2 Tahun 2015
P
engujian Aktivitas dan persiapan, penyimpanan, dan senyawa aktif dari Alamar Blue
Perbanyakan Sel pembuangan yang membutuhkan yang diketahui merupakan
Penggunaan metode untuk perlakuan khusus (Stoddartdkk., indikator reaksi reduksi oksidasi
mengetahui aktivitas sel dan 2011) (redoks) yang digunakan untuk
perbanyakan sel telah dilakukan menilai fungsi metabolism sel
sebelumnya dengan menggunkan Penggunaan garam tetrazolium sejak lama (Rampersad, 2012).
beberapa metode yaitu, uji kerap digunakan sebagai indikator Resazurin juga dikenal sebagai
aktivitas sel, menggunakan metabolisme suatu sel diazol-resorcinol, azoresorcin,
senyawa analog nukleotida, dan dikarenakan metode ini tidak resazoin, resazurine, yang larut
penggunaan garam tetrazolium menggunakan biaya yang cukup dalam air, tidak beracun, dan
sebagai indikator metabolisme. Uji banyak. Garam yang digunakan mudah masuk kedalam membran
aktivitas sel biasanya digunakan dalam uji ini adalah 3-(4,5- sel.
untuk mengetahui efek suatu dimethyethiazol-2-yl)-2, 5-
senyawa pada sel secara in vitro, diphenyltetrazolium bromide Resazurin telah dimanfaatkan
misalnya dalam pengujian (MTT), sodium 3′-[1-phenylamino)- dalam banyak penelitian dan telah
senyawa obat pada suatu bakteri carbonyl]-3,4-tetrazolium]-bis(4- dilaporkan pada beberapa terbitan
patogen. Uji aktivitas sel dapat methoxy-6-nitrobenzene) sulfonic tulisan ilmiah Hasil penelusuran
diketahui hasilnya secara acid hydrate (XTT), and 4-[3-(4- literatur melalui PubMed
kuantifikasi dengan menghitung iodophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H- ditemukan lebih dari 200 terbitan
konsentrasi ATP interseluar yang 5-tetrazolio]-1,3-benzene mengenai aplikasi Alamar Blue
terbentuk dalanm suatu sel. Tidak disulfonate, water-soluble pada penelitian kanker,
hanya ATP, biomarker lain seperti tetrazolium salt (WST-1). Salah sedangkan 1000 terbitan tulisan
konsentrasi NADH juga dapat satu garam yang biasanya ilmiah pada pencarian, seleksi,
digunakan LDH Penggunaan uji ini digunakan dalam pengujian dan pengembangan obat.
diperlukan keterampilan personel aktivitas sel adalah garam MTT.
yang baik dan menggunakan alat Prinsip penggunaan garam MTT Aplikasi resazurin pertama kali
dan bahan yang tidak murah. adalah pengukuran perbanyakan dilakukan pada tahun 1929 oleh
(Rampersad, 2012) sel secara kolorimetri dengan Pesch dan Simmert untuk
melihat perubahan garam menduga kontaminasi bakteri dan
Metode penggunaan senyawa tertrazolium menjadi formazan yeast pada susu. Penelitain
analog nukleotida misalnya dalam mitokondria yang aktif pada terbaru (Muliro dkk, 2013)
menggunakan penanda berupa sel hidup. Penggunaan garam – melaporkan pemanfaatan
3
senyawa analog [ H]-thymidine garam tersebut harus disesuaikan resazurin pada pengujian susu
atau 5-bromo-2’-deoxyuridine dengan objek sel yang akan dilihat dengan prinsip reduksi resazurin.
