PERHITUNGAN JUMLAH BAKTERI

(Laporan Praktikum Mikrobiologi Akuatik)

Oleh:
Andree Firmansyah
1414111007
Kelompok 6

PROGRAM STUDI BUDIDAYA PERAIRAN

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS LAMPUNG
2015
 LEMBAR PENGESAHAN

Nama Mahasiswa : Andree Firmansyah

NPM : 1414111007

Program Studi : Budidaya Perairan

Fakultas : Pertanian

Judul Praktikum : Perhitungan Jumlah Bakteri

Tempat : Laboratorium Budidaya Perairan

Waktu Praktikum : Rabu , 18 Oktober 2015

Kelompok : 6 (enam)

Bandar Lampung , 17 Oktober 2015

Mengetahui,

Asisten,

Ayu Novy Yanti

NPM 1114111013

Catatan Nilai
 PENGHITUNGAN JUMLAH BAKTERI

Oleh
Andree Firmansyah
1414111007

ABSTRAK

Penghitungan jumlah bakteri adalah suatu cara atau suatu metode yang digunakan
untuk menghitung jumlah suatu  koloni bakteri yang tumbuh pada suatu media
pembiakkan. Banyak metode yang biasa digunakan untuk menaksir bakteri secara
kuantitatif dari suatu populasi bakteri . Akan tetapi , terdapat dua metode yang
paling sering digunakan yaitu Standar / Viable Plate Count Method dan Analisa
Spektrofotometer . Pada praktikum ini dilakukan penghitungan bakteri dengan
menggunakan metode Analisa Spektrofotometer (turbidimetri). Metode Analisa
Spektrofotometer ini juga memiliki prinsip yang didasarkan pada kekeruhan dan
metode ini menghitung seluruh jumlah sel bakteri yang hidup maupun sel bakteri
yang mati. Pada praktikum ini digunakan larutan Mc Farland , Larutan blangko
dan juga bakteri Aeromonas Hydrophila yang dimasukkan kedalam cuvvette dan
kemudian diukur absorbansi nya menggunakan spektrofotometer dengan panjang
gelombang 625 nm, dilakukan juga pengenceran apabila jumlah koloni terlalu
padat . Didapatkan hasil bahwa nilai absorbansi sebesar 0,053. Kemudian setelah
dilakukan penghitungan dengan menggunakan rumus regresi didapatkan hasil
sebesar 2,42 x 109 CFU/ml. Hasil tersebut menyatakan jumlah kepadatan semua
sel bakteri dalam suspensi dengan satuan sel/ml. Berdasarkan literatur (Ferdias,
1992) yang menyatakan “fungsi alat spektrofotometer dalam laboratorium adalah
mengukur transmitans atau absorbans suatu media yang dinyatakan dalam fungsi
panjang gelombang” ,dapat disimpulkan bahwa praktikum ini berhasil dilakukan.

