Akses Publik HHS

Naskah penulis
ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.
Naskah Penulis

Diterbitkan dalam bentuk akhir yang diedit sebagai:

ACS Nano. 24 April 2018; 12 (4): 3714–3725. doi: 10.1021 / acsnano.8b00940.

Antigen Membran Khusus Prostat Bertarget Nanopartikel Emas

untuk Theranostik Kanker Prostat

Joey Dacula Mangadlao †, ⊥, Xinning Wang †, ‡, ⊥, Christopher McCleese §, Maria Escamilla §,

Gopalakrishnan Ramamurthy †, Ziying Wang †, Mukul Govande †, James P. Basilion *, †, ‡, dan
Clemens Burda *, §
† Departemen Radiologi, Universitas Case Western Reserve, Cleveland, Ohio 44106, Amerika Serikat
Naskah Penulis

‡ Departemen Teknik Biomedis, Universitas Case Western Reserve, Cleveland, Ohio

44106, Amerika Serikat

§ Departemen Kimia, Universitas Case Western Reserve, Cleveland, Ohio 44106, Amerika Serikat

Abstrak
Kanker prostat adalah salah satu kanker paling umum dan di antara penyebab utama kematian akibat kanker di Amerika Serikat. Pria

yang didiagnosis dengan penyakit ini biasanya menjalani prostatektomi radikal, yang sering mengakibatkan inkontinensia dan

impotensi. Kekambuhan penyakit ini sering dialami oleh sebagian besar pasien dengan prostatektomi tidak lengkap selama

pembedahan. Oleh karena itu, pengembangan teknik yang memungkinkan ahli bedah mencapai prostatektomi yang lebih tepat tetap
Naskah Penulis

menjadi tantangan terbuka. Dalam kontribusi ini, kami melaporkan agen theranostic (AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4) berdasarkan

antigen membran spesifik prostat (PSMA-1) -targeted gold nanoparticles (AuNPs) sarat dengan obat fluorescent photodynamic

therapy (PDT), Pc4. Nanopartikel yang dibuat memiliki karakter yang baik dengan teknik spektroskopi dan pencitraan dan ditemukan

stabil pada berbagai pelarut, In vitro percobaan serapan seluler menunjukkan serapan nanopartikel secara signifikan lebih tinggi

dalam sel PC3pip PSMA-positif daripada di sel PC3flu PSMA-negatif. Lebih lanjut, pembunuhan sel yang lebih lengkap diamati di

Pc3pip daripada di sel PC3flu setelah terpapar cahaya pada dosis yang berbeda, menunjukkan penargetan aktif diikuti oleh

pengiriman Pc4. Juga, in vivo penelitian menunjukkan remisi pada tumor yang mengekspresikan PSMA 14 hari setelah PDT.

Spektroskopi absorpsi atom mengungkapkan bahwa AuNP yang ditargetkan terakumulasi 4 kali lipat lebih tinggi di PC3pip daripada

di tumor PC3flu. Sistem nanopartikel yang dijelaskan di sini diharapkan dapat memberikan panduan bedah untuk reseksi tumor

prostat dan intervensi terapeutik saat pembedahan tidak mencukupi.

Naskah Penulis

*
Penulis Terkait: cxb77@case.edu. jxb206@case.edu.
⊥ Kontribusi Penulis
JD Mangadlao dan X. Wang memberikan kontribusi yang sama untuk pekerjaan ini.

informasi pendukung
Informasi Pendukung tersedia gratis di Situs web ACS Publications di DOI: 10.1021 / acsnano.8b00940 .
Kromatogram HPLC untuk pemurnian peptida dan konjugat, citra TEM dari AuNP-DDA, distribusi ukuran AuNP DDA yang disintesis dalam batch yang berbeda,
hasil studi stabilitas, grafik DLS yang representatif, ringkasan eksperimen pembentukan oksigen singlet, studi pelepasan di media dan dalam darah, dan
mekanisme deteksi DCFDA dari ROS ( PDF )

Para penulis menyatakan tidak ada kepentingan finansial yang bersaing.

 Mangadlao dkk. Halaman 2

Abstrak Grafis
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Kata kunci

kanker prostat; PSMA; nanopartikel emas; terapi fotodinamik; theranostics

Kanker prostat adalah kanker paling umum dan merupakan penyebab utama ketiga kematian akibat kanker pada pria di Amerika

Serikat. 1 Sekitar 161.000 diagnosis dan 26.730 kematian diproyeksikan pada tahun 2017 di antara pria Amerika. Sekitar 91% pria

yang didiagnosis dengan penyakit ini pada pemeriksaan awal memiliki tumor yang terlokalisasi secara klinis dan merupakan

kandidat untuk prostatektomi radikal, atau operasi pengangkatan kelenjar prostat. 2 Namun, selama pembedahan, kanker telah

terbukti menyebar ke luar prostat pada 20-42% pasien, mengakibatkan kegagalan untuk mencapai kesembuhan bedah pada pasien

yang menjalani prostatektomi radikal. 3 Selain itu, pendekatan bedah untuk kanker prostat sebagian besar dikaitkan dengan

morbiditas yang signifikan seperti inkontinensia (3-74%) dan impotensi (30-90%). 4–7 Oleh karena itu, pengembangan teknologi yang
Naskah Penulis

akan meningkatkan tingkat keberhasilan prostatektomi dan secara bersamaan mengurangi morbiditas terkait pembedahan pada

kanker lokal tidak hanya merupakan tantangan terbuka tetapi juga merupakan kebutuhan yang mendesak.

Berkat biologi molekuler modern, antigen membran khusus prostat (PSMA) diidentifikasi untuk membedakan penyakit
jinak dari penyakit ganas, memungkinkan pengembangan target potensial untuk strategi pengobatan. 8 PSMA
merupakan protein transmembran tipe II yang terdiri dari 750 residu asam amino dengan berat molekul 110 kDa. Ini
diekspresikan secara berlebihan dalam semua kasus adenokarsinoma prostat dan di neovaskulatur tumor padat seperti
usus besar, payudara, dan karsinoma paru. 9 Lebih penting lagi, ekor sitoplasma dari PSMA memiliki motif internalisasi
yang menunjukkan bahwa terapi dengan ligan PSMA diinternalisasi ke dalam sel. 10,11
Naskah Penulis

Dalam studi ini, kami mengembangkan platform berbasis nanopartikel untuk menargetkan tumor kanker prostat untuk

pemberian obat fluoresen dan terapi fotodinamik (PDT), Pc4 (Skema 1). Tinjauan singkat tentang mekanisme PDT dapat

ditemukan di Informasi Pendukung, dan tinjauan menyeluruh dibahas di bagian lain. 12 Pada akhirnya, kami

memperkirakan teknologi ini berpotensi meningkatkan tingkat keberhasilan prostatektomi dan sekaligus mengurangi

operasi-

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 3

morbiditas terkait pada kanker lokal. Menggunakan model tikus sebagai langkah pertama dalam mencapai tujuan ini, kami
Naskah Penulis

membangun keahlian kami dengan pencitraan molekuler dan pengiriman obat nanopartikel untuk mengembangkan nanopartikel

posko yang berpotensi memungkinkan pengangkatan jaringan kanker dengan panduan gambar dan memberikan manfaat

tambahan untuk memungkinkan ablasi penyakit. jaringan yang tidak dapat direseksi. Sebagai bukti konsep, model hewan yang

membawa tumor kanker prostat yang ditanam secara heterotopis digunakan untuk memastikan kelayakan pendekatan yang

diusulkan.

Idealnya, agen PDT yang baik harus memiliki daya serap maksimum yang tinggi pada panjang gelombang lebih dari 630 nm

(penetrasi cahaya jaringan optimal pada daerah merah elektromagnetik.

spektrum), memiliki koefisien kepunahan tinggi, memiliki hasil kuantum tinggi 1 HAI 2, dan memiliki

kelarutan air yang baik. Pc4 berbasis ftalosianin [HOSiPcOSi (CH 3) 2 ( CH 2) 3 N- (CH 3) 2] telah menjadi obat PDT
andalan kami bukan hanya karena sudah disetujui untuk uji klinis 13 tapi
juga karena ia memiliki karakteristik yang disebutkan di atas, kecuali bahwa ia tidak dapat larut dalam sistem air. Untuk
Naskah Penulis

menghindari dilema ini, kami baru-baru ini mengembangkan rute sintetik kovalen menggunakan turunan Pc4 untuk membuat

molekul tersebut larut dalam air. 14 Di masa lalu, kami juga telah mengembangkan platform pengiriman Pc4 berbasis nanopartikel

nonkovalen untuk kanker otak. 15–18 Selain menghilangkan modifikasi sintetis yang membosankan, pendekatan nonkovalen

memastikan pengiriman obat dalam bentuk aslinya. Dengan nanopartikel sebagai sarana pengiriman, kami dapat memanfaatkan

efek peningkatan retensi permeasi (EPR), yang memungkinkan partikel dengan ukuran tertentu memiliki waktu tinggal yang lebih

lama di tumor sebagai konsekuensi dari kebocoran pembuluh darah tumor dan drainase limfatik yang buruk. 19–21 Oleh karena itu

dengan EPR, nanopartikel yang memuat obat secara pasif terakumulasi dalam tumor di mana muatan yang tidak berkapsul secara

non-kovalen dapat dilepaskan dan dipusatkan. Namun, penelitian terbaru menunjukkan bahwa pemberian obat nano berdasarkan

