REVIEW JURNAL ISOLASI, PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI

ENZIM KATALASE DARI Fungi.

Laporan Tugas Akhir

Jenny Risma Dewi Nurmayasari

12161018

Universitas Bhakti Kencana

Fakultas Farmasi
Program Strata I Farmasi
Bandung
2020
 LEMBAR PENGESAHAN

REVIEW JURNAL ISOLASI, PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI

ENZIM KATALASE DARI Fungi.

Laporan Tugas Akhir

Diajukan untuk memenuhi syarat kelulusan Program Strata I Farmasi

Jenny Risma Dewi N

12161018

Bandung, Juli 2020

Menyetujui,
Pembimbing Utama, Pembimbing Serta,

(Rahma Ziska M.Si.,) (Drs. Rahmat Santoso, M.Si., MH. Kes., Apt)
 ABSTRAK
REVIEW JURNAL ISOLASI, PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI
ENZIM KATALASE DARI Fungi.
Oleh :
Jenny Risma Dewi N

12161018

Katalase andalah enzim yang ditemukan pada bakteri, jamur, tanaman, hewan dan manusia.
Pada manusia enzim katalase ditemukan di hati dan dapat mencegah penumpukkan
hidrogen peroksida dalam tubuh serta melindungi organel dan jaringan seluler dari radikal
bebas. Pada saat ini katalase banyak dibutuhkan di industri makanan, tekstil dan kosmetik.
Dalam industri kosmetik katalase digunakan untuk pembersih lensa kontak dan perawatan
kecantikan seperti masker wajah. Penelusuran review ini dilakukan isolasi, purifikasi
(pemurnian) , karakterisasi pH, uji aktifitas dan temperatur optimum enzim katalase, pada
purifikasi dilalkukan 3 tahap yaitu pengendapan amonium sulfat, kromatografi penukar ion
dan dialisis, dan pada karakterisasi menentukan bobot molekul, uji aktifitas dan stabilitas
katalase (pH, suhu). Kultur yang telah diisolasi dimurnikan hingga mendapat ekstrak crude
enzim murni, hasil pemurnian ditentukan bobot molekul dan didapat rentang kDa dari
beberapa jurnal yaitu 50 – 90 kDa selanjutnya diuji aktivitas zimografi hasil positif katalase
karena adanya gelembung pada gel SDS yang ditetesi H2O2. Review jurnal ini bertujuan
untuk mengetahui informasi terhadap beberapa artikel dari isolasi, purifikasi dan
karakterisasi katalase dari fungi.

Kata kunci: Fungi, Isolasi; Katalase Purifikasi.

i
 ABSTRACT

REVIEW JURNAL ISOLASI, PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI

ENZIM KATALASE DARI Fungi.

By :
Jenny Risma Dewi N

12161018

Catalase is an enzyme found in bacteria, fungi, plants, animals and humans. In

humans the enzyme catalase is found in the liver and can prevent the buildup of
hydrogen peroxide in the body and protect organelles and cellular tissue from free
radicals. At this time catalase is needed in the food, textile and cosmetics industries.
In the cosmetics industry catalase is used for contact lens cleansers and beauty
treatments such as face masks. This research was carried out isolation, purification,
pH characterization, activity test and optimum temperature of the enzyme catalase,
purification was carried out in 3 steps, namely the deposition of ammonium sulfate,
ion exchange chromatography and dialysis, and the characterization determines the
molecular weight, activity test and catalase stability ( pH, temperature). The isolated
culture was purified until pure crude enzyme extract was obtained, the purification
results were determined by molecular weight and obtained kDa range from several
journals of 50-90 kDa and then zymogram activity tested positive for catalase as a
result of bubbles in the SDS gel with H2O2 drops. This journal review is to find out
information about several articles on the isolation, purification and characterization of
catalase from fungal.

