T0 dan T28

T (Hari) Klorofil a Klorofil b Karotenoid

0 2.418 0.996 0.732
28 2.801 2.849 0.613

B.1.4 Absorbansi Nitrat

Perolehan bimassa dihitung berdasarkan konsentrasi awal
dan akhir nitrat. Konsentrasi tersebut didapat dari perbandingan
absorbansi sampel yang diamati dengan konsentrasi pada kurva
standar. Adapun absorbansi sampel kultur suspense sel pada T0 dan
T28 dapat dilihat pada Tabel B.5.

Tabel B.5 Absorbansi nitrat

T (hari) Absorbansi Nitrat

41
 220 nm 275 nm
0 2.008 0.024
28 0.421 0.443
0.460 0.443
Rata-rata : 0.440 Rata-rata : 0.443
SD : 0.27577 SD :0

Konsentrasi nitrat diperoleh dengan membandingkan

konsentrasi yang ada di larutan baku nitrat. Adapun konsentrasi
tersebut ditunjukan pada Tabel B.6

Tabel B.6 Konsentrasi nitrat dan biomassa awal dan akhir berat
kering atau basah

T (Hari) Konsentrasi Nitrat (mM)

0 7.073
28 0.771

B.2 Kurva baku

B.2.1 Kerapatan sel terhadap optical density
Pembuatan kurva baku dilakukan dengan mengencerkan
larutan baku menjadi beberapa konsentrasi berbeda melalui prinsip
serial dilution. Adapun hasil dari pengamatan optical density dan
densitas sel larutan baku tersebut dapat dilihat pada Tabel B.7

Tabel B.7 Optical density dan densitas sel larutan baku

Tabung Densitas sel

Optical density
(sel.mL-1)
1 3.634 77350000
2 1.936 28090000
3 1.074 17633750
4 0.608 13547500
5 0.312 6831250
6 0.207 6675000
7 0.106 2375000
8 0.058 1832500
9 0.042 1230000
10 0.020 535000

42
 Data di Tabel B.7, ditransfomasikan ke dalam bentuk kurva
baku menjadi Grafik B.1.
Densitas sel (sel/mL)

4
y = 4,902E-8x + 0,0345
R² = 0,9682
3,5

3
Optical Density

2,5

1,5

0,5

0
0 10000000 20000000 30000000 40000000 50000000 60000000 70000000 80000000
Densitas Sel (sel/mL)

Grafik B.1 Optical density terhadap densitas sel larutan

standar

B.2.2 Berat kering terhadap optical density

Pembuatan kurva baku dilakukan dengan mengencerkan
larutan baku menjadi beberapa konsentrasi berbeda melalui prinsip
serial dilution. Adapun hasil dari pengamatan optical density dan
berat kering larutan baku tersebut dapat dilihat pada Tabel B.8
.
Tabel B.8 Optical density dan berat kering larutan standar

Tabung Optical density Berat kering (g)

1 2.06 0.0048
2 1.35 0.0035
3 0.70 0.0016
4 0.39 0.0015
5 0.20 0.0007
6 0.14 0.0008
7 0.05 0.0007

43
 Data di Tabel B.6, ditransfomasikan ke dalam bentuk kurva
baku menjadi Grafik B.2

Berat Kering (x 0,01 gram)

3
y = 4,6693x - 0,2019
R² = 0,9834
2,625

2,25
Optical Density

1,875

1,5

1,125

0,75

0,375

0
0 0,063 0,125 0,188 0,25 0,313 0,375 0,438 0,5
Berat Kering (gram)

Grafik B.2 Optical density (g/ml) terhadap berat kering (g)

larutan standar

B.2.3 Berat kering terhadap optical density

Pembuatan kurva baku dilakukan dengan mengencerkan
larutan baku menjadi beberapa konsentrasi berbeda melalui prinsip
serial dilution. Adapun hasil dari pengamatan optical density dan
berat basah larutan baku tersebut dapat dilihat pada Tabel B.9.
.
Tabel B.9 Optical density dan berat basah larutan standar