EPR saja menawarkan peningkatan kurang dari 2 kali lipat dalam pengiriman obat, menghasilkan konsentrasi yang tidak cukup

untuk menyembuhkan sebagian besar kanker. 22 Di sisi lain, penargetan aktif, yaitu, nanopartikel difungsikan dengan ligan khusus

untuk biomarker penyakit, meningkatkan afinitas nanopartikel untuk sel tumor, menghasilkan peningkatan waktu tinggal tumor dan

internalisasi oleh endositosis yang dimediasi reseptor. 23,24

Naskah Penulis

Ada beberapa laporan tentang nanopartikel bertarget PSMA. Bahan "lunak" berdasarkan struktur nano
polimerik, seperti nanopartikel poli (asam laktat) −polyethyene glycol (PLAPEG), 25,26 Misel
kolesterol-PEG, 27 dan poliester bercabang alifatik,
28 dan bahan "keras" seperti tabung nano karbon berlapis banyak 29 dan nanopartikel oksida besi superparamagnetik 30

telah difungsikan dengan ligan PSMA untuk pencitraan, pengiriman obat, dan aplikasi terapeutik lainnya. Baru-baru ini,

antibodi antiPSMA terkonjugasi nanopartikel emas dikembangkan untuk mendeteksi penyakit prostat secara

spektroskopi berdasarkan resonansi plasmon permukaan lokal (LSPR) dari nanopartikel emas. 31 Dalam kontribusi ini,

kami melaporkan sintesis, karakterisasi, dan aplikasi nanopartikel emas bertarget PSMA-1 yang dikarakterisasi secara
Naskah Penulis

menyeluruh untuk diagnosis kanker prostat. Ligan PSMA-1 pertama kali dikonjugasi menjadi polietilen glikol (PEG)

yang diakhiri tiol, yang kemudian dicangkokkan ke permukaan AuNP dengan reaksi pertukaran ligan. Kemanjuran

nanopartikel ini terhadap sel PC3pip (PSMA +) dan PC3flu (PSMA−) dievaluasi. In vitro

dan in vivo ( Skema S1). Untuk in vivo studi, sel PC3pip dan PC3flu ditanamkan secara heterotopis ke
dalam sayap kanan dan kiri tikus athymic telanjang. Ketika tumor berukuran cukup, nanodrug
dimasukkan ke hewan melalui injeksi vena ekor.

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 4

Pengikatan preferensial ke tumor pengekspres PSMA dievaluasi menggunakan seluruh hewan in vivo
Naskah Penulis

fluoresensi sistem pencitraan Maestro dan dengan menganalisis kandungan emas tumor ex vivo dengan spektrometri

serapan atom (SSA). Percobaan PDT kemudian dilakukan dengan meradiasi area tumor dengan dioda laser 672 nm.

Hewan-hewan tersebut kemudian dipantau selama 14 hari pasca-PDT, dan pengukuran seperti volume tumor dan berat

badan total dicatat. Secara keseluruhan, hasil percobaan yang dilakukan menunjukkan bahwa PSMA-1-target AuNPs

adalah vektor untuk mengantarkan Pc4 untuk diagnosa kanker prostat. Hal ini berpotensi diterjemahkan ke dalam

aplikasi bedah seperti pencitraan intraoperatif untuk penilaian real-time dari luasnya invasi, operasi dengan panduan

gambar untuk diferensiasi yang tepat antara jaringan yang rusak dan sehat, dan ablasi PDT untuk menjamin

pengangkatan kanker secara maksimal setelah prostatektomi konvensional.

HASIL DAN DISKUSI

Naskah Penulis

PSMA-1 adalah ligan berbasis urea yang disintesis secara rutin di laboratorium kami menggunakan kimia

fluorenylmethyloxycarbonyl standar. Kami sebelumnya telah menunjukkan bahwa PSMA-1

mendemonstrasikan peningkatan afinitas pengikatan (IC 50 = 2.30 nM) dibandingkan dengan reseptor PSMA

untuk ligan induknya Cys-CO-Glu (IC 50 = 9,93 nM). 32 Residu lisin di C-terminus menawarkan kesempatan untuk

mengkonjugasikan molekul yang relevan secara biologis seperti bahan penyesuai,

obat-obatan, dan agen pencitraan melalui banyak sekali bahan kimia amina yang tersedia. Dalam studi ini, kami menggunakan

gugus terminal ortopiridil disulfida (OPSS) yang mengandung PEG bifungsional 5 kDa di satu ujung dan ester

N-hidroksisuksinimida (NHS) di ujung lainnya. PEGylation dilakukan

melalui kimia ikatan silang karbodiimida standar untuk memasangkan ester NHS ke lisin N dari C-terminus
PSMA-1 (Gambar 1a). Bahan hasil sintesis dimurnikan dengan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC), di mana
absorbansi UV dari kelompok OPSS berperan penting dalam memantau keberhasilan konjugasi ligan PSMA-1 dan
PEG. Kami menggunakan MALDI-TOF MS untuk mengkonfirmasi massa konjugat yang disintesis seperti yang
Naskah Penulis

ditunjukkan pada Gambar 1b dan Gambar S1. Setelah konjugasi, sekitar 1 kDa pergeseran spektrum massa
SH-5kPEG-PSMA-1 membuktikan keberhasilan kopling 1087 Da PSMA-1 dan 5 kDa OPSS-5kPEG-NHS.

Dodecylamine (DDA) -stabilized gold nanoparticles (AuNPDDA) kemudian disintesis menggunakan Brust yang
dimodifikasi. - Metode Schiffrin. 16 Gambar mikroskop elektron transmisi (TEM) dari AuNP-DDA ditampilkan pada
Gambar S2. Kami mensintesis tiga batch AuNP-DDA dan melakukan analisis TEM dan UV-vis untuk memastikan
konsistensi dalam pembuatan nanopartikel. Gambar S3 menunjukkan bahwa berdasarkan distribusi ukuran dan profil
spektral sintesis prekursor AuNP-DDA kami konsisten dan dapat direproduksi. Untuk mencangkok ligan PSMA-1 ke
nanopartikel, reaksi pertukaran ligan dilakukan berdasarkan interaksi yang kuat antara emas dan tiol. Singkatnya,
kelebihan ligan SH-5kPEG-PSMA-1 dan SH-5kPEG 1000 molar dalam rasio molar 1: 5 dibiarkan bereaksi dengan 1
Naskah Penulis

ekuiv AuNP-DDA selama 2 hari (Gambar 2a). Ligan berlebih dan produk reaksi lainnya dihilangkan dengan pemurnian
ekstensif menggunakan filter sentrifugasi (MWCO = 50 kDa) diikuti dengan pengeringan beku. Penghapusan lengkap
ligan bebas sangat penting untuk menghindari ikatan kompetitif antara nanopartikel dan ligan tak terikat ke reseptor
PSMA. Oleh karena itu, filtrat juga dikumpulkan, dikeringkan-beku, dan ditimbang pada setiap siklus pemurnian untuk
memastikan penghilangan lengkap. Kami menemukan bahwa sekitar 60% dari ligan yang dimuat melebihi batas,

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 5

menunjukkan bahwa sekitar 40% berhasil dicangkokkan pada nanopartikel (Gambar S4). Untuk menunjukkan
Naskah Penulis

keberhasilan perlekatan ligan PSMA-1 ke nanopartikel, percobaan elektroforesis gel agarosa dilakukan dalam buffer
TAE pada pH 8,3 (Gambar 2b). Bermuatan sangat negatif karena residu asam glutamat yang melimpah, nanopartikel
emas bertarget PSMA-1 bermigrasi ke anoda, menunjukkan bahwa permukaan partikel nano berfungsi dengan baik
dengan peptida. Sebaliknya, nanopartikel emas nontargeted bermigrasi ke katoda bersama dengan pelacak aliran
elektroosmostik, vitamin B12. Hal ini konsisten dengan laporan kami sebelumnya yang merinci mobilitas
elektroforetik dari nanopartikel emas PEGilasi. 33

Diketahui bahwa PEG bermanfaat dalam meningkatkan kelarutan, mengurangi pengikatan nonspesifik,
meningkatkan biokompatibilitas, dan meningkatkan waktu paruh sirkulasi obat-obatan berbasis molekul kecil dan
nanopartikel. 34 Lebih lanjut, amfifilisitas PEG memungkinkan enkapsulasi Pc4 yang tidak larut dalam air dalam
korona partikel nano. Pembebanan Pc4 dilakukan dengan menambahkan 40 kali lipat kelebihan Pc4 ke larutan
Naskah Penulis

AuNP-5kPEG-PSMA-1 dalam kloroform. Karena sifat amfifilik PEG, kloroform membengkak korona, yang
memfasilitasi difusi molekul Pc4 ke dalam lapisan PEG. Setelah inkubasi selama 48 jam, pelarut dihilangkan dan
konjugat AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4 akhir dimurnikan melalui 0,25. μ m filter jarum suntik. Karakterisasi menyeluruh
yang melibatkan teknik spektroskopi dan pencitraan dilakukan untuk memahami sepenuhnya sifat konjugat
nanopartikel yang disintesis. Kami menggunakan spektroskopi UV-vis (Gambar 2c) dan pita LSPR AuNP pada 520
nm dan absorbansi Pc4 pada 670 nm untuk menghitung pembebanan yang terakhir. Kami menemukan rata-rata ~
20 molekul Pc4 per AuNP. Perlu disebutkan bahwa absorbansi Pc4 yang dienkapsulasi secara batiokromik bergeser
dari 670 menjadi 680 nm. Pergeseran 10 nm disebabkan oleh efek elektronik yang ditimbulkan oleh emas dan
lingkungan PEG, yang juga merupakan indikasi bahwa molekul Pc4 sebenarnya terperangkap di dalam cangkang
polimerik. Laporan juga menunjukkan bahwa phthalocya-nines memiliki kecenderungan untuk berkumpul pada
konsentrasi tinggi dan dalam lingkungan pelarut yang buruk, 35,36 Kondisi ini dimungkinkan dalam konjugat
AuNP-Pc4 ini dalam larutan air. Namun, molekul Pc4 tidak mungkin berkumpul di cangkang polimer, karena tidak
Naskah Penulis

ada tanda spektroskopi agregat H dan J yang teridentifikasi.

