TUGAS IMUNOLOGI

“REVIEW JURNAL INTERNASIONAL”

Dosen Mata Kuliah :

Khomaini Hasan, PhD

Di Susun Oleh :

 Dian Ayu Melani

 Elmira Kania
 Meutia Nur Pratiwi
 Nabilah Fairuza
 Nur Kholipah
 Rachel Lusiana

SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN BANI SALEH BEKASI

PROGRAM STUDI S1 FARMASI
TAHUN AJARAN 2019/2020
JUDUL
1. Modulation of T Cell-Mediated Immune Responses by Natural Killer Cells
2. In vitro studies on galectin-3 in human natural killer cells
3. Genetic influence on splenic natural killer cell frequencies and maturation among aged
mice
4. CXCR3-deficient natural killer cells fail to migrate to B16F10 melanoma cells
5. miR-24 inhibited the killing effect of natural killer cells to colorectal cancer cells by
downregulating Paxillin
6. Natural killer cell activity and prostate cancer risk in veteran men undergoing prostate
biopsy
7. Dysfunction of natural killer cells mediated by PD-1 and Tim-3 pathway in
anaplastic thyroid cancer
8. Oral cancer-derived exosomal NAP1 enhances cytotoxicity of natural killer
cells via the IRF-3 pathway
9. Immunomodulatory activity of Humulus lupulus bitter acids fraction:
Enhancement of natural killer cells function by NKp44 activating receptor
stimulation
10. Impaired cytolytic activity of asthma-associated natural killer cells is linked
to dysregulated transcriptional program in energy metabolism

REVIEWER
Kelompok 3
 Dian Ayu Melani
 Elmira Kania
 Meutia Nur Pratiwi
 Nabilah Fairuza
 Nur Kholipah
 Rachel Lusiana

TANGGAL
Kamis, 31 Oktober 2019

ABSTRAK
Pembunuh (NK) sel-sel alami adalah sel limfoid yang berpartisipasi dalam imunitas bawaan dan
dalam pertahanan awal terhadap infeksi dan tumor. Sel-sel NK permukaan sel pengaktif ekspres
dan reseptor hambat yang memungkin kan mereka untuk mengenali dan membunuh sel yang
terinfeks iatau tumor dan cepat menghasilkan sitokin dan kemokin. Meningkatkan bukti
menegaskan peran imunomodulator penting dari sel NK.
PENDAHULUAN
Sel NK adalah komponen penting dari imunitas bawaan. Sel-sel NK membedakan antara sel
normal dan abnormal (seperti sel yang terinfeksi virus atau tumor) dengan menggunakan
repertoar reseptor permukaan sel yang mengontrol mereka fungsi aktivasi, proliferasi, dan
efektor strategi pengakuan canggih yang berbeda digunakan oleh sel NK.

Perbedaan fungsional substansial dan situs anatomi yang berbeda untuk sel NK. Selain itu, sel-
sel NK diketahui berinteraks idengan berbagai komponen seluler dari system kekebalan tubuh,
termasuk sel-sel dendritik (DC), makrofag, sel B, dan CD4 + dan CD8 + limfosit T.
Dengandemikian, sel NK memiliki potensi untuk berfungsi sebagai sel peraturan. Bahkan,
semakin banyak bukti menunjukkan bahwa sel-sel NK, selain peran mereka sebagai efektor
dalam kekebalan bawaan, dapat sangat berkontribusi pada pengembangan dan regulasi respon
imun adaptif .NK modulasi sel kekebalan adaptif sangat tergantung pada spesifik bagian yang
terlibat serta di situs mana interaksi terjadi. Yang penting, baik in vivo dan in vitro menunjukkan
bahwa sel-sel NK dapat mendorong atau menahan T diperantarai sel respon imun, tergantung
pada fisiologis dan / atau situasi patologis.

TUJUAN
Jurnal 1
Jurnal ini bertujuan untuk mengenali dan membunuh sel yang terinfeksi atau tumor dan cepat
menghasilkan sitokin dan kemokin. Untuk meningkatkan bukti peran imunomodulator penting
dari sel NK.
Jurnal 2
Jurnal ini bertujuan untuk menganalisis Gal-3 dalam sel NK manusia, yang diisolasi dari
mononuklear darah perifer sel.
Jurnal 3
Jurnal ini bertujuan untuk menunjukkan dasar genetik dari fenotip sel NK umur dan akan
menginformasikan studi mekanistik masa depan disfungsi sel NK selama penuaan.
Jurnal 4
Jurnal 5
Jurnal 6
Jurnal 7
Jurnal ini bertujuan untuk mengamati bahwa sel NK pada pasien yang lebih maju kanker tiroid
dan pasien ATC, dan disajikan target ditindak lanjuti untuk pengembangan masa depan
immunoterapi pada kanker tiroid.
Jurnal 8
Jurnal 9
Untuk menunjukkan kemungkinan penggunaan Hop asam pahit seperti imunostimulan alam dan
adjuvant dalam protocol kemoterapi.
Jurnal 10
Jurnal ini bertujuan untuk fungsi immunosurveillance terkompromikan dari sel NK terkait asma,
serta hubungan dengan program transkripsi disregulasi dalam energy metabolisme, dan
menjelaskan status kekebalan asma yang abnormal pasien. Intervensi mungkin diperlukan untuk
mengembalikan fungsi efektor fungsi sel NK pada pasien ini, mungkin dengan mengembangkan
teknik yang menargetkan gangguan metabolism faktor hadir pada pasien ini, seperti sitokin TGF-
β atau tipe-2.

PEMBAHASAN
Jurnal 1
Pada bagian pembahasan, penulis membagi menjadi sub pokok bahasan menjadi beberapa
bagian, yaitu :
1. Peraturan Sel NK T Responses Sel-Mediated Melalui Produksi Sitokin dan kemokin
Sel-sel NK dapat berkontribusi untuk mempertahankan homeostasis sistem kekebalan
tubuh dan mengatur respons imun adaptif melalui produksi sitokin dan kemokin. Sel-sel
NK mewakili sumber awal utama IFN- 𝛾 setelah infeksi virus, bakteri, dan protozoa, baik
pada tikus defisien sel konvensional maupun T.. Yang penting, beberapa penelitian in
vivo menunjukkan bahwa NK yang dipasok IFN- 𝛾 sangat penting untuk polarisasi T
helper 1 (Th1). Secara khusus, sel NK adalah komponen penting dalam resistensi
terhadap parasit protozoa Leishmania mayor dengan mempromosikan respons Th1 yang
bergantung pada IFN-𝛾. Dalam semua model ini, patogen dianggap mengaktifkan
produksi sitokin sel NK, terutama IFN- 𝛾, secara tidak langsung melalui induksi produksi
IL-12 oleh makrofag atau DC.

Sel-sel NK terutama terletak di sel T parafikuler dan Antigen Presenting Cell (APC) -
daerah kaya jaringan limfoid sekunder dicirikan oleh CD56high CD16 - fenotip permukaan
dan dapat dengan cepat menghasilkan sejumlah besar sitokin dan kemokin pada saat
aktivasi, tetapi menunjukkan kapasitas sitotoksik yang buruk [2]. Sebaliknya, sebagian
besar sel NK manusia yang bersirkulasi (sekitar 90%) dengan kepadatan permukaan
CD56 yang rendah dan level CD16 yang tinggi (CD56dimCD16bright) memiliki
kemampuan yang lebih rendah untuk memproduksi sitokin sebagai respons terhadap
aktivasi tetapi sangat sitotoksik. Sedangkan subset NK CD56brightCD16 kekurangan KIR.
Menariknya, hanya sel NK CD56 yang mengekspresikan penanda homing limfoid
sekunder seperti CCR7, CD62L, dan CXCR3. Studi terbaru menunjukkan bahwa dua
himpunan sel NK manusia mewakili tahap yang berbeda dari pematangan sekuensial,
dengan sel NK CD56dim berasal dari sel NK CD56 yang tinggi.

Meskipun CD56 tidak diekspresikan dalam hewan pengerat, subpopulasi sel NK mirip
dengan dua himpunan bagian sel NK manusia utama juga telah dijelaskan pada tikus. Sel-
sel NK CD11bhigh tikus termasuk himpunan bagian CD27high dan CD27 yang berbeda
dalam hal ekspresi reseptor penghambat sel NK, reseptor kemokin dan secara fungsional
berbeda: sel-sel CD27 sebagian besar ditemukan pada organ non-selfoid (darah, hati, dan
 paru-paru) dan produksi sitotoksik dan sitokinnya. Sel CD27high memiliki banyak fitur
yang mirip dengan sel CD56high.

Himpunan bagian sel NK manusia yang berbeda juga dapat menghasilkan sitokin tipe 1
(IFN- 𝛾 dan TNF-𝛼) dan tipe 2 (IL-5, IL-13, IL-10). Peran untuk IL-5 yang diproduksi
sel-NK dalam perekrutan eosinofil ke dalam paru-paru juga telah ditunjukkan dalam
model tikus peradangan alergi. Selain itu, sel NK telah dijelaskan untuk mengatur
tanggapan sel T CD4+ sebelum presentasi Ag melalui produksi IL-10 mereka. Selain IL-
10, sel NK juga merupakan sumber transformasi growth factor-𝛽 (TGF- 𝛽). Sel NK dapat
memengaruhi tidak hanya sifat respons imun yang dimediasi sel T tetapi juga rekrutmen
subset sel T tertentu.

2. NK Cell – DC Crosstalk
Semakin banyak bukti menunjukkan bahwa sel NK dan DC dapat diaktifkan secara
timbal balik selama respons imun [29] (Gbr. 1). Sel-sel NK terlibat langsung dalam
maturasi DC, yang merupakan langkah penting untuk induksi respons imun adaptif.

Gbr.1 Promosi sel NK dari respon imun sel T. Sel-sel NK diaktifkan oleh pengenalan
langsung sel-sel abnormal, oleh molekul-molekul yang dikodekan-patogen atau oleh IFN-
𝛼/ 𝛽 yang dihasilkan dari sel-sel yang terinfeksi virus. Pada gilirannya, DC matang
menghasilkan sitokin yang berbeda (IFN - 𝛼/𝛽, IL-12, IL18, IL-15) yang mampu
meningkatkan fungsi efektor sel NK.

