Pembimbing : Hj. Syahida Djasang, SKM,.M.M.

Kes
TUGAS INDIVIDU
SITOHISTOLOGI (P) & (T)

“RANGKUMAN”

TAHAPAN PEMBUATAN PREPARAT JARINGAN

Oleh

LEODIAS GERALD REPPA

PO.71.4.203.17.1.018

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENTRIAN KESEHATAN JURUSAN ANALIS

KESEHATAN MAKASSAR

PROGRAM STUDI SARJANA TERAPAN

2020
 A. Pengertian Histologi
Kata Histologi berasal dari bahasa Yunani yaitu Histo yang berarti jaringan dan Logos
yang berarti ilmu. Histologi adalah ilmu yang mempelajari tentang sel dan matriks
ekstraseluler dari jaringan. Jaringan dibentuk oleh dua komponen yang saling berinteraksi
yaitu sel dan matriks ekstrasel. Matriks ekstrasel terdiri atas banyak jenis molekul, dan
kebanyakan diantaranya sangat rumit dan membentuk struktur kompleks, seperti serabut dan
membran basal. Fungsi matriks ekstrasel ini adalah sebagai penunjang mekanis bagi sel- sel,
mengangkut nutrien ke sel- sel, dan membawa katabolit dan produk sekresi. Walaupun
menghasilkan matriks ekstrasel, sel tersebut dipengaruhi dan kadang diatur oleh molekul-
molekul matriks. Sehingga terdapat semacam interaksi intensif antara sel- sel dan matriks.
Jaringan yang berasal dari manusia tentulah yang paling ideal karena struktur histologi
yang harus dipelajari adalah struktur histologi manusia. Jaringan tubuh ini dapat diambil dari
cadaver (jenazah) dengan syarat jaringan atau organ tersebut diambil kurang dari 3 jam
setelah kematian, sebab bila lebih lama sudah terjadi pembusukan atau autolisis. Sayangnya
syarat tersebut pada masa kini hampir mustahil dapat dipenuhi. Cara lain adalah mengambil
jaringan atau organ tersebut dari kamar operasi. Setelah jaringan atau organ tubuh yang akan
dibuat sajian histologi diisolasi dari sumbernya, jaringan tubuh tersebut kemudian diproses
hingga menjadi sajian histologi. Rangkaian proses pembuatan blok preparat jaringan terdiri
atas :
1.      Fiksasi (Fixation)
2.      Dehidrasi (Dehydration)
3.      Pembeningan (Clearing)
4.      Pembenaman (Impregnasi/Embedding)
5.      Pengecoran (Blocking)
6.      Pemotongan jaringan (Cutting)
7.      Pewarnaan (Staining)
8.      Perekatan (Mounting)
9.      Pelabelan (Labelling)

B.  Isolasi / Pengambilan Jaringan Tubuh
Cara Pengambilan Jaringan Tubuh:
1.      Pemeriksaan Jaringan
Sebelum di lakukan pembuatan blok preparat dilakukan pencocokan identitas.
Identitas pasien harus sesuai dengan sampel.

2.      Pemotongan Jaringan
 Jaringan yang akan diperiksa harus diambil dari bagian yang representatif (mewakili)
seluruh, yang paling abnormal. Apabila jaringan besar dipotong dengan
pemotongan ‘gross’ tebalnya 0,4 cm lalu dimasukan ke dalam ‘cassette’
3.      Cairan Fiksasi
Cairan yang sering digunakan adalah Formalin Buffer 10% dengan perbandingan
(1:10) Jaringan harus direndam dengan cairan fiksasi volume 10 kali, hal ini bertujuan agar
seluruh permukaan jaringan meresap dengan sempurna. Karena pada tahap ini akan
mempengaruhi pada tahapan selanjutnya.

C.  Pembuatan Sediaan Jaringan

1. Fiksasi Jaringan yang telah dimasukan ke dalam cassete selanjutnya di fiksasi selama
24 jam dengan menggunakan alat Tissue Automatic Prossesor.
Tujuan dari fiksasi adalah untuk :
a. Mengawetkan jaringan
Fiksasi bertujuan untuk mempertahankan susunan jaringan agar mendekati kondisi
seperti sewaktu hidup.
b. Mengeraskan jaringan
Fiksasi bertujuan untuk mengeraskan jaringan terutama jaringan lunak agar
memudahkan pembuatan irisan tipis.
c. Mempertahankan morfologi jaringana agar sama dengan tubuh.

