Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

alyethod dkk. Catatan BMC Res (2018) 11:132

https://doi.org/10.1186/s13104-018-3236-6 Catatan Penelitian BMC

CATATAN PENELITIAN Akses terbuka

Genotip T-ARMS PCR SNP rs445709131

menggunakan polimerase perpindahan
untai termostabil
Rafeeque R. Alyethodic*, Umesh Singh, Sushil Kumar, Rani Alex, Rajib Deb, Gyanendra S. Sengar, TV Raja dan B.
Prakash

Abstrak
Tujuan: Dalam publikasi baru-baru ini, kami melaporkan keberhasilan penggunaan sistem mutasi refraktori berbasis amplifikasi
tetra primer reaksi rantai polimerase (T-ARMS-PCR) untuk genotipe rs445709131-SNP yang bertanggung jawab atas defisiensi
adhesi leukosit sapi (BLAD) pada sapi. SNP dicirikan oleh kandungan GC yang lebih tinggi dari wilayah sekitarnya, oleh karena itu,
protokol sebelumnya menggunakan dimetil sulfoksida sebagai penambah PCR. Di sini, koktail reaksi dimodifikasi dengan
menggunakan polimerase perpindahan untai termostabil (SD polimerase) alih-alih Taq DNA Polimerase yang umum digunakan.
Efisiensi amplifikasi, sensitivitas reaksi, spesifisitas, dan kebutuhan penambah PCR dalam reaksi yang mengandung SD polimerase
dan Taq polimerase dibandingkan.

Hasil: Uji T-ARMS-PCR dipengaruhi oleh banyak faktor untuk genotipe yang benar yang memerlukan optimasi ekstensif pada tahap
awal. Modifikasi yang dijelaskan memungkinkan generasi semua amplikon dengan 25 siklus sedangkan pengujian dengan Taq
polimerase membutuhkan minimal 35 siklus. Pengujian yang dimodifikasi memperkuat semua amplikon pada rentang suhu anil
yang lebih luas (50–60 °C), tanpa penambahan dimetil sulfoksida. Penggantian Taq polimerase dengan SD polimerase mungkin
bermanfaat dalam uji T-ARMS untuk pengembangan uji yang lebih cepat dan mudah digunakan yang kurang terpengaruh oleh
reaksi dan kondisi siklik.

Kata kunci: T-ARMS PCR, BLAD, SD polimerase, Taq DNA polimerase, analisis SNP

pengantar menghasilkan amplikon spesifik alel tergantung pada genotipe

T-ARMS PCR adalah alat deteksi SNP yang fleksibel, cepat
dan ekonomis dibandingkan dengan alat genotipe
kontemporer seperti PCR spesifik alel (AS-PCR).1], analisis
leleh resolusi tinggi (HRMA) [2], PCR polimorfisme
konformasi untai tunggal (PCR-SSCP) [3], PCR-primer
memperkenalkan analisis restriksi (PCR-PIRA) [4], genotipe
berbasis PCR real-time [5] dll. Ini melibatkan PCR tunggal
diikuti oleh elektroforesis gel [6, 7]. Ini menggunakan
empat primer yaitu. outer forward (OF), outer reverse (OR),
inner forward (IF) dan inner reverse (IR). Kombinasi primer
OF/OR menghasilkan fragmen luar lokus SNP dan
bertindak sebagai kontrol internal untuk PCR. Kombinasi
primer IF/OR dan OF/IR
* Korespondensi: rfq_rahman@yahoo.co.in
ICAR-Central Institute for Research on Cattle, Grass Farm Road, Meerut
Cantt, Meerut, UP 250001, India
sampel yang digunakan. Primer bagian dalam diposisikan tidak
sama dari primer luar yang sesuai untuk menghasilkan amplikon
dengan ukuran yang berbeda dan karenanya mudah dipecahkan
dalam gel dan perbedaan dibuat sesuai ([8], Gambar. 1).
Penggunaannya telah dilaporkan dalam diagnosis penyakit pada
manusia [9, 10] dan hewan termasuk laporan kami tentang SNP
rs445709131 [11]. RS445709131 ini bertanggung jawab atas
bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD) pada ternak dan
penyakit genetik ekonomis penting ternak.
Terlepas dari potensi penggunaan T-ARMS PCR dalam genotipe
yang lebih cepat, ekonomis, dan tepat, kebutuhan akan
standarisasi yang ekstensif pada tahap awal menghambat
penerapannya secara luas [6, 11]. Juga, beberapa urutan [8] dan
wilayah kaya GC paling tidak dapat diakses oleh metodologi ini [6].
Mengidentifikasi potensi teknologi ini dan mengenali
perangkapnya, Mesrian Tanha dan rekan kerja