Beberapa percobaan in vitro telah menunjukkan bahwa sel NK manusia yang diaktifkan
IL-2 dapat menginduksi maturasi DC dengan proses yang bergantung pada kontak sel-ke-
sel dan TNF 𝛼. Studi yang bertujuan mengidentifikasi reseptor yang terlibat dalam
sitotoksisitas yang dimediasi sel-NK dari DC imatur dan matur menunjukkan peran
penting pasangan reseptor NKp30 dan DNAM-1 / nectin-2. Selain itu, juga ligan untuk
reseptor sel NK lainnya dapat diinduksi pada DC seperti molekul MICA/B dan transkrip
seperti lektin-1 (LLT1), yang masing-masing berikatan dengan NKG2D dan NKRP1A.
Interaksi fungsional antara sel NK dan CD8 𝛼 + DC terjadi. Selain itu, sel NK diaktifkan
in vivo oleh sel tumor yang mengekspresikan level sangat rendah dari molekul MHC
kelas I.
3. Promosi Respons Imunitas yang Dimediasi Sel T
Banyak temuan yang tersedia dalam literatur menunjukkan bahwa sel NK dapat
membentuk respon imun adaptif sel T melalui mekanisme tidak langsung, yang
melibatkan sekresi sitokin atau kemokin atau aktivasi DC. Reseptor kostimulatori dapat
dibagi menjadi dua kelompok utama: reseptor yang termasuk dalam superfamili Ig
(seperti CD28 yang berikatan dengan CD80 dan CD86) dan reseptor keluarga nekrosis
faktor reseptor tumor (TNFR) (termasuk OX40 (CD134), 4-1BB) (CD137), dan CD27
yang masing-masing berikatan dengan OX40L, 4-1BBL, dan CD70). Secara khusus, IL-2
saja, ikatan silang dari berbagai reseptor sel NK yang aktif seperti NKp30, NKp46,
CD16, atau kultur sel NK dengan target yang rentan cukup untuk menginduksi ekspresi
CD86 pada sel NK manusia. Sebaliknya, induksi OX40L membutuhkan stimulasi yang
lebih kuat yang melibatkan baik sitokin IL-2 atau bawaan (i.e, IL-12, IL-15) dan ligasi
dari reseptor NK yang diaktifkan (i.e., CD16 atau NKG2D).
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa interaksi langsung antara NK dan sel T
mungkin juga melibatkan pasangan reseptor kostimulatori lainnya. Sel NK Murine secara
efisien dapat meningkatkan CD4+ serta proliferasi sel T CD8+ sebagai respons terhadap
pengikatan silang CD3 dan antigen spesifik melalui interaksi antara 2B4 pada sel NK dan
CD48 pada sel T. Menariknya, percobaan penipisan sel NK pada tikus telah
menunjukkan peran sel NK dalam generasi sel T sitotoksik spesifik-antigen (CTL).
Selanjutnya, penelitian yang dilakukan secara in vitro menunjukkan bahwa sel NK
diperlukan untuk diferensiasi efektor CTL yang kompeten dalam kultur limfosit
campuran.
Interaksi fungsional antara NK dan sel T yang dapat mempromosikan respon imun sel T
telah dijelaskan juga secara in vivo. Di sisi lain, sel NK juga dapat bertindak sebagai
modulator potensial sel T regulator (Treg); peningkatan jumlah dan aktivitas Treg sering
dikaitkan dengan penurunan aktivitas sel NK pada beberapa penyakit. Selama respon
imun terhadap infeksi Mycobacterium tuberculosis, sel Treg dapat mencegah
pembersihan patogen yang efisien pada tikus yang terinfeksi.
4. Downregulation of Immune Mediated Responses Sel
Regulasi negatif imunitas adaptif relevan untuk mempertahankan homeostasis limfosit
dan untuk mencegah aktivasi sel T yang tidak tepat yang pada akhirnya dapat
menyebabkan penyakit autoimun atau limfoproliferatif. Selain itu, penelitian pada model
hewan menunjukkan peran regulasi sel NK dalam inisiasi dan perkembangan gangguan
autoimun. Demikian juga, dalam model kolitis tikus in vivo, telah dilaporkan bahwa sel
NK menghambat sel efektor T CD4+ dengan mekanisme yang bergantung pada perforin,
menunjukkan bahwa sel NK dapat secara langsung melisiskan sel T atau beberapa sel
imun antara lainnya seperti DC [74] Selain itu, sel NK telah terbukti memiliki peran
protektif pada diabetes tipe I; pengobatan dengan adjuvan Freund (CFA) lengkap
mencegah diabetes pada tikus diabetes nonobese (NOD).
Sel NK dapat melemahkan respon imun adaptif sel T dengan beberapa mekanisme
termasuk membunuh DC dan / atau sel T teraktivasi dan sekresi sitokin penghambat.
Sehubungan dengan pembunuhan sel T yang dimediasi sel NK, telah ditunjukkan bahwa
sel NK tikus yang diaktivasi IL-2 mengenali dan melisiskan ledakan sel T syngeneic
dalam cara yang tergantung perforin melalui reseptor pengaktif NK NKG2D.
Menariknya, ekspresi ligan NKG2D (NKG2DLs) seperti MICA, ULBP-1, ULBP-2, dan
ULBP-3 pada sel T telah dilaporkan juga pada manusia.
Induksi NKG2DL pada limfosit T teraktivasi selama respons imun memungkinkan
pembentukan crosstalk dengan sel NK. Interaksi ini dapat memicu lisis sel T perforin
yang bergantung pada ekspresi NKG2DLs dan bertindak sebagai regulator negatif dari
respons sel T. Menariknya, peran perforin sebagai pengatur imun telah ditunjukkan.
Pasien defisiensi perforin menunjukkan kelainan limfoproliferatif dan pembunuhan yang
dimediasi perforin terlibat dalam menurunkan respons sel T in vivo, karena tikus yang
kekurangan perforin menunjukkan ekspansi besar sel T yang teraktivasi pada infeksi
virus limfositik koriomeningitis (LCMV). Selain itu, tikus yang kekurangan Fas dan
perforin memiliki percepatan dramatis penyakit limfoproliferatif spontan yang terlihat
pada tikus kekurangan Fas.
Selama transplantasi sel hematopoietik alogenik, sel T donor dalam graft dapat
memediasi penyakit graft-versus-host (GVHD) yang diprakarsai oleh tuan rumah DC
yang menyajikan aloantigen untuk sel T donor. GVHD telah disarankan untuk dicegah
melalui pembunuhan host DC oleh sel NK alloreaktif. Dapat dibayangkan, sel-sel NK ini
dapat membunuh sel T donor yang diaktifkan juga (mengekspresikan NKG2DLs),
sehingga memberikan mekanisme perlindungan tambahan dari efek buruk GVHD.
Singkatnya, sel NK dapat berkontribusi pada penekanan respon sel T dan untuk
pemeliharaan homeostasis limfosit T melalui penghapusan langsung sel T yang
diaktifkan dan sel penyajian antigen dan / atau pelepasan sitokin penghambat seperti
TGF- 𝛽 dan IL- 10 yang dapat menghambat maturasi DC atau aktivasi dan fungsi sel T
(Gbr. 2).
Gambar. 2 NK penghambatan respon imun sel T. Sel NK yang teraktivasi dapat menurunkan respons sel
T melalui sekresi TGF- 𝛽 dan IL-10 yang dapat memblokir pematangan DC dan / atau secara langsung
menghambat fungsi proliferasi dan efektor sel T. Sel-sel NK yang diaktifkan membunuh DC yang tidak
matang dan matang serta sel-sel T yang diaktifkan melalui berbagai reseptor pengaktif-sel-NK (NKG2D,
NKp30, DNAM).

Jurnal 2
Pada bagian pembahasan, penulis membagi menjadi sub pokok bahasan menjadi beberapa
bagian, yaitu :
Material and methods
1. Human NK cell degranulation assay
Degranulasi sel NK diukur seperti yang dijelaskan sebelumnya dengan menentukan
ekspresi CD107a, yang lisosom terkait membran protein-1 dalam ketiadaan / kehadiran
Gal-3 inhibitor berbasis thiodigalactoside. inhibitor ini adalah hadiah yang murah hati
oleh Prof. RolandJ. Pieters Untuk percobaan, solusi saham di 40% DMSO disiapkan dan
diencerkan dalam RPMI-1640 sebelum pengobatan sel sel NK tidak distimulasi /
dirangsang dengan IL-2 (100 U / ml) dan IL-15 (20 ng / ml), yang tidak diobati / dirawat
dengan meningkatnya konsentrasi (1 - 30 μ M) dari Gal-3 inhibitor selama 1 jam pada
37° C. Untuk menginduksi degranulasi sel NK, sel-sel diinkubasi dengan K562 sel (sel
target) pada effektor / rasio tumor sel 1: 1 selama 1 jam pada 37 ° C di hadapan anti-
CD107a-phycoerythrin ditambahkan dan sel diinkubasi selama 3 jam pada 37 ° C. Sel
dicuci, bernoda menggunakan FITC CD56 anti-manusia (NCAM) Antibodi, dan CD107a
ekspresi CD56 + sel dievaluasi oleh FACS Untuk mendeteksi spontan degranulasi sel
NK, kontrol negatif selalu termasuk, sementara untuk mengukur respon basal, sel NK
dirangsang hanya dengan IL-2 (100 U / ml) dan IL-15 (20 ng / ml) semua sampel kontrol
diobati dengan 0,1% DMSO.
Tabel 1
primer oligonukleotida digunakan untuk PCR dan real-time PCR.

Template primer

Galectin-3 maju 5 '- GCAGACAATTTTTCGCTCCATG-3 ''''

membalikkan 5 '- CTGTTGTTCTCATTGAAGCGTG-3 ''''

GAPDH maju 5 '- GGTCGGAGTCAACAACGGATTTGG-3 ''''

membalikkan 5 '- ACCACCCTGTTGCTGTAGCCA-3 ''''

S18 maju 5 '- TGCGAGTACTCAACACCAACA-3 ''''

membalikkan 5 '- CTGCTTTCCTCAACACCACA-3 ''''

 2. PCR and real-time PCR
RNA total diisolasi dari 5 × 10 5 / ml distimulasi / dirangsang NK, THP-1 (kontrol
positif) dan Jurkat (kontrol negatif) sel menggunakan RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden,
Jerman), sesuai dengan instruksi pabrik, dan terbalik ditranskripsi menjadi Cdna.
Untuk PCR amplifi kation, 3 μ L cDNA ditambahkan ke GoTaq Flexi DNA Polymerase
di 25 μ Reaksi L, yang mengandung 0,5 μ M dari maju dan mundur primer. ampli fi
produk kation divisualisasikan atas 1% gel agarosa, yang mengandung 1 μ g / ml
ethidium bromide.
Untuk real-time PCR, sampel cDNA sama-sama diencerkan untuk ampli PCR selanjutnya
fikation dengan Maxima SYBR Hijau qPCR Guru Mix (Fermentas, Milan, Italia) dan fi
Volume nal dari 20 μ L, yang berisi 1 μ L template cDNA, digunakan. Real-time analisis
PCR dilakukan dalam rangkap tiga untuk masing-masing sampel dalam sistem CFX96
Real-Time PCR (Bio Rad). Tingkat 18S RNA diukur dan digunakan untuk normalisasi
kelimpahan gen sasaran. urutan primer yang digunakan untuk PCR dan real-time PCR
tercantum dalam Tabel 1

(Gambar. 1). Gal-3 mRNA diekspresikan dalam sel NK manusia dan ekspresi dimodulasi oleh aktivasi sel. (A)
Gal-3 ekspresi mRNA yang dianalisis dengan PCR di NK dan THP-1 (kontrol positif) sel. Total diekstraksi
mRNA terbalik ditranskrip untuk cDNA dan Gal-3 cDNA ampli fi ed menggunakan gen-spesifik fi c primer
(lihat Tabel 1 ). Produk PCR dielektroforesis dalam 1% gel agarosa dan fragmen PCR berukuran
menggunakan 50 - 10.000 bp tangga. Ukuran fragmen yang diharapkan untuk Gal-3 adalah 500 bp. GAPDH
adalah ampli fi ed sebagai kontrol pemuatan dengan ukuran fragmen 1000 bp. (B) program Waktu Gal-3
ekspresi gen dalam sel NK diaktifkan diukur dengan real-time PCR. Jumlah mRNA diekstraksi dari sel NK
tidak distimulasi / dirangsang dengan IL-2 (100 U / ml) dan IL-15 (20 ng /ml) untuk 1 - 24 jam, dikonversi ke
cDNA, dan dianalisis denganreal-time PCR untuk Gal-3 ekspresi. Tingkat mRNA dinyatakan relatif terhadap
18S mRNA, dan nilai dari sel beristirahat ditetapkan pada 1. Hasil mewakili mean ± SEM dari setidaknya
enam percobaan independen. ** P ≤ Sel-sel NK tidak distimulasi 0,01 vs.

Result
3. Galectin-3 gene expression in human resting NK cells
Untuk menentukan apakah sel-sel manusia NK mengekspresikan gen yang Gal-3
kami fi pertama dilakukan penelitian PCR pada beristirahat sel NK. Manusia THP-1
 sel selalu diambil sebagai kontrol positif. Hasil kami jelas menunjukkan bahwa sel-
sel NK istirahat manusia mengekspresikan Gal-3 mRNA, seperti yang ditunjukkan
pada Gambar. 1 .
4. Galectin-3 protein in human activated NK cells
Kemudian, untuk menentukan apakah modulasi Gal-3 tingkat mRNA, diukur dalam sel
NK diaktifkan. Berkorelasi dengan perubahan pada tingkat protein, sel-sel yang sama
dianalisis oleh blot Barat. Total Gal-3 tingkat protein perkiraan selalu dinormalisasi
terhadap yang sesuai β- tingkat aktin dan dibandingkan dengan yang diukur dalam sel
yang beristirahat. Data ini menunjukkan bahwa setelah IL-2 dan IL-15 stimulasi sel NK
manusia dapat meningkatkan tingkat Gal-3 protein.
5. Galectin-3 functional studies in human NK cells
Toksisitas NK-cell terutama dimediasi oleh eksositosis vesikel sitosol, yang mengandung
perforin, granzyme, dan protein litik lainnya. Sejak Gal-3 ekspresi dapat diregulasi pada
stimulasi sitokin dan akumulasi dalam vesikel untuk menentukan apakah data ini
memiliki korelasi fungsional, respon sel NK dipelajari dengan tidak adanya / kehadiran
Gal-3 inhibitor berbasis thiodigalactoside (Kd = 44 nM) dalam uji degranulasi khas.
Sel NK tidak distimulasi mewakili sebagian kecil dari sel degranulating (gerbang putus-
putus); antara sel-sel ini hanya sebagian kecil melepaskan sejumlah besar butiran
(gerbang padat). Sitokin stimulasi diinduksi peningkatan degranulasi NK sel (gerbang
putus-putus) dan jumlah sel mengekspresikan tingkat tinggi CD107a (gerbang padat)
mengakibatkan lebih besar daripada di sel beristirahat.

Akhirnya, sejak Gal-3 inhibitor kami menggunakan telah mengikat FFI nity juga
untuk Gal-1 lektin dengan nilai-nilai yang sama Kd (49 vs. 44 nM). Menentukan
apakah sel-sel NK tidak distimulasi / dirangsang mengungkapkan Gal-1. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa sel-sel NK manusia tidak mengungkapkan Gal-1
protein setidaknya dalam kondisi eksperimental menunjukkan bahwa hasil yang
diperoleh terkait dengan Gal-3 penghambatan.

