Judul An Evaluation Study Of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

(ELISA)
Jurnal Indonesian Jurnal Of Tropical and Infeksius Disease
Volume dan Halaman 105-108
Tahun 2017
Penulis Nina Difla Muflikhah
Wayan Tunas Artama
Reviewer Anis Lailatul Fitriyah
Tanggal 21 Desember 2021

Tujuan Penelitian Untuk mengetahui nilai sensitivitas dan spesifitas protein

rekombinan GRA1 sebagai antigen menggunakan metode
ELISA. Uji sensitivitas dan spesifitas protein GRA1 sebagai
antigen dilakukan dengan membandingkan dengan ELISA Kit
yang telah dijual bebas pada 70 sampel.

Subyek Penelitian Toksoplasmosis adalah penyakit yang disebabkan oleh infeksi

parasit protozoan kewajiban, yang disebut Toxoplasma gondii.
Manusia dapat terinfeksi oleh T. gondii dalam banyak hal
seperti, sejak lahir, konsumsi melalui konsumsi (daging mentah,
sayuran mentah), aktivitas dengan tanah/daging tanpa
perlindungan, tranfussion darah, transplantasi organ, dan
sebagainya. Oocyst menjadi terinfeksi ketika pingsan dari host
definitif dan terkontaminasi dengan sumber air, tanah, dan
tanaman. Kebanyakan toksoplasmosis tidak menunjukkan
adanya gejala tetapi dapat menjadi masalah serius dalam pasien
imunodikompromikan dan bayi yang baru lahir dengan
toksoplasmosis bawaan.

Metode Penelitian Deteksi untuk toksiklasmosis biasanya menggunakan metode

serologis, seperti Test zat pewarna (DT), tes agglutinasi asi yang
dimodifikasi (ELISA), enzim menghubungkan Immunosorbent
Assays (ISAGA), Immunosorbent Agglutination assay
(ISAGA), tes agglutinasi agglutinasi tidak langsung (IFAT) dan
assay haemagglutinasi yang tidak langsung (IHA) untuk
mendeteksi antibodi Tg. Menunjukkan parasit pada jaringan
dapat dilakukan oleh kultur parasit (dalam vivo dan in vitro) dan
pendeteksian asam nukleat yang sangat fic menggunakan DNA
probe, PCR dan metode L-AMP. Enzim menghubungkan Assays
Immunosorbent (ELISA) merupakan metode yang populer dan
komersial untuk menemukan toksoplasmosis secara klinis. Kit
ELISA komersial menggunakan antigen dari tachyzoites asli
yang tumbuh pada tikus atau kultur jaringan dan mungkin berisi
jumlah materi di luar aparasitic.

Hasil Pengujian Hasil studi ini secara eksplisit menunjukkan bahwa antigen
GRA1 cocok untuk mendeteksi serum antibody untuk infeksi Tg
 dan jelas berbeda berarti dari kepadatan optik (OD) dan 95%
dari Interval kepercayaan (CI), metode ini mampu untuk
membedakan seropositive dan seronegatif dari Tg-IgG sera. Ada
51 sampel positif dan 19 negatif yang diuji oleh ELISA-GRA1,
sementara 48 sampel positif dan 22 negatif diuji oleh ELISA kit
(GenWay BioTech). Semua pengamatan sensitivitas dan
spesifikasi memperkirakan lebih dari 80%. Sensitivitas GRA1
adalah 100% dan kekhususan mencapai 86,36%. Berdasarkan
sensitivitas dan kedisiplinan 80%, ukuran sampel yang diamati
cukup untuk memperkirakan sensitivitas yang baik dan
spesifikasi sebagai alat diagnostik.

Kesimpulan Penelitian Studi ini menunjukkan sensitivitas tinggi dan spesifikasi

GRA1 recombinant protein sebagai antigen untuk
detektilasmosis menggunakan enzim yang terhubung dengan
serat kekebalan tubuh. Protein rekombinan GRA1 menjadi
antigen yang menjanjikan hasil yang akurat dan seharusnya
Berkembang sebagai alat alternatif untuk antibodi Tg terdeteksi
dalam toksoplasmosis tersangka.

Kelebihan Penelitian Serodiagnosis menggunakan protein rekombinan Tg yang

dievaluasi oleh ELISA secara tidak langsung dan dibandingkan
dengan kit ELISA komersial. Sensitivitas dan kehati-hatian
diukur untuk mendeteksi efektivitas protein GRA1 sebagai
antigen. Menunjukkan sensitivitas tinggi dan spesifikasi
GRA1 recombinant protein sebagai antigen untuk
detektilasmosis menggunakan enzim yang terhubung dengan
serat kekebalan tubuh. Protein rekombinan GRA1 menjadi
antigen yang menjanjikan hasil yang akurat.

Kekurangan Penelitian Kit ELISA komersial biasanya menggunakan antigen asli

tachyon yang dilapisi mikropelat dan didistribusikan ke seluruh
dunia untuk mendiagnosa infeksi Toxoplasma gondii. Alat ini
adalah alat yang mahal di antara laboratorium dan tidak selalu
akurat karena sering menghasilkan reaksi positif yang keliru.4
Meskipun diagnosis toksoplasmosis merupakan tes penting bagi
manusia dalam setiap status sosial ekonomi, mengembangkan
alat diagnostik biaya rendah benar-benar penting untuk
mendukung status kesehatan dan skrining epidemiologi penyakit
yang terinfeksi pada populasi.
Judul Determination of food authenticity by enzyme-linked
immunosorbent assay (ELISA)
Jurnal Science Direct
Volume dan Halaman Volume 19 dan 8 Halaman
Tahun 2008
Penulis Luis Asensio, Isabel Gonzalez, Teresa Garcia, Rosario Martin
Reviewer Fika Zahratul Aisyah (20200667011)
Tanggal 19 Desember 2021

Tujuan Penelitian Karya ini bermaksud untuk memberikan tinjauan yang diperbarui dan
ekstensif tentang penerapan teknik ELISA untuk diskriminasi spesies
daging, ikan, dan susu; otentikasi pelabelan jus buah; deteksi makanan
yang dimodifikasi secara genetik dan diiradiasi; asal bahan pakan dan
identifikasi bahan alergen. Metode ini telah banyak digunakan karena
mengurangi penggunaan peralatan yang mahal dan canggih serta waktu
analisis dan cocok untuk analisis rutin sejumlah besar sampel. Oleh
karena itu, ELISA dapat memungkinkan, bersama dengan metode analitik
lainnya seperti metode berbasis DNA, perlindungan dan kepercayaan
konsumen, dan implementasi yang akurat dari ketertelusuran untuk
pengendalian makanan regulasi yang berhasil.
Subjek Penelitian Spesies daging, ikan, dan susu
Metode Penelitian 1. Metode berbasis DNA
Metode berbasis DNA adalah metode yang paling spesifik dan sensitif
untuk identifikasi spesies daging, meskipun metode tersebut memerlukan
beberapa peralatan laboratorium yang mahal dan tingkat pengetahuan
tertentu. Sebaliknya, ELISA, karena sensitif dan spesifik, lebih cepat
daripada metode genetik untuk analisis rutin sejumlah besar sampel.
2. Metode Kuantitatif
a. Metode Pemalsuan
Martin, Chan, dan Chiu (1998) berhasil melakukan evaluasi kuantitatif
pemalsuan daging babi dalam daging giling mentah dengan ELISA. Lebih-
lebih lagi,Chen dan Hsieh (2000) dan Liu et al. (2006)mengembangkan
MAb terhadap protein otot babi yang tahan panas dan daging babi yang
diukur dalam daging mentah dan yang diproses panas serta produk pakan
dengan teknik ini. Batas deteksi ditentukan sebagai 0,5-0,05% (b/b)
daging babi dalam campuran daging heterolog.
Dalam produk daging lainnya, protein non-daging, seperti protein kedelai,
ditambahkan karena sifat nutrisi dan fungsionalnya yang menarik. Namun
demikian, salah satu bentuk pemalsuan untuk keuntungan ekonomi
adalah penambahan protein yang lebih murah ini sebagai bahan yang
tidak dideklarasikan dalam produk daging. Penipuan ini sering terjadi
sehingga menimbulkan persaingan yang tidak sehat dan berpotensi
membahayakan kesehatan bagi individu yang memiliki alergi. Dengan
demikian, teknik ELISA telah digunakan untuk mengidentifikasi substitusi
ini mencegah disengaja atau tidak disengaja substitusi protein harga
tinggi dengan protein harga lebih rendah.
b. Metode Perlindungan dan Kepercayaan Konsumen
Kontrol kualitas minuman jus jeruk sangat penting karena produk ini
dapat dengan mudah dipalsukan. Semakin banyak makalah yang terkait
dengan pemalsuan minuman jus buah telah diterbitkan, menunjukkan
pentingnya masalah yang relevan ini (Jezek & Suhaj, 2001; Tzouros &
Arvanitoyannis, 2001). Pemalsuan dapat didasarkan pada pengenceran
sederhana dengan air atau penggantian bahan buatan yang lebih murah
(gula, asam, dan pewarna). Selanjutnya, karena meningkatnya informasi
tentang komposisi kimia buah-buahan, metode pemalsuan yang lebih
halus sekarang digunakan. Sebagian besar metode ini didasarkan pada
suplementasi jus jeruk dengan ekstrak pulp dan kulit atau dengan
beberapa jus buah yang lebih murah (Mears & Shenton, 1973). Untuk
memastikan perlindungan konsumen, alat analisis yang andal dan sensitif
diperlukan untuk mendeteksi pemalsuan dalam jus. Untuk tujuan ini,
Sass-Kiss dan Sass (2000, 2002) diperoleh antibodi poliklonal yang
dikembangkan terhadap jus karakteristik dan peptida kulit jeruk bali dan
jeruk. Antibodi ini digunakan dalam immunoassay dan memungkinkan
deteksi produk jus buah yang dipalsukan.
 c. Metode Implementasi
Sistem ketertelusuran mendokumentasikan sejarah suatu produk dan
dapat melayani tujuan pemasaran dan perlindungan kesehatan. Dalam
kerangka ini, segregasi dan sistem pelestarian identitas memungkinkan
pemisahan produk rekayasa genetika dan non-modifikasi dari ''pertanian
ke garpu''. Implementasi sistem ini dilengkapi dengan persyaratan teknis
khusus untuk setiap langkah tertentu dari rantai pemrosesan makanan
(Miraglia et al., 2004). Selain itu, menurut Peraturan (EC)
1830/2003Parlemen Eropa dan Dewan, persyaratan ketertelusuran untuk
makanan dan pakan yang dihasilkan dari organisme yang dimodifikasi
secara genetik (GMO) harus ditetapkan untuk memfasilitasi pelabelan
yang akurat dari produk tersebut, sesuai dengan persyaratan Peraturan
(EC) 1829/2003 pada makanan dan pakan yang dimodifikasi secara
genetik. Oleh karena itu, makanan dan bahan makanan yang akan dikirim
ke konsumen akhir di mana terdapat protein atau DNA yang dihasilkan
dari modifikasi genetik, dikenakan persyaratan pelabelan khusus
tambahan. Berdasarkan informasi ini, untuk mengatur keberadaan
transgenik dalam tanaman, makanan, pakan dan bahan, pengembangan
metode yang andal dan sensitif untuk deteksi transgenik diperlukan.
Metodologi saat ini untuk analisis GMO difokuskan pada salah satu dari
dua target, DNA transgenik yang dimasukkan atau protein baru yang
diekspresikan dalam produk rekayasa genetika. Untuk sebagian besar
metode deteksi berbasis DNA, PCR digunakan dan untuk sebagian besar
metode berbasis protein, metode ELISA dengan antibodi yang mengikat
protein baru digunakan (Luthy, 1999).
Hasil Pengujian Dalam beberapa tahun terakhir, kemajuan dalam teknologi ELISA telah
menyebabkan perkembangan pesat dari berbagai kit immunoassay
komersial untuk digunakan dalam industri makanan dan pakan. Kit
immunoassay yang paling sering digunakan untuk identifikasi komponen
makanan adalah ELISA dan uji aliran lateral. Kit uji ELISA dapat dilakukan
dalam pelat mikrotiter dan format imunostik. Tes aliran lateral atau
''dipsticks'' menggunakan prinsip immunoassay yang sama seperti tes
ELISA tetapi melapisi antibodi dan reagen lainnya pada membran
 nitroselulosa daripada bagian dalam sumur uji atau dayung dan mereka
menggunakan emas koloid, pewarna, atau konjugat manik lateks untuk
menghasilkan sinyal daripada enzim konjugat manik. Kesederhanaan dari
kedua jenis tes dan waktu yang singkat yang diperlukan untuk analisis
membuatnya cocok untuk tes penyaringan makanan dari sejumlah besar
sampel (Bonwick & Smith, 2004). Berdasarkan informasi ini, kami
melaporkan dalam tinjauan ini penerapan ELISA pada keaslian makanan
dalam beberapa tahun terakhir. Kami telah menjelaskan penggunaan
teknik ELISA untuk diskriminasi spesies daging, ikan dan susu; otentikasi
pelabelan jus buah; deteksi makanan yang dimodifikasi secara genetik
dan diiradiasi; asal bahan pakan dan identifikasi bahan alergen.
Kesimpulan Penelitian Dari berbagai metode analisis yang tersedia, ELISA sangat cocok untuk
penentuan keaslian makanan karena sensitif dan spesifik; cepat dan
murah; mudah dilakukan dan investasi peralatan jauh lebih sedikit
daripada teknik lainnya. Meskipun keterbatasan ELISA untuk deteksi
makanan yang dimodifikasi secara genetik telah ditunjukkan dalam ulasan
ini, metodologi ini dapat memungkinkan, bersama dengan metode
analisis lainnya seperti metode berbasis DNA, perlindungan konsumen
terhadap praktik penipuan di industri makanan.
Kelebihan Penelitian 1. Metode ELISA telah
terbukti juga cepat dan sederhana dan dapat dilakukan
dengan menggunakan instrumentasi berbiaya rendah