Keuntungan obat berukuran nano untuk diagnosis dan pengobatan kanker termasuk kemampuannya untuk memiliki kapasitas

pemuatan yang besar, kemampuannya untuk melindungi muatan dari degradasi, rasio luas permukaan terhadap volume yang

besar memungkinkan berbagai ligan target dicangkok, dan kesesuaian untuk dikendalikan atau rilis berkelanjutan. 22 Karena efek

EPR, obat berukuran nano secara istimewa menembus jaringan tumor melalui pembuluh darah bocor dan disimpan di tempat tidur

tumor karena drainase limfatik yang buruk. Efek EPR adalah proses yang bergantung pada ukuran dan waktu; Oleh karena itu,

penting agar nanocarrier berisi obat yang diformulasikan stabil selama periode waktu yang sesuai. Kami menggunakan
Naskah Penulis

spektroskopi UV-vis untuk memantau stabilitas konjugat AuNP pada suhu kamar di buffer dan media yang relevan secara biologis

seperti RPMI

+ 10% FBS, PBS, TBS, buffer sitrat, NSS, dan air pada pH 7, 3, dan 10 (Gambar S5). Kami menemukan bahwa konjugat
dalam larutan stabil di sebagian besar pelarut setidaknya selama tiga bulan. Lebih penting lagi, stabilitas media (RPMI +
10% FBS) patut diperhatikan karena tidak seperti obat molekul kecil, obat nanosized perlahan bocor dari pembuluh darah
setelah dimasukkan melalui intravena. Oleh karena itu, akumulasi obat ke dalam tumor tidak akan mencukupi jika

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 6

obat berukuran nano tidak stabil dalam serum. 37 Kami juga memantau potensi agregasi nanopartikel dengan memeriksanya menggunakan
Naskah Penulis

TEM. Gambar 3a menunjukkan bahwa nanopartikel PEGylated menyajikan distribusi hampir unimodal berpusat pada 5,5 ± 0,4 nm. Untuk

memvisualisasikan cangkang atau korona nanopartikel, sampel diwarnai dengan 2% asam fosfotungstat (PTA) sebelum pencitraan

(Gambar 3b). Ukuran keseluruhan nanopartikel (inti Au + korona) adalah 23 ± 3 nm. Sebaliknya, kami menemukan bahwa ukuran yang

ditentukan oleh hamburan cahaya dinamis (DLS) adalah 26,5 ± 1,1 nm, yang diharapkan, karena DLS mengukur ukuran hidrodinamik,

dengan mempertimbangkan interaksi bahan dengan pelarut (Gambar S6). Stabilitas jangka panjang diuji dengan menyimpan partikel pada

-20 ° C diikuti oleh pencitraan TEM setahun kemudian (Gambar 3d). Menariknya, korona tetap utuh meskipun ukuran keseluruhan

berkurang menjadi 17 ± 2 nm. Untuk mendapatkan pemahaman lebih lanjut tentang fenomena ini, kami memeriksa kembali absorbansi

UV-vis dari nanopartikel dengan menyebarkannya dalam air (Gambar 3d). Nanopartikel secara instan tersebar dalam larutan, menunjukkan

bahwa nanopartikel tidak diaglomerasi dan pada kenyataannya stabil. Selain itu, profil spektral dari larutan nanopartikel berusia satu tahun

melapisi dari sebelumnya. Ini adalah penemuan yang menarik, menunjukkan bahwa polimer yang dicangkokkan kembali ke struktur yang

lebih kompak dari waktu ke waktu. Menjadi polimer kristal dengan polidispersitas sempit, rantai PEG dari waktu ke waktu pada suhu rendah

cenderung mengatur ulang menjadi cangkang padat dan kompak yang mengelilingi partikel nano. kami memeriksa kembali absorbansi

UV-vis dari nanopartikel dengan menyebarkannya dalam air (Gambar 3d). Nanopartikel secara instan tersebar dalam larutan, menunjukkan
Naskah Penulis

bahwa nanopartikel tidak diaglomerasi dan pada kenyataannya stabil. Selain itu, profil spektral dari larutan nanopartikel berusia satu tahun

melapisi dari sebelumnya. Ini adalah penemuan yang menarik, menunjukkan bahwa polimer yang dicangkokkan kembali ke struktur yang

lebih kompak dari waktu ke waktu. Menjadi polimer kristal dengan polidispersitas sempit, rantai PEG dari waktu ke waktu pada suhu rendah

cenderung mengatur ulang menjadi cangkang padat dan kompak yang mengelilingi partikel nano. kami memeriksa kembali absorbansi UV-vis dari nanopartikel dengan menye

Prinsip terapi fotodinamik adalah kemampuan agen PDT untuk menghasilkan reaktif
spesies oksigen (ROS), terutama oksigen singlet ( 1 HAI 2), saat diaktifkan oleh cahaya. Produk yang dihasilkan ini
sangat reaktif dan dapat mengoksidasi komponen seluler utama
ablasi tumor. Untuk mengkonfirmasi kemampuan Pc4 untuk menghasilkan 1 HAI 2, kami melakukan foto-iradiasi dari Pc4 di

hadapan a 1 HAI 2 perangkap, diphenylisobenzofuran (DPBF). Kapan

1 HAI 2 dihasilkan, fotodekomposisi DPBF, yang dapat dengan mudah dipantau oleh absorpsi UV-vis pada 410

nm. Gambar 4a menunjukkan dekomposisi DPBF di hadapan

Naskah Penulis

Pc4 yang diradiasi dari waktu ke waktu, menunjukkan produksi sitotoksik bersamaan 1 HAI 2. Hasil dari

kami 1 HAI 2 percobaan dirangkum dalam Gambar S7, menunjukkan respon pada pelarut yang berbeda (etanol,

PBS, dan media), konsentrasi Pc4, dan dosis ringan. Umumnya,

peningkatan konsentrasi dan dosis menyebabkan dekomposisi DPBF cepat, sehingga cepat
generasi dari 1 HAI 2. Perlu dicatat bahwa kami melakukan percobaan di media untuk menentukan apakah 1 HAI 2 akan

dihasilkan dalam lingkungan biologis. Lebih penting lagi, kami

mengevaluasi generasi 1 HAI 2 spesies konjugat AuNP yang disintesis (Gambar 4b). Kami membandingkan
kinerja AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4 terhadap Pc4 campuran secara fisik
dan AuNP-5kPEG. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4b, kehadiran Pc4 sangat penting dalam pembangkitan

dari 1 HAI 2 spesies, karena DPBF dan AuNP yang tercampur secara fisik saja tidak menunjukkan penurunan absorbansi yang

cukup besar (sedikit peningkatan karena penguapan pelarut). Absorbansi

DPBF campuran fisik + Pc4 turun menjadi 31,5 ± 6,8%, sedangkan DPBF campuran fisik + AuNP-5kPEG + Pc4 turun menjadi
Naskah Penulis

46,6 ± 2,9%. Hal ini diantisipasi karena Pc4 yang tercampur secara fisik dapat dengan bebas berinteraksi dengan DPBF dalam

larutan, menghasilkan pembangkitan yang cepat

1 HAI 2. Perbedaan kinerja sistem campuran secara fisik dengan dan tanpa AuNP mungkin disebabkan

oleh sedikit absorbansi AuNP pada 678 nm. Sebaliknya, file

absorbansi AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4 minimal menurun menjadi 85,1 ± 5,4%, bukti kuat
bahwa obat Pc4 diringkas dalam korona

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 7

nanopartikel dan terlindung dari aktivasi cahaya. Fitur ini penting untuk meminimalkan pelepasan obat
Naskah Penulis

secara dini dan nonspesifik selama pengenalan.

Kami sebelumnya telah menunjukkan bahwa interaksi yang ditargetkan dari nanopartikel yang dimuat dengan sel

memulai transfer muatan hidrofobik ke daerah hidrofobik di dalam sel (misalnya, membran mitokondria dan sel). 15,16,18,24

Untuk meniru ini, kami melakukan studi pelepasan obat dalam sistem dua fase yang terdiri dari konjugat AuNP baik di

media atau dalam darah tikus sebagai lapisan berair dan toluena sebagai komponen hidrofobik. Gambar S8 dan Gambar

S9 menunjukkan bahwa molekul Pc4 hidrofobik ini dapat dilepaskan ke lingkungan hidrofobik yang berdekatan.

Afinitas nampak dari nanopartikel target PSMA kemudian dievaluasi oleh kompetisi
uji mengikat untuk menentukan IC 50 ( Gambar 5a). Sel PC3pip pengekspres PSMA diinkubasi dengan
konsentrasi AuNP-5kPEGPSMA-1, PSMA-1, dan induk yang berbeda.
Naskah Penulis

ligan, ZJ24, dengan adanya 12 nM 3 H-berlabel ZJ24. Serapan terkait sel ditentukan dengan mengukur
radioaktivitas melalui penghitung kilau. Dibandingkan dengan ZJ24
(IC 50 = 9,66 nM) dan PSMA-1 (IC 50 = 2.01 nM) ligan, AuNP-5kPEG-PSMA-1
sangat memamerkan IC terendah 50 nilai (IC 50 = 0,17 nM). Peningkatan 12 kali lipat dalam aviditas pengikatan

dibandingkan dengan PSMA-1 kemungkinan karena beberapa ligan PSMA-1 di

setiap nanopartikel. Multivalensi telah terbukti meningkatkan pengikatan pada target yang diinginkan dan faktor kunci

untuk meningkatkan penargetan biologis. 39,40 Mirip dengan dendrimers yang dipelajari oleh Hong dkk, 39 geometri bola

AuNPs mengatur ligan menjadi wilayah ruang kecil, yang membatasi derajat kebebasannya dibandingkan dengan peptida

bebas, PSMA-1. Ini mengkompensasi penalti entropik yang diperlukan untuk melokalisasi ligan target ke dalam tumor.