Keywords: Catalase, Fungal, Isolation, Purification.

ii
 KATA PENGANTAR

Bismillahirahmanirahim
Pertama-tama marilah kita panjatkan puji syukur kehadirat Allah SWT dan shalawat serta
salam mudah-mudahan terlimpah curah kepada pemimpin seluruh umat Nabi Muhammad
SAW beserta keluarganya, sahabatnya, tabi‟in tabi‟atnya dan umatnya hingga akhir zaman.
Berkat karunia dan rahmat-Nya sehingga sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir
ini yang berjudul “REVIEW JURNAL ISOLASI, PURIFIKASI DAN
KARAKTERISASI KATALASE DARI Fungi”. Dalam penulisan tugas akhir ini penulis
mendapat banyak bantuan, bimbingan, dukungan, serta do‟a dari berbagai pihak sehingga
tugas akhir ini dapat terselesaikan. Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan
terimakasih kepada:
1. Allah SWT.
2. Bapak H. Mulyana selaku Ketua Yayasan Adhiguna Kencana.
3. Bapak Dr. apt. Entris Sutrisno, S.Farm., MH. Kes selaku Rektor Universitas Bhakti
Kencana Bandung
4. Ibu Rahma Ziska, M.Si selaku dosen pembimbing utama yang telah memberikan
arahan serta masukan dengan tulus kepada penulis selama proses pengerjaan tugas
akhir ini.
5. Bapak Drs. Apt, Rahmat Santoso M.Si., MH Kes selaku dosen pembimbing serta
yang telah memberikan arahan serta masukan dengan tulus kepada penulis selama
proses pengerjaan tugas akhir ini.
6. Kepada orang tua, kakak, serta keluarga besar yang tercinta atas do‟a, harapan,
dukungan, semangat, serta kasih sayang bagi penulis.
7. Rekan satu bimbingan yang telah melaksanakan bimbingan bersama, saling
memberikan informasi serta bantuan bagi penulis.
8. Kepada rekan seperjuangan Fa-5 yang mampu berjuang bersama-sama melewati
tantangan semua ini baik suka maupun duka.
9. Dan semua pihak yang telah membantu dan mendukung yang tidak dapat disebutkan
satu-persatu. Besar harapan penulis agar laporan tugas akhir ini dapat bermanfaat bagi
semua pihak.

iii
Semoga amal baik dari semua pihak mendapatkan balasan yang berlipat ganda dari Allah
SWT. Di sadari bahwa penyusunan Tugas Akhir ini masih jauh dari sempurna, oleh
karena itu kritik dan saran yang membangun sangat diharapkan guna penyempurnaan
Tugas Akhir ini dapat bermanfaat bagi semua pihak.

Bandung, Agustus 2020

Penulis

iv
 DAFTAR ISI

ABSTRAK ............................................................................................................................... i
ABSTRACT ............................................................................................................................. ii
KATA PENGANTAR ........................................................................................................... iii
DAFTAR ISI........................................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR DAN ILUSTRASI ........................................................................... vii
DAFTAR TABEL ............................................................................................................... viii
DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG ....................................................................... ix
BAB I Pendahuluan ............................................................................................................... 1
I.1 Latar Belakang............................................................................................................ 1
I.2 Rumusan Masalah ...................................................................................................... 1
I.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................................ 1
I.4 Waktu dan Tempat Penelitian ..................................................................................... 2
BAB II Tinjauan Pustaka ...................................................................................................... 3
II.1 Katalase ...................................................................................................................... 3
II.2 Struktur Katalase ........................................................................................................ 4
II.3 Tipe Katalase .............................................................................................................. 7
II.3.1 Tipe A (Katalase-Monofungsional): ....................................................................... 7
II.3.2 Tipe B (Katalase-Peroksida): .................................................................................. 8
II.3.3 Tipe C (Katalase-Nonheme): .................................................................................. 9
II.3.4 Tipe D (Katalase-Minor): ....................................................................................... 9
II.4 Katalase Dalam Kosmetik ........................................................................................ 10
II.5 SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate) ................................................................. 11
II.6 Sacharomyces ceevisiae .......................................................................................... 13
BAB III Metodologi Penelitian ........................................................................................... 14
BAB IV Prosedur kerja ....................................................................................................... 15
IV.1 Kultivasi Jamur ....................................................................................................... 15
IV.2 Isolasi Katalase ....................................................................................................... 15
IV.3 Purifikasi ................................................................................................................. 15
IV.4 Pengendapan ammonium sulfat 40% b/v ............................................................... 15
IV.5 Pengendapan amonium sulfat 60% b/v .................................................................. 15
IV.6 Dialisis .................................................................................................................... 16
IV.7 Kromatografi kolom ............................................................................................... 16