© Penulis 2018. Artikel ini didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Internasional Creative Commons Attribution 4.0 (http://
creativecommons.org/licenses/by/4.0/), yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun,
asalkan Anda memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli dan sumbernya, memberikan tautan ke lisensi Creative Commons,
dan menunjukkan jika ada perubahan. Pengabaian Dedikasi Domain Publik Creative Commons (http://creativecommons.org/
publicdomain/zero/1.0/) berlaku untuk data yang disediakan dalam artikel ini, kecuali dinyatakan lain.
alyethod dkk. Catatan BMC Res (2018) 11:132
Gambar 1 Strategi PCR T-ARMS untuk SNP rs445709131. sebuah Diagram konseptual T-ARMS menggunakan Taq polimerase (i) dan SD polimerase (ii). B Pola
genotipe oleh Taq polimerase (i) dan SD polimerase (ii). Primer luar (OF dan OR) memperkuat produk 354 bp. Primer IF menghasilkan alel liar dengan ukuran
amplikon 179 bp sedangkan primer IR menghasilkan alel bermutasi dengan ukuran amplikon 230 bp.n genotipe liar, C genotipe pembawa, M tangga molekul 100 bp
[12] memodifikasi primer luar untuk menyamakan
kekuatan primer dan memasukkan parameter tambahan
suhu anil yang sama dari fragmen tertentu. Penggunaan
strategi chimeric primer-based temperature switch PCR
(TSP) dengan primer T-ARMS memungkinkan multiplexing
T-ARMS PCR [13].
Taq DNA polimerase umumnya digunakan dalam genotipe
T-ARMS PCR. Sifat-sifat SD polimerase dan Taq polimerase
berbeda dan mempengaruhi PCR T-ARMS secara berbeda
(Gbr. 1).1sebuah). Taq DNA polimerase, yang digunakan dalam
PCR T-ARMS klasik, memiliki 5–3kan polimerase serta 5–3kan
aktivitas eksonuklease. 5 ini–3kan aktivitas exonuclease dapat
menurunkan primer IF dan IR anil yang mirip dengan 5kan Uji
Nuklease [14] oleh Taq polimerase OF/OR sedangkan 3kan
ujung primer IF dan IR diperpanjang oleh molekul Taq
polimerase lain yang menyebabkan pita non-spesifik yang
bising dengan berbagai ukuran dan intensitas (Gbr. 2). 1
sebuah (i)). SD polimerase adalah varian dari Taq polimerase
dengan 5–3kan polimerase dan 5–3kan aktivitas perpindahan
untai tetapi tanpa aktivitas eksonuklease [15]. Aktivitas
perpindahan yang kuat dan kurangnya aktivitas eksonuklease
dari SD polimerase memastikan tidak ada degradasi primer IF
dan IR sehingga kemungkinan pita non-spesifik berkurang.
Kami berhipotesis bahwa sifat-sifat polimerase SD ini akan
berguna untuk genotipe yang akurat dan lebih cepat
menggunakan T-ARMS PCR. Ini akan sangat bagus
Halaman 2 dari 5
gunakan untuk genotipe yang lebih cepat dan menjadikan T-ARMS PCR
sebagai uji genotipe yang lebih disukai tanpa memerlukan langkah
standarisasi yang rumit, melelahkan, dan panjang.
Teks utama
Metode
Dalam PCR T-ARMS, interaksi primer merupakan fenomena yang
kompleks dan sebagian mungkin bergantung pada urutannya.
Untuk menemukan kemampuan membedakan empat primer pada
semua genotipe, maka penting untuk memiliki semua genotipe.
Studi saat ini menggunakan alel mutan kloning (File tambahan1)
sebagai genotipe mutan.