Karena arah yang ditawarkan oleh interaksi tiol-emas, desain sintetis kami memiliki PSMA-1 di satu ujung dan tiol di sisi

lain memastikan bahwa ligan PSMA-1 terpapar ke permukaan partikel nano dan memungkinkan semua penargetan untuk

mengatasi permukaan sel .

Naskah Penulis

Selanjutnya, In vitro fototoksisitas konjugat AuNP bertarget dan nontarget yang mengandung Pc4 ditentukan (Gambar 5b). PC3pip

yang mengekspresikan PSMA atau sel PC3flu yang tidak mengungkapkan ekspresi diinkubasi dengan nanopartikel yang

mengandung Pc4 selama 4 jam. Setelah pencucian, sel-sel terkena dosis cahaya yang berbeda (0, 0,1, 0,5, dan 1 J), dan

persentase sel yang bertahan hidup dihitung 24 jam kemudian menggunakan 3 (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -5- (3-

karboksimetoksifenil) -2- (4-sulfofenil) -2 H- uji tetrazolium (MTS). Gambar 5b menunjukkan bahwa pada 1 J, AuNP bertarget

PSMA membunuh sekitar 8 kali lebih banyak PC3pip (4,9 ± 2,2%) dibandingkan sel PC3flu (37,1 ± 7,7%). Sampai batas

tertentu, nanopartikel emas yang tidak ditargetkan dapat membunuh sel PC3pip dan PC3flu pada dosis iradiasi yang tinggi,

yang mungkin disebabkan oleh pelepasan dan absorpsi Pc4 bebas yang tidak spesifik ke dalam sel. Hasil ini menunjukkan

bahwa konjugat AuNP-5kPEGPSMA-1-Pc4 lebih efisien dalam membunuh sel pengekspres PSMA daripada nanopartikel
Naskah Penulis

nontargeted. Mereka lebih selektif untuk sel pengekspres PSMA, yang membuktikan penargetan aktif dan pengiriman Pc4 ke

sel sebagai hasil dari konjugasi AuNP dengan ligan PSMA-1. Untuk menyelidiki lebih lanjut mekanisme toksisitas, kami

melakukan uji ROS intraseluler. Sel PC3pip diinkubasi dengan dichlorofluorescein diacetate (DCFDA) dan kemudian

diperlakukan dengan partikel nano emas baik yang ditargetkan atau tidak bertarget yang mengandung Pc4. Ketika radikal

bebas dihasilkan di dalam sel, DCFDA nonfluorescent diubah menjadi fluorescent 2 ′, 7 ′ - dichlorofluorescein (DCF -) karena

bereaksi dengan ROS seluler

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 8

( λ Mis = 495 nm; λ Em = 529 nm). 41 Mekanisme transformasi ditunjukkan pada Gambar S10. Pengujian dilakukan
Naskah Penulis

dengan menginkubasi sel PC3pip dengan target dan non target

nanopartikel emas bersama dengan DCFDA diikuti dengan iradiasi. Gambar 5c menampilkan gambar fluoresensi sel

pada jendela emisi yang sesuai dari setiap fluorofor (nukleus diwarnai dengan 2- (4-middleinophenyl)

-6-indolecarbamidine dihydrochloride, DAPI). Data menunjukkan bahwa sel yang diobati dengan

AuNP5kPEG-PSMA-1-Pc4 menunjukkan lebih banyak sinyal fluoresensi, menunjukkan hasil Pc4 dalam produksi ROS.

Hasil ini semakin menegaskan pengiriman Pc4 yang efisien sebagai hasil dari penargetan PSMA.

Reseptor PSMA memiliki motif internalisasi MXXXL dan dilaporkan memiliki tingkat internalisasi dasar yang kuat sebesar 60% dari

permukaan PSMA dalam 2 jam, menunjukkan bahwa AuNP bertarget PSMA-1 diinternalisasi melalui endositosis yang dimediasi clathrin. 11 Untuk

tujuan ini, kami melakukan pewarnaan perak untuk memastikan apakah AuNP berada dalam lingkungan seluler. Dalam prosedur ini, ion

perak berinti di sekitar nanopartikel emas dan mengendap sebagai logam perak. Emas berlapis perak selanjutnya mengkatalisasi lebih

banyak pengendapan perak, menghasilkan pertumbuhan partikel, sehingga dapat dilihat di bawah mikroskop cahaya. Hal ini terbukti pada
Naskah Penulis

Gambar 6 bahwa ada serapan emas yang lebih tinggi secara signifikan dalam sel PC3pip pengekspres PSMA daripada dalam sel PC3flu

PSMA-negatif. AuNP yang tidak ditargetkan memiliki serapan yang jauh lebih sedikit oleh sel pengekspres PSMA, serupa dengan tingkat

serapan yang diukur dengan sel-sel yang tidak mengekspresikan PSMA. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar

6, penyerapan Pc4 berkorelasi baik dengan AuNP terkait sel yang dinilai dengan pewarnaan perak.

Menetapkan bahwa AuNP5kPEG-PSMA-1 efektif dalam menargetkan dan mengirimkan Pc4 ke sel

In vitro, kami selanjutnya mempelajari kemanjuran konjugat AuNP in vivo. Tikus telanjang Athymic diinokulasi secara
subkutan dengan 1x10 6 Sel PC3pip atau PC3flu di sisi kanan dan kiri, masing-masing. Ketika tumor berukuran cukup,
hewan diinjeksi dengan 0,07 mg / kg (sehubungan dengan Pc4) AuNP5kPEGPSMA-1-Pc4 melalui vena ekor. Maestro in
Naskah Penulis

vivo
pencitraan fluoresensi digunakan untuk melacak fluoresensi dari Pc4. Gambar 7a menunjukkan bahwa Pc4 terakumulasi lebih banyak ke

dalam tumor yang mengekspresikan PSMA dan pelepasan puncak dan dataran tinggi Pc4 setelah 3 jam pasca injeksi (Gambar S11).

Biasanya, akumulasi pasif dari nanopartikel ke dalam tumor oleh efek EPR membutuhkan waktu 16-24 jam. Sebaliknya, akumulasi yang

diamati dalam eksperimen kami berlangsung cukup cepat. Selain itu, sinyal Pc4 juga bertahan hingga 24 jam, meskipun terdapat indikasi

bahwa tumor secara bertahap dibersihkan. Pengamatan ini konsisten dengan penargetan aktif karena PSMA. Meskipun mungkin tampak

dari Gambar S11 bahwa tampaknya ada sedikit perbaikan karena penargetan, kami berhipotesis bahwa fluoresensi Pc4 dipadamkan karena

adanya AuNP dalam tumor PC3pip. Oleh karena itu, untuk menentukan kadar emas, kami memotong tumor pip dan flu setelah 3 jam dan

melakukan pencernaan asam. Dengan AAS, kami menemukan bahwa AuNP5kPEG-PSMA-1-Pc4 terakumulasi 4x lebih banyak di PC3pip

daripada di tumor PC3flu (Gambar 7c). Kami juga memotong jaringan tumor dan melakukan pewarnaan perak cepat untuk menentukan

secara kualitatif jaringan mana yang memiliki kandungan emas lebih banyak. Gambar 7c (inset) menunjukkan bahwa bagian tipis tumor

PC3pip menjadi gelap sementara PC3flu menunjukkan sedikit atau tidak ada penggelapan setelah pewarnaan perak. Semua hasil ini
Naskah Penulis

dengan jelas menunjukkan penargetan aktif dan pengiriman Pc4 sebagai hasil dari konjugasi PSMA-1. Gambar 7c (inset) menunjukkan

bahwa bagian tipis tumor PC3pip menjadi gelap sementara PC3flu menunjukkan sedikit atau tidak ada penggelapan setelah pewarnaan

perak. Semua hasil ini dengan jelas menunjukkan penargetan aktif dan pengiriman Pc4 sebagai hasil dari konjugasi PSMA-1. Gambar 7c

(inset) menunjukkan bahwa bagian tipis tumor PC3pip menjadi gelap sementara PC3flu menunjukkan sedikit atau tidak ada penggelapan

setelah pewarnaan perak. Semua hasil ini dengan jelas menunjukkan penargetan aktif dan pengiriman Pc4 sebagai hasil dari konjugasi PSMA-1.

Sebagai langkah terakhir dalam studi tersebut kami lakukan in vivo Percobaan PDT dengan tikus yang membawa tumor

PC3pip berlabel green fluorescent protein (GFP). Kemanjuran pengobatan

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 9

dievaluasi dengan memantau pertumbuhan tumor menggunakan kaliper digital, fluoresensi GFP oleh Maestro, dan penurunan
Naskah Penulis

berat badan selama 14 hari pasca-PDT. Pada 3 jam pasca injeksi AuNP5kPEGPSMA-1-Pc4, tumor diiradiasi dengan cahaya 672

nm pada kecepatan fluence konstan 0,1 W / cm3. 2 selama 25 menit (150 J / cm 2) dan 50 menit (300 J / cm 2). Pembengkakan

segera setelah PDT biasanya terlihat pada studi PDT, tetapi biasanya hilang dalam 3 hari. Selain itu, tidak ada toksisitas pada

hewan yang tercatat selain keropeng di tempat penyinaran, yang juga menghilang dalam beberapa hari. Gambar 8a

menunjukkan hitam-putih dan gambar fluoresensi GFP yang sesuai dari tikus yang sama yang dipantau dari waktu ke waktu,

yang menunjukkan bahwa tumor berkurang dalam ukuran dan intensitas fluoresensi.