v
 IV.8 Karakterisasi Katalase SDS-PAGE ........................................................................ 16
IV.9 Uji aktifitas Zimografi ........................................................................................... 17
IV.10 Uji pH optimum .................................................................................................... 17
IV.11 Uji suhu optimum ................................................................................................. 17
Bab V Hasil dan Pembahasan ............................................................................................. 18
V.1 Kultivasi Jamur ........................................................................................................ 18
V.2 Pembuatan Kurva pertumbuhan Jamur ................................................................... 18
V.3 Isolasi ....................................................................................................................... 19
V.4 Purifikasi dan Uji Aktivitas. ................................................................................... 19
Penentuan pH dan suhu maksimum: ................................................................................. 22
V.6 Uji Aktivitas ............................................................................................................. 24
Bab VI Kesimpulan dan Saran ........................................................................................... 25
VI.1 Kesimpulan ............................................................................................................. 25
VI.2 Saran ....................................................................................................................... 25
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................................... 26

vi
 DAFTAR GAMBAR DAN ILUSTRASI

Gambar.1 “Struktur heme Katalase dan Haemoglobin dengan K lambang untuk protein
katalase dan G lambang untuk protein globin” ........................................................................ 4
Gambar.2 “Struktur Katalase 3D” ........................................................................................... 5
Gambar.3 “Diagram proses katalitik anion superoksida” ........................................................ 5
Gambar 4 “Reaksi bertingkat katalase” ................................................................................... 6
Gambar5 “klasifikasi katalase” (Sooch et al., 2017) ............................................................... 7
Gambar.6 “asal bakteri dan jamur dan kelompok III mengandung ketiga enzim bakteri serta
enzim jamur dan hewan dan satu enzim dengan asal archaebacterial” ................................... 8
Gambar 7 “skema hasil SDS-PAGE” ................................................................................... 12
Gambar 8 “(A) Interpretasi hasil SDS-PAGE, (B) Marker Protein” ..................................... 12
Gambar.9 “Saccharomyces cerevisiae dalam mikroskopis” ................................................. 13
Gambar 2 bobot molekul Haloarchaeal strain dan bobot molekul Aspergillus terreus ...... 21
(Gambar 3 Pengaruh pH (a) dan Suhu (b) dalam katalase Haloarchaeal strain) .................. 22
(Gambar 4 Aktivitas katalase pH (a) dan suhu (b). Buffer pH yang berbeda (masing-masing
konsentrasi 50 mM dari Aspergillus terreus)......................................................................... 23
(Gambar 5 Aktivitas Katalase pH (a) dan Suhu (b) dari Neurospora crassa) ...................... 23

vii
 DAFTAR TABEL

Tabel 1 Hasil Purifikasi Pengendapan ................................................................................... 20

Tabel 2 Hasil Purifikasi Pengendapan ................................................................................... 21

viii
 DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG

SINGKATAN MAKNA

SDS Sodium Dodecyl Sulphate

YPDB Yeast Potato Dextrose Broth
HIC Hydrophobic interaction chromatography
SEC Size exclusion chromatography

ix
 BAB I Pendahuluan

I.1 Latar Belakang

Katalase adalah enzim antioksidan yang memiliki kemampuan untuk mendegradasi hidrogen
peroksida (H2O2) menjadi air (H2O) dan oksigen (O2) [1]. Katalase berperan dalam beberapa
proses pembentukan uban, dan memperlambat kerusakan sel pada penyakit tertentu seperti
multiple sclerosis. Katalase juga berperan dalam mekanisme inflamasi, apoptosis (kematian
sel), penuaan (aging), dan kanker (Wulansari et al., 2017).

Dalam industri makanan katalase banyak digunakan sebagai kombinasi dengan senyawa
kimia lainnya untuk menghilangkan senyawa hidrogen peroksida (H2O2) yang dihasilkan
pada susu dan keju. Katalase juga dapat digunakan dalam pembungkus makanan untuk
mencegah terjadinya proses oksidasi pada makanan [3].

Katalase dapat diisolasi dari mikroorganisme seperti bakteri dan fungi. Saccharomyces
cerevisiae merupakan fungi yang termasuk kelompok khamir (yeast) [4]. Saccharomyces
cerevisiae dapat menghasilkan enzim ekstraseluler seperti amilase, β-galaktosidase, protease
dan katalase [5]

Vatsyayan and Goswami (2016) telah melakukan isolasi purifikasi dan karakterisasi katalase
dari Aspergillus terreus, dari isolasi tersebut katalase stabil pada pH 3-12. Berdasarkan
penelitian tersebut, maka akan dilakukan isolasi, purifikasi dan karakterisasi katalase dari
Saccharomyces cerevisiae.