Kata Kunci : Penghitungan , Analisa Spektrofotometer , Standar Plate Count

Method , Aeromonas Hydrophila , Larutan Mc Farland , Cuvvette

I. PENDAHULUAN

I.I Latar Belakang

Perhitungan bakteri adalah suatu jumlah koloni bakteri yang tumbuh
cara atau suatu metode yang bisa di media pembiakkan bakteri.. Untuk
digunakan untuk dapat menghitung dapat mempermudah penghitungan
koloni suatu bakteri juga diperlukan
pengetahuan serta wawasan tentang
morfologi bakteri tersebut sehingga
suatu media pertumbuhan yang akan
digunakan sesuai dengan sifat bakteri
tersebut.
Pertumbuhan mikroorganisme yang
membentuk koloni dapat dianggap
bahwa setiap koloni yang tumbuh
berasal dari satu sel, maka dengan
menghitung jumlah koloni bakteri
,maka dapat diketahui penyebaran
koloni bakteri yang ada pada media
pembiakkan bakteri. Jumlah bakteri
pada suatu media dapat juga dihitung
dengan menggunakan berbagai cara,
tergantung pada jens media dan juga
jenis bakteri.  Ada banyak metode
yang digunakan untuk menghitung
jumlah bakteri secara kuantitatif dari
suatu populasi koloni bakteri.  Perhitungan jumlah suatu sel bakteri
Proses penghitungan sel bakteri juga
dapat dilakukan dengan beberapa
metode baik secara langsung maupun
tidak langsung, diantaranya adalah
metode hitung pada cawan petri atau
biasa disebut (standard plate count),
metode pengamatan langsung dengan
menggunakan kaca objek atau juga
metode hitung dengan menggunakan
haemocytometer, serta metode ukur
kekeruhan atau biasa disebut dengan
(turbidimetri), khusus pada metode
ini yaitu menggunakan suatu alat
yang disebut spektrofotometer dan
juga dengan menggunakan metode
tentang beberapa jumlah perkiraan
terdekat (Brady,1999).
Metode perhitungan bakteri dengan
perhitungan menggunakan suatu alat
spektrofotometer ,didasarkan pada
mikroba yang terdapat dalam suatu
bahan cair dan juga dapat dideteksi
dengan berdasarkan kekeruhannya.
Pertumbuhan sel-sel bakteri didalam
medium berbentuk cair maka akan
meningkatkan kekeruhan pada media
yang juga akan bisa mempengaruhi
beberapa jumlah sinar yang dapat
ditransmisikan untuk bisa menembus
medium.
juga dapat dilakukan dengan melalui
berbagai macam uji, beberapa contoh
uji-uji yang dapat digunakan untuk
perhitungan jumlah sel bakteri yaitu
seperti uji kualitatif koliform yang
secara lengkap terdiri dari tiga
tahap ,tahap pertama yaitu uji
penduga (uji kuantitatif, dengan
menggunakan metode MPN), tahap
kedua yaitu uji penguat dan tahap
terakhir yaitu uji pelengkap. Pada
praktikum tentang penghitungan
jumlah sel bakteri ini ,penghitungan
jumlah sel-sel bakteri ini dilakukan
dengan menggunakan metode
Analisa Spektrofotometer atau
( turbidimetri ) Metode Analisa
Spektrofotometer ini juga memiliki
prinsip bahwa “analisa penghitungan
bakteri didasarkan pada kekeruhan”.
1.2 Tujuan Praktikum
Adapun tujuan dari praktikum ini
adalah sebagai berikut :
1. Mahasiswa bisa mengetahui
berbagai macam cara untuk
menghitung jumlah sel dari
biakkan suatu bakteri.
II. TINJAUAN PUSTAKA
Perhitungan bakteri merupakan suatu
cara atau metode yang digunakan
untuk menghitung jumlah koloni sel
bakteri yang tumbuh pada media
pembiakkan. Terdapat dua cara yang
biasa digunakan dalam penghitungan
bakteri, yaitu penghitungan bakteri
secara langsung dan penghitungan
secara tidak langsung. Ada beberapa
cara perhitungan secara langsung,
antara lain adalah dengan membuat
preparat dari suatu bahan (preparat
sederhana yang kemudian diwarnai
atau tidak diwarnai) dan penggunaan
ruang hitung atau disebut dengan
sebutan sebagai (counting chamber).
Sedangkan perhitungan secara tidak
langsung hanya mengetahui jumlah
mikroorganisme pada suatu bahan
yang masih hidup saja (viable count).
Dalam pelaksanaannya ada beberapa
cara yaitu perhitungan pada cawan
petri disebut (Viable Plate Count
Method), serta perhitungan melalui
pegenceran, dan perhitungan jumlah
terkecil atau jumlah yang terdekat
(MPN methode), dan cara kekeruhan
atau turbidimetri yaitu yang dengan
menggunakan alat spektrofotometer
(Wheeler, 1993).
Perhitungan bakteri adalah suatu cara
yang dilakukan untuk mengetahui
berapa banyak sebaran bakteri yang
tumbuh pada suatu media. Secara
kuantitatif koloni sel bakteri dapat
dihitung dengan cara menghitung
