Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

TES ORIENTASI

KATALASE DAN
Oksidase

Tujuan
• Jelaskan perbedaan antara kedua tes orientasi
• Realisasi katalase dan oksidase menggunakan reagen bioMérieux
 Tujuan

Untuk mengidentifikasi keluarga bakteri, penting untuk melakukan:

Pewarnaan Gram: diferensiasi antara dua keluarga: dan

Penelitian enzim pernapasan: Tes Katalase dan Oksidase

Klasifikasi mikroorganisme

Gram Pos Gram Neg

Katalase Oksidase

? ? 2
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
katalase

Uji Orientasi Kokus Gram Positif

 ID WARNA KATAlase (REF: 55561)

Tujuan Penggunaan: Bedakan Kokus Gram Positif

Stafilokokus spp.
Streptokokus spp.

Prinsip:
2 H2HAI2
Katalase
2 H2O + O2

Komposisi ID COLOR CATALASE

Hidrogen peroksida (H2HAI2)
Pengental : Membatasi difusi reagen di piring dan menjebak
gelembung oksigen
biru evan : memudahkan membaca

Keuntungan: kemungkinan untuk melakukan uji dll

katalase di piring, termasuk agar darah.
4
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 DETEKSI KATALASE

Pengujian slide atau tabung Pengujian langsung

H2HAI2

menggeser

Reaksi langsung
HAI2 (dalam 5 detik) HAI2
Katalase + Katalase +

5
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Membaca dan interpretasi

Kokus gram positif

Katalase Positif Katalase Negatif

Gelembung = O2 emisi Tidak ada gelembung yang diamati

Kehadiran katalase Tidak adanya katalase

Stafilokokus spp Streptokokus spp

6
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
Oksidase

Uji Orientasi Bakteri Gram Negatif

 REAGEN OKSIDAS (REF: 55635)

Tujuan Penggunaan: Membedakan Basil Negatif Gram

Enterobacteriaceae
Non fermentor

Prinsip:
fenilendiamin (TMPD) Oksidase indofenol
Senyawa berwarna ungu

Komposisi Oksidase
N,N,N,N-tetrametil-1,4-fenilendiamina (TMPD = substrat)
Asam askorbat : zat pereduksi untuk mengurangi auto-oksidasi dan untuk
meningkatkan stabilitas

Catatan: Disk yang tidak diresapi (ref 54 991)

8
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 DETEKSI oksidase

1 tetes

menggeser

Reaksi positif (ungu menjadi ungu)

dalam 10-30 detik

9
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Membaca dan interpretasi

basil gram negatif

Oksidase Positif Oksidase Negatif

Warna ungu ke ungu Tanpa warna

Adanya oksidase
Non fermentor Tidak adanya oksidase Enterobacteriaceae

10
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 PERTANYAAN YANG SERING DIAJUKAN

Q Apa rekomendasi untuk menggunakan oksidase?

reagen?
A Gunakan yang tidak diresapi
Jangan menggunakan volume reagen yang terlalu besar (hasil
negatif palsu)
Jangan gunakan loop besi (positif palsu)
Buang reagen yang digunakan sebagian setelah 12 jam

Q Apa ketidakcocokan antara reagen oksidase?

dan media budaya?
A Uji oksidase TIDAK boleh dilakukan dari:
-Koloni diperoleh pada agar EMB, Chapman2
- Koloni dari biakan berumur 48 jam yang ditumbuhkan pada media agar padat
- Koloni terisolasi menunjukkan perkembangan warna spontan (ungu,
merah muda, hijau, hitam…).

SELALU LIHAT SERTIFIKAT KOMPATILITAS 11

GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Ringkasan

Keluarga utama mikroorganisme

Bakteri yang tidak diketahui

Gram Pos Gram Neg

kokus basil

Katalase Pos Katalase Neg Pos oksidase Oksidase Neg

Stafilokokus Streptokokus Non fermentor Enterobacteriaceae

12
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Klasifikasi mikroorganisme*

Gram Pos Gram Neg

kokus basil kokus basil

Katalase Pos

Diplokokus (biji kopi) Oksidase Neg Pos oksidase

Rantai
Katalase Neg Spora
Cluster membentuk
Katalase Pos Bukan spora
membentuk

Streptokokus Basil Enterobacteriaceae

Non
Neisseria
Stafilokokus Corynebacterium fermentor
13
GCS – TM 0039 – 2015/03/20 * Aerob atau aerob fakultatif
IDENTIFIKASI

Tujuan
• Jelaskan pentingnya identifikasi
• Jelaskan prinsip-prinsip yang berbeda dari identifikasi
• Buat daftar solusi bioMérieux untuk identifikasi
 Mengapa kita melakukan identifikasi?