2. Metode ELISA telah digunakan untuk deteksi dan kuantisasi

protein yang diekspresikan oleh sebagian besar tanaman
turunan bioteknologi dalam produksi komersial.
Kelemahan Penelitian 1. keterbatasan besar metodologi ELISA, yaitu bahwa protein target
kadang-kadang mengalami denaturasi selama pemrosesan makanan dan
oleh karena itu epitop protein target mungkin tidak ada dalam kondisi
yang dapat dideteksi oleh antibodi
 IMUNOSEROLOGI
Judul Metode ELISA Menggunakan Manik-manik Magnetik sebagai Fase
Padat untuk Kuantisasi Cepat Tikus dan Imunoglobulin Manusia
Jurnal Internasional, Hybridoma
Volume dan Halaman Vol. 10, No. 5, Hal. 641-645
Tahun 1991
Penulis Øystein W. RØnning & Anne C. Christophersen
Reviewer Atsila Amala Hafsah (20200667016)
Tanggal 19 Desember 2021 (09:00)

Tujuan Penelitian Untuk mengukur konsentrasi imunoglobulin dalam berbagai cairan

Subjek Penelitian Partikel polystyrene superparamagnetik, Dynabeads M-450
Metode Penelitian Alasan utama untuk menerapkan manik-manik magnetik sebagai
fase padat dalam metode ELISA, adalah untuk mengurangi waktu
inkubasi secara signifikan.
Hasil Penelitian GAMBAR 1 Optical density (OD) pada 490 nm sebagai fungsi
waktu inkubasi dengan igG mouse. 20 g.l Dynabeads M-450
dilapisi dengan domba anti-tikus IgG diinkubasi bersama dengan
mouse IgG (10 gg / ml) pada suhu kamar (20 0C) dengan gemetar
manual setiap lima menit. Pada saat diindikasikan, manik-manik
dicuci dua kali di PBS, Tween 20, dan disimpan dalam buffer ini
sampai semua sampel dikumpulkan. Semua sampel diperlakukan
secara simultan dengan domba dan substrat konjugasi-tikus
peroksidase dan substrat seperti yang dijelaskan dalam Bahan
dan Metode. Setiap poin mewakili rata-rata sampel duplikat yang
tidak menyimpang lebih dari 10%.
Gambar 1 menunjukkan jumlah mouse IgG terikat pada
manik-manik dilapisi dengan domba anti-tikus IgG sebagai
fungsi waktu inkubasi. Pengikatan maksimum diperoleh setelah
kurang dari sepuluh menit inkubasi. Hal ini sejalan dengan
temuan Millan et al (4) yang mengamati pengikatan maksimum
antigen ke manik-manik yang dilapisi dengan antibodi
monoklonal dalam waktu sepuluh menit. Namun, penelitian lain
(5,6), menunjukkan perlunya waktu inkubasi yang lebih lama (30
menit).

GAMBAR 2a (panel kiri). Optical density (OD) pada 490 nm

sebagai fungsi konsentrasi imunoglobulin tikus. Manik-manik
dilapisi dengan: (O) kambing anti-tikus IgM, (A) kelinci anti-
tikus IgG dan (A) domba anti-tikus IgG. Sampel yang kurang
menggunakan mouse Ig adsorbed kurang dari 0,1 unit OD. 2b
(panel kanan). Sama seperti 2a, kecuali bahwa imunoglobulin
adalah manusia. Manik-manik dilapisi dengan (O) kelinci anti-
manusia IgG atau (O) kelinci anti-manusia IgM. Sampel yang
kekurangan ig manusia kurang dari 0,1 unit OD. Setiap titik
mewakili rata-rata sampel duplikat yang tidak menyimpang lebih
dari 10%, dan garis menunjukkan fungsi logaritmik yang
dipasang pada titik-titik yang mewakili bagian lurus kurva.

Gambar 2a menunjukkan kerapatan optik (OD) pada 490

nm sebagai fungsi konsentrasi imunoglobulin tikus. Ada
hubungan linear (dalam diagram semilogaritmik) antara OD dan
konsentrasi imunoglobulin dalam kisaran satu dekade.
Sensitivitas terbaik untuk kuantitas mouse IgG 0,3 pg/ ml)
diperoleh dengan antibodi kelinci; Antibodi domba sekitar 5 kali
kurang sensitif. Sensitivitas untuk mendeteksi igM tikus mirip
dengan mendeteksi IgG dengan antibodi kelinci. Salah satu
penjelasan tentang perbedaan sensitivitas mendeteksi igG tikus
mungkin bahwa antibodi kelinci baru digabungkan dengan
manik-manik, sementara manik-manik dilapisi dengan antibodi
 domba dibuat oleh produsen dan digunakan sekitar 6 bulan
setelah tanggal pembuatan (umur simpan 12 bulan). Beberapa
antibodi dapat terlepas dari manik-manik, dan bersaing dengan
partikel-terikat, dan karena itu mengurangi jumlah antigen terikat
pada manik-manik. Efek dari ini dapat dihilangkan dengan
mencuci manik-manik sebelum digunakan. Afinitas dari dua
antibodi mungkin juga berbeda dan dapat menjelaskan perbedaan
yang diamati dalam sensifivitas. Dengan demikian, pilihan
antibodi yang cermat diperlukan jika sensitivitas tinggi akan
diperoleh.
Gambar 2b menunjukkan kurva yang sama untuk
mendeteksi IgG dan IgM manusia. Juga dalam kasus ini tes
dapat digunakan dalam kisaran konsentrasi satu dekade.
Sensitivitas terbaik diperoleh untuk IgG manusia sementara
untuk IgM itu sekitar 10 kali kurang sensitif.
Kesimpulan Penelitian Kesimpulannya, metode ELISA yang dijelaskan berdasarkan
manik-manik superparamagnetik (Dynabeads M-450) sangat
berguna untuk kuantitas imunoblobulin ketika hasil yang dapat
diandalkan diperlukan dalam waktu yang relatif singkat. Total
waktu tes adalah sekitar satu jam, dan secara rutin digunakan di
laboratorium ini untuk mengukur konsentrasi antibodi monoklonal
dalam supernatants kultur sel.
Kelebihan Peneltian Dalam upaya untuk menggunakan manik-manik yang lebih kecil
dan lebih ringan, Dynabeads M-285 digunakan sebagai fase padat.
Namun, karena variabilitas yang lebih besar secara dramatis dalam
pengujian, manik-manik ini tidak berguna (data tidak
ditampilkan). Selain ukuran, manik-manik M-285 lebih berpori
daripada manik-manik M-450 (Dynal A.S., komunikasi pribadi)
yang mungkin mengakibatkan masalah dengan pelepasan bahan
terikat yang tidak terikat atau tidak spesifik. Oleh karena itu,
menggunakan Dynabeads M-450 sehingga cocok untuk pengujian
 ini.
Kelemahan Penelitian Sifat-sifat manik-manik yang tidak dijelaskan dan diketahui
misalnya, seperti bentuk, permukaan, porositas, dll. Sehingga
aksesibilitas antigen untuk mencapai antibodi terlampir.
Judul A new enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of
antibodies against foot-and-mouth disease virus
Jurnal Journal of Immunological Methods
Volume 115-121
Tahun Received 13 March 1986, accepted 12 May 1986
Penulis C. Hamblin, ITR Barnett dan RS Hedger
Reviewer Adinda Jauhar Dyah Kinanti
Tanggal Senin, 20 Desember 2021

Latar Belakang Uji imunosorben terkait-enzim (ELISA) sudah digunakan oleh

beberapa pekerja untuk mendeteksi dan mengukur antibodi dalam
serum dari hewan baikterinfeksi atau divaksinasi terhadap kaki
dan mulutpenyakit. (PMK). Abu Elzein dan Crowther
(1978),Crowther dan Abu Elzein (1980) dan Franz et al.(1982),
menggunakan ELISA tidak langsung, ditentukan anti-titer tubuh
dari kurva kalibrasi standar.Lombard dan Piroird (1981) dan
Lombard andPetermann (1982) menggunakan ELISA serupa di
mana antigen tidak aktif dilapisi ke kertas cakram.Pada tahun
1983, Have dan Jensen melaporkan penggunaan amembalikkan
sandwich ELISA di mana hasilnya adalahdinyatakan dengan
menghubungkan densitas optik (OD) dicatat untuk sampel positif
atau uji (P) dansampel negatif kontrol (N) sebagai rasio P/Ndan
tes pemblokiran antibodi di mana titernyadiekspresikan pada
tingkat penghambatan 50% dibandingkandengan pengendalian
virus.
Tujuan Penulisan Bertujuan untuk kuantifikasi antibody terhadap virus penyakit
mulut dan kuku yang dapat menggantikan uji netralisasi virus
(VN)
Subjek Penelitian Virus
Jenis virus penyakit mulut dan kuku (FMDV)01 (BFS 1860), A 5
(FRA 1/68), Az2 (IRAQ24/64), Ca (NOVILLE), SAT 1 (BOT
1/68), SAT2 (ZIM 5/81), SAT 3 (BEC 1/65), ASIA 1 (PAK1/54)
dan ASIA 1 (IND 8/79) disebarkan dalam lapisan tunggal sel
BHK-21 yang ditanam di Rouxtermos. Cairan kultur jaringan
diambil ketika100% efek sitopatik diamati dan kemudian
diklarifikasi dengan sentrifugasi pada 2000 × g 10 menit.

Antiserum kelinci
Antiserum kelinci untuk masing-masing jenis virus dipro-
diinduksi oleh dua inokulasi subkutan denganacetylethyleneimine
(AEI) menonaktifkan 146 S FMD antigen seperti yang dijelaskan
oleh Have dan Jensen (1983).