2. Dehidrasi
` Dehidrasi merupakan langkah kedua dalam pemrosesan jaringan. Proses ini bertujuan
untuk mengeluarkan seluruh cairan yang terdapat dalam jaringan yang telah difiksasi
sehingga jaringan nantinya dapat diisi dengan parafin atau zat lainnya yang dipakai untuk
membuat blok preparat.
Cara melakukan dehidrasi :
Proses dehidrasi dijalankan secara perlahan-lahan menggunakan alkohol bertingkat,
dimulai dengan alkohol presentase rendah sampai dengan alkohol absolute. Dimulai dengan
alkohol 30 %, kemudian 50 %, 70 %, 80 %, 95 %, alkohol absolute. Waktu yang
dipergunakan untuk setiap tingkat alkohol tergantung dari besar kecilnya jaringan. Alkohol
absolute mempunyai kemampuan memperkeras jaringan. Sebagai ancar-ancar jaringan
jangan ditinggalkan didalam alkohol tersebut lebih dari 1 atau 2 jam untuk jaringan
berukuran biasa ( tebal 2-4 mm)

3.  Clearing (Pembeningan) dan Infiltrasi Parafin

 Pembeningan adalah suatu tahap untuk mengeluarkan alkohol dari jaringan dan
menggantinya dengan suatu larutan yang dapat berikatan dengan parafin. Jaringan tidak dapat
langsung dimasukkan ke dalam parafin karena alkohol dan parafin tidak bisa saling
melarutkan.
Bahan atau reagen pembening yang paling sering dipakai adalah  sebagai berikut:
a. Chloroform
b. Benzene/ benzol
c. Xylene/ xylol
d. Cedar wood oil
e. Benzil benzoat
f. Methyl benzoat

Cara melakukan Clearing:

a. Setelah jaringan dikeluarkan dari cairan dehidrasi (alkohol) jaringan dimasukkan
kedalam xylol I selama 1 jam.
b. Perhatikan jaringan akan menjadi bening
c. Untuk menyakinkan bahwa seluruih cairan alkohol telah keluar, jaringan kemudian
dipindahkanke cairan xylol II. Lama inkubasi dalam xylol tergantung pada besarnya
jaringan, tetapi biasanya berkisar antara ½ - 1 jam.
d. Jaringan kemudian direndam dalam parafin cair di dalam oven selama kira-kira ½
jam. Setelah itu jaringan siap untuk dimasukkan kedalam blok parafin.
4. Embedding (Pembenaman)
Pembenaman (impregnasi) adalah proses untuk mengeluarkan cairan pembening (clearing
agent) dari jaringan dan diganti dengan parafin. Pada tahap ini jaringan harus benar-benar
bebas dari cairan pembening karena sisa cairan pembening dapat mengkristal dan sewaktu
dipotong dengan mikrotom akan menyebabkan jaringan menjadi mudah robek.
Cara melakukan Embbeding:
Mengeluarkan jaringan yang sudah impregnasi dari  moldtray, kemudian
menempelkannya ke dalam lempengan blok yang berisi parafin cair. Setelah itu tutup
menggunakan casette atau deckel lalu didinginkan pada cold plate. Disebut blok preparat.

5. Cutting (Pemotongan)
 Pemotongan adalah proses pemotongan blok preparat dengan menggunakan mikrotom.
Pemotongan ada 2:
a.  Pemotongan kasar, berguna untuk mendapatkan penampang atau dasar jaringan
dengan ketebalan 25-30 mikron.
b. Pemotongan halus/Section, berguna untuk mendapatkan lembaran pita dengan
ketebalan 5 mikron (Standar Internasional)

Sebelum melakukan pemotongan serangakaian persiapan yang harus dilakukan adalah :