Gambar 8b-d menunjukkan kemanjuran pengobatan, terutama pada dosis cahaya yang lebih tinggi. Kelompok diberi perlakuan 300 J /

cm2 2 dalam remisi 14 hari pasca perawatan dan secara umum lebih sehat dan aktif, sebagaimana dibuktikan dengan penambahan

berat badan mereka.

Naskah Penulis

Temuan yang disajikan menunjukkan bahwa nanopartikel emas bertarget PSMA dapat digunakan untuk menargetkan kanker

prostat secara selektif In vitro dan in vivo. Lebih penting lagi, partikel nano ini secara efisien dapat mengirimkan pencitraan dan

agen PDT Pc4, secara selektif ke penyakit prostat yang mengekspresikan PSMA. Dengan mengirimkan Pc4 langsung ke sel

kanker prostat, aplikasi potensial, seperti (1) pencitraan intraoperatif untuk menilai invasi ekstrakapsular dari kanker prostat dan

menginformasikan pengambilan keputusan intraoperatif secara real-time; (2) reseksi gambar-dipandu intraoperatif kanker prostat

dan diferensiasi struktur kritis di sekitarnya ( misalnya, bundel saraf dan sfingter uretra); dan (3) ablasi PDT pada jaringan tumor

yang tidak dapat dioperasi untuk memastikan pengangkatan kanker secara maksimal setelah operasi konvensional selesai, dapat

diakses dan akan dieksplorasi di masa mendatang.

RINGKASAN DAN KESIMPULAN

Naskah Penulis

Nanopartikel emas target PSMA yang stabil disintesis dan secara ekstensif dikarakterisasi dengan teknik spektroskopi dan

pencitraan. Nanopartikel emas theranostic direkayasa untuk mengandung dan mengirimkan Pc4, yang merupakan agen

pencitraan dan obat PDT antikanker yang manjur. Nanopartikel ini memiliki mekanisme yang sangat efektif untuk

mengantarkan obat ke sel kanker prostat In vitro dan in vivo. Hasil dari In vitro percobaan serapan seluler menunjukkan serapan

nanopartikel secara signifikan lebih tinggi dalam sel PSMA + PC3pip daripada di sel PSMA-PC3flu. Selain itu, ablasi sel lebih

banyak diamati pada PC3pip dibandingkan pada sel PC3flu setelah terpapar cahaya pada dosis yang berbeda, menunjukkan

penargetan aktif diikuti dengan pengiriman Pc4.

In vivo, kami telah menunjukkan bahwa nanopartikel ini dapat secara selektif mengirimkan muatan yang memungkinkan
visualisasi tumor dan memungkinkan penghancurannya saat disinari dengan cahaya. Hewan yang dirawat menunjukkan

remisi tumor 14 hari pasca-PDT, menunjukkan bahwa nanopartikel emas bertarget PSMA adalah bahan yang efektif dalam

memberikan panduan bedah untuk reseksi tumor prostat dan intervensi terapeutik saat pembedahan tidak mencukupi.
Naskah Penulis

METODOLOGI

Sintesis Glu-CO-Glu ′ - Amc-Ahx-Glu-Glu-Glu-Lys-NH 2 ( PSMA-1).

Dengan menggunakan kimia fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) standar, peptida disintesis pada skala 0,2 mmol
dimulai dari C-terminal Fmoc-rink amide 4-methylbenzhydrylamine

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 10

Damar. Piperidin 20% dalam larutan dimetilformamida (DMF) digunakan selama setiap siklus deproteksi Fmoc.
Naskah Penulis

Tes ninhidrin juga dilakukan pada setiap siklus penjumlahan. Penggandengan asam amino dilakukan dengan
menggunakan 3,3 ekuiv asam amino Fmoc dalam DMF yang diaktivasi dengan 3,3 ekuiv 2- (6-kloro-1- H- benzotriazole-1-yl)
-1,1,3,3-tetramethylaminium hexafluorophosphate dan 5 equiv dari diisopropylethylamine (DIPEA) di DMF.
Setelah urutan peptida Fmoc-Glu ′ - Amc-Ahx-Glu-Glu-Glu-Lys (Mtt) dirakit pada resin, gugus Fmoc dari asam
amino N-terminal Glu ′ dilindungi oleh 20% piperidine. Residu Amc, Ahx, dan Lys (Mtt) berasal trans- 4- (9-

fluorenylmethyloxycarbonylaminomethyl) asam sikloheksanoat, 6- (Fmoc-amino) asam heksanoat, dan N- α- Fmoc- N- ε −4-metiltritasl-

L- lisin, masing-masing. Kemudian, larutan kloroform yang mengandung 3 equiv H-Glu (OtBu) -OtBu dicampur dengan 2.5

equiv DIPEA kemudian disiapkan diikuti dengan penambahan lambatnya ke 0.25 equiv triphosgene dalam kloroform

selama 10 menit di RT. Setelah reaksi 15 menit, campuran dicampur dengan Glu ′ - Amc-Ahx-Glu-Glu-Glu-Lys pada resin

yang telah dilarutkan dalam kloroform dengan 2,5 setara DIPEA. Setelah reaksi resin dicuci dengan DMF kemudian
Naskah Penulis

diklorometana dan dikeringkan semalaman. Peptida dilepaskan dari resin menggunakan asam trifluoroacetic / air /

triisopropylsilane (95%: 2.5%: 2.5%). Pemurnian peptida yang dibelah dilakukan dengan menggunakan HPLC preparatif.

Produk ini dikarakterisasi dengan spektroskopi massa desorpsi / ionisasi -time-of-flight massa berbantuan matriks

resolusi tinggi (MALDITOF MS) menggunakan Bruker AutoFlex III MALDITOF-TOF MS dalam mode ion positif. Waktu

retensi adalah 18,6 menit. MALDI-MS:

C 48 H. 74 N 10 HAI 20, 1087,5 (ditemukan); 1087.1 (dihitung).

Sintesis SH-5kPEG-PSMA-1.

PEGylation dari PSMA-1 dilakukan melalui γ- NH 2 dari lisin. PSMA-1 (1 mg)

dilarutkan dalam 200 μ L dari PBS, dan Et 3 N ditambahkan sampai pH antara 7 dan 8. Kemudian, kelebihan 2 kali lipat
Naskah Penulis

NHS-5kPEG-OPSS (Jenkem Technology) dilarutkan dalam 200 μ L

dari DMF dicampur dengan larutan PSMA-1. Campuran dibiarkan bereaksi semalaman dalam pengaduk berputar.

Pemurnian melalui HPLC kemudian dilakukan. Untuk deproteksi, tris (2-karboksitil) fosfin berlebih 10 kali lipat

ditambahkan ke OPSS-5kPEG-PSMA-1 untuk mengurangi

kelompok OPSS ke kelompok tiol (−SH) yang sesuai. Reaksi dilakukan di H. 2 HAI
dan dilakukan selama 2 jam diikuti dengan dialisis (MWCO = 2 kDa) terhadap H deionisasi 2 O dalam semalam.
Bahan yang didialisis diliofilisasi, dan grup OPSS berhasil dihilangkan
dikonfirmasi oleh HPLC.

Sintesis Konjugat Nanopartikel Emas.

Nanopartikel emas dibuat dengan terlebih dahulu mencampurkan 0.1367 g tetraoctylammonium bromide dan 5 mL toluene.

Setelah 5 menit pencampuran, 367 μ L larutan emas (III) (30% berat dalam HCl encer) ditambahkan, dan campuran dibiarkan
Naskah Penulis

diaduk selama 5 menit. DDA (0.112 g) kemudian ditambahkan ke dalam larutan. Setelah 10 menit diaduk lagi, 1 mL larutan

0,0756 g / mL

natrium borohidrida (NaBH 4) Larutan air dingin ditambahkan perlahan pada 50 μ L / 15 dtk

kenaikan. Penambahan NaBH 4 akan segera mengubah warna larutan dari oranye salmon menjadi merah anggur.

Campuran reaksi dibiarkan diaduk selama 2 jam. Untuk mengendapkan

AuNP-DDA, campuran dituang ke dalam 50 mL ethanol 100% selama 15 menit dengan kecepatan 4000 rpm.
Supernatan dituang diikuti dengan putaran pencucian etanol lainnya. AuNP-
Nanopartikel DDA kemudian dikeringkan di bawah aliran N 2 gas selama 30 menit. Kemudian, dikeringkan

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 11

nanopartikel dilarutkan dalam 5 mL kloroform (CHCl 3) dilanjutkan dengan sentrifugasi pada 4000 rpm selama 15
Naskah Penulis

menit. Hanya supernatan yang dikumpulkan. Konsentrasi ditentukan

oleh spektroskopi UV-vis berdasarkan pita serapan LSPR emas pada 520 nm ( ε = 2,737 × 10 7
L / mol / cm). Untuk mensintesis AuNP-5kPEG-PSMA-1, kelebihan ligan SH-5kPEGPSMA-1 dan SH-5kPEG sebanyak

1000 molar dalam rasio molar 1: 5 dibiarkan bereaksi dengan 1 ekuiv AuNP-DDA selama 2 hari. Ligan yang berlebih dan

produk reaksi lainnya dihilangkan dengan pemurnian ekstensif menggunakan filter sentrifus (MWCO = 50 kDa) diikuti

dengan pengeringan beku. Untuk membuat AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4, 40 kali lipat kelebihan Pc4 ditambahkan ke

larutan AuNP-5kPEG-PSMA-1 dalam kloroform. Setelah inkubasi selama 48 jam, pelarut dihilangkan dan konjugat

AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4 akhir dimurnikan melalui 0,25. μ m filter jarum suntik.

Karakterisasi Konjugat Nanopartikel Emas.