Review jurnal ini bertujuan untuk mengetahui informasi terhadap beberapa artikel dari
isolasi, purifikasi dan karakterisasi katalase dari fungi.

I.2 Rumusan Masalah

1. Bagaimana aktifitas katalase dari Fungi?
2. Bagaimana karakterisasi dan aktivitas katalase dari Fungi?

I.3 Tujuan Penelitian

1. Bagaimana aktifitas katalase dari Fungi?
2. Bagaimana karakterisasi dan aktivitas katalase dari Fungi?

1
 2

I.4 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini akan di lakukan pada bulan Februari-Juni 2020, di laboratorium mikrobiologi
Universitas Bhakti Kencana Jl. Soekarno Hatta No 754, Cipadung Kidul, Kec. Panyileukan Bandung
Jawa Barat.
 BAB II Tinjauan Pustaka

II.1 Katalase

Katalse mempunyai empat rantai polipeptida yang pada masing- masing rantainya tersusun
dari ±500 asam amino. Enzim katalase juga mempunyai 4 kelompok heme yang terbentuk
dari cincin protoporphyrin. Cincin ini mengandung atom besi tunggal, dengan berat molekul
tersebut sekitar 118.054,25 gram/mol.

Enzim katalase dikelompokan kedalam golongan enzim hidroperoksidase yang berfungsi

melindungi organisme dari senyawa peroksida yang berbahaya. Penumpukan senyawa ini
dapat merusak permeabilitas membran sel di dalam tubuh dan dapat menyebabkan penyakit
seperti kanker dan arterosklerosis. Katalase berperan dalam mengurai H2O2 atau hidrogen
peroksida yang apabila tidak diuraikan menjadi senyawa beracun (Sumardjo, 2009).'

Salah satu sumber katalase yaitu mikroorganisme seperti bakteri dan jamur, Berdasarkan
penelitian yang telah dilakukan yaitu karakterisasi katalase dari Geobacillus sp, hasil dari
karakterisasi tersebut yaitu katalase yang terdapat dalam Geobacillus sp mulai aktif pada
suhu 80 ⁰C yang artinya katalase sangat tahan panas (Jia et al., 2016).

Karakterisasi katalase sangat beragam, tidak hanya tahan dingin atau panas, menurut
penelitian Hussein, dilakukan karakterisasi thermo-alkali dari Bacillus sp, hasil uji
karakterisasi yaitu katalase dalam Bacillus sp mulai aktif pada suhu 60 ⁰C dan pH 9, sehingga
katalase yang didapat dari Bacillus sp aman jika dilakukan pemanasan di atas 60 ⁰C atau
dalam kondisi basa di atas pH 9 (Hussein, 2012).

Uji katalase merupakan suatu pengujian terhadap bakteri tertentu untuk mengetahui apakah
bakteri tersebut merupakan bakteri aerob, anaerob fakultatif atau anaerob obligat. Bakteri
yang memerlukan oksigen menghasilkan hidrogen peroksida yang sebenarnya beracun bagi
bakteri itu sendiri. Bakteri dapat tetap hidup dengan adanya antimetabolit tersebut karena
mereka menghasilkan enzim katalase yang dapat mengubah hidrogen peroksida menjadi air
dan oksigen dengan reaksi sebagai berikut:

Reaksi Hidrolisis 2 H2O2 2H2O+ O2

3
 4

Pada uji katalase dikatakan positif apabila terdapat gelembung udara pada kaca objek.
Gelembung udara yang muncul adalah gelembung oksigen, berdasarkan reaksi diatas.
Katalase merupakan enzim yang mengkatalisa penguraian hidrogen peroksida menjadi H2O
dan O2 Hidrogen peroksida bersifat toksik terhadap sel karena bahan ini menginaktifkan
enzim dalam sel. Enzim katalase mampu mengkatalis reaksi penguraian Hidrogen Peroksida
(H2O2) melalui dua mekanisme kerja yaitu katalitik dan peroksidatik.Katalase merupakan
enzim yang mengkatalisis reaksi penguraian H2O2 (Hidrogen Peroksida). H2O2 (Hidrogen
peroksida) mempunyai kemampuan untuk berdifusi ke dalam dan menembus membran sel
yang terletak jauh dari tempat Hidrogen Peroksida (H2O2) dibentuk.Hidrogen Peroksida
(H2O2) dalam tubuh dapat berasal dari berbagai sumber anatar lain, proses transfer elektron di
mitokondria oleh sitokrom oksidase yang mereduksi O2 dengan menerima dua elektron dan
reaksi dimutasi O2 yang dikatalisis oleh superoksida dismutase (Wood, 1994).