Antiserum babi Guinea

Antiserum babi Guinea disiapkan untuk melawansetiap jenis virus
dengan inokulasi subkutan tunggal antigen 146 S yang tidak aktif
(Ferris et al.,1984). Antigen 146 S yang digunakan untuk
membuat kelinci danAntiserum PMK spesifik marmot
selaluterkait dengan protein serum sapi. Ini adalah esensi-untuk
memblokir reaksi anti-bovine ini denganpenambahan serum sapi
normal, baik untukbuffer pengencer atau antisera kelinci
percobaan dankonjugat anti-kelinci percobaan.

Sapi antiserum
Anti-referensi bovine spesifik tipe FMDV serum yang digunakan
dalam ELISA dan VN dikumpulkan dari ternak 21 hari setelah
infeksi eksperimental. Serum dari sapi yang terinfeksi FMDV tipe
O 1dan dari sapi yang divaksinasi jenis FMDVA 22 digunakan
untuk menentukan variasi titerantara tes yang direkam dengan
sampel individu.
Metode Penelitian 1. Virus neutralisation tests
Tes netralisasi virus dilakukan dipelat mikrotiter kelas kultur
jaringan dasar datar menggunakan metode yang sebelumnya
dijelaskan oleh Golding dkk. (1976). Titer antibodi dinyatakan
sebagai kebalikan dari pengenceran akhir serum dicampuran
serum/virus yang menetralkan esti-mengawinkan 100 TCIDs0
virus pada titik akhir 50% diperkirakan menurut metode K~trber
(1931)

1. 2. The liquid-phase blocking sandwich ELISA

Prinsip : ELISA fase cair (Mc-Cullough et al., 1985) telah

dimodifikasi dan diadaptasi untuk kuantifikasi FMDV tipe-
spesifik anti-tubuh.

Antiserum kelinci tipe khusus dilapisi kefase padat pelat ELISA.

Tes serum dan campuran virus yang diinkubasi dalam pelat
pembawa adalah kemudian dipindahkan ke pelat penjebak
antibodi.
Antiserum dan anti-guinea pig spesifik tipe konjugat enzim babi
kemudian digunakan dalam dua tahap untuk mengukur jumlah
antigen yang terperangkap. konjugat terdeteksi setelah substrat /
kromo-penambahan phore.
Hasil pengujian Virus yang digunakan dalam ELISA pada pengenceran
diperkirakan memberikan 1,50 D dan di mana reaksi silangdengan
jenis virus heterolog adalah diabaikan.

Dua puluh lima serum dari sapi yang terinfeksi PMK virus tipe O
1 dan 25 serum dari sapi yang divaksinasi terhadap virus PMK
tipe A22 diperiksa dites rangkap tiga dengan ELISA dan VN.
Secara keseluruhan data menunjukkan bahwa 96% dari titer
serum dicatat oleh ELISA dan 76% dari titer serum direkam oleh
VN untuk masing-masing hewan berada dalam langkah
 pengenceran dua kali lipat. Estimasi gabungan darisimpangan
baku untuk log 10 titer timbal balik dari serum individu masing-
masing adalah 0,102 dan 0,186.
virus hidup digunakan dalam penelitian ini, hasil menunjukkan
bahwa ada sedikit perbedaan-perbedaan antara virus dan titrasi
serum referensi kurva tion dan titer titik akhir yang diperoleh
dengan menggunakan antigen hidup atau antigen yang
diinaktivasi AEI.

Kesimpulan Penelitian Reaksi silang dicatat di kedua pengujian tetapi rasio antara
antibodi homolog dan heterologtiter jauh lebih besar
menggunakan ELISA. Namun, reaksi silang satu arah yang serupa
terjadi kembali.dijalin dengan baik oleh ELISA dan VN antara
FMDV jenis SAT 1 dan SAT 3. Reaksi tersebut telah diamati
sebelumnya di VN dan fiksasi komplementes tion (Laboratorium
Referensi Dunia, Pirbright,data yang tidak dipublikasikan). Oleh
karena itu kemungkinan besar inireaksi silang mencerminkan
hubungan yang benar antara kedua jenis virus ini.

Variasi titer antibodi yangdicatat dalam tes hewan ual secara

signifikan lebih besar oleh VN. simpangan baku rata-rata,
dihitung untuk semua serum diperiksa, adalah 0,102 untuk ELISA
dan 0,186 untuk VN. Konsisten dengan nilai-nilai ini adalah
pengamatan kamitions bahwa, untuk serum individu, perbedaan
maksimum referensi untuk hasil ELISA adalah antara 0,18 dan
0,26 hanya untuk 470 sampel, sedangkan untuk VN hasil
perbedaan maksimum adalah antara 0,3dan 0,45 untuk 1070
serumrangkap tiga menggunakan serum dari individu
Kelebihan Penelitian 1. Tes menggunakan inkubasi antigen dalam jumlah konstan
dengan kisaran pengenceran serum uji difase cair sebelum
diuji menggunakan ELISA perangkap. Jadi tidak bergantung
pada ketersediaan atau pertumbuhan sel kultur jaringan.
 2. Pengujiannya cepat dan relatif sederhana untuk dilakukan,

3. Reagen yang digunakan ekonomis dan hasilnya dapat dicatat

dalam waktu 24 jam.

4. ELISA sensitif dan hasilnya lebih spesifik dan lebih dapat

direproduksi daripada yang diperoleh dengan VN.

5. Hasil dinyatakan sebagai titer antibodi timbal balik yang

analog dan dengan urutan yang mirip dengan yangdirekam
oleh VN. Oleh karena itu, titer individu dapat dengan mudah
dinilai oleh pekerja di lapangan yang sudah akrab dengan
VN.
Kelemahan Penelitian Tes ini dianggap sensitif, spesifik dan relative sederhana untuk
dilakukan tetapi membutuhkan sel kultur jaringan yang terlalu
sering bervariasi dalam sensitivitas atau gagal untuk tumbuh
karena kontaminasi, pertumbuhan yang buruk con-atau zat
beracun dalam sampel uji. Tes ini juga membutuhkan inkubasi
pada 37 ° C selama tiga hari sebelum hasil dapat dibaca.
Judul Metode dalam diagnostik virus: Dari ELISA ke pengurutan
generasi berikutnya

Jurnal Diagnostik Molekuler Penelitihan Virus

Volume dan Halaman 186 dan 14 halaman
Tahun 2014
Penulis Neil Boonham, Jan Kreuze B, Stephan Musim Dingin C, René van
der Vlugt D, Jan Bergervoet D, Jenny Tomlinson sebuah, Rick
Mumford

Reviewer Ira Ayu Ashari (20200667012)

Tanggal Jum’at, 16 Desember 2021

Tujuan Penelitihan Terlepas dari perkembangan metode yang lebih baru dan lebih
rumit untuk mendeteksi dan mengidentifikasi virus, sangat sedikit
dari metode baru ini yang diadopsi untuk penggunaan rutin di
laboratorium pengujian, seringkali meskipun banyak dan beragam
keunggulan yang diklaim mereka miliki. Untuk memahami
mengapa tingkat penyerapan teknologi baru begitu rendah,
diperlukan pemahaman yang kuat tentang apa yang membuat alat
diagnostik rutin yang baik untuk memulai. Hal ini dapat dilakukan
dengan melihat dua metode deteksi virus tanaman yang paling
berhasil dibuat: enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) dan
baru-baru ini diperkenalkan polymerase chain reaction (PCR).
Dengan memeriksa karakteristik dari pasangan teknologi ini,
menjadi jelas bahwa mereka berbagi banyak manfaat, seperti
format standar industri dan tingkat pengulangan dan
reproduktifitas yang tinggi. Ini digabungkan untuk membuat
metode yang dapat diakses oleh laboratorium pengujian, yang
mudah dibuat dan kuat dalam penggunaannya, bahkan dengan
pengguna baru dan tidak berpengalaman. Oleh karena itu, untuk
memastikan pembentukan teknik baru, perlu untuk tidak hanya
memberikan manfaat yang tidak ditemukan dengan ELISA atau
PCR waktu nyata, tetapi juga menyediakan platform yang mudah
dibuat dan digunakan.
Subyek Penelitihan 1. Deteksi multipleks menggunakan 10 sampai 20 virus
dalam satu pengujian.
2. Sampel dianalisis yaitu manik-manik yang berbeda dan
fluorokrom reporter yang dideteksi menggunakan sitometer
 aliran kecil berbasis laser atau
3. penganalisis gambar berbasis LED.
4. Sample Deteksi RNA dan
5. DNA virus berdasarkan metode hibridisasi titik asam
6. nukleat (NASH) menggunakan virus dan viroid, dimana
hasilnya paling berhasil dieksploitasi pada Reaksi Rantai
Polimerase (PCR)
7. Sample pada metode ELISA untuk
8. menilai status fitosanitasi tanaman menggunakan sertifikasi
virus, dan integral pengindeksan patogen seperti jamur dll.
9. Sample pada saat mengidentifikasi virus berbasis NGS
adalah metagenomics yang diaktifkan vektor (VEM) di
10. mana serangga diambil sampelnya untuk mengidentifikasi
virus yang ada di lingkungan dan menggunakan
pendekatan VEM pada lalat putih, kemudian dapat
mengkonfirmasi begomovirus yang baru diidentifikasi di
Chenopodium ambrosiodes dengan gejala virus, yang
tumbuh di ekosistem sampel dan dengan efektivitas teknik
pemantauan proaktif virus tanaman.

Metode Penelitihan 1. Metode isotermal yang mapan

HDA menggunakan helikase untuk memisahkan untaian

DNA untai ganda yang memungkinkan pengikatan primer
dan ekstensi oleh DNA polimerase pada suhu konstan
sekitar 65◦C. Metode ini menopang amplifikasi produk
yang relatif pendek sekitar 70-120 bp. RPA menggunakan
rekombinase yang membentuk kompleks dengan primer
untuk memulai amplifikasi tanpa denaturasi termal. Reaksi
diinkubasi pada suhu reaksi rendah yang dapat dengan
mudah ditopang oleh instrumen berdaya rendah.

Namun, penggunaan suhu reaksi yang rendah dapat

menghasilkan artefak amplifikasi yang lebih non-spesifik
daripada yang biasanya diamati dalam metode amplifikasi
isotermal, yang menggunakan suhu reaksi yang lebih
tinggi. Keuntungan utama dari RPA adalah waktu reaksi
yang singkat, yang biasanya.

2. Metode amplifikasi isotermal lainnya

Dua metode amplifikasi isotermal lebih lanjut, yang telah

 diterapkan untuk mendeteksi patogen tanaman, adalah
rolling-circle amplification dan Isothermal and Chimeric
primer-initiated Amplification of Nucleic acids . Dalam
format yang paling sederhana, RCA digunakan untuk
mengamplifikasi asam nukleat sirkular dengan
memanfaatkan aktivitas perpindahan untai Phi29 DNA
polimerase. RCA diikuti oleh analisis restriksi fragmen
panjang polimorfisme telah digunakan untuk diagnosis
geminivirus yang memiliki genom DNA sirkular untai
tunggal kecil .