populasinya secara umum atau juga
dengan kata lain menghitung seluruh
sel bakteri yang ada dalam media
termasuk juga sel yang mati, dan
menghitung sel bakteri hidup dengan
menggunakan suatu teori pendekatan
(Stainer ,1986).
Perhitungan bakteri merupakan salah
satu cara yang juga dilakukan dengan
tujuan untuk bisa mengetahui berapa
banyak koloni bakteri yang terdapat
pada suatu media ,baik itu koloni sel
bakteri yang hidup maupun koloni
sel bakteri yang mati. Ada dua cara
perhitungan bakteri ,secara langsung
dan perhitungan bakteri secara tidak
langsung. Perhitungan jumlah suatu
bakteri secara langsung, biasadipakai
untuk menentukan jumlah bakteri
keseluruhan baik yang mati maupun
yang hidup. Sedangkan perhitungan
jumlah bakteri secara tidak langsung
biasa dipakai untuk bisa menentukan
jumlah bakteri yang hidup saja.
Untuk menentukan jumlah bakteri
yang hidup dapat dilakukan setelah
suspensi  bahan atau biakan bakteri
diencerkan dengan beberapa kali dan
ditumbuhkan dalam medium dengan
suatu cara tertentu tergantung dari
macam bahan dan sifat bakterinya.
(Bibiana, 1994).
Viable count method adalah cara
penghitungan bakteri secara tidak
langsung yang dilakukan dengan
menghitung koloni sel bakteri yang
terdapat di media secara langsung.
Tidak semua jumlah bakteri dapat
dihitung. Ada juga beberapa syarat
perhitungan yang harus untuk bisa
dipenuhi seperti jumlah koloni tiap
petridish antara 30-300 koloni, jika
memang tidak ada yang memenuhi
syarat ,maka dipilih yang jumlahnya
mendekati 300. Tidak ada koloni
bakteri yang menutup lebih besar
dari setengah luas petridish, koloni
tersebut dikenal sebagai spreader.
Perbandingan jumlah bakteri dari
hasil pengenceran yang bertururt-
turut antara pengenceran yang lebih
besar dengan suatu pengenceran
yang sebelumnya, jika sama atau
lebih kecil dari 2 hasilnya dirata-rata,
tetapi jika lebih besar dari 2 yang
dipakai jumlah mikrobia dari hasil
pengenceran yang sebelumnya. Jika
dengan ulangan setelah memenuhi
syarat maka hasilnya juga dirata-rata
(Schlegel, 1994). 
Penghitungan jumlah bakteri hidup
(secara tidak langsung) yaitu dengan
menggunakan suatu metode Plate
Count (hitungan pada cawan). Plate
count/viable count meupakan suatu
metode yang didasarkan pada asumsi
bahwa setiap sel-sel mikroorganisme
hidup dalam suspensi akan tumbuh
menjadi satu koloni bakteri setelah
ditumbuhkan dalam suatu media
pertumbuhan dan lingkungan yang
sesuai. Setelah diinkubasi, jumlah
koloni yang bisa tumbuh tersebut
dihitung dan merupakan perkiraan
atau juga dugaan dari suatu jumlah
mikroorganisme yang ada didalam
suspensi. Koloni-koloni bakteri yang
tumbuh tidak selalu berasal dari satu
sel mikroorganisme karena beberapa
mikroorganisme tertentu cenderung
membentuk kelompok atau berantai.
Berdasarkan hal tersebut
digunakan ,maka biasa disebut
dengan istilah Coloni Forming Units
(CFU’s) per ml (Fardiaz, 1993).
Prinsip dari metode hitungan cawan
(viable plate count method) adalah
menumbuhkan sel-sel bakteri yang
masih hidup dan tumbuh pada media
agar, sehingga sel bakteri tersebut
akan bisa untuk tumbuh dan juga
berkembang biak dan membentuk
koloni yang dapat dilihat langsung
dengan menggunakan mata tanpa
menggunakan mikroskop. Metode
hitunga cawan (viable count
method ) ini dapat dibedakan atas
dua cara yaitu:  cara pertama yaitu
metode tuang (pour plate) dan cara
kedua yaitu dengan menggunakan
metode permukaan/sebar atau biasa
disebut (surface/spread plate)  (Volk,
1989).
Metode analisa spektrofotometer ini
didasarkan kepada kekeruhan yang
ditimbulkan oleh koloni bakteri yang
tumbuh dan berkembang di suatu
media . Prinsip kerja yang terdapat
pada alat spektrofotometer ini adalah
apabila ada cahaya (monokromatik
maupun campuran) jatuh pada suatu
medium yang homogen,dan sebagian
dari sinar masuk akan dipantulkan,
sebagian di serap dalam medium itu,
dan sisanya diteruskan. Nilai yang
keluar dari cahaya yang diteruskan
dinyatakan dalam nilai absorbansi
karena memiliki hubungan dengan
konsentrasi sampel. Studi tentang
spektrofotometri biasa dianggap juga
sebagai perluasan suatu pemeriksaan
visual yang lebih mendalam dari
absorbsi energi (Gibsen, 1996).
Bakteri yang berada didalam suatu