II.2 Struktur Katalase

Struktur dari katalase berbeda dari satu makhluk hidup dengan yang lain, tetapi struktur
kuartener analog dengan Hb di mana katalase mempunyai beberapa unit dan masing-masing
mengandung 500-residu sub unit Fe pada pusat cincin prophyrin seperti dilihat pada
gambar.2 berikut :

Gambar.1 “Struktur heme Katalase dan Haemoglobin dengan K lambang untuk protein
katalase dan G lambang untuk protein globin”
 5

Gambar.2 “Struktur Katalase 3D”

Pada Gambar.2 CatF (A), yaitu subunit kecil tetramerik, katalase yang mengandung heme.
HPII (B), yaitu subunit besar tetramerik. BpKatG (C) yaitu katalase yang mengandung heme,
katalase-peroksidase dimer, dan LPC (D) katalase dimangan heksamerik (Chelikani, Fita and
Loewen, 2004)

Katalase adalah bagian terbesar bodyguard makhluk hidup dalam melindungi tubuh dari
bahaya radikal bebas anion superoksida, suatu hasil samping dari metabolisme lemak dan
karbohidrat (Welch et al., 1979).

Gambar.3 “Diagram proses katalitik anion superoksida”

Pada Gambar.2 memperlihatkan bahwa enzim superoksida dismutase (SOD) adalah garis
pertama yang melawan radikal bebas anion superoksida yang diubah menjadi hidrogen
peroksida. Hidrogen peroksida masih bersifat racun untuk sel. Katalase adalah jawaban untuk
 6

mengubah hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen yang sama sekali tidak berbahaya bagi
tubuh, dimana pada reaksi ini hidrogen peroksida direduksi dan dioksidasi (Luck, 1974).

Gambar 4 “Reaksi bertingkat katalase”

Reaksi umum oleh katalase adalah degradasi dua molekul hidrogen peroksida menjadi air dan
oksigen (reaksi 1). Katalis yang mengandung heme semuanya memiliki mekanisme dua kali
lipat untuk degradasi H2O2. Pada langkah pertama, satu molekul hidrogen peroksida
mengoksidasi heme (dalam katalisis yang mengandung heme) menjadi spesies oksiferry di
mana satu ekuivalen oksidasi dihilangkan dari besi dan satu dari cincin porfirin untuk
menghasilkan radikal kation porfirin (reaksi 2). Molekul hidrogen peroksida kedua digunakan
sebagai reduktor senyawa I untuk meregenerasi enzim keadaan istirahat, air dan oksigen
(reaksi 3) (Chelikani, Fita and Loewen, 2004).

Mekanisme reaksi katalisasi dari katalase dianggap sebagai proses dua langkah, yaitu langkah
pertama satu molekul hidrogen peroksida direduksi menjadi air dan katalase dioksidasi
menjadi kompleks I, dan langkah kedua satu molekul hidrogen peroksida dioksidasi menjadi
oksigen dan kompleks I direduksi menjadi katalase.

Reaksi penguraian ini mengikuti reaksi orde pertama sekurang-kurangnya reaksi dengan
waktu pendek (kurang dari 3 menit) pada konsentrasi enzim yang relatif tinggi (Societies et
al., 1992)
 7

II.3 Tipe Katalase

Gambar5 “klasifikasi katalase” (Sooch et al., 2017)

Katalase dibagi dalam empat kelompok utama, yaitu enzim monofungsional "klasik" tipe A,
katalase-peroksidase tipe B, katalis non-heme tipe C, dan protein lain-lain dengan aktivitas
katalitik kecil tipe D (Nicholls et al., 2000)

II.3.1 Tipe A (Katalase-Monofungsional):