3. Amplifikasi isotermal yang dimediasi loop

Metode amplifikasi isotermal yang dibahas sejauh ini

masing-masing memiliki berbagai
keunggulan. Namun, dalam konteks pengembangan
metode untuk penggunaan di tempat, faktor-faktor seperti
waktu reaksi dan kompleksitas desain pengujian adalah
potensi kerugian. Pendekatan amplifikasi isotermal
alternatif adalah merancang primer sedemikian rupa
sehingga produk amplifikasi mengandung situs pengikatan
primer beruntai tunggal. LAMP adalah metode yang paling
umum digunakan untuk mengambil pendekatan
ini, menggunakan tiga pasang primer , untuk menghasilkan
produk amplifikasi yang berisi daerah loop beruntai
tunggal yang primer dapat mengikat tanpa denaturasi
template pada suhu reaksi sekitar 65 ◦C. Primer internal
memperkenalkan selfcomplementarity ke dalam produk
amplifikasi, menyebabkan loop terbentuk, sedangkan
ekstensi primer eksternal menyebabkan perpindahan
produk ekstensi primer internal. Produk reaksi LAMP
terdiri dari pengulangan urutan target yang berorientasi
secara bergantian. Penambahan primer loop mempercepat
amplifikasi dengan priming pada daerah loop yang
orientasinya salah untuk primer internal untuk
mengikat. Primer loop meningkatkan sensitivitas dan
mengurangi waktu reaksi, dan diperlukan untuk kinerja
yang dapat diterima dari beberapa pengujian.

4. Metode multipleks

Sejauh ini dalam tinjauan ini fokusnya adalah pada uji

 simpleks, yang mampu mendeteksi satu target secara andal
dalam setiap pengujian individu. Namun, dalam banyak
skenario pengujian sampel untuk beberapa virus atau
bahkan patogen lain diperlukan. Seperti yang telah dibahas
sebelumnya, pengindeksan kentang benih adalah salah satu
contoh di mana skrining untuk beberapa patogen dilakukan
secara rutin. Dalam kasus ini, kemampuan untuk
melakukan pengujian multipleks menawarkan manfaat
biaya yang besar, terutama dalam situasi di mana sejumlah
besar sampel perlu diuji. Pada bagian berikutnya kami
menjelaskan dan mendiskusikan pengembangan metode
tersebut; berfokus pada perkembangan terbaru yang
menawarkan potensi pengujian throughput tinggi..

5. Metode multipleks: berbasis serologis

Sebuah metode untuk memperluas kemampuan deteksi
imunologi multipleks ELISA adalah universal bead
microsphere immune assay . Array berbasis manik ini
memungkinkan deteksi simultan dari sejumlah besar
patogen dan sebanding dengan metode yang dikembangkan
untuk ELISA. MIA didasarkan pada universal bead-array
yang diproduksi oleh Luminex . Akibatnya antibodi
spesifik virus yang berbeda dapat digabungkan ke manik-
manik yang diwarnai secara internal yang berbeda dan
manik-manik yang berbeda ini kemudian dapat
digabungkan untuk membuat 'set manik-manik' khusus
untuk mendeteksi kombinasi spesifik virus tanaman.

6. Metode multipleks: berbasis asam nukleat

Seperti dibahas di atas, teknologi multiplexing yang

memungkinkan deteksi simultan dari banyak virus dalam
satu pengujian, dapat sangat mengurangi waktu, biaya, dan
input tenaga kerja yang terkait dengan teknologi deteksi
reaksi tunggal . TaqMan generasi berikutnyaTM mesin
dapat meningkatkan level multiplexing ini tetapi ini masih
jauh dari deteksi multipleks sebenarnya dari 10 atau 20
virus dalam satu pengujian. Platform array berbasis
hibridisasi memang ada dan menawarkan potensi untuk
memperluas batas pengujian multipleks menjadi ratusan
bahkan ribuan target . Namun platform ini tidak berlaku
untuk pengujian throughput tinggi tetapi sebenarnya lebih
 cocok untuk menyaring virus baru dan tidak biasa . Ini
dibahas lebih lanjut di Bagian5 dari ulasan ini. Salah satu
platform yang menawarkan tingkat deteksi asam nukleat
multipleks yang sangat tinggi adalah sistem bead Luminex
MagPlex-TAG. Teknologi ini telah membuktikan nilainya
untuk deteksi multipleks patogen dalam pengaturan klinis
dan deteksi multipleks virus . Sistem ini menggabungkan
manik-manik polistiren superparamagnetik karboksilasi 6,5
-m yang sama dengan sistem xMAp .

metode yang cocok untuk penemuan virus (misalnya, pengurutan

generasi berikutnya, NGS). Metode berbasis lapangan bukanlah
hal baru, dengan Perangkat Aliran Lateral (LFDs) untuk deteksi
yang tersedia untuk beberapa tahun sekarang. Namun, penggunaan
teknologi ini secara luas tetap buruk. LAMP memang menawarkan
keuntungan yang signifikan dibandingkan LFD, dalam hal
sensitivitas dan aplikasi generik, tetapi masih menghadapi
tantangan dalam hal pendirian.

Hasil Pengujian Meskipun metode tradisional khususnya Meskipun metode

tradisional masih digunakan untuk diagnostik virus di
laboratorium pengujian rutin, adopsi ELISA di seluruh dunia pada
tahun 1970-80an merupakan kemajuan besar dan mengubah wajah
diagnostik virus. Ini menyediakan platform yang dapat digunakan
secara umum untuk berbagai virus yang berbeda dengan sedikit
modifikasi. Ini kuat dan mudah dilakukan; membutuhkan sedikit
pelatihan dan keahlian untuk menghasilkan kinerja tingkat tinggi
secara konstan. Ini mendukung format pengujian standar
industri, yaitu pelat 96-sumur, yang membawa serta peralatan
standar, misalnya pipet, tip, pembaca pelat, dll.; yang semuanya
diformat ke jejak generik yang sama. Ini telah membantu
menurunkan biaya dan membuat material tersediah untuk
laboratorium pengujian rutin di seluruh dunia dan tidak diragukan
lagi telah berkontribusi pada keberhasilan metode yang
berkelanjutan. Banyak metode baru 'di blok' telah dijelaskan dalam
ulasan ini. Waktu akan menunjukkan mana yang akan menjadi
mapan dalam 10 tahun ke depan dan mana yang akan ditinggalkan
oleh sejarah di atas akan digabungkan untuk menentukan
penetapan metode. Tentu saja faktor kuncinya adalah bahwa
pendekatan ini merupakan perubahan yang signifikan dari norma
dan mungkin perlu waktu untuk membangun kepercayaan
pengguna akhir dan kedewasaan laboratorium pengujian untuk
 tumbuh, menerima bahwa beberapa sampel tidak akan lagi
dikirim. ke laboratorium tetapi mereka akan terus memberikan
peran pendukung, di mana kecepatan pengujian lapangan
memberikan keuntungan yang signifikan. Metode pengujian
paralel atau multipleks tampaknya sangat konvergen dalam kinerja
ketika melihat ke dalam jangka menengah hingga jangka
panjang, namun saat ini dipisahkan semata-mata pada harga. NGS
di sisi lain menggunakan alat pencarian bioinformatika untuk
mencari kesamaan urutan antara urutan yang dihasilkan dan
database yang terus berkembang dan tersedia secara bebas dari
urutan yang diketahui. Ini tidak hanya membuat metode lebih
efektif saat ini, tetapi juga akan menjadi semakin efektif seiring
dengan bertambahnya basis data dari urutan yang diketahui dari
waktu ke waktu.
Namun, dalam jangka panjang, metode pengujian NGS dan paralel
akan mulai menyatu secara signifikan. Pendorong utama dalam
pengembangan NGS adalah obat yang dipersonalisasi, khususnya
pengurutan seluruh genom manusia dengan biaya yang sangat
rendah.
Kesimpulan Penelitihan Hanya waktu yang akan menentukan metode generasi berikutnya
yang saat ini sedang dikembangkan yang akan menjadi diagnostik
rutin di masa depan. Pertimbangan pertama yang jelas adalah
bahwa teknologi itu sendiri harus menawarkan keunggulan kinerja
dibandingkan metode yang ada untuk menggantikannya dan
tinjauan ini menunjukkan potensi untuk mencapai ini untuk
sejumlah teknologi yang muncul. Hal ini membuat teknologi NGS
hanya cocok untuk laboratorium terpusat yang didanai dengan
baik. Namun, situasi ini bukanlah hal baru dan kriteria yang sama
pernah diterapkan pada teknik seperti PCR waktu-nyata.

Selain itu, teknik seperti LAMP, yang dirancang sebagai teknologi

pengujian lapangan, menawarkan potensi besar bagi laboratorium
yang sumber daya dan keahliannya terbatas. Oleh karena
itu, adalah mungkin untuk membayangkan masa depan di mana
lebih banyak lagi laboratorium di seluruh dunia yang mampu
melakukan diagnostik molekuler rutin spesifik target. Namun
sementara faktor-faktor yang terkait dengan teknologi itu sendiri
akan berperan dalam adopsi di masa depan, mungkin faktor
manusialah yang mungkin paling signifikan dalam memutuskan
metode baru mana yang diadopsi secara luas dan mana yang gagal.
Kelebihan Penelitihan Namun, sementara ELISA memiliki banyak keuntungan untuk
 pengujian virus rutin , karena hemat biaya, kuat, mudah
digunakan, dan dapat diskalakan untuk menguji sampel dalam
jumlah besar, ia juga memiliki beberapa perangkap yang
membatasi penggunaannya sebagai tes yang dapat diterapkan
secara universal untuk diagnosis virus tanaman. 

Pertama, ELISA dan berbagai formatnya memerlukan antiserum

berkualitas tinggi, untuk memungkinkan pengikatan antigen virus
yang sensitif dan spesifik. Pembuatan antiserum tersebut
memerlukan keahlian virologi dan kemampuan untuk memurnikan
virion atau selubung virus/protein lain sebagai antigen. Ini adalah
proses yang panjang, yang meskipun banyak kemajuan
teknologi, masih merupakan proses yang sangat tidak terduga dan
mahal. 

Kedua, metode ELISA mendeteksi antigen virus. Secara umum

efisien dan sensitif dan bahkan di mana virus yang tidak dapat
dimurnikan, deteksi virus sensitif dan spesifik dengan ELISA
dapat dicapai, menggunakan antiserum yang dibangkitkan
terhadap protein virus rekombinan . Namun antiserum sering tidak
memiliki resolusi untuk mengidentifikasi strain virus dengan
benar, yang terkait erat tetapi memiliki fenotipe yang
berbeda, seringkali karena karakter penentu strain tidak tercermin
dalam variasi protein mantel misalnya, PVYntn – galur nekrosis
umbi dari Virus kentang Y atau karena protein selubung virus
sangat terkonservasi dalam genus tertentu bahwa antibodi tidak
dapat digunakan untuk membedakan spesies di dalamnya. 