Kami telah melaporkan prosedur standar PCR T-ARMS untuk
genotipe SNP rs445709131 menggunakan Taq polimerase
(Sigma-Aldrich, USA, Cat.No.D6677) [11]. Campuran reaksi PCR
T-ARMS SD (Bioron GmbH, Jerman, Cat. No. 108702) berbeda
dengan T-ARMS standar (Tabel1). Singkatnya, itu terdiri dari
2U SD polimerase dan empat primer dengan rasio primer luar
ke dalam 2:1 dalam volume reaksi akhir 25 l. Kondisi reaksi
terdiri dari pemanasan awal pada 92 °C selama 2 menit diikuti
dengan 25 siklus denaturasi pada 92 °C selama 40 detik,
annealing pada 60 °C selama 45 detik, ekstensi pada 68 °C
selama 35 detik, dan tahap akhir. ekstensi pada 68 ° C selama
5 menit. Scoring dilakukan dengan menjalankan produk PCR
pada elektroforesis gel agarosa 1,5% pada 3-5 volt/cm selama
40 menit.
alyethod dkk. Catatan BMC Res (2018) 11:132
Tabel 1 Optimalisasi parameter yang berbeda dalam
genotipe PCR T-ARMS berbasis SD polimerase dan Taq
DNA polimerase
Parameter SD polimerase Taq DNA polimerase
berbasis T-ARMS PCR T-ARMS berbasis
(SNP rs445709131) (SNP rs445709131)
DNA polimerase 2 Unit 1 unit
Luar: rasio primer dalam 2:1 1:2
Suhu anil 50–60 55
(°C)
Kuantitas DNA genom 50–100 80–100
(ng)
Kebutuhan PCR enhancer Tidak dibutuhkan DMSO (5%)
MgCl2 (mM) 1,5–2 2 tidak menunjukkan efek yang menguntungkan pada genotipe T-
Jumlah siklus PCR 25 35
Genotipe dibedakan dengan memeriksa ukuran amplikon
mengacu pada penanda ukuran molekul. Hasil genotipe
divalidasi dengan metode PCR-RFLP yang diterbitkan
menggunakanTaq1 enzim (Thermo Fisher Scientific, USA,
Cat. No. ER0671) seperti yang dijelaskan [16].
Setiap pengujian dinilai pada berbagai siklus PCR yaitu. 15, 20,
25, 30 dan 35 siklus untuk pembangkitan semua amplikon
dengan intensitas yang cukup. Penilaian dilakukan dengan
visualisasi pada gel agarosa 1,5%. Kemampuan genotipe yang
benar dari setiap protokol tanpa pembentukan pita non-
spesifik juga dinilai dengan visualisasi pada gel agarosa 1,5%.
Sensitivitas suhu masing-masing protokol diukur dengan PCR
gradien dari 50 hingga 60 °C dengan kenaikan 2 °C. DMSO
digunakan sebagai penambah PCR dalam uji genotipe
berbasis polimerase Taq pada tingkat yang dioptimalkan lima
persentase [16].
hasil dan Diskusi
Genotipe T-ARMS menggunakan SD polimerase menghasilkan
amplifikasi yang baik dari 25 siklus dan seterusnya dan pada
semua rentang suhu yang diuji 50–60 ° C tanpa perlu DMSO
(Gbr. 2b). 2) sedangkan genotipe T-ARMS menggunakan Taq
DNA polimerase menghasilkan semua amplikon yang
diharapkan pada 35 siklus PCR dan pada suhu sempit 55 °C
dengan adanya lima persentase DMSO.
T-ARMS PCR menggunakan Taq DNA polimerase dan SD
polimerase menghasilkan pola genotipe yang diharapkan,
sehingga memiliki spesifisitas yang sama; genotipe normal
untuk rs445709131 menunjukkan amplikon 354 dan 179 bp
sedangkan pembawa menunjukkan pita tambahan 230 bp
(Gbr. 4b).1B). Alel mutan menunjukkan pola genotipe yang
diharapkan dari amplikon hanya 354 dan 230 bp yang
menunjukkan kemampuan diskresi primer pada semua
genotipe (File tambahan1: Gambar S2).
Konsentrasi primer luar yang lebih tinggi bermanfaat
