Machine Translated by Google

INTERNASIONAL ISO
STANDAR 18593

Edisi pertama
2004-06-01

Mikrobiologi makanan dan bahan makanan

hewan — Metode horizontal untuk teknik
pengambilan sampel dari permukaan
menggunakan pelat kontak dan penyeka
Microbiologie des aliments — Méthodes horizontales
pour de
moyen de boîtes les iTeh
technicals de prélèvement
STANDAR PREVIEW sur des surface, au
hubungi et d'écouvillons

(standards.iteh.ai)
ISO 18593:2004
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/5eedf775-eba6-493a-8095-
20329b36bbb8/iso-18593-2004

Nomor referensi
ISO 18593:2004(E)

© ISO 2004
Machine Translated by Google

ISO 18593:2004(E)

Penafian PDF
File PDF ini mungkin berisi tipografi yang disematkan. Sesuai dengan kebijakan lisensi Adobe, file ini dapat dicetak atau dilihat tetapi tidak boleh diedit kecuali
jenis huruf yang disematkan dilisensikan dan diinstal pada komputer yang melakukan pengeditan. Dalam mengunduh file ini, para pihak menerima di dalamnya
tanggung jawab untuk tidak melanggar kebijakan lisensi Adobe. Sekretariat Pusat ISO tidak bertanggung jawab di bidang ini.

Adobe adalah merek dagang dari Adobe Systems Incorporated.

Detail produk perangkat lunak yang digunakan untuk membuat file PDF ini dapat ditemukan di Info Umum terkait file tersebut; parameter pembuatan PDF
dioptimalkan untuk pencetakan. Setiap perawatan telah dilakukan untuk memastikan bahwa file tersebut sesuai untuk digunakan oleh badan anggota ISO. Jika
tidak mungkin ditemukan masalah yang berkaitan dengan hal itu, harap menginformasikan Sekretariat Pusat di alamat yang diberikan di bawah ini.

PREVIEW STANDAR iTeh

(standards.iteh.ai)
ISO 18593:2004
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/5eedf775-eba6-493a-8095-
20329b36bbb8/iso-18593-2004

© ISO 2004

Seluruh hak cipta. Kecuali ditentukan lain, tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh direproduksi atau digunakan dalam bentuk apa pun atau dengan cara apa
pun, elektronik atau mekanis, termasuk fotokopi dan mikrofilm, tanpa izin tertulis dari ISO di alamat di bawah ini atau badan anggota ISO di negara asal. pemohon.

Kantor hak cipta ISO

Kasus pos 56 • CH-1211 Jenewa 20 Telp. +
41 22 749 01 11 Faks + 41 22 749 09 47 Email
hak cipta@iso.org Web www.iso.org

Diterbitkan di Swiss

ii © ISO 2004 – Semua hak dilindungi undang-undang

Machine Translated by Google

ISO 18593:2004(E)

Kata pengantar

ISO (Organisasi Internasional untuk Standardisasi) adalah federasi badan standar nasional (badan anggota ISO) di
seluruh dunia. Pekerjaan mempersiapkan Standar Internasional biasanya dilakukan melalui komite teknis ISO. Setiap
badan anggota yang tertarik pada suatu topik yang untuknya komite teknis telah dibentuk berhak untuk diwakili dalam
komite tersebut. Organisasi internasional, pemerintah dan non-pemerintah, bekerja sama dengan ISO, juga ambil bagian
dalam pekerjaan tersebut. ISO bekerja sama erat dengan International Electrotechnical Commission (IEC) dalam semua
masalah standardisasi elektroteknik.

Standar Internasional disusun sesuai dengan aturan yang diberikan dalam Arahan ISO/IEC, Bagian 2.

Tugas utama panitia teknis adalah menyiapkan Standar Internasional. Rancangan Standar Internasional yang diadopsi
oleh komite teknis diedarkan ke badan-badan anggota untuk pemungutan suara. Publikasi sebagai Standar Internasional
memerlukan persetujuan setidaknya 75% dari badan anggota yang memberikan suara.