Jadi sementara ELISA masih merupakan metode yang sangat tepat

untuk banyak situasi, termasuk
pengawasan, pemberantasan, sertifikasi tanaman induk, sanitasi
dan karantina, terutama ketika virus tertentu perlu dideteksi secara
andal, metode berbasis asam nukleat lebih umum dan
menyediakan platform yang lebih fleksibel untuk menjawab
pertanyaan diagnostik yang lebih luas.
Mengikuti pengembangan dan penyebaran ELISA dalam skala
luas, pengembangan metode baru telah difokuskan pada deteksi
RNA dan DNA virus. Sementara metode berdasarkan hibridisasi
titik asam nukleat telah banyak digunakan untuk beberapa virus
dan khususnya untuk viroid, teknik yang paling berhasil
dieksploitasi didasarkan pada Reaksi Rantai Polimerase .
Kekurangan Penelitihan 1. metode ini memiliki berbagai kelemahan misalnya,
menggunakan sejumlah besar antiserum mentah atau dibatasi oleh
formatnya, dan karenanya hanya sejumlah kecil sampel yang dapat
diuji.
2. ELISA tidak memiliki fleksibilitas dan kompatibilitas yang
melekat pada beberapa metode molekuler.
3. Ligan dapat digabungkan selama amplifikasi menggunakan
nukleotida atau primer berlabel, atau melalui probe yang
ditambahkan pada akhir reaksi. Deteksi amplikon menggunakan
metode ini memang memiliki kelemahan yang biasanya
membutuhkan tabung reaksi
4. Biaya yang terkait dengan pembuatan reagen serologis baru
untuk masalah penyakit yang muncul, atau dalam situasi di mana
metode serologis (LFD atau ELISA) tidak cukup sensitif untuk
mendeteksi patogen penyebab penyakit.
Judul Development of an indirect competitive
ELISA for the detection of doxycycline
residue in animal edible tissues
Jurnal International journal food and agricultural
imunology
Volume dan halaman 20 dan 111-124
Tahun 2009
Penulis Tao Le
Huan Yu
Yancheng Guo
Babacar Ngom
Yaan Shen
Dingren Bi
Reviewer Lukita Anggraini
Tanggal 21 desember 2021
Tujuan penelitian Untuk menentukan DOX
Subyek penelitian 1. Otot babi yang belum terkontsminsdi
DOX
2. Hati babi yang belum terkontaminasi
DOX
Metode penelitian Ic-ELISA
Hasil penelitian 1. BSA dan PABA menunjukkan panjang
gelombang serapan maksimum masing-
masing pada 280 nm dan 266 nm. Untuk
DOX, panjang gelombang absorbansi
maksimum berkisar antara 271 dan 346
nm. Spektrum konjugat DOX-PABA-
BSA menunjukkan panjang gelombang
serapan maksimum pada 278 nm dan
435 nm. Pergeseran merah ini bisa
menjadi hasil kombinasi dari protein
pembawa dan hapten. Perubahan yang
sama dapat dilihat pada spektrum DOX-
PABA-OVA. Hasil ini menunjukkan
bahwa sintesis antigen buatan berhasil
2. Titer antiserum ditentukan dengan
ELISA non-kompetitif dan nilainya
1:32.000 dengan konsentrasi antigen
pelapis yang optimal ditetapkan pada 0,5
g/ml. Jadi konsentrasi optimal dari
antigen pelapis DOX-PABA-OVA (0,5
g/ml) dan titer antiserum (1:32.000)
dipilih untuk pengembangan lebih
lanjut.
3. konsentrasi 0,5 g/ml antigen pelapis dan
pengenceran antisera yang ditetapkan
 pada 1:32.000 ditemukan optimal untuk
reaksi antigen/antibodi dengan nilai B0
yang lebih tinggi (absorbansi sampel
tanpa DOX) dan IC50 yang lebih
rendah.
4. Untuk optimasi waktu pelapisan, 4°C
semalam memberikan nilai IC50 lebih
rendah dari 37°C selama 2 jam,
sedangkan nilai B0 serupa (Gambar 5
dan 6). Dengan demikian, lapisan pada 4
° C untuk semalam dipilih.
Dibandingkan dengan waktu reaksi (15,
30, 45 atau 60 menit), waktu inkubasi 15
menit menunjukkan nilai IC50 yang
rendah. Kesetimbangan cepat reaksi
antigen/antibodi menyiratkan bahwa
antibodi poliklonal yang dikembangkan
di sini mungkin memiliki tingkat
asosiasi dan disosiasi konstan yang
tinggi (Chen et al., 2008).
5. Melalui studi beberapa faktor, parameter
utama prosedur ELISA ditentukan.
Konsentrasi antigen pelapis (DOX-
PABA-OVA) adalah 0,5 g/ml, dan
pengenceran antibodi ditetapkan pada
1:32.000. Waktu pelapisan dilakukan
pada suhu 4°C selama semalam. Waktu
inkubasi kompleks antigen dan antibodi
ditetapkan dalam 15 menit.
6. Oleh karena itu, dapat disimpulkan
bahwa ic-ELISA yang dikembangkan
untuk DOX sangat spesifik
7. Dibandingkan dengan antibodi
poliklonal TC seperti yang dijelaskan
oleh Pastor-Navarro et al. (2007),
antibodi poliklonal DOX yang
dikembangkan di sini memiliki afinitas
dan sensitivitas yang lebih besar.
8. koefisien variasi rata-rata intra-assay
dalam sampel hati dan sampel otot
masing-masing adalah 5,75 dan 7,53%.
Koefisien variasi rata-rata antar-assay
adalah 5,92% dengan sampel hati dan
7,21% untuk sampel otot
9. Liver and muscle samples spiked
with different concentrations of DOX
were simultaneously analysed by ic-
 ELISA as described above. The
results are shown in Table 3. The
recoveries of DOX in liver ranged
from 80.19 to 89.41%. In muscle
samples, the recoveries ranged from
83.98 to 94.75%.
10. Menurut kurva kalibrasi, dengan PBS,
IC50 adalah 8,74 g/l. Untuk sampel otot
dan sampel hati dari babi, IC50 masing-
masing adalah 9,45 g/l dan 10,22 g/l.
Hasil ini menunjukkan bahwa matriks
tidak berpengaruh signifikan terhadap
spesifisitas dan sensitivitas ic-ELISA
Kesimpulan penelitian Dalam penelitian ini, ELISA cepat untuk
dikembangkan dengan DOX. Antibodi
poliklonal terhadap DOX dihasilkan setelah
mengimunisasi kelinci dengan DOX
terkonjugasi ke BSA menggunakan spacer-
arm alifatik yang lebih pendek dari PABA.
IC50 adalah 8,74 g/l, dan CR yang lemah
juga diamati pada senyawa lain yang terkait
secara struktural. Batas deteksi adalah 1,96
g/l. Dengan metode ELISA yang
dikembangkan dalam penelitian ini,
pemulihan yang baik diperoleh pada sampel
hati dan otot babi dari babi. Hapten selektif
untuk DOX disintesis dan dimurnikan untuk
pertama kalinya dan selanjutnya digunakan
untuk menghasilkan antibodi poliklonal
yang sensitif dan generik. Hapten DOX
yang digunakan dalam penelitian ini
menunjukkan bahwa pemilihan protein
pembawa bisa sangat signifikan. Imunisasi
terus-menerus pada kelinci menggunakan
imunogen murni (DOX-PABA-BSA) dapat
menghasilkan antibodi yang lebih sensitif
untuk DOX. Oleh karena itu, ELISA yang
dioptimalkan dapat menjadi alat analisis
baru yang nyaman, cepat, dan akurat untuk
memantau residu DOX dalam produksi
makanan hewani.
Kelebihan penelitian 1. memiliki keuntungan dalam menentukan
analog DOX individu dengan
sensitivitas tinggi
Kelemahan penelitian 1. Tidak efektif
2. Peralatan yang digunakan mahal
Judul Application of an indirect ELISA and a PCR technique for detection
of cows’milk in sheep's and goats’milk cheeses (Penerapan ELISA
tidak langsung dan teknik PCR untuk mendeteksi susu sapi dalam
keju susu domba dan kambing)

Jurnal international Dairy Journal

Volume dan halaman 87-93 dan 8 halaman
Tahun 2006
Penulis Ine´s M. Lo´pez-Calleja, Isabel Gonza´lez , Violeta Fajardo, Pablo
E. Herna´ndez, Teresa Garcı´a, Rosario Martı´n
reviewer Lukita Sabrina Izzatin
Tanggal 21 Desember 2021

Tujuan penelitian untuk mendeteksi keberadaan susu sapi pada keju domba dan keju
susu kambing.
Subjek penelitian Sample keju komersial Keju PDO domba, guat dan susu sapi murni
diperoleh di pasar toko makanan lokal. Juga, beberapa keju non
PDO berlabel "domba murni" dan "kambing pare" dibeli dari pasar
super setail yang berbeda
Metode penelitian Metode ELISA dan PCR
Hasil pengujian Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini menunjukkan bahwa baik
PCR dan teknik ELISA dapat menyediakan sarana yang dapat
diandalkan untuk deteksi spesifik susu sapi dalam keju. Pendekatan
lain termasuk immunoenry matic assays (ELISA), yang juga
terbukti berhasil untuk identifikasi spesies dalam makanan asal
hewan.
Kesimpulan penelitian Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa ELISA revalts sangat
cocok dengan amplifikasi PCR yang menunjukkan persetujuan
 lengkap dari kedua metode. Susu disisi lain, PCR menggabungkan
spesifisitas dan sensitivitas, dan mendeteksi DNA sapi secara
independen dari sumbernya. PCR spesifik spesies dan ELISA tidak
langsung yang dilaporkan disini dapat mewakili dua alat yang
efektif dan langsung untuk mendeteksi presentase rendah dari susu
sapi yang tidak dideklarasikan dalam keju ovine dan caprine
kualitas premium serta produk susu lainnya.
Kelebihan penelitian ELISA memiliki keunggulan dibandingkan PCR karena lebih murah
dan lebih praktis untuk penggunaan rutin di lapangan,
memungkinkan De Noti, 1. Tad, A. & Maoni F. (1996 Tujuan susu
sapi dalam pemrosesan sejumlah besar sampel tanpa memerlukan
langkah-langkah seperti pencernaan dan/atau parifikasi DNA dari
makanan.
Kelemahan penelitian kelemahan ELISA teknik menggunakan antibodi terhadap cuscins
bisa muncul dalam kasus penggabungan palsu protein

Judul A limited survey of aflatoxin M1 in milk from Indonesia by ELISA

(Survei terbatas aflatoksin M1 dalam susu dari indonesia dengan
ELISA)
Jurnal Journal Homepage
Volume dan halaman Hal, 721–724
Tahun 2008
Penulis N. Nuryono , A. Agus , S. Wedhastri , Y.B. Maryudani , F.M.C.
Sigit Setyabudi , J. Böhm , E. Razzazi-Fazeli.
Reviewer Rizka Dwi Prasyani (20200667003)
Tanggal 21 Desember 2021

Tujuan penelitian Tujuan dalam penelitian ini adalah untuk menganalisis AFM1
 dalam susu yang diproduksi oleh indonesia
Subjek penelitian Subjek penelitian ini adalah susu segar sebanyak 113 sampel dari
lima daerah berbeda di provinsi Yogyakarta, Indonesia. Diambil
langsung dari peternakann sapi perah sebelum pasteurisasia.
Metode penelitian Pada penelitian ini menggunakan metode ELISA
Hasil penelitian Hasil penilitian Dari 113 sampel, 48 sampel terkontaminasi pada
kadar <5 ng/L, 65 sampel pada kisaran 5-25 ng/L, dan tidak ada
sampel yang menunjukkan kontaminasi di atas 25 ng/L. Semua
sampel yang terkontaminasi dikumpulkan hanya dari satu area (S).
Namun, tingkat kontaminasi masih lebih rendah dari batas
maksimum yang ditetapkan oleh Peraturan Komisi Uni Eropa,
bahkan untuk konsumsi bayi, jadi secara signifikan lebih rendah
dibandingkan dengan negara-negara Asia lainya.
Kesimpulan penelitian Kontaminasi sampel susu dengan AFM1 ditemukan lebih rendah
dari 25 ng/L. Dalam penelitian ini tidak ada sampel yang melebihi
batas regulasi Uni Eropa untuk Aflatoksin M1 dalam susu dan
produk susu. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sampel susu
segar Indonesia yang diteliti aman untuk dikonsumsi
manusia.program pengawasan tambahan untuk pakan dan susu
perlu dilakukan untuk dapat melakukan penilaian risiko AFM1.
Kelebihan penelitian Menggunakan metode ELISA yang harganya terjangkau dan
mudah
Kekurangan penelitian Penelitian ini terbatas karena jumlah dan wilayah sampel di
Indonesia

Judul Evaluation Of A New Survivin ELISA And UBC®

Rapid For The Detection Of Bladder Cancer In Urine
Jurnal Molecular Scinses
Volume Dan Halaman 1-13
Tahun 2017
Penulis Jan Gleichenhagen
Christian Arndt
 Swaantje Casjens
Carmen Meinig
Holger Gerullis
Irina Raiko
Thomas Brüning
Thorsten Ecke
Georg Johnen
Reviewer Devi Nur Aisyah (202006670050)
Tanggal Selasa, 21 Desember 2021