1.      Persiapan pisau mikrotom
Pisau mikrotom harus diasah sebelum dipakai agar jaringan dapat dipotong dengan
baik dan tidak koyak sehingga didapatkan jaringan yang baik.
Pisau mikrotom kemudian diletakan pada tempatnya di mikrotom dengan sudut tertentu.
Rekatkan blok parafin pada holder dengan menggunakan spatula atau scalpel.
Letakkan tempat duduk blok parafin beserta blok preparat pada tempatnya pada mikrotom.
2.      Persiapan Kaca Objek
Kaca objek yang akan direkatkan preparat harus telah dicoated (disalut) dengan zat perekat
seperti albumin (putih telur), gelatin atau tespa
3.      Persiapan
a. Waterbath atau wadah berisi air hangat dengan temperatur 37-400C
b. Persiapan sengkelit atau kuas
Teknik pemotongan parafin yang mengandung preparat adalah sebagai berikut :
a. Rekatkan blok parafin yang mengandung preparat pada tempat duduknya di
mikrotom. Tempat duduk blok parafin beserta blok parafinnya kemudian diletakkan
pada pemegangnya (holder) pada mikrotom dan dikunci dengan kuat.
b. Letak pisau mikrotom pada tempatnya dan atur sudut kemiringannya. Biasanya sudut
kemiringan berkisar 20-30 derajat.
c. Atur ketebalan potongan yang diinginkan, biasanya dipakai ketebalan antara 5-7
mikrometer
d. Gerakkan blok preparat ke arah pisau sedekat mungkin dan potonglah blok preparat
secara teratur dan ritmis. Buang pita-pita parafin yang awal tanpa jaringan  hingga
kita mendapatkan potongan yang mengandung preparat jaringan.
e. Pita parafin yang mengandung jaringan lalu dipindahkan secara hati-hati
menggunakan sengkelit atau kuas kedalam waterbath yang temperaturnya diatur 37-
40C dan biarkan beberapa saat hingga poita parafin tersebut mengembang.
 f. Setelah pita parafin terkembang dengan baik, tempelkan pita parafin tersebut pada
kaca objek yang telah dicoated dengan cara memasukkan kaca objek itu kedalam
waterbath dan menggerakkannya ke arah pita parafin. Dengan menggunakan sengkelit
atau kuas pita parafin ditempelkan pada kaca objek. Setelah melekat kaca objek
digerakkan keluar dari waterbath dengan hati-hati agar pita parafin tidak melipat.
g. Letakkan kaca objek yang berisi pita parafin di atas hotplate dengan temperatur 40-
45C, biarkan selama beberapa jam. Cara lainnya adalah dengan melewatkan kaca
objek di atas api sehingga pita parafin melekat erat di atas kaca objek.
h. Setelah air kering dan pita parafin telah melekat dengan kuat, simpan kaca objek
berisi potongan parafin dan jaringan sampai saatnya untuk diwarnai.

6. Steaning (Perwarnaan)
Pewarnaan ini yaitu memberikan warna yang kontras terhadap jaringan sehingga apabila
diamati dengan bantuan mikroskop bagian-bagian dari jaringan tersebut tampak
jelas. Tujuannya untuk mewarnai jaringan sehingga mudah diamati di mikroskop.
Pewarnaan Hematoksilin-Eosin (HE)
Menggunakan 2 macam zat warna yaitu:
·         Hematoksilin yaitu memulas inti sel dan memberikan warna biru (basofilik).
·         Eosin yang merupakan counterstaining hematoksilin, memulas sitoplasma sel dan
jaringan penyambung dan memberikan warna merah muda dengan nuansa yang berbeda. 
Pewarnaan HE
Tahapan staining terdiri dari :
a. Proses deparafinasi atau penarikan parafin dari dalam jaringan.
b. Proses rehidrasi atau pemasukan molekul air ke dalam jaringan yang dilakukan secara
bertahap dengan menggunakan alkohol bertingkat dari konsentrasi tinggi ke
konsentrasi rendah. Proses ini sebagai media penghantar zat warna ke jaringan.
c. Selanjutnya proses infiltrasi zat warna. Menggunakan haematoxilin untuk mewarnai
sitoplasma dan eosin untuk mewarnai inti sel.
d. Lalu dehidrasi kembali yang bertujuan untuk mencegah kerusakan pada jaringan
karena mengakibatkan terjadinya pembusukan.
e. Setelah parafin dikeluarkan dengan menggunakan xilen selama 20 menit preparat
dikeringkan dan diolesi dengan entelan dan ditutup dengan deck glass.  Kemudian
diamati di bawah mikroskop
Interpretasi hasil :
·         Inti sel bewarna biru
·         Sitoplasma bewarna kemerahan dengan adanya beberapa variasi warna pada komponen
tertentu

Perwarnaan Papanicalou cara fiksasi basah dengan alkohol 70 % selama 30 menit

Terdapat 3 perwarnaan inti:
a. Hematosiklin, untuk mewarnai inti sel
b. OG6, untuk mewarnai sitoplasma yang selnya tua (mature) berwarna pink selama 5
menit
c. EA50, untuk mewarnai sel muda berwarna hijau.

7. Mounting (Perekatan)
Perekatan (mounting) menempelkan potongan jaringan yang baik ke obyek glass.
Proses Mounting
·         Obyek glass diberi albumin agar jar menempel dengan baik
·         Dimasukkan ke dalam water bath suhu 30 0C - lembaran pita tidak melipat
·         Bila sudah menempel dikeringkan/ diriskan (Bisa dengan hot plate)

8. Labelling
Yaitu untuk memberikan suatu tanda atau kode dengan tujuan untuk mencegah
kekeliruan terutama apabila banyak sediaan yang dikerjakan dalam label tersebut.
a. Jenis atau asal sediaan
b. Cairan fiksasi yang digunakan
c. Tanggal pembuatan
d. Pewarnaan yang digunakan
e. Nama penugas yang mengerjakan