Perhatian diberikan pada kemungkinan bahwa beberapa elemen dari dokumen ini dapat menjadi subyek hak paten. ISO
tidak bertanggung jawab untuk mengidentifikasi salah satu atau semua hak paten tersebut.

ISO 18593 disiapkan oleh Komite Teknis ISO/TC 34, Produk makanan, Subkomite SC 9, Mikrobiologi.

PREVIEW STANDAR iTeh

(standards.iteh.ai)
ISO 18593:2004
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/5eedf775-eba6-493a-8095-
20329b36bbb8/iso-18593-2004

© ISO 2004 – Semua hak dilindungi undang-undang aku aku aku

Machine Translated by Google

ISO 18593:2004(E)

pengantar

Penting untuk menentukan keberadaan, atau jumlah, mikroba yang hidup pada permukaan peralatan, permukaan
kerja dan peralatan lain yang bersentuhan dengan makanan untuk memperkirakan tingkat kontaminasi selama
produksi, atau efektivitas protokol pembersihan dan disinfektan.

Metode horizontal yang dijelaskan dalam Standar Internasional ini mencakup metode kontak permukaan
menggunakan pelat kontak dan metode usap. Metode pelat kontak hanya berlaku untuk permukaan datar,
sedangkan metode swab dapat digunakan untuk semua jenis permukaan. Untuk pengambilan sampel permukaan
besar (> 100 cm2), kain atau spons steril dapat digunakan. Metode alternatif ini berguna untuk estimasi beban
mikroba permukaan. Hasil sering disajikan sebagai skor kebersihan berdasarkan jumlah unit pembentuk koloni
(CFU) per sentimeter persegi yang ada pada permukaan uji.

PREVIEW STANDAR iTeh

(standards.iteh.ai)
ISO 18593:2004
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/5eedf775-eba6-493a-8095-
20329b36bbb8/iso-18593-2004

iv © ISO 2004 – Semua hak dilindungi undang-undang

Machine Translated by Google

STANDAR INTERNASIONAL ISO 18593:2004(E)

Mikrobiologi makanan dan bahan makanan hewan — Metode

horizontal untuk teknik pengambilan sampel dari permukaan
menggunakan pelat kontak dan penyeka

1 Lingkup
Standar Internasional ini menetapkan metode horizontal untuk teknik pengambilan sampel menggunakan pelat kontak atau
penyeka pada permukaan di lingkungan industri makanan (dan pabrik pengolahan makanan), dengan tujuan mendeteksi atau
menghitung mikroorganisme yang hidup.

CATATAN Istilah "lingkungan" berarti setiap barang yang bersentuhan dengan produk makanan atau kemungkinan mewakili sumber
kontaminasi atau kontaminasi ulang, misalnya bahan, bangunan, operator.

2 Referensi normatif
PREVIEW STANDAR iTeh
Dokumen referensi berikut sangat diperlukan untuk penerapan dokumen ini. Untuk referensi bertanggal, hanya edisi yang dikutip
yang berlaku. Untuk referensi yang tidak bertanggal, berlaku edisi terbaru dari dokumen yang diacu (termasuk amandemennya).
(standards.iteh.ai)
ISO 6887-1, Mikrobiologi makanan dan bahan pakan ternak — Persiapan sampel uji, suspensi awal ISO 18593:2004
dan pengenceran desimal untuk pemeriksaan mikrobiologi — Bagian 1: Aturan umum untuk pembuatan suspensi awal dan
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/5eedf775-eba6-493a-8095-
pengenceran desimal 20329b36bbb8/iso-18593-2004

ISO 7218, Mikrobiologi makanan dan bahan makanan hewan — Aturan umum untuk pemeriksaan mikrobiologi

3 Prinsip
3.1 Karena metode ini tidak dapat diandalkan atau direproduksi secara kuantitatif, hasilnya hanya boleh digunakan dalam "analisis
tren".

3.2 Pelat kontak (atau dipslide) yang diisi dengan media agar yang sesuai ditekan pada permukaan yang akan diuji. Setelah
inkubasi, perkiraan kontaminasi permukaan diperoleh dengan menghitung jumlah koloni yang berkembang.