Tabung Optical density

Berat basah (g)
(λ= nm)
1 3.03 0.1331
2 2.06 0.0921
3 1.35 0.0812
4 0.70 0.0526
5 0.39 0.0323
6 0.20 0.0132
7 0.12 0.0125
8 0.05 0.0133

44
 9 0.03 0.0338
10 0.01 0.0808

Data di Tabel B.9 ditransfomasikan ke dalam bentuk kurva

baku menjadi Grafik B.3

Berat Basah (x 0,1 gram)

4
y = 2,1967x - 0,1622
R² = 0,967
3,5

2,5
Optical Density

1,5

0,5

-0,5
0 0,175 0,35 0,525 0,7 0,875 1,05 1,225 1,4
Berat Basah (gram)

Grafik B.3 Optical density(g/ml) terhadap berat basah (g)

larutan standar
B.2.2 Nitrat
Nilai absorbansi yang ada pada larutan baku dapat dilihat
pada Tabel B.10.
Tabel B.10 Hasil pengukuran absorbansi nitrat

FP 500X Absorbansi (220nm) Absorbansi (275nm)

A220 A275 Asel
c (M) 1 2 3 1 2 3
0.004 2.780 2.828 2.829 0.019 0.015 0.02
0.002 2.726 2.816 2.771 0.014 0.009 0.01
0.001 2.601 2.665 2.665 2.665 0.007 0.009 0.01 0.007 2.658
0.0005 1.557 1.732 1.737 1.645 0.011 0.008 0.01 0.01 1.635
0.00025 0.663 1.280 1.266 0.965 0.002 0.007 0.01 0.008 0.957
0.000125 0.237 0.434 0.434 0.336 0.001 0.005 0.01 0.006 0.330
45
 Tabel B. 4 ditransformasikan ke dalam bentuk kurva baku menjadi
Grafik B.4

12
y = 0,2537x + 0,1987
10 R2= 0,9726

0
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025 0.003 0.0035 0.004 0.0045

Grafik B.4 Kurva baku nitrat

B.3 Perhitungan
B.3.1 Laju pertumbuhan spesifik (μ)
Laju pertumbuhan spesifik (μ) dapat dihitung dengan
menggunakan persamaan B.4.

1 𝑑𝑥 ln 𝑥 − ln 𝑥0
𝜇= =
𝑥 𝑑𝑡 𝑡

Keterangan :
x = massa
t = waktu
Berikut ini adalah perhitungan laju pertumbuhan spesifik
Chlorella pyrenoidosa yang ditinjau dari Optical Density, Cell
Number, Dry Weight, dan Fresh Weight.
B.3.1.1 Laju pertumbuhan spesifik Chlorella pyrenoidosa
berdasarkan Optical Densityterhadap waktu

46
 ln 𝑋 − ln 𝑋0
𝜇=
𝑡
ln 6,46 − ln 2,92
𝜇= 𝑠𝑒𝑐
3.5 ℎ𝑎𝑟𝑖 𝑥 3600
ℎ𝑎𝑟𝑖
𝜇 = 0,000063/𝑠𝑒𝑐

B.3.1.2 Laju pertumbuhan spesifik Chlorella pyrenoidosa berdasarkan

Cell Numberterhadap waktu.

ln 𝑋 − ln 𝑋0
𝜇=
𝑡
ln 124815560 − ln 52570660
𝜇= 𝑠𝑒𝑐
3.5 ℎ𝑎𝑟𝑖 𝑥 3600
ℎ𝑎𝑟𝑖
𝜇 = 0,000068/𝑠𝑒𝑐

B.3.1.3 Laju pertumbuhan spesifik Chlorella pyrenoidosa berdasarkan

Dry Weight terhadap waktu.

ln 𝑋 − ln 𝑋0
𝜇=
𝑡
ln 1.42 − ln 0,67
𝜇= 𝑠𝑒𝑐
3,5ℎ𝑎𝑟𝑖 𝑥 3600
ℎ𝑎𝑟𝑖
𝜇 = 0,0000596/𝑠𝑒𝑐
𝜇 ≈ 0,000060/𝑠𝑒𝑐