Naskah Penulis

Semua studi spektroskopi UV-vis dilakukan pada Tecan Infinite M200. Dalam percobaan khusus, absorbansi
konjugat AuNP yang dilarutkan dalam pelarut pilihan dikumpulkan dari 300 hingga 800 nm, dengan
memperhatikan pita LSPR AuNP pada 520 nm dan Q-band Pc4 pada 670 nm. Untuk studi stabilitas dalam
larutan, larutan stok AuNP
konjugat di media (RPMI + 10% FBS), DI H 2 O (pada pH 3, 7, dan 10), PBS, TBS, NSS, dan sitrat dan
buffer RIPA disiapkan dan disimpan pada suhu kamar. Absorbansi
solusi ini dipantau dalam rangkap tiga pada 520 dan 670 nm pada titik waktu tertentu dengan memipetkan 200 μ L
larutan stok ke dalam susunan pelat 96-sumur. Sebuah sistem hamburan cahaya dinamis ZetaPALS (Brookhaven
Instruments) digunakan untuk menentukan ukuran hidrodinamik dari konjugat nanopartikel. Untuk penentuan ukuran
absolut, sampel dijatuhkan ke grid TEM tembaga 400 mesh dengan dukungan Formvar / karbon (Ted Pella, Inc.).
Sebelum pewarnaan, sampel berlebih dihapus dari kisi TEM dengan kertas saring. Kemudian, 2% PTA dijatuhkan ke
kisi, sekali lagi menghapus kelebihannya dengan kertas saring. Jaringan dibiarkan mengering di RT semalaman, dan
Naskah Penulis

pencitraan dilakukan pada FEI Tecnai 12 Spirit TEM yang beroperasi pada tegangan akselerasi 100 kV. Di sisi lain,
studi elektroforesis gel dilakukan pada gel agarosa 1% dan buffer berjalan 1 × TAE. Setiap sampel terdiri dari 10 μ L dari
2 mM konjugat AuNP, 5 μ L gliserol, dan 5 μ L udara. Pelacak aliran elektroosmostik, vitamin B12, juga disertakan. Gel
dijalankan pada 120 V selama 30 menit.

Eksperimen Generasi Oksigen Singlet.

Generasi oksigen singlet ditentukan oleh dekomposisi DPBF (50−200

mM) di hadapan Pc4 gratis atau terenkapsulasi (10 mM). Percobaan dilakukan dalam etanol, PBS, atau media
(RPMI + 10% FBS). Dalam percobaan tipikal, 100 mL larutan DPBF dalam 10 mL larutan Pc4 dalam pelat
96-sumur. Sumur tersebut kemudian diiradiasi dengan 1−5 mW / cm 2 cahaya 672 nm dari laser dioda (Applied
Naskah Penulis

Optronics Corp.) yang dilengkapi dengan serat multimode berujung lensa GRIN (OZ Optics). Setiap 10 detik,
peluruhan DPBF dipantau penyerapannya pada 410 nm menggunakan pembaca pelat Tecan Infinite M200.

Budaya sel.

Sel PSMA + PC3pip dan sel PSMA-PC3flu yang ditransfeksi secara retroviral diperoleh dari Dr. Michel Sadelain pada

tahun 2000 (Laboratorium Transfer Gen dan Ekspresi Gen, Transfer Gen

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 12

dan Fasilitas Rekayasa Sel Somatik, Memorial-Sloan Kettering Cancer Center, New York, NY, USA) digunakan
Naskah Penulis

dalam studi ini. Sel-sel tersebut terakhir diperiksa dengan analisis Western blot pada 2017 untuk ekspresi PSMA. Sel
dikultur dalam medium RPMI1640 (Invitrogen
Life Technology) dengan 2 mmol / L. L- glutamin dan 10% FBS pada 37 ° C dan 5% CO 2 di bawah atmosfer yang lembab.

Competition Binding Assay.

Uji pengikatan kompetisi dilakukan dengan inkubasi 5 × 10 5 Sel PC3pip dengan konsentrasi berbeda (1000,
100, 10, 1, 0,1 nmol) AuNP-5kPEG-PSMA-1, PSMA-1, dan ZJ24 dengan adanya 12 nmol / L N- [N - [(S) - 1,3-dikarboksipropil]
karbamoil] - S- [ 3 H] -
metil- L- sistein ( 3 H-ZJ24) (GE Healthcare Life Sciences) di buffer Tris. Radioaktivitas
pelet sel dihitung dengan penghitung kilau. IC 50, konsentrasi yang dibutuhkan untuk menghambat 50%
pengikatan, ditentukan dengan GraphPad Prism 3.0.
Naskah Penulis

In vitro Fototoksisitas dengan MTS Assay.

Viabilitas sel dievaluasi dengan uji proliferasi sel CellTiter 96 Aqueous (Promega Corporation) dalam gelap dan di
bawah paparan cahaya. Sel PC3pip dan PC3flu (1000 / sumur) disemai di 96-lubang kultur 3 hari sebelum
perlakuan. Kemudian, media dilepas dan diganti dengan 200 μ L dari 1 μ mol / L dari Pc4 dalam AuNP-5kPEG-Pc4
dan AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4 disiapkan dalam larutan RPMI + 10% FBS. Setelah inkubasi selama 4

h, sel dicuci dua kali dengan 200 μ L media RPMI lengkap, dan 200 lagi μ L media ditambahkan sebelum iradiasi.
Pelat 96-sumur kemudian diiradiasi di bawah cahaya (> 500 nm; proyektor Apollo Horizon, Merek Acco) dengan
paparan radiasi pada 0,1, 0,5, dan 1 J / cm 2.
Setelah inkubasi semalaman, pereaksi berair CellTiter 96 ditambahkan ke setiap sumur. Setelah inkubasi 3 jam
pada 37 ° C, absorbansi pada 490 nm diukur.
Naskah Penulis

In vitro Studi Serapan Seluler.

Sel PC3pip dan PC3flu (20.000 sel / 500 μ L) dilapisi pada kaca penutup dan dibiarkan tumbuh sampai sekitar 70%
pertemuan. Sel-sel tersebut kemudian diinkubasi dengan 0,5 mL 1 sel μ mol / L Pc4 dalam AuNP-5kPEG-Pc4 dan
AuNP5kPEGPSMA-1-Pc4 pada 1, 4, dan 24 jam. Setelah inkubasi, sel dicuci tiga kali dengan PBS dilanjutkan fiksasi
dengan paraformaldehida 4%. Sel-sel tersebut kemudian diwarnai dengan DAPI dan dipasang dengan larutan
pemasangan berair Fluor-Mount. Slide diamati di bawah mikroskop fluoresensi Leica DM4000B (Leica Microsystem
Inc.). Pewarnaan perak dilakukan dengan menggunakan kit penambah perak (Sigma-Aldrich). Setelah tiga siklus
pencucian dengan air DI, penutup penutup dengan sel direndam dalam 2 mL campuran garam perak (larutan A) dan
inisiator (larutan B) 1: 1 selama 5 menit pada pengocok. Setelah pewarnaan, larutan perak dihilangkan dan sel dicuci
dengan air DI tiga kali. Setelah dipasang, sel-sel divisualisasikan di bawah mikroskop yang sama dalam mode
mikroskop cahaya.
Naskah Penulis

In vitro Deteksi ROS dengan DCFDA Assay.

Sel PC3pip disiapkan dengan cara yang sama seperti dijelaskan di atas. Sel pertama diinkubasi dengan 20 sel μ M DCFDA dalam

PBS selama 30 menit dilanjutkan dengan pencucian dengan PBS. Kemudian sel diinkubasi dengan 1 buah μ mol / L Pc4 dalam

AuNP-5kPEG-Pc4 dan AuNP5kPEG-PSMA-1-

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 13

Pc4 selama 1 jam dilanjutkan dengan pencucian dengan PBS. Setelah penambahan PBS segar, sel diiradiasi dengan
Naskah Penulis

1 J / cm3 2 cahaya. Sel-sel tersebut kemudian diwarnai dengan DAPI dan dipasang dengan larutan pemasangan berair
Fluor-Mount. Slide diamati di bawah mikroskop fluoresensi pada jendela emisi yang sesuai dari fluorofor yang
diinginkan.

In vivo Studi Pencitraan NIR.

Semua hewan percobaan dilakukan sesuai dengan pedoman dari Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC #
120024) di Case Western Reserve University. Tikus telanjang athymic jantan berusia enam hingga delapan minggu
ditanamkan secara subkutan dengan ukuran 1 × 10 6

sel PC3pip dan PC3flu di sisi kanan dan kiri, masing-masing. Ketika tumor berukuran cukup, konjugat AuNP yang

mengandung Pc4 disuntikkan secara intravena melalui vena ekor pada dosis 0,07 mg / kg Pc4. Hewan-hewan tersebut

kemudian dibius dengan isoflurane, dan pencitraan fluoresensi dilakukan dengan menggunakan Maestro in vivo Sistem

Pencitraan (PerkinElmer) pada titik waktu tertentu. Setelah pencitraan, mencit di eutanasia, dan jaringan diambil untuk
Naskah Penulis

pencitraan ex vivo dan untuk analisis kadar emas. Gambar multispektral tidak dicampur ke dalam spektrum

komponennya (Pc4, autofluoresensi, dan latar belakang).

Distribusi Biodata Nanopartikel Emas.

Sampel jaringan dan darah dari tikus yang disuntik (hati, paru-paru, jantung, ginjal, kulit, limpa, tumor PC3pip dan PC3flu)

dikumpulkan post mortem pada 3 jam pasca injeksi AuNP5kPEG-PSMA-1-Pc4. Semua sampel jaringan disimpan pada suhu

-20 ° C, dan sampel darah disimpan pada suhu 4 ° C sebelum dianalisis. Sampel yang dikumpulkan dari masing-masing tikus

dicairkan, ditimbang, kemudian dicerna dalam 3 mL aqua regia pada suhu 65 ° C semalaman. Sampel yang dicerna

diencerkan hingga 20 mL dengan air deionisasi dan dianalisis dengan GFAAS (Varian, SpectrAA 220 Z). Kadar emas

ditentukan dengan kalibrasi menggunakan serangkaian larutan standar emas pada panjang gelombang 242,8 nm. Data yang

dikumpulkan dalam setiap kelompok dirata-ratakan, dan standar deviasi dihitung dan ditabulasi.
Naskah Penulis

In vivo Pengobatan PDT untuk Tumor PC3pip Subkutan.