[BrdU] disisipkan kedalam DNA aktivitasnya, Misalnya untuk Pada bidang kesehatan dalam
sel dan mengalami replikasi pada metode MTT, metode ini tidak skala seluler (Ahmed et.al, 1994),
sel secara normal. Jumlah dapat diaplikasikan pada sampel apoptosis, siklus selular dan
nukleotida kemudian diukur yang berwarna karena sampel kontrol (Mizuno dkk, 2004) , uji
berdasarkan: 1. Jumlah DNA yang juga akan menyerap sinar UV senyawa toksik pada medis dan
berpenanda dalam populasi sel, 2. sehingga menimbulkan nilai yang risiko pada lingkungan,
Jumlah penanda inti dengan tidak valid (Mosmanndkk., 1983) sitotoksisitas (Hamid dkk, 2004),
mikroskop. Tingkat pertumbuhan uji antimkiroba (Lozano-Chiu dkk,
sel sebanding dengan jumlah Resazurin danAplikasinya 1998), Pemanfaatan lainnya telah
penanda (senyawa analog). Resazurin (C12H7NO4) memiliki digunakan untuk pengujian fungsi
Penggunaan metode ini nama IUPAC (7-hydroxy-10- mitokondria pada sel secara in
menggunakan radioisotope oxidophenoxazin-10-ium-3-one) vitro (Zhang dkk, 2004). Penelitian
sehingga memerlukan dengan bobot molekul 229,18828 tersebut menitikberatkan pada
penanganan sampel seperti g/mol. Resazurin merupakan fungsi mitokondria pada sel dalam
26
BioTrends Vol.6 No.2 Tahun 2015
hal kemampuannya dalam fungsi kandidat obat untuk menghambat uji kimia, dan berguna untuk
respirasi, integrasi membran, dan bakteri patogen, seperti menentukan kecepatan tumbuh
dalam aktivitas mitokondria pada Mycobacterium spp, suatu sel (Rampersad, 2012).
respirasi kompleks. Staphylococcus spp,
Enterococcus spp, Pseudomonas Telah banyak metode pengujian
Resazurin memiliki warna biru spp (Yamaguchi dkk., 2002, yang digunakan untuk mengetahui
yang tidak berflourescent dan Zabranskydkk., 1995). Pada aktivitas sel dan metabolisme,
dapat tereduksi menjadi warna Mycobacteriumspp, resazurin seperti uji aktivitas sel,
pink yang berfluorescent dalam dapat digunakan pada sistem menggunakan senyawa analog
bentuk resorufiin. Perubahan BACTEC (Yajkodkk., 1995). nukleotida, dan penggunaan
warna dari biru (resazurin) menjadi garam tetrazolium. Metode –
warna pink (resorufin) merupakan Sebuah studi yang melaporkan metode tersebut memiliki
indikator terjadinya reduksi oleh perbandingan tujuh pengujian dari kelebihan dan kekurangan
sel (Page ddk., 1993). Perubahan beragam senyawa kimia, yang tertentu, sehingga perlu dilakukan
warna pada resazurin dilakukan meliputi Nitrae Reductase Assay penyempurnaan oleh metode lain.
oleh enzim – enzim dalam sel (NRA), microscopic observation Resazurin sebagai metode yang
pada bagian mitokondria dan drug susceptibility (MODS), terus dikembangan telah banyak
sitoplasma, enzim tersebut adalah Mycobacterium Grwoth Indicator menjawab kekurangan metode –
dihydrolipoamine dehydrogenase Tube 960 (MGITTM 960), metode sebelumnya yang pernah
(EC 1.8.1.4) (Matsumoto dkk., Genotype MTBDRplus, Alamar ada. Resazurin telah diaplikasin ke
1990)NAD(P)H: quinone Blue, MTT dan uji resazurin untuk banyak bidang ilmu sains dari
oxidoreductase (EC 1.6.99.2) deteksi kandidat-kandidat obat anti peternakan hingga kesehatan dan
(Belinsky dkk., 1993), danflavin M.tuberculosis strains Ugnda banyak terdapat pada laporan
reductase (EC 1.6.99.1) (Bwangadkk., 2010). Hasil studi ilmiah baik nasional maupun
(Chikubadkk., 1994). tersebut menunjukkan bahwa internasional.
Resazurin dan MTT memiliki
Pemanfaatan resazurin untuk sensitivitas dan selektifitas yang Daftar Pustaka
menilai potensi obat juga telah baik dibanding metode lain.
banya dilaporkan seperti pada Resazurin banyak digunakan Rampersad, S.N. Multiple
multi-drug screening dalam didalam laporan ilmiah terkait uji Applications of Alamar Blue
pengujian senyawa antimikroba aktivitas dan metabolisme sel, as an Indicator of Metabolic
terhadap yeast dan fungi patogen dikarenakan alasan berikut: Non- Function and Celluar Health
(termasuk Aspergillus spp., radioaktif, mudah diguanakan, in Cell Viability Bioassays. J.
Candida spp.) dengan metode murah, tidak diperlukan keahlian Sensors. 2012. 12347-12360
NCCLS (Reis dkk., 2004, McBride khusus, pengujian dapat dilakukan Stoddart, M.J. Cell viability assays:
dkk., 2005). Penggunaan cepat pada sampel yang banyak, Introduction, mammalian cell
resazurin untuk screening tidak beracun, tidak mengganggu
27
BioTrends Vol.6 No.2 Tahun 2015
28