B.3.1.4 Laju pertumbuhan spesifik Chlorella pyrenoidosa

berdasarkan Fresh Weigtterhadap waktu

ln 𝑋 − ln 𝑋0
𝜇=
𝑡
ln 3 − ln 1,4
𝜇= 𝑠𝑒𝑐
3,5 ℎ𝑎𝑟𝑖 𝑥 3600
ℎ𝑎𝑟𝑖
𝜇 = 0,000060/𝑠𝑒𝑐

B.3.2 Yield produk (YP/S)

Yield produk (YP/S) dapat dihitung dengan menggunakan
persamaan B.6.

∆𝑃
YP/S = − ∆𝑆

47
 Keterangan :
P : Perubahan konsentrasi produk (klorofil a, klorofil b, dan
Karotenoid) pada awal dan akhir pengkulturan.
S : Perubahan konsentrasi substrat nitrat pada awal dan akhir
Pengkulturan

Produk dari kultur sel Chlorella pyrenoidosa ini adalah

klorofil a, b dan karotenoid. Adapun konsentrasinya dapat dihitung
dengan persamaan B,7.

Klorofil a = 12.21 * A663 – 2.81 * A647

Klorofil b = 20.31 * A647 – 5.03 * A663
Karotenoid = (1000 * A470 – 3.27 * Ca – 104 * Cb)/229

Berikut ini adalah perhitungan produk kultur suspensi sel

Chlorella pyrenoidosa.
∆𝑃
YP/S = − ∆𝑆

Klorofil a
Yp/s = -(2.801-2.418)/(0.771-7.073) = 0.06
Klorofil b
Yp/s = -(2.849-0.996)/(0.771-7.073) = 0.294
Karotenoid
Yp/s = -(0.613-0.732)/(0.771-7.073) = -0.002

B.3.3 Doubling time (dt)

Doubling time (dt)dapat dihitung dengan menggunakan
persamaan B.8.

(ln 2)
dt = 𝜇

Keterangan :

48
 μ : Laju pertumbuhan spesifik
Berikut ini adalah perhitungan doubling time Chlorella
pyrenoidosa yang ditinjau dari Optical Density, Cell Number, Dry
Weight, dan Fresh Weight.
B.3.3.1 Doubling time Chlorella pyrenoidosa
berdasarkan Optical Densityterhadap waktu

(ln 2)
dt = 𝜇

dt = 11002 s atau 0.127 hari

B.3.3.2 Doubling time Chlorella pyrenoidosa berdasarkan

Cell Numberterhadap waktu.

(ln 2)
dt = 𝜇

dt = 10193 s atau 0.118 hari

B.3.3.3 Laju pertumbuhan spesifik Chlorella pyrenoidosa berdasarkan

Dry Weight terhadap waktu.

(ln 2)
dt = 𝜇

dt = 11552 s atau 0.134 hari

B.3.3.4 Laju pertumbuhan spesifik Chlorella pyrenoidosa

berdasarkan Fresh Weigtterhadap waktu

(ln 2)
dt = 𝜇

dt = 11552 s atau 0.134 hari

B.3.4 Yield biomassa (Yx)

Yield biomassa (Yx) dapat dihitung dengan menggunakan
persamaan B.9.

49
 ∆𝑋
Yx = − ∆𝑆

Keterangan :
 X : Jumlah perubahan biomassa (selisih biomassa akhir dan
awal)
S : Jumlah perubahan substrat yang dikonsumsi (selisih
konsentrasi nitrat akhir dan awal)
Berikut ini adalah perhitungan perolehan yield
biomassa:

Berdasarkan perbedaan densitas hari-1 dan hari-28 dengan

volume awal sebesar 400 mL dan volume akhir 200 mL, maka
yield yang diperoleh adalah
5,475
Yx = - ( −7,884 )
1000

= 0,07%

50