bahan cair (media)dapat dihitung dan
diketahui kepadatannya berdasarkan
kekeruhannya. Pertumbuhan sel-sel
bakteri didalam suatu media , maka
akan meningkatkan kekeruhan suatu
media, hal itu akan mempengaruhi
jumlah sinar-sinar yang juga dapat
ditransmisikan untuk juga menembus
medium, untuk menghitung koloni
bakteri tersebut ,digunakan alat yang
bernama “spektrofotometer”. Fungsi
dari alat spektrofotometer ini adalah
untuk mengukur transmitans atau
absorbans dari suatu contoh yang
dinyatakan dalam fungsi panjang
gelombang (Brady, 1999).
Pengenceran merupakan suatu cara
yang dilakukan untuk mengurangi
kepadatan atau sebaran bakteri yang
terdapat disuatu media. Pada metode
perhitungan cawan (plate method)
dilakukan suatu pengenceran yang
juga bertingkat yang ditujukan untuk
membentuk konsentrasi dari suatu
suspensi bakteri. Sampel yang telah
di encerkan ini di hitung ke dalam
cawan baru dan kemudian di tuang
kedalam mediumnya (metode tuang).
Kemudian setelah diinkubasi selama
waktu 24-48 jam, amati koloni yang
tumbuh dan koloni yanng diamati
hanyalah koloni yang berjumlah 25-
250 koloni (Pelczar, J, 1986).
Prinsip pengenceran bakteri adalah
untuk menurunkan jumlah bakteri,
sehingga semakin banyak jumlah
pengenceran yang dilakukan, makin
sedikit sedikit jumlah suatu bakteri,
dimana suatu saat didapat hanya satu
bakteri pada satu tabung. Inkubasi
dilakukan selama 2 x 24 jam ,karena
jumlah bakteri maksimal yang dapat
dihitung. Selama masa inkubasi, sel
yang masih hidup akan membentuk
koloni yang dapat dilihat langsung
oleh mata (Dwidjoseputro, 1978).
III.MATERI DAN METODE
3.1 Waktu dan Tempat
Praktikum Mikrobiologi Akuatik
dengan materi Penghitungan Jumlah
Bakteri ini dilaksanakan pada Hari
Rabu,tanggal 21 Oktober 2015 Pukul
08.00-10.00 WIB di Laboratorium
Budidaya Perairan (lab k) Fakultas
Pertanian Universitas Lampung.
3.2 Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada praktikum
ini adalah cuvvette, pipet tetes,
inkubator, spektrofotometer,dan juga
tabung reaksi. Adapun bahan yang
digunakan yaitu sampel bakteri
(isolat air laut,tawar, ikan sakit, serta
Aeromonas Hydrophila dan juga
Aeromonas Salmonicida ), Plate
Count Agar (PCA), Phosphate Buffer
Salin (PBS), dan Larutan
Farland.
3.3 Cara Kerja
Adapun cara kerja dalam praktikum
Penghitungan Jumlah Bakteri ini
adalah sebagai beriku :
Standar Plate Count Method
1.Diencerkan 3 tabung PCA dalam
air mendidih.
2.Didinginkan agar di dalam penagas
air (50°C) selama 5-10 menit.
3.Setelah agar dingin, dituangkan
media agar ke dalam petridish dan
membiarkan media agar membeku,
menandai petridish dengan nama dan
tingkat pengenceran.
4.Dibuat seri pengenceran 10-1 -10-3
dari sample bakteri.Pipet 0,1 ml
cairan masing-masing pengenceran
tersebu kedalam petridish
sesuai.
5.Gunakan spreder untuk mearatakan
suspense diatas permukaan lempeng
agar
6. Membungkus petridish dengan
menggunakan kertas pembungkus
dan masukanlah kedalam inkubator
35°C dalam posisi terbalik selama
24-48jam.
7.Menghitung koloni pada petri yang
mempunyai kisaran 25-250 koloni.
Mc 8.Hitunglah jumlah bakteri hidup
dengan suatu cara mengalikan faktor
pengenceran yang digunakan dengan
10 (karena volume suspensi bakteri
yang dimasukkan kedalam petri
hanya 0,1 ml).
8. Hasil akhir pengalian merupakan
jumlah bakteri yang hidup dalam
satuan yang disebut colony-forming
unit/ml (CFU/ml).
Metode Turbidimetri
1.Dibuat larutan standar McFarland
(lampiran).
2.Dinyalakan alat spektrofotometer
dan juga dipanaskan terlebih dahulu
selama 30 menit.
3.Dimasukkan larutan blangko yang
telah dimasukkan cuvvette kedalam
yang spektrofotometer dan diatur panjang
gelombangnya yang terdapat pada
spektrofotometer sebesar 625 nm.
4.Di “BLANK” kan terlebih dulu
alat spektrofotometer nya hingga
absorbansi nya “NOL”.
5.Kemudian, dimasukkanlah larutan
yang telah berisi bakteri Aeromonas
Hydrophila ke dalam cuvvette dan
dimasukkan dalam spektrofotometer.
6.Ditutup alat spektrofotometer dan 7.Dicatat hasil dan dihitung dengan
dihitung absorbansi nya. rumus regresi.
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan didapatkan hasil sebagai berikut :
4.1 Hasil Pengamatan
No Nama Sampel Absorbansi Tingkat Kepadatan
1 Bacillus sp. 0,307 7,4044 x108 CFU/ml