Tujuan Penelitian Tujuan Dari Penelitian Ini Adalah Untuk

Mengembangkan ELISA Baru Untuk Kuantifikasi
Survivin Dalam Sampel Urin Dan Untuk Mengevaluasi
Kinerja ELISA Dalam Kombinasi Dengan UBC"
Rapid For Urin-Deteksi Berbasis Kanker Kandung
Kemih, Terutama Tumor Tingkat Tinggi.
Tujuan Dari Studi Kasus-Kontrol Ini Adalah Untuk
Mengevaluasi Kinerja Dari Enzym-Linked
Immunosorbent Assay (ELISA) Yang Dikembangkan
Sendiri Untuk Survivin, UBC® Rapid Test, Dan
Kombinasi Keduanya Karena Kanker Kandung Kemih
Pada Sebelumnya, Kontrol Klinis Tanpa Penyakit
Urologi, Antibodi Yang Dihasilkan Dari Survivin
Rekombinan Digunakan Untuk Mengembangkan
Sandwich ELISA. ELISA Dan UBC Rapid Test
Diterapkan Pada Semua Sampel Urin.Analisis
Karakteristik Operasi Penerima (ROC) Digunakan
Untuk Mengevaluasi Kinerja Penanda.
Subyek Penelitian ELISA Dan UBC Rapid Test Diterapkan Pada Semua
Sampel Urin. Analisis Karakteristik Operasi Penerima
(ROC) Digunakan Untuk Mengevaluasi Kinerja
Penanda. ELISA Survivin Menunjukkan Sensitivitas
35% Dengan Spesifisitas 98%, Tes Cepat UBC®
Menunjukkan Sensitivitas 56% Dan Spesifisitas 96%.
Kombinasi Kedua Tes Meningkatkan Sensitivitas
Menjadi 66% Dengan Spesifisitas 95%. Untuk Tumor
Tingkat Tinggi, Kombinasi Menunjukkan Sensitivitas
82% Dan Spesifisitas 95%.
Metode Penelitian  ELISA Baru Untuk Kuantifikasi Survivin
Dalam Sampel Urin Dan Untuk Mengevaluasi
Kinerja ELISA Dalam Kombinasi Dengan
UBC" Rapid For Urin-Deteksi Kemih,
Terutama Tumor Tingkat Tinggi.
Hasil Pengujian Hasil Produksi Survivin Dan Pengembangan ELISA
Kloning, Ekspresi, Dan Pemurnian Afinitas
Menghasilkan Sekitar 2,5 Mg Protein Fusi
Hisigrsurvivin Yang Sesuai Untuk Pembentukan
Antibodi Pada Kelinci. Dimurnikan Dan Sebagian
Dibiotinilasi Untuk Aplikasi Dalam ELISA Sandwich.
Tidak Ada Reaktivitas Silang Yang Diamati Untuk
Antibodi Anti-Survivin. Rasio Signal-To-Noise
Terbaik Diperoleh Dengan Pengenceran 1:5000 Untuk
Antibodi Penangkap Dan Pengenceran 1: 10.000
Untuk Antibodi Pendeteksian Kurva Sigmoidal Yang
Dihasilkan Dapat Diinterpolasi Dalam Kisaran 0,025-5
Ng/Ml, Dengan Batas Deteksi (Lod) Sekitar 0,033
Ng/Ml Untuk Survivin Baru LISA. Kami
Membandingkan ELISA Kami Dengan Kit ELISA
Survivin Yang Tersedia Secara Komersial Dari R&D
Dan Enzo.
Kinerja UBC® Rapid Distribusi Hasil UBC Rapid
Untuk Kontrol Klinis Dan Kelompok Tumor
Digambarkan Sebagai Plot Titik Nilai UBC® Rapid
Median Adalah 5,0 Mg/L Untuk Kontrol Klinis Dan
16,3 Mg/L Untuk Kelompok Tumor.
Kesimpulan Penelitian Kesimpulannya Yaitu ELISA Baru Untuk Mengukur
Survivin Dalam Sampel Urin Telah Dikembangkan
Dan Dievaluasi Bersama Dengan UBC" Rapid Test
Dalam Studi Kasus-Kontrol. Kedua Tes Mendeteksi
Kanker Kandung Kemih, Lebih Disukai Tumor
Tingkat Tinggi, Tetapi Masing-Masing Dengan Relatif
Rendah Sensitivitas. Untuk Pertama Kalinya, Survivin
Dan UBC® Rapid Telah Diuji Sebagai Panel,
Menunjukkan Peningkatan Sensitivitas. Namun,
Hasilnya Memerlukan Pengujian Lebih Lanjut Dengan
Kelompok Kontrol Lain, Seperti Pasien Yang Dicurigai
Menderita Kanker Kandung Kemih, Dan Akhirnya
Validasi Dalam Studi Prospektif Menggunakan Kohort
Berisiko Tinggi Bahan Tambahan.
Kelebihan Penelitian
Kelemahan Penelitian
Keuntungan Dari ELISA Survivin Dan UBC® Rapid
Adalah Keterjangkauan Dan Kemudahan Penggunaan,
Faktor-Faktor Yang Penting Untuk Aplikasi Masa
Depan Dalam Program Penyaringan Atau Pengawasan.
Memerlukan Pengujian Lebih Lanjut Dengan
Kelompok Kontrol Lain, Seperti Pasien Yang Dicurigai
Menderita Kanker Kandung Kemih, Dan Akhirnya
Validasi Dalam Studi Prospektif Menggunakan Kohort
Berisiko Tinggi.

Development of monoclonal antibody based sandwich

Judul ELISA for the rapid detection of pathogenic Vibrio
parahaemolyticus in seafood
Jurnal International Journal of Food Microbiology
Volume dan halaman 244–249
Tahun 2011
Ballamoole Krishna Kumar
Pendru Raghunath
Penulis Devananda Devegowda, Vijay Kumar Deekshit,
Moleyur Nagarajappa Venugopal, Iddya Karunasagar,
Indrani Karunasagar
Reviewer Sitit Mufarrohah
Tanggal 21 Desember 2021

Pengembangan sandwich ELISA berbasis antibodi

Tujuan penelitian monoklonal untuk deteksi cepat Vibrio
parahaemolyticus patogen dalam makanan laut
 makanan laut
 Hemolisin langsung termostabil (TDH) dan
hemolisin terkait TDH (TRH) dianggap virulensi
Subyek penelitian penting faktor Vibrio parahaemolyticus Antibodi
monoklonal (mAbs) terhadap protein rekombinan
TRH murni dari patogen V. parahaemolyticus.
Sandwich enzyme-linked immunosorbent assays
(ELISA) menggunakan klon hybridoma 4B10
  Tes berbasis antibodi monoclonal menggunakan
mAb 4B10 sandwich berbasis ELISA
 Test PCR telah digunakan untuk mendeteksi V.
Metode penelitian parahaemolyticus dari keduanya sampel klinis
dan lingkungan. Metode ini menargetkan gen
pengkodean penentu virulensi dan juga penanda
spesifik spesies yang termasuk tdh, trh, tlh dan
toxR
Dapat mendeteksi V. parahaemolyticus patogen pada
41,18% (14 dari 34) makanan laut sampel dianalisis.
PCR yang menargetkan gen toxR menunjukkan
keberadaan V. parahaemolyticus di 64,7% (22 dari 34)
sampel makanan laut. Selanjutnya, PCR yang
Hasil penelitian menargetkan gen virulensi menunjukkan bahwa 6
sampel makanan laut mengandung gen tdh sedangkan
9 mengandung gen trh yang menunjukkan adanya
patogen V. parahaemolyticus.
ELISA sandwich mAb 4B10 yang dikembangkan
dalam penelitian ini dapat digunakan sebagai metode
cepat untuk penyaringan sampel makanan laut untuk
keberadaan patogen V. parahaemolyticus

pengembangan mAb menjadi TRH protein V.

parahaemolyticus dan aplikasi dalam format ELISA
Kesimpulan penelitian untuk deteksi patogen V. parahaemolyticus (tdh dan
trh positif) dalam budaya murni dan pengayaan
makanan laut.
penerapan teknik sederhana untuk mendeteksi toksin
penghasil V. parahaemolyticus untuk penilaian risiko
makanan laut, sandwich ELISA bisa temukan aplikasi
sebagai tes rutin di tangan teknisi Tes berbasis antibodi
Kelebihan penelitian monoklonal dianggap sebagai alat yang ampuh untuk
mengidentifikasi mikroorganisme dari berbagai
sumber, enzim yang dikembangkan linked
immunosorbent assay (ELISA) sangat sensitif untuk
identifikasi TDH dan TRH patogen V.
parahaemolyticus dari sampel klinis.
teknik ini memiliki kekurangan yang diperlukan
peralatan khusus dan keahlian dibandingkan dengan
relative teknik sederhana sandwich ELISA. Di sisi
Kelemahan penelitian lain, sandwich ELISA yang digunakan dalam
penelitian ini memiliki kelemahan yaitu
ketidakmampuan untuk membedakan tdh dan trh,
yang merupakan satu-satunya kekuatan PCR dimana
kedua
gen dapat dibedakan
Judul ELISA microarray technology as a high-throughput system for
cancer biomarker validation
Jurnal Future Drugs Ltd
Volume danHalaman 37-44
Tahun 2006
Penulis Richard C Zangar†
Don S Daly
Amanda M White
Reviewer Sherley Agustina (20200667008)
Tanggal Jum’at, 17 Desember 2021