Data keseluruhan menunjukkan bahwa Gal-3 fungsional berkorelasi dengan degranulasi

sel NK.

6. Discussion
Dalam studi ini menunjukkan, untuk fi waktu pertama, bahwa: i) sel NK
peristirahatan manusia mengekspresikan Gal-3 di kedua gen dan protein tingkat; ii)
istirahat.
Sel-sel NK dapat mengekspresikan tingkat basal tinggi atau rendah dari Gal-3 protein,
tergantung pada donor individu dianalisis; iii) pada stimulasi sitokin, sel NK dapat
menerjemahkan basal Gal-3 mRNA menjadi protein; iv) Gal-3 melokalisasi di kedua
sitoplasma dan nukleus, sementara itu tidak terdeteksi pada permukaan membran sel,
baik dalam istirahat atau dirangsang sel; v) Gal-3 dapat terjadi dalam perforin di vesikula
 penghambatan peningkatan degranulasi sel NK.
Pada sel NK, khususnya, ekspresi Gal-1 telah dijelaskan pada trimester ketiga kehamilan
yang normal, Sedangkan Gal-3 masih harus diselidiki. Data literatur minim fokus hanya
pada pro fi les ekspresi gen dalam sel tikus NK Dan isolasi kontra-reseptor untuk Gal-3
dari jaringan dari murine utero-plasenta kompleks.
Beristirahat sel NK mengekspresikan Gal-3 di kedua mRNA dan tingkat protein dengan
ekspresi relatif sangat bervariasi, tergantung pada donor individu dianalisis. Secara
khusus,sel NK mengekspresikan rendah atau tinggi tingkat Gal-3 protein yang
mengidentifikasi fied. Menurut pendapat kami, ini bukan hasil yang mengejutkan karena
sel-sel NK adalah populasi yang sangat heterogen. Sel-sel ini tidak hanya secara kasar
dapat dikategorikan dalam dua himpunan bagian utama (CD56 redup dan CD56 terang),
berdasarkan di ff Tingkat ekspresi erent molekul CD56 permukaan, Tetapi mereka juga
dapat mengerahkan eff fungsi ektor melalui beragam mengaktifkan atau reseptor inhibis.
IL-2 dan IL-15 telah di sini digunakan untuk mengaktifkan sel NK, karena kedua sitokin
ini, lebih dari yang lainnya, yang terlibat dalam kelangsungan hidup sel dan fungsi
sitotoksik. Setelah stimulasi sitokin, tingkat intraseluler dari Gal-3 mRNA menghasilkan
significantly berkurang pada 1 - 6 jam, sementara itu kembali ke tingkat basal setelah 12 -
24 h. Dua kali lipat peningkatan dalam Gal-3 protein juga diukur setelah stimulasi sitokin
24 jam, dibandingkan dengan sel yang tidak distimulasi.
Jurnal 3
Pembunuh alami (NK) sel-sel bawaan limfoid di garis depan mengendalikan infeksi virus dan
menghilangkan pikun, nutrisi-kekurangan, dan sel-sel ganas. sel NK mengidentifikasi sel target
melalui spektrum yang beragam dari kedua mengaktifkan dan reseptor hambat, yang keterlibatan
gabungan mendikte aktivasi sel target sel NK dan membunuh.

Cacat pada NK pematangan sel dan fungsi peningkatan kerentanan terhadap infeksi bakteri virus
dan intraseluler dan telah dikaitkan dengan berbagai penyakit, termasuk beberapa penyakit auto
imun. Gangguan funsional fenotipik dalam sirkulasi sel NK juga fitur yang menonjol dari
penuaan. Disfungsi sel NK yang berkaitan dnga usia ditandai dengan penurunan ekspresi
reseptor mengaktifkan tertentu, gangguan pembunuhan karena sel sinyal berubah, dan berkurang
migrasi ke situs di inflamasi. Pada tikus berusia, mengurangi sitotoksisitas sel NK fenotip
dewasa lebih sedikit baik di sumsum tulang dan jaringan perifer. Cacat sel NK tampaknya
disebabkan sebagian untuk faktor eksternal: diubah sumsum tulang isyarat stroma dan
lingkungan non-hematopoietik pada usia tua.
Pada bagian pembahasan, penulis membagi menjadi sub pokok bahasan menjadi beberapa
bagian, yaitu :
Bahan bahan dan metode
1. Tikus
Dalam semua percobaan, tikus dewasa muda digunakan pada 2 - 4months usia dan umur
tikus yang digunakan di 18 - 20months usia, kecuali untuk Pohn / Deh, yang 21months usia
pada saat pengorbanan fi ce.
2. Persiapan sel dan fl ow cytometry
Limpa dipanen dan suspensi sel tunggal limfosit berasal. Brie fl y, limpa secara manual
dipisahkan melalui 70 μ m fi lter dengan plunger jarum suntik dan sel-sel darah merah
segaris dengan amonium klorida kalium (ACK). Sampel dari masing-masing individu juga
hidup / mati bernoda dengan terbukti> 99% yang layak. kompensasi fluoresensi yang
dilakukan menggunakan UltraComp eBeads bersama dengan dicemarkan dan fl uorescence-
minus satu.
3. Statistika
Semua analisa statistik dilakukan di R atau GraphPad Prism 7.01 dengan signi statistik fi
cance ditetapkan pada p < . 05. Nilai untuk masing masing variabel yang diubah untuk lebih
memenuhi asumsi untuk analisis varians (ANOVA). Jumlah limpa NK sel frekuensi yang fi
arcsine pertama dari akar kuadrat berubah. Frekuensi matan Untuk mengevaluasi asumsi
normalitas varians, QQ plot dievaluasi; dan untuk memverifikasi asumsi kesetaraan varians
kelompok bertemu, standar deviasi dari masing-masing kelompok dievaluasi dan Levene-
jenis tes Brown-Forsythe dilakukan untuk setiap variabel berubah. g, transisi, dewasa, dan
DN NK sel-sel akar kuadrat berubah. . Perbandingan muda dibandingkan sel data NK berusia
dilakukan dengan model linear ANOVA dan beberapa penyesuaian perbandingan Sidak ini
diterapkan posttest. Korelasi diuji menggunakan Pearson uji r korelasi dua ekor.

Gambar. 1. Mengalir strategi gating untuk populasi sel NK limpa. Strategi gating perwakilan untuk sel NK
limpa sebagai de fi ned oleh CD3 - CD19 - NKp46 + sel dan populasi sub kelompok berikutnya digambarkan
oleh CD11b dan CD27 ekspresi permukaan. gating sel tunggal untuk menghapus doublet tidak ditampilkan
Semua fenotipe sel NK limpa ditampilkan signi fi tidak bisa variabilitas di strain. Rata-rata total
limpa proporsi sel NK berkisar antara 0,5% (± 0,03% SEM) di BTBR tikus untuk 2,9% (± 0,4%)
di WSB galur liar yang diturunkan ( Gambar. 2 b). Mayoritas sel-sel NK ada dalam tahap belum
matang dan dewasa, dan WSB tikus dipamerkan proporsi tertinggi sel dewasa NK (67,3% ±
3.0%, dari jumlah sel NK limpa) dibandingkan dengan jenis lainnya - lebih dari 6 kali lipat lebih
tinggi dari Pohn (10,1% ± 0,7%; Gambar. 2 c). Tingginya persentase sel NK yang matang di
WSB tikus dipasangkan dengan rendahnya proporsi sel NK transisi (3,4% ± 0,4%; Gambar. 2 d).
Sebaliknya, CAST tikus yang terkandung persentase tertinggi sel transisional NK (61,0%),
outlier di antara strain dievaluasi. Proporsi tertinggi kedua sel NK transisi diperagakan oleh
129S1 tikus (22,1% ± 2,3%), dan median dari semua strain adalah 15,2%. Berarti belum matang
proporsi sel NK berkisar antara 12,0% (± 1,4%) menjadi 62,1% (± 2,7%) di WSB dan NZW
tikus, masing-masing ( Gambar. 2 e), sedangkan berarti proporsi sel DN NK berkisar antara
5,1% (± 1,9%) di BLK untuk 26,7% (± 4,7%) di A tikus ( Gambar. 2 f). NK galur sel frekuensi
tidak sesuai dengan murine pengelompokan pohon genetic.

Secara umum, tikus berusia cenderung terus terhadap total proporsi NK limpa yang lebih
rendah (rata-rata 1,4% pada tikus tua dibandingkan 2,1% di muda, Gambar. 3 b) dan