3.3 Menggunakan metode usap, area tertentu dari permukaan yang akan diperiksa ditandai (misalnya menggunakan templat) dan
kemudian dilap. Tongkat swab dipecah menjadi tabung atau botol berisi cairan pengencer steril atau cairan penetralisir dan
dicampur dengan tangan.

Jika permukaan dilap dengan kain atau spons steril (lembab), alat pengambilan sampel disimpan dalam volume cairan pengencer
yang diketahui (misalnya 100 ml untuk 100 cm2).

Di laboratorium suspensi awal dan, jika perlu, pengenceran desimal lebih lanjut digunakan untuk menentukan jumlah
mikroorganisme menggunakan prosedur yang dijelaskan dalam metode penghitungan (kelompok) mikroorganisme yang akan
diselidiki.

CATATAN Waktu inkubasi dan suhu tergantung pada jenis mikroorganisme yang akan dideteksi.

© ISO 2004 – Semua hak dilindungi undang-undang 1

Machine Translated by Google

ISO 18593:2004(E)

3.4 Untuk media selektif, tes konfirmasi yang sesuai dapat dilakukan. Jumlah unit pembentuk koloni mikroorganisme spesifik per sentimeter
persegi atau per swab dihitung dari jumlah koloni (yang dikonfirmasi).

3.5 Setelah pengambilan sampel, permukaan dibersihkan dan didesinfeksi, jika perlu, untuk menghindari jejak nutrisi yang dihasilkan dari
prosedur pengambilan sampel yang tersisa pada permukaan sampel.

4 Media kultur dan cairan pengencer

CATATAN Untuk informasi lebih lanjut, lihat Standar Internasional yang relevan untuk mikroorganisme target yang akan dideteksi atau dicacah.

4.1 Cairan penetralisir

Secara umum, bahan dasar untuk cairan penetral adalah buffered pepton water, atau garam pepton, atau pengencer lain yang sesuai (seperti
larutan Ringer seperempat kekuatan, buffer fosfat pada pH 7,5, larutan pepton pada 1 g/l).

Dalam kasus di mana residu disinfektan diharapkan, penetralisir yang sesuai harus ditambahkan ke cairan pengencer dan media yang
digunakan pada pelat kontak untuk mencegah efek penghambatan disinfektan pada pertumbuhan mikroorganisme.

5 Peralatan dan barang pecah belah

PREVIEW STANDAR iTeh
Untuk persyaratan umum, lihat ISO 7218.
(standards.iteh.ai)
Peralatan sekali pakai adalah alternatif yang dapat diterima untuk peralatan gelas yang dapat digunakan kembali jika memiliki spesifikasi yang serupa.

ISO 18593:2004
Peralatan laboratorium mikrobiologi biasa dan, khususnya, berikut ini. https://standards.iteh.ai/
catalog/standards/sist/5eedf775-eba6-493a-8095-
20329b36bbb8/iso-18593-2004
5.1 Pelat kontak, piring plastik dengan diameter 65 mm, diisi dengan volume media agar yang terkontrol (dipilih sesuai dengan mikroorganisme
target), khusus dibuat untuk pengambilan sampel permukaan.

Piring bervariasi dalam diameter atau area, sesuai dengan jenis permukaan yang akan diambil sampelnya. Agar-agar harus membentuk
meniskus cembung dengan cawan.

CATATAN Dimungkinkan juga untuk menggunakan perangkat lain (media nutrisi dalam wadah fleksibel atau kaku) yang memungkinkan
kontak dengan permukaan yang akan diambil sampelnya, seperti dipslide (5.2).

5.2 Dipslide, slide sintetis (7 cm2 sampai 10 cm2), salah satu atau kedua sisinya ditutupi dengan lapisan media pertumbuhan padat (dipilih
sesuai dengan mikroorganisme target).

CATATAN Berbagai media pertumbuhan tersedia sesuai dengan mikroorganisme yang dicari.

5.3 Penyeka, tongkat yang mudah pecah dengan kapas atau bahan sintetis (seperti alginat atau rayon) yang terdapat dalam tabung atau
amplop.