2 Air Tawar 0,767 1,70722 x 109 CFU/ml

3 Ikan Cupang 0,483 1,64332 x 109 CFU/ml

4 Air Laut 0.793 2,07766 x 109 CFU/ml

5 Ikan B 5-6 0,503 1,25396 x 109 CFU/ml

6 Aeromonas hydrophila 0,053 7,496 x 107CFU/ml

Y = 7,4044 x108 CFU/ml

Perhitungan :
2. Kelompok 2 : diketahui X =
Rumus : Y = aX – b
0,767, a = 2,62 x 109 , b = 6,39 x107
Keterangan : Y : kepadatan(CFU/ml)
X : absorbansi Penyelesaian :
a : Interscept Y = aX-b
b : slope Y = 2,62 x 109 (0,676) - 6,39 x107

1.Kelompok 1 : diketahui X = 0,307, Y = 177,112 107 −¿ 6,39 x107

a = 2,62 x 109 , b = 6,39 x107 Y = 170,722 x 107

Y = 1,70722 x 109 CFU/ml
Penyelesaian :
Y = aX-b 3. Kelompok 3 : diketahui X =

Y = 2,62 x 109 (0,307) - 6,39 x107 0,483, a = 2,62 x 109 , b = 6,39 x107

Y = 80,434 x 107 - 6,39 x107 Penyelesaian :