bawah proporsi sel dewasa NK (berarti 31,4% pada tikus tua dibandingkan 38,8% di
muda, Gambar. 3 c), dengan proporsi sel NK yang belum matang lebih tinggi (rata-rata
33,0% pada tikus tua dibandingkan 27,5% di muda, Gambar. 3 e) dibandingkan dengan
kontrol muda. Namun, pergeseran ini hanya statistik signi fi tidak bisa di B10 dan A tikus.
Meskipun penurunan sel NK limpa yang matang antara tikus B6 berusia (dibandingkan dengan
kontrol) tidak signi fi tidak bisa, karena itu dalam laporan sebelumnya, kami menemukan
bahwa tikus B6 berusia memiliki signi fi cantly proporsi yang lebih tinggi dari sel-sel NK
belum matang dan proporsi yang lebih rendah dari sel NK transisi dari kontrol muda (
Gambar. 3 d dane) ( Nair et al., 2015 ; Shehata et al., 2015 ). Selain itu, tikus B6 berusia
memiliki signi fi cantly proporsi yang lebih tinggi dari sel DN NK dari kontrol muda (
Gambar. 3 f). Mirip dengan tikus B6, tikus Pohn berusia memiliki signi fi proporsi cantly lebih
rendah dari proporsi transisi dan lebih tinggi dari sel DN NK dari kontrol muda ( Gambar. 3 d
dan f).
Jurnal 4
1. Bahan-bahan dan metode-metode
 Tikus dan sel-sel
C57BL6 / J tikus yang dibeli dari OrientBio (Sungnam, Gyunggi, Korea) dan CXCR3 - / -
tikus (B6; 129P2-CXCR3 tm1Dgen / J) dari Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA).
Semua tikus (6 - 10weeks usia) yang ditempatkan di bawah tertentu fi kondisi c bebas
patogen pada 21 - 24 ° C dan 40 - 60% kelembaban relatif di bawah 12 h cahaya / siklus
gelap dan digunakan sesuai dengan pedoman dari Perawatan dan Penggunaan Komite
Kelembagaan Hewan Chungbuk National University. Sel-sel NK diisolasi dari sel tikus
limpa oleh seleksi negatif menggunakan kit NK isolasi (Miltenyi Biotec, Auburn, CA,
USA). Puri fi Sel ed NK dikultur secara lengkap RPMI 1640 medium dengan 3000 U / ml
rekombinan manusia IL-2 (Bayer HealthCare Pharmaceuticals, Emeryville, CA, USA),
10% serum janin sapi, 2mm L- glutamin, 100 U / ml penisilin, 100 μ g / ml streptomisin,
dan 50 μ M 2-mercaptoethanol. Proliferasi sel dan kelangsungan hidup ditentukan oleh
penghitungan sel dalam hemositometer dan tripan uji eksklusi biru. kemurnian sel
melebihi 90%. sel NK IL-2-diaktifkan digunakan dari hari 10 ke12.
2. Hasil
Mengingat pentingnya kemokin dalam migrasi sel, kami pertama meneliti ekspresi reseptor
kemokin di NK sel dan kemokin produksi oleh sel-sel kanker. Sel-sel NK diaktifkan
menyatakan CCR2, CCR5, dan CXCR3, tapi reseptor kemokin tidak lain ( Gambar. 1
SEBUAH). Meskipun sel-sel B16F10 naif sangat sedikit diproduksi CXCL10, IFN- γ-
diperlakukan B16F10 (IFN-B16) sel sangat disajikan CXCL10 ( Gambar. 1 B, C, dan D).
Konsentrasi CXCL10 diproduksi oleh B16F10 sel adalah 153 ng / ml dan yang oleh sel IFN-
B16 adalah 2609 ng / ml (17 kali lipat). IFN- γ peningkatan produksi CXCL10 oleh B16F10
sel dengan cara yang tergantung dosis ( Gambar. 1 E) dan ditingkatkan STAT1 fosforilasi di
doseand sopan santun tergantung waktu ( Gambar. 1 F dan G). Kami juga memeriksa e ff dll
dari IFN- γ pada beberapa baris sel kanker. IFN- γ pada 100 U / ml peningkatan ekspresi gen
dan produksi protein dari CXCL10 oleh Hepa1c1c7 (hepatoma), dan Colon 26 sel (kanker
usus besar), tetapi tidak oleh MC57G ( fi brosarcoma) ( Gambar. 1 H). Data ini menunjukkan
bahwa IFN- γ meningkatkan produksi CXCL10 oleh sel-sel kanker dalam sel line-spesifik fi c
cara. Akhirat, kita meneliti peran CXCL10 B16F10 yang diturunkan dalam migrasi sel NK
dalam rincian yang lebih besar.
Gambar. 2. Fenotip dan sitotoksisitas dari CXCR3 - / - sel NK. ( SEBUAH) Sel-sel NK diisolasi
dari limpa dari WT dan CXCR3 - / - tikus dan berbudaya dengan 3000 U / ml IL-2 selama 12 hari.
proliferasi sel NK dan kelangsungan hidup ditentukan dengan menggunakan hemositometer dan
tripan pewarna biru pengecualian assay. (B) Fenotipe sel NK ( n = 5). (C) The sitotoksisitas sel
NK terhadap sel B16F10 dinilai dengan alat tes LDH (n = 5). (D) Tingkat mRNA dari perforin,
granzim A / B, dan FasL ditentukan dengan RT-PCR ( n = 3). tingkat (E) intraseluler dari
perforin dan granzim B ditentukan oleh cytometry (n = 3).
Berikutnya, kita meneliti peran CXCR3 yang - CXCL10 sumbu dalam migrasi sel NK
terhadap IFN-B16 sel dengan menggunakan CXCR3 - / - sel NK. Proliferasi dan
kelangsungan hidup CXCR3 - / - Sel NK adalah serupa dengan sel WT NK ( Gambar. 2
SEBUAH). Fenotip CXCR3 - / - sel NK (NK1.1, DNAM-1, NKG2D, dan CD69) juga mirip
dengan sel WT NK ( Gambar. 2 B). Sitotoksik potensi CXCR3 - / - sel NK ( Gambar. 2 C)
dan gen ( Gambar. 2 D) dan protein ( Gambar. 2 E) ekspresi perforin dan granzim B yang
mirip dengan sel-sel WT NK. Data ini menunjukkan bahwa CXCR3 de fi siensi tidak
seorang ff fenotip sel dll NK dan fungsi, seperti proliferasi dan sitotoksisitas.
Sel-sel WT NK menyatakan CCR2, CCR5, dan CXCR3, tapi CXCR3 - / - Sel-sel NK
melakukan hanya CCR2 dan CCR5, seperti yang diharapkan ( Gambar. 3 SEBUAH).
Dalam uji Transwell, CXCR3 -/- Sel-sel NK tidak bermigrasi ke CXCL10, meskipun
mereka menanggapi biasanya untuk CCL2 dan CCL5 ( Gambar. 3 B). Sebaliknya, sel-sel
WT NK bermigrasi dengan baik untuk semua tiga kemokin ( Gambar. 3 B). Seperti
tercantum dalam Gambar. 1 . sel IFN-B16 yang sangat menghasilkan CXCL10, yang akan
mengakibatkan akumulasi dalam medium kultur. menengah AC ini sudah cukup untuk
menginduksi migrasi sel WT NK, tapi tidak dari CXCR3 - / - sel NK ( Gambar. 3 C).
Sebaliknya, sel-sel WT NK tidak bermigrasi ke media dikondisikan sel IFN-B16, yang pra-
perawatan dengan antiCXCL10 menetralkan antibodi ( Gambar. 3 D). Dan sel-sel WT NK
pra-diobati dengan anti-CXCR3 memblokir antibodi tidak bermigrasi ke media AC (
Gambar. 3 D). Sel-sel NK tidak bermigrasi ke media dikondisikan sel IFN-B16 transfected
 dengan CXCL10 siRNA ( Gambar. 3 E). Sel-sel WT NK juga bermigrasi dengan baik
untuk media AC dari IFN- γ- diperlakukan Hepa1c1c7 atau Colon 26 sel, tetapi tidak
dengan sel MC57G ( Gambar. 3 F), seperti yang diharapkan di Gambar. 1 H. Secara
keseluruhan, data ini menunjukkan bahwa CXCL10 diproduksi oleh sel-sel kanker
mungkin kemokin penting untuk menginduksi migrasi sel NK.
3. Diskusi
Penelitian ini dirancang dengan ruang lingkup yang sangat sempit: untuk memeriksa
peran CXCL10 yang - CXCR3 sumbu dalam migrasi sel NK terhadap sel-sel kanker.
Untuk mengatasi masalah ini, kita dimuat CXCR3 - / - Sel-sel NK sebagai faktor sel dan
sel B16F10 CXCL10-memproduksi sel-sel target dalam piring pencitraan khusus dan
diperiksa perilaku sel NK dengan menggunakan selang waktu pencitraan. Penelitian kami
menyediakan beberapa wawasan ke dalam mekanisme migrasi sel NK terhadap sel kanker: (i)
meskipun sel NK mengungkapkan setidaknya tiga reseptor kemokin (CCR2, CCR5, dan
CXCR3), hanya CXCR3 yang terlibat dalam migrasi mereka terhadap sel kanker; (Ii)
meskipun B16F10 sel melanoma hanya memproduksi rendahnya tingkat kemokin, mereka
sangat menghasilkan tingkat tinggi CXCL10 pada IFN- γ pengobatan; (Iii) CXCL10
meningkatkan directionality migrasi dan kecepatan sel NK; (Iv) CXCL10 meningkatkan
sitotoksisitas kontak tergantung dari sel NK; tapi (v) CXCL10 tidak meningkatkan tingkat
senjata sitotoksik seperti perforin dan granzyme. Kami juga menunjukkan bahwa IFN- γ akan
mengaktifkan sel-sel kanker untuk menghasilkan dalam spesifik sel-line fi c cara. Secara
kolektif, data kami menunjukkan bagaimana sel NK fi sel kanker nd dalam tumor padat.
Jurnal 5
Jurnal 6
Sel NK adalah limfosit sitotoksik dari sistem kekebalan tubuh bawaan dan memainkan
peran kunci dalam imunitas anti-tumor dan imunosurveilans termasuk produksi sitokin dan
kemokin yang memediasi respon imun anti-tumor. Menariknya, berbagai penelitian
menunjukkan sitotoksisitas alami sel NK perifer secara signifikan lebih rendah pada pasien
dengan berbagai jenis tumor padat dibandingkan orang sehat. Beberapa penelitian
menemukan hubungan antara sel-sel NK dan berbagai tahap PC. Di antara pasien dengan PC
metastatik, yang lebih besar ex-vivo NK sitotoksisitas sel PC berkorelasi dengan waktu lebih
lama untuk ketahanan pengebirian dan kelangsungan hidup.
1. Bahan-bahan dan metode-metode
 Studi desain dan peserta
Setelah mendapat persetujuan Institutional Review Board, pria bawah- akan jarum
prostat biopsi untuk PSA tinggi dan / atau abnormal di- pemeriksaan dubur gital (DRE)
antara Oktober 2015 dan Juli 2016 di Durham Veterans Affairs Sistem Perawatan
Kesehatan direkrut untuk berpartisipasi dalam studi yang sedang berlangsung. Pria
setidaknya 18 tahun dan memiliki tes PSA dalam waktu 12 bulan sebelum pendaftaran.
100 pasien direkrut untuk studi ini, kami dikecualikan 3 mata pelajaran informasi
pada ras, 2 data yang hilang pada volume prostat, dan 1 pasien yang memiliki biopsi
 positif sebelum dan surveilans aktif, meninggalkan 94 pasien untuk analisis hilang.
Semua orang menandatangani formulir informed consent tertulis.
 Metode tes
Darah dikumpulkan sebelum biopsi jarum dan NKA di seluruh darah perifer dievaluasi
dengan menggunakan uji NKA (NK Vue ™, ATGen) sesuai petunjuk produsen dan
seperti yang dijelaskan dalam Barkin et al. nilai NKA diekspresikan dalam pg / mL
interferon-gamma dilepaskan oleh sel NK diaktifkan. Nilai-nilai luar ujung atas kurva
standar dicatat sebagai nilai-nilai 1000 pg / mL. PSA diukur oleh Durham VAHCS
sebagai bagian dari standar perawatan
 Patologi
Jaringan biopsi dinilai oleh ahli patologi per standar perawatan dan PC kelas itu
disarikan dari laporan patologi yang dihasilkan. Kelas ditugaskan menggunakan
sistem lima kelas kelompok mana penyakit ringan didefinisikan sebagai kelompok
kelas (GG) 1 (skor Gleason ≤6) dan kanker prostat bermutu tinggi sebagai GG 2-5
(skor Gleason ≥7).
 Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan SAS 9.4 (SAS Institute, Inc, Cary,
NC). Data kontinyu digambarkan sebagai median (kisaran kuartil antar, IQR). variabel
kategori disajikan sebagai quencies fre- dan persentase. Statistik signifikansi
ditetapkan untuk a = 0,05. karakteristik pasien yang dirangkum dan dibandingkan
antara individu dengan NKA <200 pg / mL vs ≥200 pg / mL menggunakan Wilcoxon
tes untuk variabel kontinyu dan uji chi-squared untuk variabel gorical-kategori.
Analisis yang dinilai apakah NKA diprediksi PC dan apakah NKA menambahkan
informasi ke apa yang sudah diketahui menggunakan variabel klinis standar. Kami
menguji kinerja diagnostik 3 model untuk memprediksi PC dan bermutu tinggi PC:
(1) NKA saja (con tinuous), (2) model dasar faktor dan deteksi risiko tindakan
didirikan termasuk usia, PSA, ras, Volume prostat , dan temuan DRE, dan (3) model
dasar + NKA (terus menerus). PSA dan prostat volume yang sedang log-berubah
sebelum analisis, ras diberi kode sebagai hitam vs non hitam, dan DRE diberi kode
seperti biasa vs abnormal. kinerja tes diagnostik model dinilai menggunakan
Karakteristik Receiver Operating (ROC) analisis kurva dan area di bawah kurva
(AUC). analisis hasil tes (sensitivitas, spesifisitas, nilai prediksi tive positif dan nega-)
dihitung pada ditetapkan sebelumnya nilai cut-off dari 200 pg / mL. Univariat dan
multivariat logistik model gression kembali digunakan untuk menilai hubungan antara
tingkat NKA (terus menerus dan kategoris) dan PC dan PC bermutu tinggi. model
multivariabel disesuaikan untuk variabel-variabel yang dijelaskan dalam model dasar
di atas. Dalam analisis subkelompok, analisis multivariabel diulang pada pria dengan
DRE yang normal untuk menilai kinerja NKA dalam kelompok ini sebagai laki-laki
dengan DRE yang abnormal sering disebut biopsi berapapun kembali dari kadar
serum biomarker
 2. Hasil
 karakteristik dasar
Sebuah deskripsi karakteristik dasar dari pasien dengan NKA <200 dan ≥200 pg /
mL ditunjukkan pada Tabel 1 . Di antara semua pasien, median (IQR) usia kohort
adalah 67 (62-69) dan 68% dari pasien berkulit hitam. Median (IQR) PSA adalah
6,0 (4,9-8,3) dan 41% dari pasien memiliki DRE abnormal. karakteristik pasien
adalah serupa antara pasien dengan NKA <200 dan ≥200 pg / mL, kecuali ada
proporsi yang lebih tinggi dari laki-laki yang didiagnosis dengan PC pada biopsi di
NKA <200 pg kelompok / mL (84% vs 59%, p = 0,026 ). Enam puluh dua mata
pelajaran memiliki PC, dan 32 tidak. Pasien yang didiagnosis dengan PC, 37 (60%)
memiliki PC bermutu tinggi.
 kinerja uji diagnostik uji NKA
Pada analisis multivariabel, setiap 100 pg / mL penurunan NKA dikaitkan dengan
1,16 kali peningkatan kemungkinan diagnosis PC (OR 1,16, 95% CI 1,01-1,32, p =
0.031; Meja 2 ). Ketika NKA itu dichotomized pada 200 pg / mL, pasien dengan
NKA <200 pg / mL memiliki 4,89 kali peningkatan kemungkinan diagnosis PC
dibandingkan dengan pasien dengan NKA≥200 pg / mL (OR 4,89, 95% CI 1,34-
17,8, p = 0,016). Asosiasi antara NKA dan PC bermutu tinggi cenderung lebih lemah
pada kedua analisis variabel univariat dan multi. Menggunakan analisis ROC,
optimal cut-off dalam data kami dihitung pada nilai 218 pg / mL, sangat dekat
dengan yang telah ditetapkan 200 pg / mL. Menggunakan <200 pg / mL sebagai
menunjukkan tes positif, kinerja uji assay NKA menunjukkan spesifisitas 88%, nilai
prediksi positif 84%, sensitivitas 34%, dan nilai prediksi negatif 41% untuk
diagnosis PC ( tabel 3 ). Ketika PC bermutu tinggi diperlakukan sebagai hasilnya, uji
NKA menunjukkan spesifisitas 77%, nilai prediksi positif 48%, sensitivitas 32%, dan
negatif prediksi nilai 64%. AUC untuk NKA sendiri memprediksi PC adalah 0,61.
AUC dari model dasar fitur klinis dan demografis adalah 0,76, yang pun semakin
meningkat 0,79 ketika NKA ditambahkan ke model dasar ( tabel 4 ), ROC
Tabel 1
Karakteristik dasar dikelompokkan
berdasarkan nilai-nilai NKA.