Swab harus dibungkus satu per satu dan disterilkan. Bahan yang digunakan harus didokumentasikan bebas dari zat penghambat.

CATATAN Untuk beberapa jenis permukaan, residu kapas dapat mencemari bagian dalam permukaan ini setelah pengambilan sampel.

5.4 Kain, lembab, bahan tenun steril, bebas dari zat antimikroba, dikemas secara terpisah dalam kantong plastik steril, digunakan untuk
pengambilan sampel permukaan besar (L 100 cm2).

5.5 Spons, basah, persegi steril dari spons datar, bebas dari zat antimikroba, dikemas secara individual dalam kantong plastik steril, digunakan
untuk pengambilan sampel permukaan besar (L 100 cm2).

2 © ISO 2004 – Semua hak dilindungi undang-undang

Machine Translated by Google

ISO 18593:2004(E)

5.6 Wadah, seperti botol, tabung atau termos, cocok untuk sterilisasi dan penyimpanan media kultur.

5.7 Kotak pendingin, berinsulasi, mampu menjaga sampel pada suhu rendah selama pengangkutan ke laboratorium.

5.8 Pipet ukur, memiliki bukaan lebar dan kapasitas nominal 1 ml, bertingkat dalam pembagian 0,1 ml, atau pipet otomatis yang
menghasilkan 100 l dan 1.000 l.

5.9 Mixer, untuk mencampur cairan dalam tabung kultur.

5.10 Homogenizer atau homogenizer peristaltik menggunakan pengocokan horizontal, dengan kantong plastik steril untuk menyiapkan
suspensi awal dengan gerakan peristaltik (homogenizer peristaltik) atau gerakan vibrasi (homogenizer menggunakan pengocokan
horizontal).

5.11 Cawan petri, terbuat dari plastik, diameter 65 mm.

5.12 pH-meter, mampu dibaca ke unit pH 0,01 terdekat pada 25 °C ± 1 °C, memungkinkan pengukuran dilakukan yang akurat hingga ±
0,1 unit pH.

5.13 Template, terbuat dari bahan tahan korosi (misalnya rangka baja tahan karat yang menutupi area seluas 20 cm2 hingga 100 cm2),
yang mudah dibersihkan dan dapat disterilkan.

6 Teknik Pengambilan
Sampel iTeh STANDARD PREVIEW
6.1 Umum
(standards.iteh.ai)
Adalah penting bahwa laboratorium menerima sampel yang mewakili permukaan yang diuji dan tidak berubah selama pengangkutan dan
penyimpanan, atau oleh residu disinfektan.
ISO 18593:2004
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/5eedf775-eba6-493a-8095-
Disinfektan umumnya diformulasikan untuk waktu kontak desinfeksi 5 menit sampai 15 menit. Tunggu periode di 20329b36bbb8/
iso-18593-2004
sesuai dengan spesifikasi desinfektan sebelum menyelidiki permukaan dengan penyeka atau pelat kontak untuk menilai kinerja program
pembersihan dan desinfeksi (atau menurut spesifikasi desinfektan).

Penetral yang tepat untuk semua situasi tidak dapat ditentukan. Umumnya, sorbitan monooleat (30 g/l) dan lesitin (3 g/l) berguna untuk
menetralkan residu disinfektan yang diserap (misalnya senyawa amonium kuaterner, amfoterisida). Sodium tiosulfat (5 g/l) adalah
penetral yang baik untuk produk berbasis halogen. Dalam kasus disinfektan berbasis peroksida, katalase atau peroksidase dapat
digunakan sebagai penetral. Satu unit enzim ini mengkatalisis penguraian 1 mol hidrogen peroksida per menit pada 25 °C dan pada pH
7,0 ± 0,2. Sejumlah penetral disinfektan direkomendasikan dalam EN 1276 [1], EN 1650 [2], EN 13697 [3]

dan EN 13704 [4].