Kelompok katalase terbesar dan paling banyak dipelajari, merupakan enzim monofungsional.
Pemindahan hidrogen peroksida adalah aktivitas utama dan aktivitas peroksida pada substrat
kecil. Cara yang paling mudah untuk mengkategorikan grup ini didasarkan pada ukuran
subunit yang menyertai heme. Terdapat dua subkelompok, kelompok pertama mengandung
enzim subunit kecil (55 hingga 69 kDa) dengan heme b yang terkait, dan kelompok kedua
mengandung enzim subunit besar (75 hingga 90 kDa) dengan heme d terkait. Katalis
monofungsional ini semuanya terbukti aktif sebagai tetramer karena adanya kesamaan
struktur tetramerik Gambar.5 ,saat ini telah dibagi menjadi tiga kelompok yang berbeda,
suatu pengelompokan yang berbeda yang timbul dari analisis filogenetik. Kelompok I
mengandung enzim tanaman dan bakteri, contohnya yaitu Pseudomonas syringae, kelompok
II hanya mengandung katalase subunit besar dengan
 8

Gambar.6 “asal bakteri dan jamur dan kelompok III mengandung ketiga enzim bakteri serta
enzim jamur dan hewan dan satu enzim dengan asal archaebacterial”
Pohon filogenetik tanpa akar berdasarkan urutan asam amino inti dari 113 katalase. Angka-
angka pada tiga node utama mewakili proporsi (dari 100) sampel bootstrap yang mendukung
topologi. Tiga clade utama dilingkari untuk kejelasan. Pada gambar tiga kesimpulan dari
pohon seperti itu adalah bahwa clade atau kelompok utama muncul dari progenitor katalase,
setidaknya dua duplikasi gen.

II.3.2 Tipe B (Katalase-Peroksida):

Kelompok katalase terbesar berikutnya adalah katalase-peroksidase, dinamakan demikian

karena mereka menunjukkan aktivitas peroksidasi yang signifikan di samping aktivitas
katalis. Mereka telah dikarakterisasi pada jamur dan bakteri yang menyerupai tanaman
tertentu sama seperti (tipe I) contohnya yaitu Bacillus pumilus. Ada lebih banyak
keseragaman dalam urutan dalam kelompok katalase ini, yang mengandung heme b, memiliki
subunit lebih besar dari 80 kDa (dengan beberapa pengecualian), aktif sebagai dimer atau
tetramer.

Telah dihipotesiskan bahwa katalase-peroksidase mungkin telah muncul melalui peristiwa

duplikasi dan fusi sehingga menimbulkan dua domain dengan urutan yang sama di subunit
yang sama. Salah satu domain telah mempertahankan aktivitas dan kesamaan urutan yang
lebih besar dengan katalase peroksida lainnya, sedangkan yang kedua telah berkembangnyab
penyimpangan urutan yang lebih besar menjadi bentuk tidak aktif tanpa terikat dengan heme.
Analisis filogenetik dari sekuens katalase-peroksidase, saat ini diperluas hingga 20 sekuens
 9

yang tersedia, tidak mengungkapkan subkelompok utama yang sebanding dengan yang ada
dalam keluarga katalase.

II.3.3 Tipe C (Katalase-Nonheme):

Saat ini kelompok terkecil, hanya ada tiga katalis nonheme yang dikarakterisasi dan jumlah
yang sama, semua asal bakteri (Lactobacillus plantarum, album Thermoleophilum, dan
Thermus thermophilus) memiliki bobot molekul 170 –210 kDa (Sooch et al., 2017). Situs
aktif masing-masing dari tiga enzim (8-10) mengandung pusat reaksi yang kaya mangan
daripada kelompok heme, dan kurangnya heme inilah yang menyebabkan mereka awalnya
disebut "pseudo-katalase." Struktur kristal telah ditentukan untuk enzim Lactobacillus
plantarum dan Thermus thermophilus dan telah mengkonfirmasi situs aktif yang
mengandung kluster mangan binuclear binuclear. Mekanisme tindakan katalitiknya saat ini
sedang dibahas. Sampai lebih banyak urutan tersedia, analisis filogenetik tidak diperlukan.

II.3.4 Tipe D (Katalase-Minor):

Beberapa protein yang mengandung heme, termasuk sebagian besar peroksidase, telah
diamati pada katalase tipe d ini menunjukkan tingkat aktivitas katalitik yang rendah, dengan
kloroperoksidase dari Caldariomyces fumago menunjukan reaktivitas terbesar sebagai
katalase.