NKA <200 pg / mL (N = NKA≥200 pg / mL (N = Jumlah (N = 94) p value

25) 69)

Usia 0,536
Sebuah
rata-rata 68 67 67
Q1, Q3 62, 69 63, 69 62, 69
Ras 0,136 b
Non-hitam 5 (20%) 25 (36%) 30 (32%)
Hitam 20 (80%) 44 (64%) 64
(68 0,860 b
dubur digital
%)
Tidak mencurigakan untuk 15 (60%) 40 (58%)
kanker
55
 (59
%)

Mencurigakan untuk kanker 10 (40%) 29 (42%) 39 (41%)

Volume prostat TRUS (cc) 0,908
rata-rata 42 Sebuah
41 42
Q1, Q3 29, 56 30,6, 56 30, 56
PSA 0,449
Sebuah
rata-rata 5.4 6.2 6.0
Q1, 4.7, 7.2 5.0, 8.7 4.9,
Q3 8.3 0.026 b
hasil 4 (16%) 28 (41%)
biopsi 32
Tidak ada kanker (34
%)
Kanke 21 (84%) 41 (59%) 62
r (66 0,771 b
kelom %)
9 (43%) 16 (39%)
pok
kelas 25
1 (40
%)
2-5 12 (57%) 25 (61%) 37 (60%)
nilai NKA (pg / mL)
rata-rata 62 1000 650
Q1, Q3 26, 138 526, 1000 177, 1000

NKA: NK aktivitas sel uji, Q: kuartil, TRUS: USG transurethral, PSA: prostate-specific
antigen.
3. Diskusi
Inflamasi sistemik telah dilaporkan berhubungan dengan diagnosis PC dan perkembangan,
Namun beberapa studi tentang sistemik PC: kanker prostat. penanda inflamasi dan PC
dilakukan pada penyakit tahap awal. Selain itu, hanya tiga penelitian sebelumnya
dianalisis aktivitas sel NK untuk nilai prediktif pada diagnosis PC, Dengan hasil yang
bertentangan. Kami berusaha untuk menguji apakah aktivitas sel NK berkorelasi
dengan PC di biopsi menggunakan yang sama in vitro perangkat diagnostik yang
digunakan dalam dua studi yang saling bertentangan [ 18 . 19 ]. Kami menemukan
nilai NKA lebih rendah dikaitkan dengan risiko yang lebih tinggi dari PC di biopsi,
mengkonfirmasikan data yang dilaporkan oleh studi percontohan. Dengan demikian,
penelitian kami menegaskan penggunaan perangkat untuk mengukur NKA dengan
sederhana in vitro Tes sebagai biomarker tambahan untuk memprediksi risiko PC
pada pria yang menjalani biopsi. Selain itu, studi ini menegaskan

Hubungan antara nilai NKA (sebagai variabel kontinu dan kategorikal) dan kanker prostat atau bermutu tinggi diagnosis kanker prostat.

PC vs tidak ada PC -Grade tinggi PC vs kelas

rendah atau tidak ada PC

OR (95% CI) p-value OR (95% CI) p-value

model univariat
nilai NKA (terus menerus) ** 1.11 (0,99-1,25) 0,069 1,05 (0,95-1,17) 0,358
 nilai NKA (<200 vs.≥200 pg / mL) 3.59 (1,10-11,6) 0,033 1,63 (0,64-4,10) 0,304

model multivariabel *
nilai NKA (terus menerus) ** 1,16 (1,01-1,32) 0.031 1.11 0.115
(0,98-
1,26)
nilai NKA (<200 vs.≥200 pg / mL) 4,89 (1,34-17,8) 0,016 2,51 0,095
(0,85-
7,40)

* Disesuaikan dengan usia, ras, PSA, Volume prostat, dan temuan DRE.

* * Dimodelkan per 100 pg / mL penurunan nilai NKA.

hubungan antara aktivitas NK dan PC lanjut mendukung hubungan antara fungsi

kekebalan tubuh dan PC. Selain itu, meskipun kami un- didukung untuk mendeteksi
perbedaan ras, mengingat kelompok kami adalah pra dominan hitam, hasil kami
menunjukkan uji NKA bekerja tanpa memandang ras, meskipun penelitian yang lebih
besar untuk mengkonfirmasi hal ini diperlukan.
Hasil kami setuju dengan pilot studi sebelumnya dari 43 pria Kanada yang menjalani
biopsi prostat, yang ditemukan nilai-nilai NKA <200 pg / mL dikaitkan dengan risiko
86% dari biopsi prostat positif, menggunakan assay yang sama. Di antara 94 orang yang
menjalani biopsi prostat dalam penelitian kami, dan setelah memperhitungkan usia, ras,
PSA, Volume prostat, dan temuan DRE, nilai NKA lebih rendah (NKA <200 pg / mL vs
≥200 pg / mL) dikaitkan dengan risiko lebih tinggi secara signifikan dari PC di biopsi
(OR: 4,89, 95% CI 1,34-17,8, p = 0,016). Hasil ini menunjukkan bahwa NKA in vitro
perangkat dapat digunakan sebagai alat penilaian risiko untuk memperkirakan
probabilitas biopsi prostat positif. Meskipun peningkatan secara keseluruhan dalam AUC
ketika NKA ditambahkan ke model adalah sederhana (0,76-0,79), yang bisa disebabkan
kohort berisiko tinggi yang digunakan dalam penelitian ini, fakta bahwa nilai prediksi
meningkat cukup menjanjikan. Studi lebih lanjut diperlukan untuk menentukan optimal
cut-off dan populasi pasien yang ideal. Selanjutnya, mengingat bahwa mayoritas pasien
kami yang hitam, data kami menunjukkan perangkat NKA bekerja dengan baik pada
laki-laki hitam, yang merupakan temuan penting mengingat bahwa itu hanya diuji pada
pria kulit putih atau Asia sebelum. Dengan demikian, studi terbatas tanggal nyarankan-
gest perangkat NKA bekerja tanpa memandang ras, meskipun penelitian yang lebih
besar untuk mengkonfirmasi hal ini diperlukan.
Jurnal 7
Pada bagian pembahasan, penulis membagi menjadi sub pokok bahasan menjadi beberapa
bagian, yaitu :
Methods
1. Subyek penelitian
Dua puluh enam kontrol sehat, dua puluh enam pasien kanker tiroid pada tahap I dan
II, enam belas pasien kanker tiroid pada tahap III dan IV, dan delapan pasien kanker
 tiroid anaplastik direkrut dalam penelitian ini. Diagnosis dan pementasan kanker
tiroid didasarkan pada pemeriksaan fisik, tes darah, ujian ultrasound, dan CT scan,
dan confirmed oleh biopsi. sampel darah perifer diperoleh dari semua mata pelajaran
selama diagnosis dan sebelum perawatan. Semua mata pelajaran harus memenuhi
kriteria berikut sebelum perekrutan, termasuk memberikan persetujuan tertulis
diinformasikan, usia antara 18 dan 65 tahun, tidak ada riwayat keganasan, dan tidak
menghadirkan penyakit autoimun yang sedang berlangsung dan infeksi virus akut
atau kronis. Semua kelompok mata pelajaran yang cocok di usia dan jenis kelamin.
Etika komite di Rumah Sakit Taizhou Rakyat menyetujui semua prosedur penelitian.
2. Sample
Sel mononuklear darah perifer (PBMC) diperoleh dari sampel darah perifer segar
melalui metode gradien sentrifugasi standar menggunakan Ficoll-Hypaque solusi
(Sigma). Sel-sel NK Jumlah dipanen melalui seleksi negatif magnetik
menggunakan EasySep Manusia NK Sel Pengayaan Kit (stemcell), dengan
kemurnian konsisten> 95% sebagai confirmed oleh flow cytometry dengan sel NK
terjaga keamanannya sebagai CD3 - CD19 - CD56 + limfosit.Untuk beberapa
penelitian, sel NK terisolasi lanjut difraksinasi berdasarkan CD56 dan CD16 ekspresi
menggunakan flow cytometry penyortiran. CAL-62 dan K562 garis sel manusia yang
dibeli dari Amerika Type Culture Collection. Untuk penyimpanan jangka panjang,
PBMC dipertahankan dalam 90% DMSO (Sigma) di bawah- 150 ° C.
3. Statistika
The GraphPad PRISM 6.0 software yang digunakan untuk semua uji statistik. sampel
berpasangan diperiksa menggunakan ANOVA 1 arah diikuti oleh beberapa
perbandingan Tukey atau 2-way ANOVA diikuti oleh beberapa perbandingan Sidak
ini,dan sampel berpasangan diperiksa menggunakan tindakan berulang (RM)
ANOVA, sebagaimana tercantum fi ed di fi legenda angka p < 0,05 diperlukan untuk
signi statistik ficance.
4. Hasil
Untuk mengetahui karakteristik sel NK, kami merekrut pasien kanker tiroid dengan
berbagai subtipe dan tingkat keparahan, termasuk delapan mata pelajaran dengan
kanker anaplastik tiroid (ATC), dua puluh enam subyek dengan nonATC papiler dan
kanker tiroid folikel pada tahap I dan II (nonATC I / II), dan enam belas subyek
dengan non ATC-papiler dan kanker tiroid folikel pada tahap III dan IV (non-ATC
III / IV). Dua puluh enam usia dan jenis kelamin dicocokkan individu sehat direkrut
sebagai control. Sel-sel NK beredar (CD3 - CD19 - CD56 + limfosit) dikumpulkan
dan phenotyped di flow cytometry. CD56 Hi CD16 hi / lo NK bagian adalah
significantly meningkat, bersama-sama dengan frekuensi yang lebih rendah dari
CD56 lo CD16 Hai sel NK. Kecenderungan ini diperburuk pada pasien ATC.
 CD56 Hai CD16 lo / hi dan CD56 lo CD16 Hi Sel-sel NK ditampilkan set khas penanda
permukaan
Molekul-molekul KIR mengakui MHC kelas I molekul sebagai “ diri ” dan
menghambat aktivasi membunuh fungsi dalam sel NK. Kami memeriksa ekspresi
dua anggota keluarga KIR, CD158a dan CD158b, di CD56 Hi CD16 hi / lo dan
CD56 lo CD16 Hi sel NK . Dibandingkan dengan CD56 yang lo CD16 Hi sel NK,
CD56 yang Hi CD16 hi / lo Sel-sel NK menunjukkan signi fi cantly ekspresi yang
lebih tinggi dari CD158a dan CD158b . Hal ini diamati pada individu yang sehat
serta pasien non-ATC pada berbagai tahap dan pasien ATC, dengan tidak ada
signifikan tidak bisa di selisih antara kontrol dan pasien dan di antara kelompok
pasien. Ekspresi CD314 (NKG2D), bagaimanapun, adalah lebih rendah di CD56
Hi
CD16 hi / lo sel NK dari di CD56 lo CD16 Hi sel NK, tanpa signifikan tidak bisa di
perbedaan-perbedaan antara kontrol sehat dan non-ATC dan pasien ATC.
 CD56 Hi CD16 lo / hi Sel-sel NK disajikan secara signifikan mengurangi fungsi
efektor dari CD56 lo CD16 Hi sel NK
Kapasitas sel NK untuk menengahi sitotoksisitas. Garis sel ATC manusia CAL-62
digunakan sebagai sel target, dan coincubated dengan CD56 diurutkan Hi CD16 hi /
lo
dan CD56 lo CD16 Hi sel NK dari kontrol sehat, non-ATC I / pasien II, non
ATC-III / IV pasien, dan pasienATC pada 0,5 / 1, 1/1, dan 2/1 rasio efektor /
target. spesifik yang di signifikan c lisis CAL-62 sel dimediasi oleh sel-sel NK
dievaluasi.
Gambar. 1. Frekuensi CD56 Hi CD16 lo /hi dan CD56 lo CD16 0i sel NK dalam kontrol yang sehat dan pasien kanker
tiroid. gating perwakilan dari CD56 Hi CD16 lo /hi dan CD56 lo CD16 Hai sel NK yang sehat, non-ATC I / II, non-
ATC III / IV, dan pasien ATC ditampilkan dalam (A), dengan satu subjek perwakilan dari masing-masing
kelompok. Data yang ditampilkan adalah pra-dipilih di CD3 hidup - CD19 - CD56 + limfosit. Nomor mewakili
nilai persentase dari gerbang total kejadian. Frekuensi CD56 Hi CD16 lo /hi sel NK dalam semua sehat (N = 26), non-
ATC I / II (N = 26), non-ATC III / IV (N = 16), dan ATC (N = 8) pasien ditunjukkan pada (B),sementara frekuensi
CD56 Hi CD16 lo /hi sel NK ditampilkan dalam (C). Data di (B) dan (C) yang diperiksa dengan menggunakan 1-way
ANOVA diikuti oleh beberapa perbandingan Tukey. ns, tidak signi fi tidak bisa. p< 0,001.