Komponen penetralisir yang dapat digunakan dalam kebanyakan situasi diberikan pada Tabel 1. Dibuat dalam larutan pepton (1 g/l) dan
natrium klorida (8,5 g/l), didistribusikan dalam tabung atau botol, dan disterilkan selama 15 menit pada suhu 121 °C.

Tabel 1 — Penetral yang dapat digunakan di sebagian besar situasi

Komponen konsentrasi

Sorbitan monooleat (Polisorbat 80) 30 g/l

Lesitin 3 g/l
Natrium tiosulfat 5 g/l
L-Histidin 1 g/l
Saponin 30 g/l

© ISO 2004 – Semua hak dilindungi undang-undang 3

Machine Translated by Google

ISO 18593:2004(E)

6.2 Metode pelat kontak

Setelah dikeluarkan dari wadah transpor, tekan permukaan agar pelat kontak atau dipslide dengan kuat dan tanpa gerakan lateral
terhadap permukaan uji. Dari literatur diketahui bahwa hasil yang optimal untuk pelat kontak diperoleh dengan waktu kontak 10 s dan
tekanan yang diperoleh dengan massa 500 g.
Tutup pelat kontak atau dipslides segera setelah inokulasi dan masukkan kembali ke dalam wadah transportasi.

6.3 Metode swab atau kain/spons

6.3.1 Metode swab

Keluarkan swab dari pembungkus steril dan basahi ujungnya dengan merendamnya dalam tabung yang berisi cairan pengencer.
Tekan ujung swab ke dinding tabung untuk menghilangkan kelebihan air. Tempatkan ujung swab pada permukaan yang akan
diperiksa dan coret pada area sekitar 20 cm2 sampai 100 cm2, sambil memutar swab antara ibu jari dan jari telunjuk dalam dua arah
tegak lurus satu sama lain.

Masukkan swab ke dalam tabung dengan cairan pengencer dan aseptik mematahkan atau memotong tongkat.

6.3.2 Metode spons/kain

Buka kantong plastik atau wadah berisi kain atau spons.

Lepaskan kain atau spons secara aseptik dengan forsep steril atau tangan bersarung tangan steril. Basahi kain atau spons dengan
PREVIEW STANDAR iTeh
pengencer secukupnya (tanpa berlebihan). Dalam kasus permukaan lembab, ini tidak perlu.

(standards.iteh.ai)
Kembalikan kain atau spons ke dalam kantong plastik dan tutup dengan cara yang memastikan tidak ada kebocoran.

Sampel permukaan yang dipilih dalam dua arah tegak lurus, mengubah permukaan kain atau spons. Tempatkan ISO 18593:2004
kain atau spons dalam wadah steril, tambahkan pengencer dan tutup. Tambahkan volume https://standards.iteh.ai/catalog/standards/
sist/5eedf775-eba6-493a-8095- yang diketahui dan memadai
pengencer, sehingga kain atau spons masih lembab pada saat analisis.
20329b36bbb8/iso-18593-2004

Cara lainnya, buka kantong plastik berisi kain atau spons. Mencengkeram spons melalui tas, tarik tas terbalik di atas tangan. Gunakan
spons untuk mengumpulkan sampel seperti dijelaskan di atas dan pindahkan kain atau spons ke kantong plastik steril. Tutup tas
dengan cara yang akan memastikan tidak ada kebocoran.

7 Transportasi
Pindahkan sampel yang diperoleh dengan metode usap, sebaiknya dalam waktu 4 jam, ke kotak pendingin yang diatur pada suhu 1 °C hingga 4 °C.
Periksa di laboratorium sesegera mungkin dan selambat-lambatnya 24 jam, seperti yang dijelaskan dalam Klausul 8.

Pindahkan pelat kontak dan/atau dipslide, sebaiknya dalam waktu 4 jam, sedemikian rupa sehingga tidak ada kontaminasi yang dapat terjadi.

8 Prosedur

8.1 Metode pelat kontak

Inkubasi pelat kontak atau dipslides sesuai dengan jenis mikroorganisme yang akan dicacah (lihat Catatan untuk Ayat 4).

Metode pelat kontak tidak boleh digunakan untuk deteksi spesifik mikroorganisme patogen.