Koleksi &
Mengangkut

Untuk memberi nama pada bakteri yang tidak dikenal

Makroskopik
& Mikroskopis
Penyelidikan

Budaya

Identifikasi

Keluarga
Marga
Antibiotika Jenis
Kerawanan
Pengujian
Sub-spesies
16
GCS – TM 0039 – 2015/03/20 Biotipe
 Bagaimana cara mengidentifikasi bakteri?

Dengan mengamatinya secara langsung Dengan mempelajari pemrogramannya

Materi genetik
Karakter morfologis

NucliSens EasyQ
Diversilab

Dengan mempelajari apa yang dimakannya dan Dengan menggunakan komposisi nya
apa yang ditolaknya " sedang mengemas "

Karakter biokimia Karakter antigenik atau kimia

Media kromogenik
RANGE API VITEK M
CEPAT VIKIA
VITEK Slidex
17
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Prinsip sistem identifikasi

Jalur API INKUBASI

VITEK 2 kartu

apijaring VITEK 2 Sistem

Tidak dikenal

mikroorganisme di piring

TANPA INKUBASI
VITEK MS-Slide
VITEK MS

Teridentifikasi

mikroorganisme
BACAAN DAN INTERPRETASI

Alat interpretasi
(basis pengetahuan)

18
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Bagaimana memilih reagen untuk melakukan
identifikasi?

Lakukan pewarnaan Gram dan tes orientasi untuk lihat

memilih produk yang sesuai untuk identifikasi

Bakteri yang tidak diketahui

Gram Pos Gram Neg

kokus basil

Katalase Pos Katalase Neg Pos oksidase Oksidase Neg

Stafilokokus Streptokokus Enterobacteriaceae non fermentor

staf API API 20 strep API 20 NE API 20 E

Kartu VITEK 2 GP Kartu VITEK 2 GP Kartu VITEK 2 GN Kartu VITEK 2 GN

19
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 solusi manual bioMérieux

Media kromogenik – Hidrolisis substrat tertentu

Strip API - Identifikasi Biokimia

20
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
BIOMÉRIEUX
PENAWARAN OTOMATIS

VITEK 2 sistem

Sistem VITEK MS
 VITEK 2 Sistem

VITEK 2

VITEK 2 Kompak

VITEK 2 XL

22
GCS – TM 0039 –222015/03/20
 VITEK 2 Kartu

Transfer teknologi API ke dalam kartu dengan waktu sumur untuk

yang lebih singkat untuk hasil identifikasi

18-24j*

3-10j*

* Untuk bakteri GN dan GP yang tidak

rewel (90% rutin)
23
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Alur Kerja sistem VITEK 2

PENANGGUHAN
PERSIAPAN

BACAAN DAN INTERPRETASI

Langkah-langkah yang dilakukan oleh instrumen dan perangkat lunak:

Inokulasi kartu
Inkubasi
Membaca terus menerus
Interpretasi hasil

24
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Teknologi VITEK MS

Identifikasi cepat bakteri/ragi/jamur, langsung dari

koloni, oleh MALDI-TOF (Desorpsi Laser Berbantuan Matriks
Ionisasi Time-of-Flight) spektrometri massa.
MALDI-TOF memeriksa pola protein dideteksi
langsung dari bakteri

25
GCS – TM 0039 –225015/03/20
 Alur Kerja VITEK MS

PERSIAPAN MS SLIDE

BACAAN DAN INTERPRETASI

(Tidak perlu inkubasi)

26
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 VITEK MS: Prinsip

deteksi detektor ion

++ bebas lapangan

pemisahan jangkauan drift

+ +
elektroda jaringan

percepatan
percepatan
daerah
+
ionisasi
+
desorpsi
matriks / analit
kristal

templat

27
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Ringkasan

ID Krom VITEK 2 VITEK MS

SOLUSI strip API
piring sistem sistem

Kolorimetri + Massa
Teknologi Biokimia Kolorimetri
kekeruhan Spektrometri
Manual atau
Otomatis manual manual Otomatis Otomatis

24 jam
Waktu untuk Hasil 18-48j 3-10j 2 menit*
(4 jam untuk strip ID cepat)

* 2 menit hanyalah langkah membaca di instrumen

28
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
IDENTIFIKASI
API® JANGKAUAN

Tujuan
• Pilih Jalur API sesuai dengan tes orientasi
• Gunakan strip API untuk mengidentifikasi bakteri

• Interpretasikan hasilnya menggunakan apiweb™

 Bagaimana memilih reagen untuk melakukan
identifikasi?