Gambar. 2. Ekspresi CD158a, CD158b, dan CD314 dengan CD56 Hi CD16 lo //hi dan CD56 lo CD16 Hi sel NK dalam
kontrol yang sehat dan pasien kanker tiroid. Perwakilan CD158a, CD158b, dan CD314 ekspresi oleh CD56 Hi
CD16 lo //hi sel NK (hitam solid), CD56 lo CD16 Hai sel NK (hitam dasbor), dan kontrol isotipe (abu-abu) dalam
satu perwakilan ATC pasien ditunjukkan pada (A). mean fl Intensitas uorescence (LKM) dari (B) CD158a, (C)
CD158b, dan (D) CD314 ekspresi oleh CD56 Hi CD16 lo //hi sel NK dan CD56 lo CD16 Hai sel NK dari semua
sehat (N = 26), non-ATC I / II (N = 26), non-ATC III / IV (N = 16), dan ATC (N = 8) pasien direpresentasikan
sebagai mean ± SD. Data di (B) ke (D) diperiksa menggunakan 2-way ANOVA diikuti oleh beberapa
perbandingan Sidak ini. *** p < 0,001. ** p < 0.01. * p < 0.05.
5. Diskusi
The papiler umum dan tiroid folikular kanker pada tahap I dan II menyajikan tingkat
ketahanan hidup 5 tahun tinggi di dekat 100%; Namun, tingkat kelangsungan hidup
ini turun signifikan fi cantly untuk pasien pada tahap III dan IV, dan sangat rendah di
7 sampai 14% untuk pasien ATC. Investigasi kami menemukan bahwa bagian dari
alasan yang mendasari mungkin dikaitkan dengan NK cellrelated disfungsi, ditandai
dengan pengayaan CD56 kurang fungsional Hi CD16 hi / lo sel NK dan downregulation
dari NK sel-dimediasi sitotoksisitas pada pasien dengan lebih kanker tiroid maju dan
pasien ATC. Kami juga menunjukkan bahwa PD-1 dan Tim-3 pemblokiran secara
efektif dapat meningkatkan fungsi NK pada pasien ATC. Bersama-sama, hasil ini
menunjukkan bahwa strategi PD-1 dan Tim-3 blocking bisa berfungsi melalui
meningkatkan sitotoksisitas sel NK, dan sel NK mungkin target potensial
pengobatan pada kanker tiroid maju dan ATC..
Telah diamati bahwa CD56 yang Hi CD16 - Sel-sel NK memiliki telomere lebih lama
 dan mungkin menunjukkan CD56 lo fitur sel NK pada saat aktivasi. Oleh karena itu,
diusulkan CD56 yang Hi dan CD56 lo sel NK sel NK diwakili di ff tahap erent
pematangan dan / atau negara aktivasi. Pada sel T,aktivasi kronis terbukti upregulate
penanda kelelahan, seperti PD-1 dan Tim-3, dan memblokir molekul-molekul hambat
sebagian dapat meningkatkan fungsi sel T. Kami menemukan bahwa PD-1 dan Tim-3
yang hadir pada tingkat yang lebih tinggi di CD56 yang Hi CD16 hi / lo sel NK, dan PD-
1 dan Tim-3 blokade kebangkitan sitotoksisitas CD56 yang Hi CD16 hi / lo. sel NK.
Oleh karena itu, adalah mungkin bahwa analog diaktifkan / populasi kelelahan ada
untuk sel-sel NK, yang ditandai dengan CD56 lebih tinggi dan ekspresi CD16
variabel. Studi masa depan harus fokus pada fungsi, lokalisasi, dan mekanisme
reinvigoration CD56 Hi CD16 hi / lo sel NK pada pasien kanker tiroid dalam pengaturan
in vivo.
Sel-sel NK termasuk CD62L, CCR7, CXCR3, dan CXCR4, yang memungkinkan
perekrutan preferensial ke dalam fl jaringan amed, organ limfoid sekunder, dan
jaringan tumor. Oleh karena itu, tumor-in fi populasi infiltratif NK mungkin lebih
diperkaya dengan CD56 Hi CD16 + / - sel NK, tunduk pada validasi eksperimental.
Selain itu, sejumlah molekul pos pemeriksaan kekebalan tubuh lainnya dan reseptor
hambat / mengaktifkan seperti CD96, molekul NKG2 (NKG2A, C, dan E), dan
molekul KIR (KIR2DL4-L5 dan KIR2DS1-S5), terlibat dalam modulasi NK respon
sel, beberapa di antaranya terlibat dalam kelelahan sel NK [ 16 ]. Ekspresi dan
regulasi molekul-molekul dalam sel NK dari pasien kanker tiroid harus diselidiki
dalam studi masa depan.
Jurnal 8

Jurnal 9

Metode dan bahan yang digunakan

1. Bahan kimia
cara dengan obat, menangkal pihak mereka e ff ECTS dan menurunkan dosis mereka ).
Yang paling strategi antitumor baru-baru ini melibatkan penggunaan imunomodulator
alami, ditandai dengan toksisitas rendah dan harga yang lebih rendah dibandingkan
dengan obat-obatan. Zat ini dapat digunakan selama kemoterapi, dengan tujuan untuk
meningkatkan respon imun terhadap tumor, yang mengatasi pengawasan kekebalan
tubuh yang dihasilkan oleh obat kemoterapi. Sel-sel CD8 + T merupakan pemain kunci
dalam respon imun adaptif, dan telah terbukti menjadi sangat penting untuk respon
perlindungan terhadap berbagai tumor melalui ekspresi sitokin
2. Sampel dan proses ekstrasi
Plet yang didasarkan pada sebuah mortir porselen, 1 g sampel diekstraksi dengan 12.5mL
dari heksana dan disimpan di bawah diaduk selama 10 menit dalam gelap pada suhu
kamar. supernatan disentrifugasi pada 6000 rpm (25 ° C) selama 10 menit, operasi itu
diulang dua kali. Kemudian residu diekstraksi dengan 12.5mL dari CH 3 OH dengan cara
 yang sama. Supernatan dikumpulkan, dikeringkan di bawah tekanan dan lyophilized.
Sampel dilarutkan dalam metanol, fi disaring pada 0,45 μ m nilon membran injeksi
sebelumnya dalam sistem LC.
3. Sel
Semua donor memberi ditulis, informed consent sesuai dengan Deklarasi Helsinki dengan
penggunaan bu sisa mereka ff y mantel untuk tujuan penelitian. Peripheral mononuklear
darah Sel (PBMC) dari donor yang sehat diisolasi lebih Ficoll-Hypaque gradien (media
pemisahan limfosit; MP Biomedicals, Aurora, OH, USA). Peripheral Blood Limfosit
(CD14-) telah dipilih secara negatif oleh prosedur immunomagnetic (microbeads CD14,
Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Jerman) dari PBMC dan diresuspensi al 4 * 10 6 /
4. Arus cytometric uji sitotoksisitas sel NK
Puri fi Sel-sel ed NK dari donor yang sehat dirangsang dengan IL-2 dan IL-15 Kemudian
mereka digunakan sebagai e ff ectors terhadap K562 garis sel manusia menggunakan fl
uorescenmmt aksimal -% secara spontan sel target mati) × 100. CFDA NK uji
sitotoksisitas. Brie fl y, sel target K562 diberi label dengan CFDA
5. Deteksi sitokin
Untuk sitokin pengukuran pada media AC dikumpulkan dari dirangsang PBL, manik-
manik berbasis multipleks ELISA (LEGENDplex, Biolegend, USA) digunakan.
Diencerkan supernatan kultur sel diinkubasi selama 2 jam dengan manik-manik dan
antibodi deteksi, diikuti dengan inkubasi 30 menit dengan SA-PE seperti yang dilaporkan
di tempat lain
6. Analisis statik
Analisis statistik telah dilakukan pada semua percobaan ditunjukkan dengan
menggunakan GraphPad prisma software 6.0 untuk Windows (software GraphPad).
Untuk setiap jenis pengujian atau analisis fenotipik, data yang diperoleh dari beberapa
percobaan dihitung sebagai mean ± SD dan dianalisis untuk signi statistik fi cance
 spektrum massa tandem dilaporkan dalam Gambar. 5 . Jumlah senyawa ini tidak
diperkirakan karena tidak ada standar yang sesuai individu murni tersedia, dan ini akan
membutuhkan sintesis kimia yang luas dari masing-masing senyawa. Dengan demikian
senyawa ini biasanya relatif quanti fi ed dan dinyatakan sebagai relatif% dari alpha dan
beta asam, dengan menggunakan campuran beberapa alpha dan beta asam sebagai
standar pengganti ( Ceslova et al. 2009 ), Yang bagaimanapun sedikit di ff erent dari
senyawa dalam fraksi bunga, dan dengan demikian kuantitasi absolut mereka berada di
luar lingkup pekerjaan ini. Karena dikaitkan dengan fungsi sitotoksik NK, kami fi
akhirnya ditentukan apakah HFB subfraksi pengobatan sel NK sitokin-prima dapat
meningkatkan aktivitas sitolitik mereka melawan NK-rentan lini sel target K562 di di ff
erent E: rasio T. Data Gambar. 4 D dengan jelas menunjukkan bahwa sitokin-prima sel
NK ditampilkan tingkat menengah dari sitotoksisitas sehubungan dengan tinggi e FFI
Sel-sel siensi membunuh dengan IL-2-prima NK co-diobati dengan HFB3. Tidak ada
perbaikan sitotoksik terdeteksi setelah HFB1 dan HFB2 co-pengobatan.