dalam kasus SD Polymerase. Mungkin karena fakta
Halaman 3 dari 5
bahwa primer luar diperlukan untuk pembuatan fragmen luar-luar
maupun generasi fragmen luar-dalam. Dalam kasus Taq DNA
polimerase, 5–3kan aktivitas eksonuklease dapat menurunkan
primer yang menempel di bagian dalam.14]. Oleh karena itu,
terkadang perlu menambahkan lebih banyak primer dalam
dibandingkan dengan primer luar [17]. Sifat Taq DNA polimerase
ini dapat menyebabkan pembentukan pita non-spesifik.11]. Unit
SD polimerase yang dibutuhkan secara optimal diuji untuk
amplifikasi semua amplikon. Sementara 1U SD polimerase
menghasilkan amplikon luar berintensitas rendah, penggunaan
2U SD polimerase memberikan amplifikasi yang baik dari
amplikon luar dan dalam (File tambahan1: Gambar S3). Pada kasus
Taq Polymerase, peningkatan jumlah enzim dari 1U menjadi 2U
ARMS PCR (File tambahan1: Gambar S3). Perbandingan
penggunaan Taq polimerase dan SD polimerase dalam reaksi
perpindahan rantai polimerase (PCDR) melaporkan efisiensi SD
polimerase yang lebih tinggi secara signifikan sementara Taq
polimerase gagal memberikan pola yang berhasil pada empat dan
enam primer PCDR [15]. Mungkin karena fakta bahwa PCR
kompleks dengan Taq polimerase membutuhkan lebih banyak
optimasi untuk pola genotipe yang benar seperti yang ditunjukkan
dalam kasus PCR T-ARMS untuk rs445709131 [11].
Genotipe T-ARMS menggunakan SD polimerase menghasilkan
amplifikasi yang baik pada 25 siklus, membuat protokol ini lebih cepat
daripada genotipe berbasis Taq Polymerase yang jika tidak
memerlukan 35 siklus untuk menghasilkan amplikon yang dapat
dipecahkan gel yang terlihat (Gbr. 1b). 2sebuah). Demikian pula,
efisiensi yang lebih tinggi dari SD polimerase dilaporkan dalam kasus
PCR jarak jauh dan amplifikasi isotermal yang dimediasi loop (LAMP) [
15]. Aktivitas perpindahan yang kuat dari SD polimerase seperti Bst
polimerase dan termostabilitasnya yang tinggi seperti Taq DNA
polimerase memungkinkan SD polimerase menjadi polimerase yang
sesuai dalam PCR kompleks seperti T-ARMS PCR.
Peran suhu anil di T-ARMS PCR dilaporkan [6, 11]. SD
polimerase menunjukkan amplifikasi yang baik pada suhu
anil bervariasi dari 50 hingga 60 ° C (Gbr. 2b).2b (i))
sedangkan Taq polimerase memberikan amplifikasi semua
amplikon hanya pada 55 °C dengan kondisi optimal DMSO
(5%) dan MgCl2 (2 mM) (Gbr. 2b (ii)). Kerentanan yang lebih
tinggi dari Taq polimerase memerlukan penemuan suhu
anil yang tepat dengan kombinasi yang tepat dari MgCl2
dan DMSO. Ini mungkin menunjukkan bahwa PCR T-ARMS
berbasis polimerase Taq sensitif terhadap perubahan suhu
anil dan kondisi reaksi yang mungkin menjadi salah satu
alasan mengapa T-ARMS PCR membutuhkan standarisasi
awal yang lebih tinggi seperti yang dilaporkan [6].
Uji yang dimodifikasi dengan SD polimerase berhasil menghasilkan
pola genotipe yang benar dengan tidak adanya DMSO sementara itu
diperlukan dalam kasus Taq DNA polimerase untuk genotipe
rs445709131 (Gbr. 3d). 1B). Konten GC yang lebih tinggi
alyethod dkk. Catatan BMC Res (2018) 11:132 Halaman 4 dari 5