Terlepas dari kenyataan bahwa hanya ada satu contoh yang perlu dipertimbangkan, yaitu
katalase pertama kali ditandai karena kemampuannya untuk mengklorinasi substrat organik di
hadapan klorida dan hidrogen peroksida pada pH asam, tetapi kemudian ditemukan memiliki
sifat peroksidik dan katalitik di atas pH 4 tanpa adanya ion klorida dan substrat organik.
Enzim ini memiliki berat molekul 42 kDa dan aktif sebagai monomer. Ada tiga kelas
tambahan haloperoxidases, dua di antaranya adalah enzim nonheme dan tidak
dipertimbangkan di sini; yang ketiga, termasuk bromoperoxidase yang mengandung heme
dari Streptomyces violaceus, dianggap sebagai katalase tipe A berdasarkan urutannya.

Protein lain seperti methemoglobin dan metmyoglobin telah diamati untuk menghasilkan
oksigen molekuler di hadapan hidrogen peroksida, tetapi pada tingkat yang sangat rendah. Ini
mungkin hanya properti heme, yang dapat mempromosikan reaksi katalitik tingkat rendah
tanpa adanya protein. Akibatnya, adalah mungkin bahwa semua protein yang mengandung
heme dapat menunjukkan reaksi katalitik jika diuji dengan hati-hati, tetapi aktivitas yang di
dapat minor, sebagian besar tidak dapat dijelaskan tersebut tidak dipertimbangkan.
 10

II.4 Katalase Dalam Kosmetik

Mekanisme pertahanan antioksidan pada kulit bisa dipengaruhi oleh ROS (Reactive Oxygen
Species), ketika mekanisme pertahanan tidak seimbang, stres oksidatif dapat merusak
membran sel, protein, karbohidrat dan asam nukleat yang memicu oksidasi. Pembentukan
radikal bebas adalah mekanisme penting yang menyebabkan penuaan kulit. Radikal bebas
memiliki molekul reaktif sangat tinggi dengan elektron tak berpasangan yang dapat secara
langsung merusak berbagai struktur membran seluler, lipid,protein, dan DNA. Efek merusak
dari senyawa oksigen reaktif ini diinduksi secara internal selama metabolisme normal dan
eksternal melalui berbagai tekanan oksidatif (Haerani et al., 2008)

Produksi radikal bebas meningkat seiring bertambahnya usia sementara mekanisme

pertahanan endogen yang menghambatnya menurun. Ketidakseimbangan ini mengarah pada
kerusakan progresif struktur seluler sehingga menghasilkan penuaan yang dipercepat
(Allemann and Baumann, 2008). Antioksidan adalah zat yang bisa memberi perlindungan
endogen dan tekanan oksidatif eksogen dengan menangkap radikal bebas, antioksidan
merupakan molekul yang mampu menghambat oksidasi molekul lain (Lai-Cheong and
McGrath, 2017).

Antioksidan berfungsi untuk menghambat reaksi radikal bebas. Antioksidan memiliki

banyak manfaat untuk kesehatan kulit yaitu sebagai antipenuaan, perlindungan dari ROS
akibat stress oksidatif dan perlidungan dari UVA (Haerani et al., 2008).

UVA merupakan faktor eksternal utama penyebab penuaan kulit. UVA meningkatkan
produksi matrik metalloproteinase (MMP) yang mendegradasi kolagen melalui pembentukan
reactive oxygen species (Indrayati, 2016)

Superoxide dismutases (SODs) adalah enzim yang berperan dalam melindungi sel dan
jaringan dari efek toksik radikal bebas (Indrayati et al., 2011). SODs telah digunakan dalam
bidang farmasi khususnya untuk keperluan terapi dan kosmetik. SODs berguna dalam
terapeutik untuk pengobatan gangguan inflamasi (Yasui and Baba, 2006). Penelitian lain
menunjukkan bahwa jika ditambahkan SODs kedalam kombinasi katalase dan dibuat sediaan
kosmetik dapat mencegah penuaan kulit (Lods et al., 2000).
 11

II.5 SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate)

Protein dapat diuraikan menjadi rantai polipeptida penyusunnya dengan menggunakan
detergen SDS setelah mereduksi ikatan disulfide (Peck, 1998). Dodesil sulfat terikat kuat
padaprotein sehingga hanya memerlukan 0,1% dodesil sulfat untuk menjenuhkan rantai
peptida, dengan rata-rata satu molekul detergen tiap dua residu asam amino.