Latar Belakang Kesenjangan besar saat ini ada antara kemampuan untuk
menemukan biomarker potensial dan kemampuan untuk menilai
nilai sebenarnya dari protein ini untuk skrining kanker. Salah satu
tantangan utama dalam validasi biomarker adalah variabilitas
yang melekat pada tingkat biomarker. Variabilitas ini berasal dari
keragaman di seluruh populasi manusia dan heterogenitas
molekuler yang cukup besar antara tumor individu, bahkan yang
berasal dari jaringan tunggal. Tantangan tambahan dengan
skrining kanker adalah bahwa sebagian besar kanker jarang terjadi
pada populasi umum, yang berarti spesifisitas pengujian harus
sangat tinggi. Kemajuan terbaru dalam teknologi penemuan
seperti spektrometri massa, susunan ekspresi DNA, dan susunan
protein mempercepat laju penemuan biomarker. . Kandidat
biomarker ini berpotensi digunakan untuk mendeteksi penyakit,
atau menentukan kemanjuran atau toksisitas terapeutik. Namun,
deteksi klinis penyakit kompleks seperti kanker mungkin
memerlukan analisis profil biomarker untuk mencapai
tingkat sensitivitas dan
spesifisitas yang dapat diterima. . Sementara sebagian besar
 teknologi penemuan sangat cocok untuk analisis profil, teknologi
ini saat ini tidak memiliki kemampuan untuk menganalisis jumlah
sampel yang cukup untuk secara efektif mengkarakterisasi kinerja
pengujian mengingat variabilitas besar di seluruh populasi
manusia. .
Masalah ini semakin diperparah ketika volume sampel kecil. Oleh
karena itu, meskipun teknologi penemuan ditingkatkan, tingkat
persetujuan protein baru untuk digunakan sebagai biomarker
klinis telah menurun selama 10 tahun terakhir. . Alasan
keterlambatan ini adalah bahwa teknologi untuk validasi
biomarker belum mengalami peningkatan kapasitas yang
sebanding dengan teknologi penemuan .Penulis mengusulkan
bahwa teknologi
microarray ELISA dapat mempercepat laju validasi biomarker.
Tujuan Penelitian Microarray ELISA saat ini digunakan untuk tujuan penelitian,
termasuk evaluasi sitokin dan biomarker penyakit potensial
lainnya. Teknologi ini memiliki potensi untuk karakterisasi
simultan dari beberapa protein dalam sejumlah besar sampel kecil.
Kemampuan multi-assay, throughput tinggi, volume rendah
seperti itu diperlukan untuk membantu mengevaluasi peningkatan
jumlah kandidat biomarker yang berpotensi untuk skrining
kanker. Teknologi microarray ELISA berpotensi digunakan untuk
validasi
biomarker kanker.
Subyek Penelitian 1. oarray ELISA juga membutuhkan ukuran sampel yang
kecil (biasanya 20-50 l sampel yang diencerkan per chip)
dan telah mengurangi persyaratan penanganan.
2. dekatan meningkatkan throughput sebanyak 16 array
ulangan dicetak pada setiap slide. Jarak susunan pada pelat
mikro 96 lubang, yang prosesnya dengan pipet
multisaluran atau
robotika.
3. lah tipikal tes/chip 1000-an atau 10.000-an (10-50)
 4. Throughput potensi 50-100 adalah studi besar (1000-an
analisis mungkin)
5. Setiap pengujian dicetak dalam rangkap empat, sekali di
setiap kuadran, sehingga pengaruh efek lokal yang
terdapat pada variabel pada Array 16-sumur serupa telah
digunakan oleh Molecular Staging, Inc. (CT, USA)
Metode Penelitian 1. Interpretasi data microarray DNA mendapat manfaat dari
normalisasi intensitas sinyal di seluruh array. Normalisasi
data juga mungkin menguntungkan analisis data
microarray ELISA
2. kontrol yang digunakan untuk QC/QA juga dapat
menyediakan data untuk normalisasi rasional dari variasi
sistematis dalam proses microarray ELISA
3. data di seluruh susunan DNA berdasarkan metode statistik
yang mengasumsikan sebagian besar titik yang sesuai di
seluruh susunan adalah ulangan
4. mikroarray ELISA, pengujian individual hampir selalu
dipilih sebelumnya berdasarkan harapan bahwa setiap
pengujian dapat berbeda antar kelompok studi. Protokol
normalisasi untuk susunan khusus ini tidak dapat
mengandalkan prosedur yang biasa digunakan untuk
analisis data microarray DNA
5. Dalam hubungannya dengan normalisasi, metode
rasiometrik dua warna juga berfungsi untuk mengontrol
variabilitas spot-to-spot dalam microarray DNA. Di sini,
variabilitas yang dihasilkan dari pencetakan atau
pemrosesan cenderung memiliki efek yang sebanding pada
intensitas sinyal untuk kedua pewarna dalam satu chip,
meskipun intensitas absolut dapat bervariasi secara
signifikan di seluruh chip.
 6. microarray ELISA terbatas pada deteksi satu warna karena
penggunaan amplifikasi sinyal on-slide. Oleh karena itu,
microarray ELISA memerlukan pendekatan alternatif
untuk
mengoreksi variasi pemrosesan spot-to-spot.
Hasil Pengujian Skrining untuk kanker rahim menggunakan tes Papanicolaou telah
menghasilkan penurunan dramatis dalam kematian terkait .
Pap dapat mendeteksi lesi prakanker yang dapat diobati, tes
tahunan sebenarnya mengurangi kejadian kanker ovarium sebesar
78% .
Corp. memproduksi sistem yang menyumbang sekitar 70% dari
tes Pap yang dilakukan di AS, dan pendapatan untuk pasar ini
adalah US$289,5 juta pada tahun 2004 . Teknologi microarray
ELISA tampaknya sangat cocok untuk aplikasi ini.
Biomarker yang ideal dapat didefinisikan sebagai protein yang
memiliki perbedaan konsentrasi yang jelas dan konsisten antara
individu yang sehat dan individu dengan penyakit tertentu; yaitu,
penanda ini akan memiliki sensitivitas dan spesifisitas 100%. Saat
ini, tidak ada biomarker protein ideal yang diketahui, dan
mungkin saja tidak ada biomarker seperti itu atau hanya ada untuk
beberapa penyakit. Juga jelas bahwa protein yang secara istimewa
disintesis oleh tumor itu sendiri cenderung berfungsi sebagai
biomarker yang berguna. Protein seperti antigen spesifik prostat,
yang terutama disintesis oleh jaringan tunggal, memiliki potensi
yang lebih besar sebagai biomarker. Sebaliknya, protein
inflamasi, seperti sitokin, tidak mungkin secara selektif
mengidentifikasi penyakit individu, meskipun mereka dapat
membuktikan diskriminator yang berguna dalam profil protein.
Teknologi microarray ELISA akan memungkinkan studi validasi
ekstensif dari profil biomarker.
Kesimpulan Penelitian Microarray ELISA saat ini digunakan untuk tujuan penelitian,
termasuk evaluasi sitokin dan biomarker penyakit potensial
 lainnya. Teknologi ini memiliki potensi untuk karakterisasi
simultan dari beberapa protein dalam sejumlah besar sampel kecil.
Kemampuan multi-assay, throughput tinggi, volume rendah
seperti itu diperlukan untuk membantu mengevaluasi peningkatan
jumlah kandidat biomarker yang berpotensi untuk skrining
kanker. Teknologi microarray ELISA berpotensi digunakan untuk
validasi biomarker kanker. Namun, kemajuan platform ELISA
yang sangat spesifik dan sensitif ke sistem yang efisien dan dapat
direproduksi untuk analisis throughput tinggi menghadapi banyak
tantangan. Tantangan ini termasuk masalah unik dengan
variabilitas pencetakan, ketidakstabilan reagen, dan spot-to-spot,
variabilitas array-to-array dan sehari-hari. Sementara solusi untuk
beberapa masalah microarray ELISA dapat diturunkan dari
pendekatan yang telah terbukti digunakan untuk teknologi
microarray DNA, masalah seperti normalisasi data tidak dapat
diselesaikan dengan cara ini. Untuk kemajuan teknologi
microarray ELISA, diperlukan tingkat QC/QA yang tinggi. Upaya
pengendalian kualitas ini harus didasarkan pada berbagai tingkat
standar dan kalibran internal spot, array dan slide. Sebagian besar
kontrol ini dan analisis statistik terkait masih harus diuji dan
divalidasi untuk tujuan ini.
Upaya pengendalian kualitas ini harus didasarkan pada berbagai
tingkat standar dan kalibran internal spot, array dan slide.
Sebagian besar kontrol ini dan analisis statistik terkait masih harus
diuji dan divalidasi untuk tujuan ini. Upaya pengendalian kualitas
ini harus didasarkan pada berbagai tingkat standar dan kalibran
internal spot, array dan slide. Sebagian besar kontrol ini dan
analisis statistik
terkait masih harus diuji dan divalidasi untuk tujuan ini.
Kelebihan Penelitian 1. Teknologi microarray enzyme-linked immunosorbent assay
(ELISA) dapat secara bersamaan mengukur tingkat
beberapa protein dan, dengan demikian, memiliki potensi
 untuk mempercepat validasi biomarker protein untuk
penggunaan klinis.
2. Menghasilkan reagen afinitas, secara inheren tidak tepat
dan lambat. Metode baru untuk menghasilkan reagen
afinitas, seperti aptamers atau ekspresi antibodi dalam
bakteri atau sistem ragi
3. Pada penggunaan metode ELISA mampu di Diagnostik
klinis dalam satu waktu sehingga pendekatan mikro
ELISA ini dapat menurunkan biaya klinis rutin untuk
panel Biomarker.
4. Pengujian yang dicetak dari pelat seperti tipe 96 sumuran
standart akan lebih mudah dirubah untuk manipulasi
system
robotic yang tersedia dan analisa otomatis.
Kelemahan Penelitian 1. Belummenunjukkan kemampuan untuk secara efisien
menghasilkan reagen berpasangan pada afinitas dan
spesifisitas tinggi yang diperlukan untuk ELISA. Oleh
karena itu, teknologi microarray ELISA saat ini memiliki
kemampuan terbatas untuk memvalidasi biomarker protein
potensial ketika reagen afinitas untuk protein tersebut
belum tersedia.
2. Pengembangan 5uji protein yang terpisah pengujiannya
akan menghabiskan biaya US$10–20 juta untuk mencapai
persetujuan FDA.
3. Pengembangan rangkaian Biomarker yang lebih besar
akan semakin kurang bermanfaat bagi perusahaan
Diagnostik
4. Sistem berbasis pelat dianggap lebih rendah daripada
platform kaca geser karena keterbatasan dengan instrumen
pencetakan dan pembacaan.
Judul Metal and Metal Oxide Nanoparticles to Enhance the
Performance of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
Jurnal ACS Applied Nano Material
Volume danHalaman 3,121
Tahun 2020
Penulis Yuan Gao
Yingzhu Zhou
Rona Chandrawati
Reviewer Farida Mumtazza Alkautsar (20200667007)
Tanggal Sabtu, 18 Desember 2021