Gambar 2. Perbandingan SD polimerase dan Taq DNA polimerase sehubungan dengan efisiensi amplifikasi (sebuah) dan pengaruh suhu annealing (B). sebuah
Superskrip 1: T-ARMS PCR dengan SD polimerase. Superscript 2: T-ARMS PCR dengan Taq DNA polimerase.M tangga molekul 100 bp, NTC tidak ada kontrol template.
B (i) SD polimerase pada berbagai TA pada genotipe heterozigot (H) (ii) Taq DNA Polimerase pada berbagai TA pada genotipe heterozigot (H) dan Wild (W) (Ge)
dengan adanya DMSO (5%). M tangga 100bp, NTC kontrol non-templat

dari wilayah sekitar rs445709131 (60,3%) atau perbedaan
kandungan GC primer yaitu. OF (53.6%), OR (53.6%), IF
(61.9%), IR (51.7%) memerlukan penambahan DMSO
dalam campuran reaksi dengan Taq polimerase [11]. Sifat-
sifat DMSO berguna dalam menurunkan suhu leleh primer
[18, 19], karenanya penting untuk amplifikasi daerah kaya
GC sedang hingga tinggi [11]. Aktivitas perpindahan yang
kuat dari SD polimerase menyebabkan amplifikasi yang
lebih baik dari daerah kaya GC [15], maka PCR enhancer
seperti DMSO tidak ditambahkan ke dalam campuran
reaksi dengan SD polimerase. Oleh karena itu,
penggunaan SD polimerase dapat menghasilkan amplikon
dalam 25 siklus PCR dalam kisaran suhu annealing yang
luas (50–60 °C) tanpa perlu penambahan PCR enhancer
seperti DMSO sedangkan T-ARMS berbasis Taq Polymerase
membutuhkan 35 siklus, diperlukan penambahan DMSO
dan diperkuat dalam kisaran suhu anil yang sempit (55 °C).
Kesimpulan
Genotipe PCR T-ARMS berbasis SD polimerase lebih cepat karena
pengujian dapat diselesaikan dalam 25 siklus dibandingkan dengan
pengujian berbasis Taq polimerase. Itu kurang terpengaruh oleh
suhu annealing dan campuran reaksi. Spesifisitas T-ARMS
dengan SD Polymerase sama atau lebih baik dari Taq DNA
polymerase. Untuk menghasilkan amplikon yang dapat
dipecahkan menggunakan standarisasi ekstensif Taq DNA
polimerase sehubungan dengan suhu anil, garam (MgCl2)
konsentrasi, DMSO diperlukan. SD polimerase, di sisi lain,
menghasilkan pola genotipe T-ARMS dengan optimasi yang
lebih sedikit. Oleh karena itu, mengganti Taq DNA polimerase
dengan SD polimerase dapat menyelesaikan PCR T-ARMS lebih
cepat. Suhu anil yang lebih luas dan kurangnya penggunaan
DMSO dalam polimerase SD dapat mengurangi kebutuhan
akan standarisasi yang luas dan dapat memberikan genotipe
yang lebih baik dari daerah yang kaya GC.
Keterbatasan
Studi ini mendemonstrasikan penggunaan SD polimerase di
atas Taq polimerase dalam genotipe berbasis T-ARMS PCR dari
satu SNP. Oleh karena itu, menyimpulkan penggunaan SD
polimerase dalam T-ARMS PCR membutuhkan validasi pada
jumlah SNP yang lebih banyak. Jika dapat divalidasi,
kelemahan utama dari standarisasi ekstensif T-ARMS PCR dan
kurangnya amplifikasi kaya GC—dapat diatasi membuat uji T-
ARMS sangat mudah digunakan.
alyethod dkk. Catatan BMC Res (2018) 11:132
File tambahan