4 © ISO 2004 – Semua hak dilindungi undang-undang

Machine Translated by Google

ISO 18593:2004(E)

8.2 Metode swab (termasuk kain dan spons)

Aduk rata isi tabung yang berisi swab menggunakan mixer (5.9) selama 30 detik, atur kecepatan agar dinding tabung terbasahi
hingga ketinggian 2 cm sampai 3 cm di bawah bagian atas.

Tambahkan ke dalam kantong plastik yang berisi kain atau spons sejumlah cairan pengencer atau cairan penetral (4.1) tergantung
pada ukuran area yang diselidiki (misalnya 100 ml untuk 100 cm2). Kemudian perlakukan isi kantong dalam homogenizer peristaltik
(5.10) selama 1 menit, atau homogenizer menggunakan pengocokan horizontal (5.10) selama 30 detik. Ini mewakili penangguhan
awal.

Jika diharapkan jumlah mikroorganisme yang tinggi, siapkan pengenceran desimal lebih lanjut dalam pengencer air pepton untuk
mendapatkan jumlah koloni yang dapat dihitung (lihat ISO 6887-1).

Menurut metode pencacahan yang digunakan (lihat Standar Internasional yang sesuai), inokulasikan media duplikat dengan
suspensi awal, menggunakan 1 ml inokulum untuk pelat tuang dan 0,1 ml inokulum untuk teknik pelat sebar. Perlakukan
pengenceran lebih lanjut dengan cara yang sama. Balikkan piring dan inkubasi piring untuk waktu dan suhu yang sesuai untuk
setiap media.

Sebagai alternatif dari metode pelapisan yang dijelaskan di atas, dimungkinkan untuk menggunakan metode pelat jatuh. Dimulai
dengan pengenceran tertinggi, gunakan pipet steril untuk memindahkan alikuot 0,05 ml suspensi awal (penyeka, kain atau spons)
dan pengenceran selanjutnya ke sektor yang sesuai dari media kultur yang ditandai di bagian bawah pelat agar-agar ( dalam
rangkap dua, menggunakan pengenceran yang sama untuk pelat agar yang berbeda). Setiap lempeng agar yang telah dikeringkan
dapat digunakan untuk tetes tidak lebih dari enam pengenceran yang berbeda. Gunakan teknik pemipetan terbalik dengan
menekan plunger sepenuhnya ketika mengambil alikuot 0,05 ml, dan menginokulasi pelat dengan menekan plunger ke
pemberhentian pertama saja. Jaga agar pelat agar tetap horizontal (tutup paling atas) sampai permukaannya kering.
PREVIEW STANDAR iTeh
(standards.iteh.ai)
Jika metode usap digunakan untuk menunjukkan adanya mikroorganisme tertentu (misalnya Listeria monocytogenes atau
Salmonella spp.), area yang diselidiki harus paling sedikit 100 cm2 dan lebih disukai sekitar 1.000 cm2. Pindahkan swab, kain atau
spons ke dalam kaldu pengayaan yang sesuai dan aduk rata.
ISO 18593:2004
https://standards.iteh.ai/catalog/standards/sist/5eedf775-eba6-493a-8095-
8.3 Penghitungan dan deteksi koloni
20329b36bbb8/iso-18593-2004

8.3.1 Metode pelat kontak

Hitung jumlah koloni tipikal pada pelat kontak atau dipslid secara langsung setelah masa inkubasi yang ditentukan dan konfirmasikan,
jika perlu, sesuai dengan mikroorganisme yang dicari.

8.3.2 Metode swab (termasuk kain atau spons)

Hitung koloni di setiap cawan dan konfirmasi ini, jika perlu, sesuai dengan mikroorganisme yang dicari.

8.3.3 Metode pelat jatuh

Hitung jumlah koloni (target) pada pengenceran yang menghasilkan 5 sampai 50 koloni.

8.3.4 Prosedur pengayaan

Setelah pra-pengayaan, ikuti instruksi sesuai dengan mikroorganisme yang dicari.

© ISO 2004 – Semua hak dilindungi undang-undang 5