Y = 74,044 x107 Y = aX-b

Y = 2,62 x 109 (0,483) - 6,39 x107
Y = 126,546 x 107 −¿ 6,39 x107
Y = 164,332 x 107
Y = 1,64332 x 109 CFU/ml
4. Kelompok 4 : diketahui X =
0,793, a = 2,62 x 109 , b = 6,39 x107
Penyelesaian:
Y = aX-b
9 7
Y = 2,62 x 10 (0,793) - 6,39 x10
Y = 207,766 x 107 −¿ 6,39 x107
Y = 201,376x 107
9
Y = 2,07766 x 10 CFU/ml
5.Kelompok 5 : diketahui X = 0,503,
9 7
a = 2,62 x 10 , b = 6,39 x10
Penyelesaian:
Y = aX - b
9 7
Y = 2,62 x 10 (0,503) - 6,39 x10
7 7
Y = 131,786 x 10 −¿ 6,39 x10
7
Y = 125,396 x 10
9
Y = 1,25396 x 10 CFU/ml
6.Kelompok 6 : diketahui X = 0,053,
a = 2,62 x 109 , b = 6,39 x107
Penyelesaian
Y = aX - b
Y = 2,62 x 109 (0,053) - 6,39 x107
Y = 13,886 x 107 −¿ 6,39 x107
Y = 7,496 x 107 CFU/ml
4.2 Pembahasan
Berdasarkan praktikum yang telah
dilakukan didapatkan hasil bahwa
nilai absorbansi pada bakteri
Bacillus Sp sebesar 0,307 dan setelah
nilai absorbansi dihitung kembali
dengan menggunakan rumus regresi
Y = aX-b maka didapatkan hasil
tingkat kepadatan bakteri sebesar
7,4044 x108 CFU/ml. pada bakteri
isolat air tawar didapatkan nilai
absorbansi sebesar 0,767 dan juga
setelah nilai absorbansi dihitung
kembali dengan menggunakan rumus
regresi Y = aX-b ,maka didapatkan
hasil tingkat kepadatan bakteri
sebesar 1,70722 x 109 CFU/ml. Pada
bakteri isolat ikan cupang didapatkan
nilai absorbansi sebesar 0,483 dan
juga setelah nilai absorbansi dihitung
kembali dengan menggunakan rumus
regresi Y = aX-b maka didapatkan
hasil tingkat kepadatan bakteri
sebesar 1,64332 x 109 CFU/ml. Pada
bakteri isolat air laut didapatkan juga
nilai absorbansi sebesar 0,793 ,dan
juga setelah nilai absorbansi dihitung
kembali dengan menggunakan rumus
regresi Y = aX-b maka didapatkan
hasil tingkat kepadatan bakteri
sebesar 2,07766 x 109 CFU/ml. Pada
bakteri Isolat Ikan B 5-6 didapatkan
nilai absorbansi sebesar 0,503 dan
juga setelah nilai absorbansi dihitung
kembali dengan menggunakan rumus
regresi Y = aX-b maka didapatkan
hasil tingkat kepadatan bakteri
sebesar 1,25396 x 109 CFU/ml.
Sedangkan pada bakteri Aeromonas
Hydrophila didapatkan nilai
absorbansi sebesar 0,053 dan setelah
nilai absorbansi itu dihitung kembali
dengan menggunakan rumus regresi
Y = aX-b maka didapatkan juga hasil
tingkat kepadatan bakteri yaitu
sebesar 1,25396 x 109 CFU/ml.
Adapun prinsip kerja dari percobaan
penghitungan jumlah bakteri ini
adalah untuk menentukan suatu nilai
absorbansi dari berbagai jenis sampel
bakteri, kemudian nilai absorbansi
tersebut biasanya digunakan untuk
menentukan tingkat kepadatan suatu
koloni bakteri. Berdasarkan hasil
yang didapat, hasil-hasil tersebut
menunjukkan bahwa setiap tingkat
kepadatan bakteri antara sampel satu
dengan sampel yang lain nya itu
berbeda. Hal tersebut dikarenakan
tingkat pertumbuhan bakteri yang
berbeda-beda. Pada penentuan nilai
absorbansi maka digunakan larutan
blangko dan juga panjang gelombang
625nm.Larutan blangko itu dibuat
dengan maksud dan tujuan untuk
membuat kurva standar atau kurva
kalibrasi sehingga nanti juga akan
diperoleh suatu panjang gelombang
maksimum dari larutan blangko
tersebut. Kenapa panjang gelombang
maksimum yang dipilih, hal ini
karena di sekitar panjang gelombang