Jurnal 10
Pada bagian pembahasan, penulis membagi menjadi sub pokok bahasan menjadi beberapa
bagian, yaitu :
1. Material and methods
A. Cell lines and serum exposure
Sel YTS. (subklon dari garis sel leukemia YT NK) dan Rajimanusia B
lymphoblast (ATCC® CCL-86 ™) dipertahankan dalam medium RPMI1640
(Corning) ditambah dengan 10% (vol / vol) FBS (Hyclone), 2 mM L-Glutamine,
1 mM HEPES, pH 7,4, 100 U / ml penisilin dan 100ug / ml streptomisin. Orang
sehat tidak menunjukkan bukti atopi, dan menunjukkan kadar IgE serum yang
 rendah (Gbr. 1A). Informasi untuk pasien dan individu sehat tercantum pada
Tabel 1. Serum diisolasi dari sehat pasien individu dan asma dipertahankan pada
suhu -80 ° C sebelum digunakan. Paparan serum dilakukan dengan inkubasi sel
YTS dengan media disebutkan di atas dicampur dengan 30% (vol / vol) serum
dari individu sehat atau pasien asma selama 12 jam sebelum dicuci dan
percobaan. Untuk sekuensing RNA dan analisis transkriptome, dikumpulkan
serum dari individu sehat atau pasien asma digunakan untuk serum paparan.
B. ELISA
Secara singkat, serum dari pasien atau kontrol sehat ditambahkan untuk piring
ELISA pra-dilapisi dengan antibodi IgE anti-manusia, dan piring diinkubasi
selama 2 jam pada suhu kamar. Setelah dicuci, biotinilasi antibodi IgE anti-
manusia dari kit diaplikasikan selama 1 jam di kamar suhu, diikuti oleh konjugat
streptavidin-HRP dari kit untuk tambahan 30 menit pada suhu kamar setelah
dicuci. Akhirnya, TMB substrat dari kit diaplikasikan setelah pencucian yang
ekstensif, dan Absorbansi 450 nm diperoleh dengan microplate GO Multiskan
pembaca (Thermo Scientific, MA, USA).
C. Antibodies and reagents
Kami membeli APC-anti-CD56, mouse murni anti-CD28, APC-antimouse IgG,
FITC-anti-Granzyme B, PE-anti-Perforin, Foxp3 Fix / Perm Perangkat Buffer
dari Biolegend (San Diego, CA, USA); kelinci anti-ERK, dan mouse anti-p-ERK
dari Cell Signal Technology (Danvers, MA, USA); IgG-HRP anti-kelinci
kambing dan IgG-HRP anti-mouse kambing dari Bosterbio (Wuhan, Cina).
Analisis aliran cytometric ekspresi CD28 adalah dilakukan dengan menggunakan
pewarnaan mouse murni anti-CD28 diikuti oleh cuci dan pewarnaan IgG anti-
tikus APC. Keduanya Phorbol 12-myristate 13-asetat (PMA) dan 5 (6) -
Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester (CFSE) dibeli dari Sigma-
Aldrich (Oakville, Ontario, Kanada).
D. Cytolytic assay
Aktivitas sitolitik sel YTS dinilai dengan menggunakan uji sitolitik Pewarnaan
CFSE-7AAD. Secara singkat, sel YTS diinkubasi dengan sel Raji berlabel CFSE
dengan perbandingan 10: 1 selama 4 jam. 7AAD kemudian ditambahkan ke
suspensi sel, dan diinkubasi di atas es selama 10 menit, sebelum aliran analisis
sitometrik dari persentase sel 7AAD + di antara sel CFSE+.
E. Apoptosis detection
Apoptosis sel YTS ditentukan dengan pewarnaan Annexin V – PI menggunakan
kit deteksi apoptosis (Transgen, Beijing, Cina) menurut instruksi pabrik.
F. Conjugation assay
Pengujian pembentukan konjugasi dilakukan dengan inkubasi CD56 sel YTS
bernoda dengan sel Raji berlabel CFSE pada suhu 37 ° C selama 12 menit atau
untuk waktu yang ditunjukkan, diikuti oleh fiksasi menggunakan Foxp3 Fix /
 Perm Buffer Set (Biolegend, San Diego, CA, USA) dan analisis aliran sitometrik
pada a cytoflex (Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Data dianalisis dengan
Perangkat lunak FlowJo (Bintang Pohon). Konjugat yang terbentuk akan
menampilkan dobel sinyal positif untuk CD56 dan CFSE.
G. RNA sequencing and gene set enrichment analysis (GSEA)
Total RNA dari sel-sel YTS NK setelah 12 jam dari 30% kumpulan serum yang
mengandung paparan medium lengkap diekstraksi menggunakan TRIzol Reagent
(Invitrogen, Carlsbad, CA). Persiapan pustaka sequencing generasi berikutnya
dibuat menggunakan Kit Pustaka Perpustakaan Ultra RNA untuk Illumina
menurut protokol pabrikan (New England Biolabs, Ipswich, MA, USA).
Perpustakaan itu multiplexed dan dimuat pada Instrumen Illumina HiSeq sesuai
dengan instruksi pabrik (Illumina, San Diego, CA, USA). Sequencing dilakukan
menggunakan a Konfigurasi pasangan-ujung 2 × 150bp. Urutan diproses dan
dianalisis oleh GENEWIZ (Suzhou, Cina). GSEA menggunakan perangkat lunak
Broad Institute dilakukan pada data sekuensing RNA dari masing-masing
sampel. GSEA menggunakan set gen dari Molecular Signature Database v.6.1
(Subramanian et al., 2005; Liberzon et al., 2015, 2011). Skor pengayaan (ES)
yang diperoleh GSEA digunakan untuk membandingkan jalur berbeda antara
paparan dengan serum kontrol dan pasien asma -dibawa serum.
H. Statistics
Perbedaan yang signifikan secara statistik ditentukan oleh uji Siswa. Nilai * P
<0,05, atau ** P <0,005 dianggap signifikan.
2. Results
a. Exposure to serum from asthma patients impaired the cytolytic activity of
NK cells
 Gambar. 1. Paparan serum dari pasien asma merusak aktivitas sitolitik sel NK.
(A) Konsentrasi IgE dalam serum dari semua pasien asma (n = 20) atau kontrol
sehat (n = 8) yang termasuk dalam penelitian ini ditunjukkan. (B) Sel YTS
terpapar serum dikumpulkan dari pasien asma (n = 20) atau sehat kontrol (n = 8)
selama 12 jam, sebelum sekuensing RNA, dan analisis GSEA untuk sel KEGG
NK yang dimediasi jalur sitotoksisitas. (C) Sel-sel YTS terkena serum dari pasien
asma atau kontrol yang sehat, sebelum diuji untuk sitotoksisitas terhadap label
berlabel CFSE Sel-sel raji pada efektor: target rasio 10: 1. Sel-sel Raji yang
terbunuh dalam pengujian dinilai dengan persentase sel 7AAD + di antara sel-sel
CFSE +. (D) Ekspresi dari Granzyme B dalam sel YTS yang terpapar serum
ditentukan sebelum uji sitolitik dengan flow cytometry. (E) Ekspresi Perforin
dalam sel YTS yang terpapar serum ditentukan sebelum uji sitolitik dengan aliran
sitometri. (F) Viabilitas sel YTS setelah paparan serum dalam (C) yang dinilai
dengan uji coba trypan blue sebelum uji sitolitik dilakukan. ditampilkan. (G)
Apoptosis sel YTS setelah paparan serum dalam (C) ditentukan sebelum uji
sitolitik dengan pewarnaan annexin V dan PI. Persentase annexin V− PI− sel-sel
non-apoptosis ditunjukkan. (C – G) Sampel acak dari kontrol sehat (n = 5) atau
pasien asma (n = 7) digunakan. (A, C – G) Data direpresentasikan sebagai berarti
± SEM.
b. Exposure to serum from asthma patients impaired conjugation formation of
NK cells
Sitotoksisitas sel NK membutuhkan pembentukan konjugasi sel NK dengan sel
target, yang melibatkan pengaturan sitoskeleton aktin, dan mengikuti sel target
melalui molekul adhesi (Mace et al., 2014; Oranye, 2008). GSEA menunjukkan
pengayaan jalur terkait ini dalam kontrol sel YTS NK, menunjukkan bahwa
kemampuan asma terkait Sel YTS NK untuk membentuk konjugasi dengan sel
target Raji mungkin terganggu (Gbr. 2A). Memang, kami mengamati lebih sedikit
konjugat yang terbentuk antara sel Raji dan sel YTS dari kelompok asma,
dibandingkan antara Raji sel dan kontrol sel YTS (Gbr. 2B-D), menunjukkan
bahwa sel YTS menurunkan kemampuan pembentukan konjugasi dengan sel
target, setelah paparan serum dari pasien asma. Sejak pembentukan konjugasi Sel
NK dengan sel target memerlukan aktivasi sel NK pada sel target.
 Gambar. 2. Paparan serum dari pasien asma mengganggu pembentukan konjugasi
sel NK dengan sel Raji. (A) Sel-sel YTS terkena serum dikumpulkan dari asma
pasien (n = 20) atau kontrol sehat (n = 8) selama 12 jam, sebelum pengurutan
RNA, dan analisis GSEA untuk jalur KEGG yang ditunjukkan. Data mewakili
dua percobaan independen dengan hasil yang serupa. (B – D) CD56 + sel YTS
yang terpapar serum dari pasien asma atau kontrol sehat diuji untuk konjugasi
pembentukan dengan sel Raji berlabel CFSE. (B) Hasil perwakilan pada 12 menit
ditunjukkan. (C) Analisis statistik persentase sel terkonjugasi di antara Raji sel-sel
pada 12 menit ditunjukkan, dan direpresentasikan sebagai mean ± SEM. Kontrol
sehat (n = 3). Pasien asma (n = 5). (D) Persentase sel terkonjugasi di antara Sel-
sel Raji pada titik waktu yang berbeda ditunjukkan. Eksperimen ini diulang dua
kali. aktivasi (Mace et al., 2014; Orange, 2008), hasil ini menunjukkan bahwa
aktivasi pada pengenalan sel target Raji oleh sel YTS mungkin terganggu setelah
terpapar serum dari pasien asma.
c. Exposure to serum from asthma patients prematurely terminates ERK
phosphorylation in NK cells
Aktivasi sel NK pada pengenalan sel target tergantung pada sinyal terintegrasi
melalui aktivasi dan reseptor permukaan penghambat (Watzl dan Long, 2010).
Sementara sel-sel YTS NK kekurangan reseptor permukaan penghambat yang
paling, reseptor pengaktif, CD28, adalah utama mengaktifkan reseptor untuk sel
YTS NK (Chen et al., 2006). Di sini, CD28 ekspresi pada pasien asma serum-sel
YTS terpapar hanya menunjukkan penurunan moderat, dibandingkan dengan sel-
sel YTS kontrol (Gbr. 3A dan B). Di sisi lain, jalur pensinyalan dari PI3K via Rac
ke ERK (a MAPK) telah terbukti penting untuk sitotoksisitas sel NK (Billadeau et
al., 1998; Djeu et al., 2002; Wei et al., 1998). Mengidentifikasi set gen pengayaan
jalur MAPK dan RAC1 dalam kontrol sel YTS NK, dibandingkan dengan sel NK
terkait asma (Gbr. 3C), menunjukkan bahwa jalur ini mungkin diregulasi ke
bawah di sel NK terkait asma. Untuk konfirmasi, kami membandingkan
 fosforilasi ERK dalam sel YTS NK setelah stimulasi PMA (Gbr. 3D). Kami
menemukan bahwa sel-sel YTS yang terpapar serum dari pasien asma secara
prematur dihentikan fosforilasi ERK setelah PMA stimulasi, dibandingkan
dengan sel YTS yang terpapar dengan serum kontrol (Gbr. 3D). Hasil ini
menunjukkan bahwa sel YTS NK bersifat hiporesponif setelahnya paparan serum
dari pasien asma.

d. Exposure to serum from asthma patients enriched genes involved in

oxidative phosphorylation in NK cells

Hasil di atas menunjukkan gangguan fungsi sitolitik sel NK terkait asma dengan
langkah-langkah kritis yang terlibat sitotoksisitas sel NK. Karena disfungsi sel T
telah disarankan didorong oleh disregulasi metabolik, kami berangkat untuk
mencari yang diperkaya jalur metabolisme pada sel YTS NK terkait asma. Kami
mengamati gen untuk jalur OXPHOS diperkaya dalam sel YTS NK yang terpapar
untuk serum asma, dengan skor pengayaan 0,65 (Gbr. 4A). Terkemuka gen tepi
yang mendorong gen mengatur pengayaan jalur Fosforilasi KEGG Oksidatif pada
sel YTS NK NK terkait asma sebagian besar adalah gen terlibat dalam respirasi
 mitokondria, seperti mitokondria H + ATP subunit sintase, NADH: subunit
ubiquinone oksidoreduktase, juga sebagai subunit sitokrom c oksidase (Gbr. 4B).
Hasil ini menunjukkan persyaratan seluler yang menyimpang untuk program
metabolisme OXPHOS di Indonesia sel NK terkait asma, dan menunjukkan
bahwa metabolisme tidak teratur mungkin mendasari gangguan fungsi efektor sel
NK ini.
3. Discussions
Dalam penelitian ini, kami menunjukkan bahwa sel NK terkena serum dari pasien
asma menunjukkan aktivitas sitolitik terganggu, sebagaimana dibuktikan oleh
penurunan pembunuhan sel target, pembentukan konjugasi yang melemah, dan
pensinyalan intraseluler hiporesponif pada pengenalan sel target. Mengingat bahwa
sel NK dari pasien asma juga menunjukkan gangguan produksi IFN-γ dan TNF-α
(Kim et al., 2013; Wei et al., 2005), bersama-sama data ini menunjukkan bahwa
fungsi anti-tumor / infeksi dari sel NK terkait asma secara fungsional terganggu.
Penting, kami menemukan hubungan antara disfungsi NK asma-terkait sel dan
kebutuhan metabolisme tidak teratur oleh sel-sel NK ini. Metabolisme memiliki
potensi besar untuk memulihkan / meningkatkan fungsi sel NK secara terapi
(Gardiner dan Finlay, 2017). Biasanya OXPHOS terlibat oleh limfosit diam untuk
menghasilkan energi pada tingkat rendah tingkat, bukan oleh limfosit teraktivasi yang
membutuhkan biosintesis yang kuat untuk proliferasi dan produksi molekul efektor.
Peningkatan regulasi gen yang terlibat dalam OXPHOS, dengan tingkat OXPHOS
sebenarnya ditekan, dilaporkan untuk sel T selama proses pembentukan kelelahan,
yang mencerminkan kebutuhan seluler, daripada tingkat metabolisme seluler yang
sebenarnya. Meskipun up-regulasi transkripsional gen yang terlibat dalam OXPHOS,
akan menarik untuk penelitian lebih lanjut selidiki kadar OXPHOS yang sebenarnya,
serta metabolisme lainnya jalur, dalam sel NK terkait asma. Juga, pengamatan kami
bahwa serum dari pasien asma secara langsung mempengaruhi aktivitas sitolitik sel
NK, serta gen yang terlibat dalam OXPHOS, menunjukkan bahwa faktor immuno-
regulatory mungkin ada dalam serum pasien asma yang dapat bertindak pada sel NK,
mungkin melalui metabolism jalur.
Salah satu faktor terlarut potensial tersebut mungkin TGF-β, sitokin imunosupresif
sering terdeteksi pada penyakit kronis. Memang, peningkatan kadar TGF-β terdeteksi
pada pasien asma (Wong et al., 2001; Balzar et al., 2005). Juga, pensinyalan TGF-β
aktif pada penderita asma saluran udara (Sagara et al., 2002). TGF-β dapat
berkontribusi pada fungsional kelelahan sel NK terkait asma (Bi dan Tian, 2017),
dengan cara mirip dengan yang diamati pada tumor atau infeksi kronis (Castriconi et
al., 2003; Donatelli et al., 2014; Sun et al., 2012). Yang penting, TGF-β jalur
pensinyalan dilaporkan untuk menekan metabolisme sel NK dan fungsi (Viel et al.,
2016; Zaiatz-Bittencourt et al., 2018), dan penghambatan jalur pensinyalan TGF-β
kanonik dapat memberikan keuntungan metabolik untuk sel NK dan dapat
 meningkatkan respons fungsional (Zaiatz-Bittencourt et al., 2018). Atau, sitokin tipe-
2 (mis. IL-4 dan IL-13) biasanya hadir pada pasien asma, yang dapat menginduksi
status bias tipe-2 Sel NK (Wei et al., 2005) dalam konteks ini, dan mungkin
menghasilkan gangguan fungsi sitolitik ortodoks sel NK. IL-4 dan IL13 mengaktifkan
saklar STAT-dependen dari program metabolisme dalam makrofag (Odegaard dan
Chawla, 2011), menyarankan bahwa sitokin tipe-2 seperti IL-4 dan / atau IL-13 juga
dapat menginduksi pemrograman ulang metabolik pada asma terkait Sel NK,
mengakibatkan disfungsional status. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk
menentukan peran sitokin ini dan STAT6 hilir dalam perubahan yang merugikan di
fungsi sitolitik sel NK dalam pengaturan saat ini.