berkas tambahan 1. Generasi genotipe Mutan/Genotipe mutan
menggunakan PCR-RFLP dan T-ARMS PCR/Pengaruh penggunaan 1 dan 2
unit SD dan Taq polimerase.
Singkatan
T-ARMS PCR: sistem mutasi refraktori amplifikasi tetra primer-PCR; SD Pol:
polimerase perpindahan untai; DMSO: dimetil sulfoksida; AS-PCR: PCR spesifik alel;
HRMA: analisis peleburan resolusi tinggi; SSCP: polimorfisme konformasi untai
tunggal; PIRA-PCR: analisis restriksi terinduksi primer-PCR; OF: depan luar; ATAU:
kebalikan luar; JIKA: ke depan batin; IR: kebalikan dalam; BLAD: defisiensi adhesi
leukosit sapi.
Kontribusi penulis
Perencanaan dan perancangan proyek RRA, TVR, AS dan SK melakukan penyusunan
naskah, RD dan RA melakukan pengumpulan sampel, PCR-RFLP, GS dan pelaksanaan
pekerjaan laboratorium dan BP melakukan pengeditan naskah, koreksi dan pemantauan
keseluruhan proyek. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.
ucapan terima kasih
Penulis berterima kasih kepada Direktur, Central Institute for Research on Cattle, Meerut, India
yang telah menyediakan fasilitas yang diperlukan untuk melakukan penelitian. Kami juga
berterima kasih kepada Direktur, Frieswal karena telah menyediakan sampel biologis.
Kepentingan yang bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan yang bersaing.
Ketersediaan data dan bahan
Data disajikan dalam naskah. Kumpulan data yang digunakan dan/atau
dianalisis selama studi saat ini juga tersedia dari penulis terkait atas
permintaan yang wajar.
Persetujuan untuk menerbitkan
Tak dapat diterapkan.
Persetujuan untuk berpartisipasi
Tak dapat diterapkan.
Persetujuan etika dan persetujuan untuk berpartisipasi
Penelitian telah disetujui oleh Institute Animal Ethics Committee (IAEC) dari
ICAR-Central Institute for Research on Cattle, Meerut, UP, India di bawah
pedoman CPCSEA.
Pendanaan
Penelitian ini didukung oleh ICAR di bawah pendanaan Institusional
(IXX12180).
Catatan Penerbit
Springer Nature tetap netral sehubungan dengan klaim yurisdiksi dalam peta
yang diterbitkan dan afiliasi institusional.
Diterima: 3 Januari 2018 Diterima: 6 Februari 2018
Referensi
1. Gaudet M, Fara AG, Beritognolo I, Sabatti M. PCR spesifik alel dalam
genotipe SNP. Metode Polimorf Nukleotida Tunggal Protoco.
2009;578:415–24.
Halaman 5 dari 5
2. Gabor M, Miluchova M, Trakovická A, Riecka Z, Candrak J, Vavrisinova K. Deteksi
pembawa malformasi vertebra kompleks pada sapi Holstein Slovakia dengan
analisis pelelehan resolusi tinggi. Dokter Hewan Akta. 2012;62(2–3):239–48.
3. Rusc A, Kaminski S. Prevalensi pembawa malformasi vertebra kompleks di
antara sapi jantan Holstein-Friesian Polandia. J App Gen. 2007;48(3):247–52.
4. Kanae Y, Endo D, Nagahata H, Hayashi M. Metode untuk mendeteksi malformasi vertebral
kompleks pada betis Holstein menggunakan analisis restriksi yang diperkenalkan reaksi
rantai polimerase-primer. J Dokter Hewan Diagnosa Berinvestasi. 2005;17(3):258–62.