Lakukan pewarnaan Gram dan tes orientasi untuk lihat

memilih produk yang sesuai untuk identifikasi

Bakteri yang tidak diketahui

Gram Pos Gram Neg

kokus basil

Katalase Pos Katalase Neg Pos oksidase Oksidase Neg

Stafilokokus Streptokokus Enterobacteriaceae non fermentor

staf API API 20 strep API 20 NE API 20 E

30
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 TEKNOLOGI

Pengujian Penyiapan API

Membaca dan interpretasi

Petunjuk teknis
 Tujuan penggunaan strip API

API adalah standar emas untuk identifikasi bakteri

API adalah sistem identifikasi yang menggabungkan:

Tes biokimia dan enzimatik

Basis data spesifik (evolusi spesies baru, klasifikasi baru)

32
GCS – TM 0039 – 2015/03/2302
 Komposisi strip

Tes konvensional:
VP, tes dekarboksilase...

Tes fermentasi:
karbohidrat dengan indikator pH

Tes asimilasi:
karbohidrat, asam amino, asam organik, digunakan sebagai satu-satunya sumber
karbon

Tes enzimatik:
Gal, Gur, PAL ...

Tes penghambatan:

antibiotik, substrat toksik

33
GCS – TM 0039 – 2015/03/2303
 Penawaran strip API

Nama stripnya Referensi Identifikasi Hasil saya n

API 20 E 1000/ 201660 basil gram negatif 24 jam

API 10 S 10100 Enterobakteri 24 jam

Cepat 20 E 20701 Enterobakteri 4 jam

API 20 NE 2005 Non Enterobacteria 24-48 jam

staf API 20500 Stafilokokus 24 jam

API 20 Strep 20600 Streptokokus 4-24 jam

API 20 C AUX 2021 Ragi 48-72 jam

Kandidat API 10500 Ragi 48-72 jam

API 20 A 20300 anaerob 24-48 jam

API Campy 20800 Campylobacter 24 jam

API Coryne 20900 Corynebacteria 24 jam

API NH 10400 Neisseria/Haemophilus 2 jam

Daftar API 10300 Listeria 24 jam

API 50 CHB/E 50300 / 50430 Basil 24-48 jam

API 50 CHL 50300 / 50410 Lactobacillus 24-48 jam

34
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 alur kerja API

LANGKAH 1: Pilihan strip

Menurut pemeriksaan mikroskopis (morfologi dan d pewarnaan Gram) dan
tes orientasi katalase/oksidase

LANGKAH 2: Inokulasi

LANGKAH 3: Inkubasi
4 jam – 24 jam pada suhu 30 - 37ºC, sesuai
dengan strip yang digunakan.

LANGKAH 4: Membaca

35
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Langkah inokulasi

Ada dua bagian di sumur API: tabung dan c upule.

Dua suasana yang berbeda

Cupule
Zona aerobik

Tabung

Zona «anaerobik»

36
GCS – TM 0039 – 2015/03/2306
 Langkah inokulasi

anaerobik seperti anaerobik ketat aerobik

Minyak

Minyak

GLU ADH CIT

37
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Penyiapan strip API

strip Inkubasi Suasana

API 20 E 18-24 jam / 36°C Aerobik

API 10 S 18-24 jam / 36°C Aerobik

Cepat 20 E 4j-4h30 / 36°C Aerobik

API 20 NE 24 jam (+/-2) / 29°C Aerobik

staf API 18-24 jam / 36°C Aerobik

4h-4h30 / 36°C jika diperlukan 24 jam

API 20 Strep Aerobik
lagi
API NH 2j-2h15 / 36°C Aerobik

API 20 A 24 jam (+/-2) / 36°C Anaerobik

API 20 C AUX 48-72j (+/-6) / 29°C Aerobik

Kandidat API 18-24 jam / 36°C Aerobik

API Coryne 24 jam (+/-2) / 36°C Aerobik

URE ke PAL: aerobik

API Campy 24 jam (+/-2) / 36°C
GLU ke EOR: aerophilic

Daftar API 18-24 jam / 36°C Aerobik

38
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 39
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
IDENTIFIKASI
API® JANGKAUAN