KONKLUSI
Jurnal 1
Penulis menjelaskan bahwa beberapa penelitian in vivo dan in vitro menegaskan peran penting
imunomodulator sel NK. Sehingga sel NK dapat membentuk respon imun adaptif melalui
berbagai mekanisme, tetap masih belum jelas dibawah kondisi apa sel NK mempromosikan atau
menghambat respon imun.
Promosi respons sel T dapat terjadi melalui sekresi beberapa sitokin dan kemokin yang masing-
masing dapat mempengaruhi polarisasi sel T dan maturasi DC dan rekrutmen sel T. Ekspresi
ligan untuk molekul kostimulatori sel T pada sel NK teraktivasi mengungkapkan wawasan baru
dan tak terduga ke dalam interaksi langsung antara NK dan sel T.
Jurnal 2
Penulis menjelaskan bahwa peran “in vitro” tentang galectin-3 di sel NK manusia adalah
kehadiran lektin ini di sel beristirahat mendukung peran pada homeostasis sel NK. Sedangkan
upregulation protein setelah stimulasi sitokin menopang peran dalam fungsi sel. Akhirnya Gal-3
co-lokalisasi dengan perforin di butiran, serta peningkatan degranulasi sel NK berikut Gal-3
penghambat menunjukan peran fungsional dalam NK sitotoksisitas.
Jurnal 3
Fungsi sel NK dan fenotipik pematangan terganggu dengan usia, dan dalam proyek ini kami
berusaha untuk memahami e ff dll variasi genetik pada fenotipe sel NK antara tikus berusia (
Beli et al., 2014 ). Kami mengumpulkan panel dari 19 strain tikus inbrida yang dipilih untuk
memaksimalkan di genetik ff perbedaan-perbedaan dan memastikan berbagai macam masa hidup
didokumentasikan, namun masih mungkin bertahan hidup durasi masa studi. Mencit bertempat
di fasilitas kami di University of Georgia sampai mereka mencapai usia tua, pada saat frekuensi
sel NK dan proporsi sel NK dalam tahap pematangan yang berbeda yang quanti fi ed dalam
jaringan limfoid utama sekunder, limpa. Data yang dihasilkan mendukung hipotesis bahwa latar
belakang genetik merupakan penentu utama dari frekuensi sel NK dan pola pematangan pada
usia tua.
Jurnal 4
Penulis menjelaskan bahwa sel-sel pembunuh alami adalah efektor dari imunitas bawaan ,
penelitian terbaru telah mengungkap informasi tentang reseptor sel NK yang mengaktifkan dan
menghambat yang memainkan peran fungsional yang penting, termasuk toleransi diri dan
keberlanjutan aktivitas sel NK. Sel-sel NK juga berperan dalam respons imun adaptif banyak
percobaan telah menunjukkan kemampuannya untuk segera menyesuaikan diri dengan
lingkungan terdekat dan merumuskan memori imunologi spesifik antigen, yang mendasar untuk
merespons infeksi sekunder dengan antigen yang sama. Peran sel NK dalam respon imun bawaan
dan adaptif menjadi semakin penting dalam penelitian yang menggunakan aktivitas sel NK
sebagai terapi kanker potensial.
Jurnal 5
Jurnal 6
Studi ini menunjukkan bahwa subyek dijadwalkan untuk biopsi prostat lebih mungkin untuk
memiliki diagnosis PC ketika tingkat NKA berada di bawah cut off dari 200 pg / mL, dan
memperkuat sebelumnya melaporkan hubungan antara usia rendah NKA dan kehadiran PC.
penelitian yang lebih besar diperlukan untuk mengkonfirmasi temuan kami.
Jurnal 7
Penulis menjelaskan bahwa peran “Disfungsi sel pembunuh alami dimediasi oleh PD-1 dan Tim-
3 jalur pada kanker tiroid anaplastik” frekuensi dari subset NK secara dinamis diatur pada pasien
kanker tiroid dan karakteristik fungsional dari sel NK pada pasien kanker tiroid. kanker tiroid
anaplastik adalah target potensial untuk terapi imun sel-dasar NK. Ekspresi dan regulasi
molekul-molekul dalam sel NK dari pasien kanker tiroid harus diselidiki dalam studi masa
depan.
Jurnal 8
Jurnal 9
Kerja dengan nutraceuticals berdasarkan fitokimia sebagai immunostimulators berkembang.
Dalam kasus ini Humulus Lupulus berisi kelas yang menarik senyawa, yang dikenal sebagai
asam pahit. Penelitian ini menunjukkan untuk fi waktu pertama bahwa fraksi asam pahit mampu
memodulasi kompartemen sel NK meningkatkan aktivitas sitolitik mereka. Secara khusus,
subfraksi yang mengandung alpha dan beta asam menginduksi aktivasi reseptor Nkp44 dan
meningkatkan aktivitas sitolitik sel NK terhadap myelogenous garis sel leukemia K562. Data ini
menyoroti potensi hop asam pahit seperti imunostimulan alam dan peran mereka mungkin
sebagai adjuvant dalam protokol kemoterapi.
Jurnal 10
Penulis menjelaskan bahwa menunjukkan fungsi immunosurveillance terkompromikan dari sel
NK terkait asma, serta hubungan dengan program transkripsi disregulasi dalam energy
metabolisme, dan menjelaskan status kekebalan asma yang abnormal pasien. Menurut data kami,
kekhawatiran bagi pasien dengan gangguan atopik tidak hanya harus dibayarkan untuk
pengendalian penyakit, tetapi juga harus dibayarkan ke status host imunosurveillance, yang
biasanya dipicu oleh metabolisme diatur dengan benar. Intervensi mungkin diperlukan untuk
mengembalikan fungsi efektor fungsi sel NK pada pasien ini, mungkin dengan mengembangkan
teknik yang menargetkan gangguan metabolism faktor hadir pada pasien ini, seperti sitokin TGF-
β atau tipe-2. Juga, terapi dengan fungsi ganda kontrol penyakit dan NK penguatan sel mungkin
dihargai.

KELEBIHAN
Jurnal 1
1. Penulis lengkap dalam menyimpulkan keseluruhan isi dari jurnal ini.
2. Penulis sangat detail dalam menjelaskan hasil penelitiannya.
Jurnal 2
1. Penulis mampu menjabarkan isi dari jurnal tersebut
2. Penulis mampu memaparkan isi jurnal secara teoritis dan tepat.

Jurnal 3
1. Penulis mampu menjabarkan materi dari tujuan urnal tersebut
Jurnal 4
1. Pemilihan kata dan penulisan pada jurnal sangat mudah di pahami
Jurnal 5
Jurnal 6
1. Pemilihan kata dan penulisan pada jurnal sangat mudah di pahami
Jurnal 7
1. Pemilihan kata dan penulisan pada jurnal sangat mudah di pahami
Jurnal 8
Jurnal 9
1. Penulis menjelaskan isi jurnal dengan detail
Jurnal 10
1. Penulis mampu menjelaskan keseluruhan isi dari jurnal ini

KELEMAHAN
Jurnal 1
1. Bahasa yang digunakan penulis kurang dapat dipahami maksud dan tujuannya oleh
pembaca

JURNAL 2
1. Bahasa dan beberapa istilah kurang di pahami oleh pembaca dan banyak menggunakan
pengulangan kata.
JURNAL 3
1. Bahasa yang baku yang sulit untuk dipahami
JURNAL 4
1. Terkadang mengadung istilah yang hanya berlaku pada bidang tertentu
JURNAL 5
JURNAL 6
 1. Bahasa dan beberapa istilah kurang di pahami oleh pembaca dan banyak menggunakan
pengulangan kata
JURNAL 7
1. Kurang nya bahan untuk pembahasan pada jurnal dan minimnya sample pada bahan
jurnal.
JURNAL 8
JURNAL 9
JURNAL 10
1. Bahasa yang digunakan penulis kurang dapat dipahami maksud dan tujuannya oleh
pembaca

REFERENSI
1. Zingoni, Alessandra., dkk.(2010). Modulation of T Cell-Mediated Immune Responses by
Natural Killer Cells. Departemen Experimental Medicine, Universitas “Sapienza”, Viale
Regina Elena 324, 00161, Roma, Italia
2. Brittoli, Alvaro., dkk. (2018). In vitro studies on galectin-3 in human natural killer cells.
Department of Pharmaceutical Sciences, University of “Piemonte Orientale, A.
Avogadro”, Largo Donegani 2, 28100 Novara, Italy. Department of Medicinal Chemistry
and Chemical Biology, Utrecht University, 3508 TB Utrecht, Netherlands. Immunology
Letters vol. 194, 4–12
3. Bumgardner, S.A., dkk. (2018). Genetic influence on splenic natural killer cell
frequencies and maturation among aged mice. Department of Foods and Nutrition,
University of Georgia, 305 Sanford Drive, Athens, GA, United States. Department of
Statistics, University of Georgia, 101 Cedar Street, Athens, GA, United States.
Experimental Gerontology vol. 104, 9–16
4. Kim, Juyoung., dkk. (2018). CXCR3-deficient natural killer cells fail to migrate to
B16F10 melanoma cells. College of Pharmacy, Chungbuk National University,
Cheongju, Chungbuk 28160, Republic of Korea. International Immunopharmacology
Vol.63, 66–73
5. Zhang, Ling-li., dkk. (2018). miR-24 inhibited the killing effect of natural killer cells to
colorectal cancer cells by downregulating Paxillin. Ph.D. Mailing address: Department
of Neurology, The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, 1 Jianshe East Rd.,
Zhengzhou 450052, China. Biomedicine & Pharmacotherapy Vol.101, 257–263.
6. Adriana C. Vidal., dkk. (2019). Natural killer cell activity and prostate cancer risk in
veteran men undergoing prostate biopsy. Division of Urology, Department of Surgery,
Samuel Oschin Comprehensive Cancer Institute, Cedars-Sinai Medical Center, 8631
West 3rd Street Suite 430W, Los Angeles, CA 90048, USA. Cancer Epidemiology
Vol.62. 101578.
7. Yin, Ming., dkk. (2018). Dysfunction of natural killer cells mediated by PD-1 and Tim-3
pathway in anaplastic thyroid cancer . Department of Ultrasound, Taizhou People's
 Hospital, 299 Hailing South Road, Taizhou, Jiangsu, China. International
Immunopharmacology Vol. 64, 333–339
8. Wang, Yingnan. (2018). Oral cancer-derived exosomal NAP1 enhances cytotoxicity of
natural killer cells via the IRF-3 pathway. 639, Zhizaoju Rd, Shanghai, PR China (W.
Chen). 12, Lane 833, Zhizaoju Rd, Shanghai, PR China (J. Zhang). Oral Oncology Vol.
76, 34–41
9. Salviati, Emanuela. (2019). Immunomodulatory activity of Humulus lupulus bitter acids
fraction:Enhancement of natural killer cells function by NKp44 activating receptor
stimulation. Department of Pharmacy, University of Salerno, Via Giovanni Paolo II 132,
I-84084 Fisciano, SA, Italy. Journal of Functional Foods Vol.61, 103469
10. Wu, Haisi. (2018). Impaired cytolytic activity of asthma-associated natural killer cells is
linked to dysregulated transcriptional program in energy metabolism. Shenzhen
Laboratory of Antibody Engineering, Institute of Biomedicine and Biotechnology,
Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences, Shenzhen,
518055, China. Department of Biotechnology, Guangxi Medical University, Nanning,
China. Department of Respiratory and Critical Medicine, Nanfang Hospital, Southern
Medical University, Guangzhou, 510515, China dShenzhen Luohu People’s Hospital,
The Third Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen, China eJinan
University, Guangzhou, China. Molecular Immunology Vol. 101, 514–520