5. Zhang Y, Fan X, Sun D, Wang Y, Yu Y, Xie Y, dkk. Metode baru untuk
deteksi cepat dan andal malformasi vertebra kompleks dan defisiensi
adhesi leukosit sapi pada sapi Holstein. J Anim Sci Biotechnol.
2012;3(1):24.
6. Medrano RFV, de Oliveira CA. Pedoman pengembangan teknik ARMS-
PCR tetra-primer. Mol Bioteknologi. 2014;56(7):599–608.
7. Zhang S, Dan Y, Zhang Q, Qin Q, Lei C, Chen H, Lan X. Sistem mutasi refraktori
amplifikasi tetra-primer PCR (T-ARMS-PCR) dengan cepat mengidentifikasi mutasi
missense kritis (P236T) dari ACADVL sapi gen yang mempengaruhi sifat
pertumbuhan. gen. 2015;559(2):184–8.
8. Ye S, Sahar D, Xiayi K, Andrew RC, Hari INM. Prosedur yang efisien untuk
genotipe polimorfisme nukleotida tunggal. Asam Nukleat Res.
2001;29:88–94.
9. Mohtavinejad N, Nakhaee A, Harati H, Poodineh J, Afzali M. SIRT1 gen
dikaitkan dengan penyakit kardiovaskular pada populasi Iran. Mesir J
Med Hum Genet. 2015;16(2):117–22.
10. Randhawa R, Duseja A, Changotra H. Uji berbasis ARMS-PCR baru Tetra-primer untuk
genotipe SNP rs12303764 (G/T) dari gen Unc-51 manusia seperti kinase 1 manusia.
Mol Biol Rep. 2017;44(1):1–4.
11. Alyethodi RR, Singh U, Kumar S, Deb R, Alex R, Sharma S, Prakash B.
Pengembangan protokol genotipe yang cepat dan ekonomis untuk defisiensi
adhesi leukosit sapi (BLAD) pada sapi. SpringerPlus. 2016;5(1):1442.
12. Mesrian Tanha H, Mojtabavi Naeini M, Rahgozar S, Rasa SMM, Vallian S.
Memodifikasi ARMS-PCR tetra-primer sebagai alat genotip polimorfisme
nukleotida tunggal. Uji Genet Mol Biomarker. 2015;19(3):156–61.
13. Zhang C, Liu Y, Ring BZ, Nie K, Yang M, Wang M, Ma X. Sebuah novel
multipleks tetra-primer ARMS-PCR untuk genotipe simultan dari enam
polimorfisme nukleotida tunggal yang terkait dengan kanker wanita. PLoS
SATU. 2013;8(4):e62126.
14. Pelayan JM. Topik lanjutan dalam pengetikan DNA forensik: metodologi.
Walthan: Pers Akademik; 2011.
15. Ignatov KBE, Barsova V, Fradkov AF, Blagodatskikh KA, Kramarov TV,
Kramarov VM. Aktivitas perpindahan untai yang kuat dari DNA
polimerase termostabil secara nyata meningkatkan hasil amplifikasi DNA.
Bioteknik. 2014;57(2):81–7.
16. Alyethodi RR, Alex R, Deb R, Kumar S, Singh U, Sharma S, Gyanendra SS,
Tyagi S, Prakash B. Prevalensi penyakit genetik pada sapi persilangan
Holstein (Frieswal) di India. India J Anim Sci. 2016;86(9):1088–91.
17. Ahlawat S, Sharma R, Maitra A, Roy M, Tantia MS. Merancang,
mengoptimalkan, dan memvalidasi protokol ARMS-PCR tetra-primer untuk
mutasi genotipe pada gen kaprin Fec. gen meta. 2014; 2:439–49.
18. Frackman S, Kobs G, Simpson D, Storts D. Betaine dan DMSO: agen peningkat
untuk PCR. Catatan Promega. 1998;65:27–9.
19. Varadaraj K, Skinner DM. Denaturan atau kosolven meningkatkan spesifisitas
amplifikasi PCR dari DNA kaya GC menggunakan rekayasa genetika
DNA polimerase. gen. 1994;140(1):1-5.