Untuk in vivo PDT, tikus telanjang athymic jantan usia 6-8 minggu ditanamkan secara subkutan dengan 1x10 6 Sel PC3pip

yang mengekspresikan GFP. Ketika tumor berukuran 4-6 mm, hewan menerima 0,07 mg / kg AuNP5kPEG-PSMA-1-Pc4

secara intravena. melalui injeksi tail-vein (berdasarkan konsentrasi Pc4). Tiga jam setelah injeksi, tumor menjadi sasaran

pengobatan PDT dengan menyinari tumor menggunakan alat optik yang sama seperti yang dijelaskan di atas. Eksperimen

terperinci termasuk kalkulasi kefasihan dapat ditemukan di Informasi Pendukung. Tiga kelompok masing-masing memiliki 5

tikus dipelajari: (i) kontrol / tanpa perlakuan; (ii) AuNP5kPEG-PSMA-1-Pc4 + 150 J / cm 2; dan (iii)

AuNP5kPEG-PSMA-1-Pc4 + 300 J / cm 2.
Naskah Penulis

Mencit dimonitor selama 14 hari dengan mengukur volume tumor menggunakan kaliper digital, fluoresensi GFP
oleh Maestro, dan berat badan.

Materi tambahan

Lihat versi Web di PubMed Central untuk materi tambahan.

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 14

UCAPAN TERIMA KASIH

Naskah Penulis

Para penulis mengucapkan terima kasih atas pendanaan dari National Institutes of Health (Grant R01 EB020353–03). Kami juga berterima kasih kepada Dr. Afsana
Akhter karena telah melakukan studi Western blot.

REFERENSI
(1). Siegel RL; Miller KD; Fedewa SA; Ahnen DJ; Meester RGS; Barzi A; Jemal A Kanker Kolorektal
Statistik, 2017. Ca-Cancer J. Clin 2017, 67, 177–193. [PubMed: 28248415]
(2). Jemal A; Siegel R; Lingkungan E; Murray T; Xu J; Smigal C; Statistik Kanker Thun MJ, 2006. Ca-
Kanker J. Clin 2006, 56, 106–130. [PubMed: 16514137]
(3). Momma T; Hamblin MR; Wu HC; Hasan T Photodynamic Therapy of Orthotopic Prostate Cancer
dengan Turunan Benzoporphyrin: Kontrol Lokal dan Metastasis Jauh. Cancer Res 1998, 58, 5425–5431. [PubMed:
9850075]
(4). Burnett AL; Aus G; Canby-Hagino ED; Cookson MS; D'Amico AV; Dmochowski RR; Eton DT;
Forman JD; Goldenberg SL; Hernandez J; Higano CS; Kraus S; Liebert M; Moul JW; Tangen C; Penebah JB; Thompson
Naskah Penulis

I American Urological Association Prostate Cancer Guideline Update,

P., Laporan Hasil Fungsi Ereksi Setelah Pengobatan Kanker Prostat yang Dilokalisasi Secara Klinis. J. Urol 2007, 178,
597–601. [PubMed: 17570435]

(5). Kundu SD; Roehl KA; Eggener SE; Antena JA; Han M; Potensi Catalona WJ, Kontinuitas dan
Komplikasi pada 3.477 Prostatektomi Retropubik Radikal Berturut-turut. J. Urol 2004, 172, 2227–2231. [PubMed:
15538237]
(6). Penson DF; McLerran D; Feng Z; Li L; Albertsen PC; Gilliland FD; Hamilton A; Hoffman RM;
Stephenson RA; Potosky AL; Stanford JL Hasil Urin dan Seksual 5 Tahun Setelah Prostatektomi Radikal:
Hasil Dari Studi Hasil Kanker Prostat. J. Urol 2005, 173, 1701–
1705. [PubMed: 15821561]
(7). Saranchuk JW; Kattan MW; Elkin E; Touijer AK; Scardino PT; Eastham JA Mencapai Optimal
Hasil Setelah Prostatektomi Radikal. J. Clin. Oncol 2005, 23, 4146–4151. [PubMed: 15961762]

(8). Mhawech-Fauceglia P; Zhang S; Terracciano L; Sauter G; Chadhuri A; Herrmann FR; Penetrante

R Ekspresi Protein Prostate-Specific Membrane Antigen (PSMA) dalam Jaringan Normal dan Neoplastik serta Sensitivitas
Naskah Penulis

dan Spesifisitasnya pada Adenokarsinoma Prostat: Studi Imunohistokimia Menggunakan Teknik Microarray Jaringan
Tumor Mutiple. Histopatologi 2007, 50, 472-483. [PubMed: 17448023]

(9). Rauscher I; Maurer T; Fendler WP; Sommer WH; Schwaiger M; Ligan Eiber M (68) Ga-PSMA
PET / CT pada Pasien dengan Kanker Prostat: Bagaimana Kami Meninjau dan Melaporkan. Pencitraan Kanker 2016,

16, 14. [PubMed: 27277843]

(10). Ikhtisar Chang SS tentang Antigen Membran Khusus Prostat. Rev. Urol 2004, 6, S13–8.
(11). Liu H; Rajasekaran AK; Moy P; Xia Y; Kim S; Navarro V; Rahmati R; Bander NH Constitutive
dan Internalisasi yang Diinduksi Antibodi dari Antigen Membran Spesifik-Prostat. Res kanker 1998,
58, 4055–4060. [PubMed: 9751609]
(12). Beruntung SS; Soo KC; Zhang Y Nanopartikel dalam Terapi Fotodinamik. Chem. Rev 2015, 115,
1990–2042. [PubMed: 25602130]
(13). Baron ED; Malbasa CL; Santo-Domingo D; Fu P; Miller JD; Hanneman KK; Hsia AH; Oleinick
NL; Colussi VC; Cooper KD Silicon Phthalocyanine (Pc 4) Terapi Fotodinamik adalah Modalitas Aman untuk
Naskah Penulis

Neoplasma Kulit: Hasil Uji Klinis Fase 1. Laser Surg. Med 2010,
42, 728–735.
(14). Wang X; Tsui B; Ramamurthy G; Zhang P; Meyers J; Kenney ME; Kiechle J; Ponsky L; Basilion
Agen Theranostik JP untuk Terapi Fotodinamik Kanker Prostat dengan Menargetkan Antigen Membran Spesifik
Prostat. Mol. Ada Kanker 2016, 15, 1834–1844. [PubMed: 27297866]
(15). Meyers JD; Cheng Y; Broome AM; Agnes RS; Schluchter MD; Margevicius S; Wang X; Kenney
SAYA; Burda C; Nanopartikel Emas Bertarget Basilion JP Peptida untuk Terapi Foto Dinamis Kanker Otak. Bagian.
Bagian. Syst. Charact 2015, 32, 448–457. [PubMed: 25999665]

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 15

(16). Cheng Y; Meyers JD; Broome AM; Kenney ME; Basilion JP; Penetrasi Mendalam Burda C a
Obat PDT menjadi Tumor oleh Konjugat Nanopartikel Emas Obat Nonkovalen. Selai. Chem. Soc
Naskah Penulis

2011, 133, 2583–2591. [PubMed: 21294543]

(17). Cheng Y; Doane TL; Chuang CH; Ziady A; Burda C Near Infrared Light-Triggered Drug
Pembangkitan dan Pelepasan dari Pembawa Nanopartikel Emas untuk Terapi Fotodinamik. Kecil
2014, 10, 1799–1804. [PubMed: 24515950]
(18). Cheng Y; Samia AC; Meyers JD; Panagopoulos I; Fei B; Pengiriman Obat Burda C Sangat Efisien
dengan Vektor Nanopartikel Emas untuk Terapi Fotodinamik Kanker in vivo. Selai. Chem. Soc
2008, 130, 10643–10647. [PubMed: 18642918]
(19). Maeda H; Ueda M; Morinaga T; Konjugasi Poli Matsumoto T (asam stirena-co-maleat)
Turunan ke Antitumor Protein Neocarzinostatin: Peningkatan yang Diucapkan dalam Sifat
Farmakologis. J. Med. Chem 1985, 28, 455–461. [PubMed: 3156994]
(20). Petros RA; Strategi DeSimone JM dalam Desain Nanopartikel untuk Aplikasi Terapeutik.
Nat. Rev. Drug Discovery 2010, 9, 615–627. [PubMed: 20616808]
(21). Upreti M; Jyoti A; Lingkungan Mikro dan Terapi Nano Tumor Sethi P. Transl Cancer Res
2013, 2, 309–319. [PubMed: 24634853]
Naskah Penulis

(22). Nakamura Y; Mochida A; Choyke PL; Kobayashi H Nanodrug Delivery: Apakah Ditingkatkan
Efek Permeabilitas dan Retensi Cukup untuk Menyembuhkan Kanker? Bioconjugate Chem 2016, 27, 2225–2238.