maksimum tersebut, bentuk kurva
serapan adalah datar sehingga hukum
Lambert-Beer akan terpenuhi dengan
baik. Sehingga suatu kesalahan yang
ditimbulkan oleh panjang gelombang
maksimum dapat diperkecil.
Dalam menggunakan metode standar
/viable plate count method , apabila
kepadatan bakteri di media tertentu
terlalu tinggi ,maka dilakukan proses
pengenceran.Proses pengenceran ini
dilakukan dengan suatu tujuan untuk
mengurangi kepadatan suatu koloni
bakteri. Proses-proses pengenceran
ini dilakukan dengan cara : suatu
sampel dari suatu suspensi yang
berupa campuran bermacam- macam
bakteri , kemudian diencerkan dalam
suatu tabung yang tersendiri. Dari
hasil pengenceran ini kemudian di
ambil kira-kira sebanyak 1 mL untuk
diencerkan lebih lanjut. Biasanya 1.Dinyalakan alat spektrofotometer
pengenceran ini dilakukan sampai dan juga dipanaskan terlebih dahulu
dengan 10-3 .Jika dari pengenceran selama 30 menit.
yang ketiga ini, diambil 0,1 mL 2.Dimasukkan larutan blangko yang
untuk disebarkan pada suatu medium telah dimasukkan cuvvette kedalam
padat, kemungkinan besar kita akan spektrofotometer dan diatur panjang
mendapatkan beberapa koloni yang gelombangnya yang terdapat pada
akan tumbuh dalam mdium tersebut, spektrofotometer sebesar 625 nm.
akan tetapi mungkin juga kita hanya
3.Di “BLANK” kan terlebih dulu
akan memperoleh satu koloni saja.
alat spektrofotometer nya hingga
Dalam hal yang demikian ini dapat
absorbansi nya “NOL”.
kita jadikan piaraan murni. Jika kita
4.Kemudian, dimasukkanlah larutan
belum yakin, Bahwa koloni tunggal
yang telah berisi bakteri Aeromonas
yang telah kita peroleh tersebut
Hydrophila ke dalam cuvvette dan
merupakan koloni yang murni, maka
dimasukkan dalam spektrofotometer.
kita dapat mengulang pengenceran
5.Ditutup alat spektrofotometer dan
dengan menggunakan koloni ini
dihitung absorbansi nya. Serta dicatat
sebagai sampel (Trianda, 2011).
hasilnya.
Penghitungan jumlah bakteri pada
Prinsip kerja dari spektrofotometer
praktikum ini, dilakukan dengan
berdasarkan oleh hukum Lambert-
Analisa Spektrofotometer. Analisa
Beer, apabila cahaya monokromatik
spektrofotometer ini memiliki prinsip
(I0),melalui suatu media (larutan),
yang didasarkan kepada kekeruhan
maka akan sebagian cahaya tersebut
yang diakibatkan oleh tumbuhnya
diserap (Ia), sebagian dipantulkan
bakteri di media. didalam analisa
(Ir), dan sebagian lagi dipancarkan
spektrofotometer ini , penghitungan
(It).Transmitans adalah perbandingan
jumlah suatu bakteri ini dilakukan
antara suatu intensitas cahaya yang
dengan menggunakan alat-alat yang
akan di transmisikan ketika melewati
bernama “Spektrofotometer” cara
sampel (It) dengan intensitas cahaya
kerja alat ini yaitu :
mula-mula sebelum melewati sampel
(Io). Persyaratan hukum Lambert-
Beer yaitu antara lain : Radiasi yang V.KESIMPULAN DAN SARAN
akandigunakan harus monokromatik,
5.1 Kesimpulan
energi radiasi yang di absorpsi oleh
sampel tidak menimbulkan reaksi Berdasarkan praktikum yang telah
kimia, suatu sampel (larutan) yang dilakukan didapatkan kesimpulan
mengabsorpsi harus homogen, tidak sebagai berikut :
akan terjadi flouresensi atau juga
phosphoresensi, dan indeks refraksi 1. Apabila semakin besar suatu