(kelanjutan)

Tujuan
• Pilih Jalur API sesuai dengan tes orientasi
• Gunakan strip API untuk mengidentifikasi bakteri

• Interpretasikan hasilnya menggunakan apiweb™

 Langkah membaca

Reaksi terdeteksi setelah inkubasi

dengan perubahan warna spontan

atau penambahan reagen pengungkap

41
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Mengungkap penyimpanan reagen

2 - 30°C 2 - 8°C Semua reagen harus

VPA VPB digunakan 1 bulan setelah
dibuka, dalam kondisi yang
VP1 VP2
diperlukan
NIT 1 - Zn NIT 2
ZYM A ZYM B *
BCP FB *
TDA FVB *
NIN *
PYZ *
James *
XYL - EHR
* peka cahaya

42
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Membaca strip

Baca setiap tes sesuai dengan tabel bacaan (pada strip IFU dari
yang digunakan)

++-+--
1 2 4 1 2 4

Ubah hasilnya menjadi profil angka

++-+--
1 2 4 1 2 4

3 1

43
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Tes tambahan

Jika profil digit tidak cukup, tes tambahan nating,

diskrimi perlu dilakukan.

Tes tambahan Tes pelengkap untuk

melakukan di strip sumur melakukan Selain itu dari strip

44
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Petunjuk teknis : Enterobacteriacae

API 20E / API 10S

Gunakan tes GLU (setelah membaca) untuk melakukan 2 )

nitrit (NO dan N2 gas (N2) riset.

20E cepat

Gunakan media yang mengandung

laktosa Gunakan kultur semalam

Hindari menggunakan bakteri yang berasal dari media selektif

45
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Petunjuk teknis: Staphylococcus

Ketika MNE dan XLT didahului atau

Tes pengasaman harus
diikuti oleh tes positif, maka tes
dibandingkan dengan kontrol oranye harus dianggap negatif
negatif (0) dan positif (GLU).

LSTR (Lysostaphin Restisance Test)

digunakan untuk membedakan Spesies
Staphylococcus dan Micrococcus

46
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Petunjuk teknis: Streptococcus

Cabang kebudayaan Penangguhan

Gunakan agar darah domba Columbia (untuk Gunakan swab untuk mencapai > 4 Mc
koloni kecil streptokokus gunakan beberapa Farland di Medium Suspension
piring) Jangan mengambil agar-agar dengan swab

Membaca

JERUK tes pengasaman harus dibaca POSITIF dalam 4 jam tetapi NEGATIF
dalam 24 jam
Inkubasi selama 24 jam jika tidak ada identifikasi atau komentar di apiweb yang meminta untuk
melakukannya. Hanya tes ESC dan pengasaman yang harus dibaca setelah 24 jam inkubasi.

47
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Petunjuk teknis : Candida

Inokulasi

Kualitas pengisian sangat penting: tabung

yang tidak cukup atau terlalu penuh dapat
menyebabkan hasil positif palsu atau
negatif palsu

48
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Ringkasan API STRIP
strip Penangguhan Mc Farland Transfer Medium Inkubasi Pada suasana Reagen
TDA-VP1-VP2-
NaCI atau Susp.
API 20 E 1 kol 18-24 jam / 36°C Aerobik NIT1-NIT2-James-
Sedang (5ml)
Zn
NaCI atau Susp. TDA-NIT1-NIT2-
API 10 S 1 kol 18-24 jam / 36°C Aerobik
Sedang (5ml) James
NaCI 0,85%
Cepat 20 E 0,5 4j-4h30 / 36°C Aerobik VP1-VP2-James
(2mL)
Media NaCI API 20 C AUX NIT1-NIT2-James-
API 20 NE 0,5 200 l 24 jam (+/-2) / 29°C Aerobik
(NO3 ke PNGG) (GLU ke PAC) Zn
staf API VP1-VP2-NIT1-
staf API 0,5 18-24 jam / 36°C Aerobik
Medium NIT2- ZYMA-ZYMB
4j-4h30 / 36°C jika
Susp. Medium 0,5 ml Media API GP VP1-VP2-NIN-
API 20 Strep 4 dibutuhkan 24 jam Aerobik
(VP ke ADH) mini (RIB ke GLYG) ZYMA-ZYMB
lagi
API NH Media NaCI 4 2j-2h15 / 36°C Aerobik ZYMB-James