(23). Bertrand N; Wu J; Xu X; Kamaly N; Nanoteknologi Kanker Farokhzad OC: Dampak dari

Penargetan Pasif dan Aktif di Era Biologi Kanker Modern. Adv. Pengiriman Obat Rev
2014, 66, 2–25.
(24). Cheng Y; Meyers JD; Agnes RS; Doane TL; Kenney ME; Broome AM; Burda C; Basilion JP
Mengatasi Tumor Otak dengan Nanopartikel Emas Bertarget: Standar Emas baru untuk Pemberian Obat
Hidrofobik? Small 2011, 7, 2301–2306. [PubMed: 21630446]
(25). Banerjee SR; Foss CA; Horhota A; Pullambhatla M; McDonnell K; Zale S; Pomper MG 111In-
dan Nanopartikel PLA-PEG Berlabel IRDye800CW untuk Pencitraan Jaringan Pengekspres Antigen Membran
Spesifik-Prostat. Biomakromolekul 2017, 18, 201–209. [PubMed: 28001364]

(26). Von Hoff DD; Mita MM; Ramanathan RK; Weiss GJ; Mita AC; LoRusso PM; Burris HA, ke-3;
Hart LL; SC rendah; Parsons DM; Zale SE; Summa JM; Youssoufian H; Sachdev JC Tahap I Studi PSMA-Targeted
Docetaxel-Mengandung Nano-partikel BIND-014 pada Pasien dengan Tumor Padat Lanjutan. Clin. Cancer Res 2016, 22,
Naskah Penulis

3157–3163. [PubMed: 26847057]

(27). Zhang H; Liu X; Wu F; Qin F; Feng P; Xu T; Li X; Yang LA Novel Prostat-Spesifik

Membrane-Antigen (PSMA) Targeted Micelle-Encapsulating Wogonin Menghambat Proliferasi Sel Kanker Prostat
melalui Induksi Jalur Apoptosis Intrinsik. Int. J. Mol. Sci 2016, 17, 676.
(28). Flores O; Santra S; Kaittanis C; Bassiouni R; Khaled AS; Khaled AR; Grimm J; Perez JM
Nanocarrier Theranostic Bertarget PSMA untuk Kanker Prostat. Theranostics 2017, 7, 2477–2494. [PubMed: 28744329]

(29). Lee SS; Roche PJ; Giannopoulos PN; Mitmaker EJ; Tamilia M; Paliouras M; Trifiro MA
Penargetan Nanopartikel Arahan Antigen Membran Spesifik-Prostat untuk Ablasi Jarak Dekat Ekstrim Sel
Kanker Prostat. Tumor Biol 2017, 39, 1–12.
(30). Nagesh PKB; Johnson NR; Boya VKN; Chowdhury P; Othman SF; Khalilzad-Sharghi V; Hafeez
BB; Ganju A; Khan S; Behrman SW; Zafar N; Chauhan SC; Jaggi M; Yallapu MM PSMA Targeted Docetaxel-Loaded
Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles untuk Kanker Prostat. Colloids Surf., B 2016, 144, 8–20.
Naskah Penulis

(31). Jazayeri MH; Amani H; Pourfatollah AA; Avan A; Pakis GA; Pazoki-Toroudi H Ditingkatkan
Sensitivitas Deteksi Antigen Spesifik Prostat melalui Nanopartikel Emas Terkonjugasi PSA Berdasarkan Resonansi
Plasmon Permukaan Lokal: Anti-PSA / LSPR berlapis GNP sebagai Pendekatan Baru untuk Identifikasi Anomali
Prostat. Ada Gen Kanker 2016, 23, 365–369. [PubMed: 27740614]

(32). Wang X; Huang SS; Heston WD; Guo H; Wang BC; Basilion JP Pengembangan Target Dekat-
Agen Pencitraan Inframerah untuk Kanker Prostat. Mol. Ada Kanker 2014, 13, 2595–2606. [PubMed: 25239933]

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 16

(33). Doane TL; Cheng Y; Babar A; Hill RJ; Mobilitas Elektroforetik Burda C dari Emas PEGilasi
NP. Selai. Chem. Soc 2010, 132, 15624–15631. [PubMed: 20958038]
Naskah Penulis

(34). Knop K; Hoogenboom R; Fischer D; Schubert US Poly (ethylene glycol) dalam Pengiriman Obat: Pro
dan Kontra serta Potensi Alternatif. Angew. Chem., Int. Ed 2010, 49, 6288–6308.
(35). Tsubone T; Braga G; Vilsinki B; Gerola A; Hioka N; Tessaro A; Agregasi Caetano W dari
aluminium phthalocyanine hidroksida dalam campuran air / etanol. J. Braz. Chem. Soc 2014, 25, 890–897.

(36). Yoon M; Cheon Y; Studi Spektroskopi Penyerapan dan Fluoresensi Kim D tentang Dimerisasi
dari Chloroaluminum (III) Phthalocyanine Tetrasulfonate dalam Larutan Beralkohol Berair. Photochem. Photobiol
1993, 58, 31–36.

(37). Kobayashi H; Watanabe R; Choyke PL Meningkatkan Permeabilitas Konvensional dan

Efek Retensi (EPR); Apa Target yang Sesuai? Theranostics 2013, 4, 81–89. [PubMed: 24396516]

(38). Pielichowski K; Studi Kalorimetri Pemindaian Diferensial Flejtuch K pada Poly (ethylene glycol)
dengan Berat Molekul Berbeda untuk Material Penyimpanan Energi Termal. Polym. Adv. Technol
2002, 13, 690–696.
Naskah Penulis

(39). Hong S; Leroueil PR; Majoros IJ; Orr BG; Baker JR, Jr. Banaszak Holl MM, The Binding
Aviditas platform Pengiriman Obat Bertarget Multivalen berbasis Nanopartikel. Chem. Biol 2007,
14, 107–115. [PubMed: 17254956]
(40). Tassa C; Duffner JL; Lewis TA; Weissleder R; Schreiber SL; Koehler AN; Shaw SY Binding
Analisis Afinitas dan Kinetik dari Nanopartikel Modifikasi Molekul Kecil yang Ditargetkan. Bioconjugate Chem 2010, 21, 14–19.

(41). Halliwell B; Whiteman MMmengukur Spesies Reaktif dan Kerusakan Oksidatif in vivo dan dalam Sel
Budaya: Bagaimana Seharusnya Anda Melakukannya dan Apa Arti Hasilnya? Br. J. Pharmacol 2004, 142, 231–255. [PubMed:
15155533]
Naskah Penulis
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 17
Naskah Penulis
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Gambar 1.

(a) Konjugasi PSMA-1 menjadi OPSS-5kPEG-NHS diikuti dengan deproteksi thiol dan (b) spektrum massa
MALDI-TOF dari PSMA-1.
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 18
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Gambar 2.

(a) Sintesis AuNP-5kPEG-PSMA-1 dan pemuatan Pc4. (b) Elektroforesis gel agarose menunjukkan keberhasilan
Naskah Penulis

pengikatan 5kPEG-PSMA-1 ke AuNP (c) Spektroskopi absorbansi UV-vis menunjukkan bahwa Pc4 dimasukkan ke
dalam sistem nanopartikel.
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 19
Naskah Penulis
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Gambar 3.

Mikroskopi elektron transmisi (a) tanpa noda dan (b) konjugat AuNP yang diwarnai membuktikan pembentukan

nanopartikel yang cukup monodispersi. (c) Citra TEM dan (d) spektrum UV -vis dari nanopartikel yang sama setelah satu

tahun penyimpanan pada −20 ° C.

Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 20
Naskah Penulis
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Gambar 4.

(Sebuah) 1 HAI 2 generasi dikonfirmasi dengan memantau oksidasi perangkap oksigen singlet,
diphenylisobenzofuran (DPBF). Sisipan menunjukkan transformasi kimia DPBF dalam
kehadiran dari 1 HAI 2. ( b) Evaluasi 1 HAI 2 generasi Pc4 dalam nanopartikel emas dalam larutan EtOH. Data
menunjukkan bahwa molekul Pc4 memang terperangkap di cangkang polimer
AuNP.
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 21
Naskah Penulis
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Gambar 5.

(a) Studi pengikatan kompetisi untuk ligan PSMA yang berbeda: induk ZJ24, PSMA-1, dan AuNP5kPEGPSMA-1.
(b) Khasiat AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4 untuk membunuh jalur sel kanker prostat. (c) Hasil uji DCFDA yang
menunjukkan gambar fluoresensi sel PC3pip postiradiasi (batang skala = 200 μ m). Bilah kesalahan ± SD.
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 22
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Gambar 6.

Studi serapan seluler dari AuNP bertarget dan tidak bertarget. Fluoresensi Pc4 divisualisasikan menggunakan mikroskop

fluoresensi, dan nanopartikel Au divisualisasikan menggunakan cahaya putih setelah perbaikan dengan pewarnaan perak

(dimensi = 853 × 638). μ m). Gambar diambil pada 400 ×.

Naskah Penulis
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 23
Naskah Penulis
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Gambar 7.

(a, b) Gambar fluoresensi maestro yang menunjukkan akumulasi selektif AuNP-5kPEGPSMA-1-Pc4 pada tumor PC3pip.

(c) Kandungan emas tumor PC3pip dan PC3flu yang dipotong 3 jam setelah injeksi AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4 dan

(inset) bagian PC3pip dan PC3flu yang diwarnai dengan perak (batang skala = 1 cm).
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 24
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Angka 8.
(a) Gambar representatif dari mouse yang sama yang dipantau untuk fluoresensi GFP setelah menerima 0,07 mg
/ kg AuNP-5kPEG-PSMA-1-Pc4 diikuti oleh PDT (300 J / cm 2). Kemanjuran pengobatan ditentukan dengan
memantau (b) volume tumor, (c) sinyal GFP total, dan (d) berat badan ( n = 5).
Naskah Penulis
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.

 Mangadlao dkk. Halaman 25
Naskah Penulis
Naskah Penulis

Skema 1.
Desain nanopartikel emas target PSMA-1 yang mengandung Pc4 sebagai pencitraan dan agen PDT.
Naskah Penulis
Naskah Penulis

ACS Nano. Naskah penulis; tersedia di PMC 2019 Februari 27.