Latar Belakang Enzyme-linked immunosorbent assay telah banyak digunakan

untuk deteksi dan kuantifikasi antigen, antibodi, peptida, protein,
hormon, dan molekul lain, dengan aplikasi mulai dari diagnostik
klinis dan keamanan pangan hingga pemantauan lingkungan.1-5
Dibandingkan dengan teknik deteksi lainnya seperti kromatografi
cair, kromatografi gas, dan spektrometri massa, ELISA
merupakan alat analisis yang sederhana, andal, dan sensitif untuk
penyaringan cepat analit target. Dalam ELISA tidak langsung,
antibodi primer tidak diberi label untuk dipertahankan
imunoreaktivitas maksimum mereka. Sebaliknya, enzim
terkonjugasi ke antibodi sekunder yang mengenali antibodi
primer. Metode ELISA kompetitif lebih kompleks karena
melibatkan antigen referensi. Antigen referensi dilapisi
sebelumnya pada pelat sumur.
Tujuan Penelitian Bertujuan untuk mendemonstrasikan beragam strategi yang
dirancang hingga saat ini yang menggunakan nanopartikel
logam dan oksida logam untuk mengatasi tantangan yang terkait
dengan sensitivitas dan stabilitas ELISA
Subyek Penelitian 1. Sample yang digunakan untuk mendeteksi biomarker
kanker payudara CA15-3 yaitu AuNPs
2. AuNP-ELISA untuk mendeteksi virus pernapasan
syncytia, prokalsitonin (biomarker sepsis), fumonisin
 (mikotoksin), dan sel kanker yang mengekspresikan
reseptor faktor pertumbuhan epidermal (EGFR) tingkat
tinggi.65 Billingsley.
3. Nanopartikel Magnetik (MNPs). untuk mendeteksi
berbagai analit target termasuk protein, bakteri, virus,
mikotoksin, dan alergen.
4. SNP-ELISA untuk mendeteksi hIgG. digunakan sebagai
pembawa antibodi dan sebagai reservoir untuk pemuatan
enzim (glukosa oksidase, GO)
5. sandwich ceria-ELISA untuk mendeteksi ekspresi reseptor
folat pada sel karsinoma paru A549 dan EpCAM pada sel
MCF-7 adenokarsinoma payudara
6. sandwich Pt-ELISA untuk mendeteksi antigen spesifik
prostat manusia (PSA) dalam sampel klinis
7. (PtNC) lateral flow immunoassay (LFIA) untuk
mendeteksi p24,124 biomarker kunci untuk HIV pasca
infeksi
8. ELISA sandwich MOF untuk mendeteksi -fetoprotein
(AFP), yang merupakan biomarker untuk kanker hati
9. SOD2 merupakan biomarker untuk perkembangan tumor
dan metastasis pada kanker prostat, usus besar, dan paru-
paru
10. Sandwich ULISA untuk mendeteksi biomarker penyakit,
troponin I jantung (cTnI) dan hormon perangsang tiroid
(TSH)
Metode Penelitian 1. Nanopartikel Sebagai Pembawa metode ini merupakan
salah satu contributor utama yang membatasi sensitivitas
pengujian rasio enzim terhadap antibody yang rendah 1:1
yang menghasilkan rasio signal-to-noise yang buruk.
2. Nanopartikel Sebagai Enzim Mimics merupakan metode
komponen penting dalam ELISA sebagai aktivitas
katalitiknya dalam menentukan sensitivitas pengujian
Enzim secara alami seperti protein catalis yang efesien dan
 sepesifikan.
3. Nanopartikel Sebagai Transduser Sinyal merupakan
metode untuk mengukur titik akhir ELISA karena
sederhana dan mudah diamati dengan mata telanjang.
Hasil Pengujian 1. Sistem AuNP−dendrimer-ELISA berhasil mendeteksi
human chorionic gonadotropin (hCG) pada rentang linier
0,1−6,4 IU/L, dengan LOD 0,03 IU/L, 20 kali lebih rendah
dibandingkan sistem AuNP-ELISA tunggal dan 27 kali
lebih rendah daripada ELISA tradisional
2. Dalam penelitian MNP berdiameter 10 nm dikonjugasi
dengan anti-AFB1 melalui metode adsorpsi langsung,
yang menghasilkan 24% hasil imobilisasi antibodi.
Kompleks MNP−antibodi−AFB1 dikonsentrasikan
sebelumnya 50 kali lipat dengan pengendapan dengan
medan magnet, dan kemudian AFB1 berlabel HRP
ditambahkan ke dalam reaksi, diikuti dengan penambahan
substrat Semakin tinggi kandungan AFB1 sampel,
semakin rendah pengikatan AFB1 berlabel HRP.
3. Hasilpenelitian sandwich ULISA menunjukkan bahwa
sensitivitas yang lebih tinggi dicapai dengan
menambahkan PAA bebas dalam buffer. Batas deteksi
cTnI dan TSH menurun masing-masing dari 2,1 menjadi
0,48 ng/L, dan dari 0,07 menjadi 0,02 mIU/L
4. Dalam penelitian ini, kondisi optimal untuk oksidasi TMB
ditemukan pada pH 4,0 dengan 200 mM H2HAI2. Sistem
ini mampu mendeteksi mIgG dalam serum pada kisaran
linier 1 hingga 100 ng/mL dengan LOD 0,34 ng/mL
(sensitivitas 3 kali lipat lebih tinggi daripada ELISA
berbasis HRP). Ketika anti-IgG−Cu-MOFs terkena suhu
tinggi 80°C, aktivitas seperti peroksidase dipertahankan
5. Dalam penelitian ini, UCNP berlapis silika terkarboksilasi
dikonjugasi dengan antibodi IgG antimouse melalui reaksi
EDC/NHS. Ditentukan bahwa ada 33 molekul anti-IgG
 per 42,5 nm diameter UCNP. Perlekatan konjugat antibodi
sekunder IgG−UCNP anti-tikus ke antibodi anti-DCF di
ULISA dipantau oleh eksitasi laser 980 nm
Kesimpulan Penelitian Dalam ulasan ini, kami menggaris bawahi keberhasilan terbaru
dari nanopartikel logam dan oksida logam dalam meningkatkan
kinerja ELISA, khususnya untuk meningkatkan sensitivitas dan
stabilitas pengujian serta mempersingkat waktu pengujian.
Nanopartikel memiliki rasio luas permukaan terhadap volume
yang besar yang memungkinkan perlekatan beberapa antibodi
terkonjugasi enzim (misalnya, hingga 20 HRP per nanopartikel),
yang menghasilkan sinyal kolorimetri yang diperkuat
dibandingkan dengan antibodi terkonjugasi enzim tunggal.
Hingga saat ini, ELISA yang dimodifikasi nanopartikel telah
menghasilkan uji ultrasensitif dengan peningkatan sensitivitas 3
kali lipat.
Kelebihan Penelitian 1. Peniru enzim pengganti alami dalam metode ELISA hasil
yang didapatkan sangat stabil, dapat diproduksi secara
massal dengan biaya yang relatif rendah, dan
memungkinkan modifikasi mudah dengan biomolekul
(misalnya, antibodi).
2. AuNP yang tidak dimodifikasi memiliki aktivitas katalitik
yang jauh lebih tinggi terhadap substrat peroksidase
dibandingkan dengan AuNP yang dimodifikasi atau
dibatasi
3. HRP lebih murah dan lebih stabil serta memiliki laju
katalitik yang lebih cepat, ukurannya yang kecil, tidak
menyebabkan hambatan sterik dengan kompleks antigen-
antibodi.
4. Sandwich ELISA memberikan hasil rasio signal-to-
noise yang lebih tinggi tetapi membutuhkan lebih banyak
optimasi dibandingkan dengan ELISA langsung dan tidak
langsung.
5. Dapat meningkatkan katalisis substrat dan penguatan
 sinyal dalam reaksi pengenalan tunggal
6. Teknik ELISA tradisional, ELISA yang digabungkan
dengan AuNPs telah terbukti meningkatkan sensitivitas
pengujian, batas deteksi yang lebih rendah (LOD), dan
mempersingkat waktu pengujian.
7. QD dan UCNP memiliki keunggulan dibandingkan
fluorofor tradisional. QDs secara signifikan lebih terang,
dan UCNPs tahan terhadap interferensi.
8. transduser sinyal memiliki beberapa keunggulan seperti
toksisitas yang lebih rendah, kelarutan air yang sangat
baik, dan kemudahan sintesis
Kelemahan Penelitian 1. keterbatasan upaya untuk eksplorasi bahan nano sebagai
tiruan enzim atau nanozim
2. Terbatas perwarnaan uji metrik adalah rentang dinamis
karena batas atas kerapatan optik (OD)
3. QD (terutama QD berbasis CdSe) relatif beracun dan
UCNP memerlukan sumber eksitasi khusus (880 atau 980
nm),yang menghambat popularitasnya dalam
immunoassays
4.

Judul Risk factors for syphilis in women: case-control study

Jurnal Revista De Saude Publica
Volume dan halaman 1 – 12 halaman
Tahun 2016
Penulis Vilma Costa de MacêdoI , Pedro Israel Cabral de LiraII, Paulo Germano
de FriasIII, Luciana Maria Delgado RomagueraIV, Silvana de Fátima
Ferreira CairesV , Ricardo Arraes de Alencar XimenesV
Reviewer Akbar Aditya Pratama
Tanggal 21 Desember 2021
Tujuan penelitian Bertujuan untuk mengetahui faktor sosiodemografi, perilaku,
dan pelayanan kesehatan yang berhubungan dengan kejadian
sifilis pada wanita yang dirawat di rumah sakit bersalin umum.
Subjek pemelitian Ini adalah studi kasus-kontrol, dilakukan dari Juli 2013
hingga Juli 2014, di tujuh rumah sakit bersalin (enam
dikelola publik dan satu filantropi), sesuai dengan jumlah
total unit yang beroperasi dan yang bekerja untuk Sistem
Kesehatan Terpadu Brasil (SUS ) di Recife, ibu kota negara
bagian Pernambuco, yang terletak di Timur Laut Brasil.
Metode penelitian Pada penelitian ini menggunakan metode ELISA
Hasil penelitian Tabel 1 menunjukkan distribusi variabel sosiodemografi
utama untuk kasus dan kontrol, dengan OR kasar yang
sesuai dan CI 95%. Variabel yang dipilih untuk analisis
multivariat (p <0,20) adalah: status perkawinan, ras yang
dilaporkan sendiri, tingkat pendidikan, kelas ekonomi, dan
akses ke Internet dan telepon.

Tabel 2 menunjukkan variabel perilaku. Agama, usia

pertama kali berhubungan dan hamil, jumlah kehamilan dan
pasangan seksual, dan usia mulai merokok, minum, dan
menggunakan obat-obatan terlarang adalah signifikan.
Variabel-variabel berikut juga dipertimbangkan: kondisi
pasangan saat ini mengenai penggunaan atau tidak
penggunaan obat-obatan terlarang, akses informasi, dan
situasi konflik.
Di antara variabel yang terkait dengan riwayat klinis,
obstetrik, dan perawatan, kami memilih langkah
penyesuaian dalam analisis multivariat: jumlah janji temu
selama perawatan prenatal, kejadian infeksi menular seksual
sebelumnya, partisipasi dalam kelompok wanita hamil,
catatan di unit kesehatan keluarga , dan serologi HIV di
rumah sakit bersalin (Tabel 3).

Tabel 4 menunjukkan hasil analisis multivariat, termasuk

semua variabel yang dianalisis. Riwayat infeksi menular
seksual sebelumnya (OR= 9,7; 95% CI 5,4-17,2) dan hanya
satu sampai tiga janji temu selama perawatan prenatal (OR=
3,5; 95% CI 1,8-6,6) adalah faktor yang terkait dengan risiko
sifilis yang lebih tinggi. Wanita yang memiliki tiga atau lebih
pasangan seksual dalam
tahun lalu tiga kali lebih berisiko terinfeksi. Temuan serupa
ditemukan di antara mereka yang mulai menggunakan
narkoba sebelum usia 18 tahun (OR = 3,0; 95% CI 1,4-6,4).
Kurangnya akses ke telepon dikaitkan dengan sifilis
(OR=2.4; 95% CI 1.2-4.7). Di antara mereka dengan tingkat
pendidikan yang lebih rendah, adanya sifilis memiliki OR
2,02 (95% CI 1,1-3,4).

Ada risiko sifilis yang lebih tinggi di antara wanita multipara

 (OR = 2.2; 95%CI 1.3–3.9) dan di antara mereka yang
melaporkan bahwa pasangannya saat ini adalah pengguna
obat-obatan terlarang (OR= 1.7; 95% CI 1.0-2.9). Agama
juga dikaitkan dengan hasil; kategori "tidak beragama"
digunakan sebagai referensi dan mereka yang berafiliasi
dengan agama Katolik memiliki risiko tertinggi (OR= 1,70;
95% CI 1,0-2,6).
Kesimpulan penelitian Dalam studi ini, kami mengidentifikasi bahwa kemiskinan dan
kerentanan terkait - baik itu perilaku atau akses dan kualitas
perawatan prenatal yang ditawarkan dalam layanan kesehatan
secara signifikan terkait dengan sifilis pada wanita hamil. Hasil
ini menunjukkan bahwa pengendalian transmisi masih menjadi
tantangan yang belum terpecahkan, sejalan dengan apa yang telah
diamati dalam penyelidikan lain. Meskipun sifilis menyajikan
metode diagnostik dan pengobatan yang sederhana, penyakit ini
tetap menjadi masalah kesehatan dan sosial di seluruh dunia 721

Penelitian ini memiliki keterbatasan yang harus ditunjukkan.

Karena data dikumpulkan dengan wawancara tatap muka, ada
kemungkinan kesalahan klasifikasi, terutama untuk variabel
perilaku, seperti penggunaan kondom, penggunaan alkohol, dan
jumlah pasangan seksual. Di sisi lain, tidak ada bukti kesalahan
klasifikasi diferensial antara kasus dan kontrol.
Kelebihan penelitian Variabel yang menunjukkan kekuatan asosiasi terbesar
untuk sifilis gestasional dalam penelitian ini adalah riwayat
infeksi menular seksual sebelumnya, diikuti oleh jumlah
kunjungan pranatal yang tidak memadai (satu hingga tiga
kunjungan). Sudah diketahui bahwa sifilis adalah salah satu
infeksi menular seksual yang menyebabkan kerusakan lebih
besar pada wanita hamil dan anak-anak mereka yang belum
lahir, dan ini terkait dengan peningkatan risiko infeksi HIV".
Kekurangan penelitian Penelitian ini memiliki keterbatasan yang harus ditunjukkan.
Karena data dikumpulkan dengan wawancara tatap muka,
ada kemungkinan kesalahan klasifikasi, terutama untuk
variabel perilaku, seperti penggunaan kondom, penggunaan
alkohol, dan jumlah pasangan seksual. Di sisi lain, tidak ada
bukti kesalahan klasifikasi diferensial antara kasus dan
kontrol