API 20 A API 20 A Medium 3 24 jam (+/-2) / 36°C Anaerobik BCP-HER-XYL

NaCI atau Susp. 48-72j (+/-6) /

API 20 C AUX 2 100 l Media API C Aerobik
Medium 29°C

Kandidat API Media NaCI 3 18-24 jam / 36°C Aerobik

Susp. Sedang (NIT Media API GP NIT1-NIT2-ZYMA-

API Coryne 6 0,5 ml mini 24 jam (+/-2) / 36°C Aerobik
ke GEL) (0 hingga GLYG) ZYMB-PYZ
NaCI Medium (URE Media AUX API URE ke PAL: aerobik
API Campy 6 150 l 24 jam (+/-2) / 36°C NIT1-NIT2-FB-NIN
ke PAL dan H2S) (GLU ke ERO) GLU ke EOR: aerophilic

Daftar API Susp. Medium 1 18-24 jam / 36°C Aerobik ZYMB 49

GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 PERTANYAAN YANG SERING DIAJUKAN

https://gcs.biomerieux.fr/faq.php?action=display&faq_dept=5&faq
_produk=API

50
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
APIWEB
 Apa itu api jaring?

Apiweb adalah perangkat lunak berbasis web untuk strip API pada
manual interpretati

Dapat diakses melalui situs internet

Dengan biaya masuk berlangganan tahunan

52
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Evolusi Basis Data API

Basis data diperbarui secara berkala

Mempertimbangkan:

- Evolusi taksonomi bioMérieux mengikuti taksonomi

Resmi ”Jurnal Internasional Mikrobiologi Sistematis
dan Evolusioner”

- Deskripsi spesies baru

- Evolusi biokimia dari beberapa spesies
- Kebutuhan baru untuk identifikasi

53
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Penggunaan api jaring

5 144 552
+
Basis Pengetahuan API 20E

Escherichia coli
54
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Lembar hasil Apiweb

55
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Basis pengetahuan API:
jantung perangkat lunak identifikasi

% reaksi positif untuk setiap tes dan setiap

takson

Takson = Satuan Dasar

Sebuah spesies

Sebuah biotipe

Sebuah genus

Pengelompokan kembali spesies yang tidak

dapat dipisahkan dengan uji strip

56
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Ke takson mana bakteri tak dikenal saya yang paling dekat?

Takson 1 Takson 2 Takson 3

57
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Indeks tipikalitas

Takson 2

Profil paling banyak

khas (=1)

58
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 komentar API

indeks T (dari 0 hingga 1)

NS
komentar adalah
sangat
penting untuk
mempertimbangkan
% Indo

(dari 0 hingga 99%)

59
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Status identifikasi

STATUS % dari identifikasi kekhususan

Bagus sekali ≥ 99,9 ≥ 0,75

CT

Baik sekali 99%Indo ≤99,99 0,5 ≤ T ≤ 0,75

Bagus 90 %Indo ≤ 99 0,25 ≤ T ≤ 0,5
Dapat diterima 80 %Indo ≤ 90 0 ≤ T ≤ 0,25

STATUS MENGAPA

Diskriminasi rendah sistem tidak dapat memisahkan 2 taksa

⇒ Tes pelengkap
Profil yang meragukan Terhadap tes 0% atau 100%
SALAH

Identifikasi tidak dapat diandalkan %Id < 80

Profil tidak dapat diterima Tidak ada profil takson yang dipilih

60
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Lembar hasil Apiweb

61
GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 melawan ujian

Dalam basis data, % untuk pengujian, menyatakan kepositifannya untuk takson yang dipertimbangkan

Tapi tes dianggap melawan jika:

5
100
0
82

Uji (+) saat % positif < 25% ADH

Uji (+) saat % positif = 0% ONPG

Uji (-) bila % positif > 75% LDC

Uji (-) bila % positif = 100% ODC 62

GCS – TM 0039 – 2015/03/20
 Lembar hasil Apiweb

63
GCS – TM 0039 – 2015/03/20