Setiap dodesil sulfat mendenaturasi muatan negatif pada protein, sehingga muatan total dari
suatu polipeptida akan menjadi negatif. Perbandingan antara muatan dan ukuran molekul
akan identik untuk semua protein dan pemisahan terjadi hanya karena adanya perbedaan berat
molekul, sehingga terpisah karena proses penyaringan molekul melalui pori-pori gel (Scopes,
1994).

Prinsip kerja SDS-PAGE:

a. Larutan protein yang akan dianalisis dicampur dengan SDS terlebih dahulu, SDS
merupakan deterjen anionik yang apabila dilarutkan molekulnya memiliki muatan negatif
dalam range pH yang luas. Muatan negative SDS akan mendenaturasi sebagian besar struktur
kompleks protein, dan secara kuat tertarik kearah anoda bila ditempatkan pada suatu medan
elektrik.

b. Pada saat arus listrik diberikan, molekul bermigrasi melalui gel poliakrilamida menuju
kutub positif (anoda), molekul yang kecil akan bermigrasi lebih cepat daripada yang besar
sehingga akan terjadi pemisahan.

c. Pada proses elektroforesis dengan SDS dilakukan didalam gel poliakrilamida, molekul
akan melewati pori-pori gel sehingga kemudahan pergerakan melalui pori tergantung pada
diameter molekul.

d. Molekul yang besar akan tertahan dan akibatnya bergerak lebih lambat. Karena molekul
terdenaturasi, diameter tergantung dari berat molekulnya. Semakin besar diameter molekul
maka semakin lambat pergerakannya. SDS-PAGE akan memisahkan molekul berdasarkan
bobot molekulnya.

Ada dua keuntungan utama menggunakan SDS-PAGE dibandingkan dengan elektroforesis

biasa, yaitu:

1.Agregat dan partikel-partikel yang tidak larut seringkali menyebabkan hasil yang tidak baik
jika dilakukan pemisahan dengan elektroforensis biasa, karena adanya pori-pori yang
 12

terhalang. Ketika didenaturasi, agregat-agregat ini akan menjadi larut dan berubah menjadi
polipeptida tunggal.

2.Mobilitas suatu protein ditentukan oleh ukuran polipeptidanya, sehingga dapat langsung
menentukan berat molekul dari tiap komponen yang ada pada sampel.

Gambar 7 “skema hasil SDS-PAGE”

Dapat dilihat pada Gambar.5 SDS akan mengikat bagian hidrofobik dan residu asam amino,
sehingga menyebabkan perubahan struktur tiga dimensi protein. Selain itu, SDS juga
menyebabkan seluruh rantai peptida bermuatan negatif.

Gambar 8 “(A) Interpretasi hasil SDS-PAGE, (B) Marker Protein”

Pada gambar 5 (A) adalah contoh yang di peroleh dari hasil SDS-PAGE dan menunjukkan
gel poliakrilamid yang telah diwarnai dengan Coomassie Blue R-250. Sedangkan untuk
menentukan ukuran molekul protein dapat diperkirakan dengan kurva kalibrasi menggunakan
protein marker (B) (Magdeldin, 2007)
 13

II.6 Sacharomyces ceevisiae

Gambar.9 “Saccharomyces cerevisiae dalam mikroskopis”

Saccharomyces cerevisiae secara morfologi berbentuk bulat, lonjong, silindris, oval atau
bulat telur yang dipengaruhi oleh strainnya. Berkembang biak dengan membelah diri melalui
“budding cell”. Reproduksinya dapat dipengaruhi oleh keadaan lingkungan serta jumlah
nutrien yang tersedia bagi pertumbuhan sel. Saccharomyces cerevisiae mempunyai
kemampuan fermentasi telah lama dimanfaatkan untuk pembuatan berbagai produk makanan
dan sudah banyak digunakan sebagai probiotik (Agawane and Lonkar, 2004).

Saccharomyces cerevisiae dapat menghasilkan enzim ekstraseluler salah satu contoh enzim
yang di hasilkan yaitu Katalase. Pada penelitian (Yulinery et al., 2006) dilakukan beberapa
uji dari Saccharomyces cerevisiae, salah satu pengujiannya yaitu katalase, dari hasil
pengujian, khamir dapat mereduksi peroksida, secara kualitatif dilakukan dengan cara 3%
hidrogen peroksida diteteskan pada isolat khamir. Uji katalase menunjukkan positif karena
terbentuknya gelembung-gelembung oksigen ketika direaksikan dengan H2O2 3%.