sangat tidak berpengaruh terhadap nilai absorbansi maka semakin besar

konsentrasi, jadi larutan harus pekat pula konsentrasi sampel yang

(tidak encer). didapat.

CFU (Coloning Forming Unit) yaitu 2. CFU (Coloning Forming Unit)

unit-unit / satuan pembentuk koloni. yaitu sel-sel bakteri yang hidup

Yang dimaksud dengan satuan kemudian dipisahkan dari koloni

pembentuk koloni adalah sel tunggal lainnya melalui proses pengenceran

atau sekumpulan sel yang jika maka sel-sel bakteri tersebut akan

ditumbuhkan dalam cawan akan berkembang menjadi koloni tunggal

membentuk satu koloni tunggal. dengan ciri khas masing-masing.

Colony Forming Unit juga dapat 3.Spektrofotometer adalah metode

dilaporkan sebagai CFU per satuan analisis yang didasarkan kepada

berat ,CFU per satuan luas ,atau CFU kekeruhan yang ditimbulkan akibat

per satuan volume. Tergantung pada bakteri yang tumbuh pada media.

jenis sampel yang diuji .Atau dengan 4.Penghitungan jumlah bakteri dapat

kata lain apabila sel bakteri yang dilakukan dengan 2 metode yaitu

hidup kemudian dipisahkan dari standar/viable plate count method

koloni lainnya melalui proses dan Analisa Spektrofotometer.

pengenceran maka sel-sel bakteri

5.2 Saran
tersebut akan berkembang menjadi
Sebaiknya dalam praktikum yang
koloni tunggal dengan ciri khas
akan datang alat dan bahan lebih
masing-masing.
dilengkapi ,sehingga praktikan tidak
perlu bergantian dalam melakukan Penerbit Buku Kedokteran
penghitungan jumlah bakteri dan EGC: Jakarta.
asisten dosen juga harus lebih Pelczar, Michael, J., 1986, Dasar-
mendampingi ketika semua praktikan Dasar Mikrobiologi,
melakukan praktikum. Universitas Indonesia:
Jakarta.
DAFTAR PUSTAKA Schlegel, H., G. 1994. Mikrobiologi
Umum. Gadjah Mada
Bibiana W, Lay., 1994, Analisis
University Press; Yogyakarta.
Mikrobiologi di laboratorium
Stainer, R.Y. 1986. The Microbial
, Raja Grafindo Persada:
World. Prentice Hall.
Jakarta.
Englewood Cliffs. New

Brady, J. E. 1999. Kimia Universitas Jersey.

Asas dan Struktur. Volk, W.A. dan M.F. Wheeler,

Binarupa Aksara: (1989). Mikrobiologi Dasar,

Jakarta. Edisi Kelima, Jilid Dua.

Dwidjoseputro, D. 1978. Dasar- Diterjemahkan dari buku

Dasar Mikrobiologi. Basic Microbiology oleh

Penerbit Djambatan; Markham. Erlangga: Jakarta.

Jakarta. Volk, dan Wheeler., 1993, Dasar-

Fardiaz, S. 1993. Analisis Dasar Mikrobiologi,

Mikrobiologi Pangan. PT. Erlangga, Jakarta.

Raja Grafindo Persada;

Jakarta.
Gibson, J.M. (1996). Mikrobiologi
dan Patologi Modern Untuk
Perawat. Diterjemahkan dari
buku Modern Microbiology 
and Patology for Nurses oleh
I.K.G. Soma Prasada.