PENUNTUN KERJA LAB SPERMATOLOGI

ANALISA SPERMA

PEMERIKSAAN MAKROSKOPIS
Pemeriksaan Warna

Pemeriksaan warna sperma dilakukan dengan inspeksi terhadap sample sperma yang telah
ditampung.

Pemeriksaan Bau

Pemeriksaan bau dilakukan dengan cara mengibaskan tangan diatas sampel semen yang berada
dalam kontainer sampai tercium baunya.

Pengukuran Volume

Volume sperma diukur dengan menggunakan syringe/spuit yang telah dibuka jarumnya.

Pemeriksaan pH

pH

Pemeriksaan pH dilakukan dengan cara meneteskan sedikit sample sperma pada kertas indikator
pH, kemudian segera dibaca dengan membandingkan pada standar pH yang terdapat dalam
kemasan.

1
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS
Motilitas Spermatozoa

Pipet 10 µL Teteskan pada Tutup dengan Amati dengan

sperma objek glas cover glas perbesaran 40X

Kriteria Motilitas Spermatozoa :

-- Motilitas Progresif (a)
Rapid Progressive (A)
-- Motilitas Non Progresif
Slow Progressive (B) (b)
-- Immotil
Non-Progressive
(c) (C)
- Immotil (D)
Pemeriksaan Leukosit

Pipet 10 µL Teteskan pada Tutup dengan Amati dengan

sperma objek glas cover glas perbesaran 40X

Hiung leukosit di tiga lapang pandang dan hasilnya dirata-ratakan.

Pemeriksaan Kristal

Pipet 10 µL Teteskan pada Tutup dengan Amati dengan

sperma objek glas cover glas perbesaran 40X

Note : Lihat ada tidaknya kristal pada lapang pandang.

2
Pemeriksaan Aglutinasi

Pipet 10 µL Teteskan pada Tutup dengan Amati dengan

sperma objek glas cover glas perbesaran 40X

Note : Lihat ada tidaknya aglutinasi pada lapang pandang.

Pemeriksaan vitalias

Pipet 10 µL Teteskan pada Tambahkan 10 µL Homogenkan

sperma objek glas Eosin

Amati dengan Tutup dengan

perbesaran 40X cover glas

Note : Spermatozoa mati akan terwarnai, spermatozoa hidup tidak terwarnai. Hitung
spermatozoa sampai 100, lalu dipersentasekan.

3
Pemeriksaan Konsentrasi Spermatozoa

Pipet 10 µL Teteskan pada Teteskan 10 µL sperma yang Amati dengan

sperma microtube yang berisi telah diencerkan pada perbesaran 40X
190 µL aquabides lalu Hemositometer yang telah dan hitung pada
homogenkan dilapisi cover glas. kotak bertanda
(Pengenceran 20X)

Jumlah spermatozoa pada 5 kotak Hemositometer hasilnya dikali 106.

Morfologi Spermatozoa

Teteskan 10 µL Slide dengan Tunggu hingga

Sperma pada kemiringan 45o kering
objek glas

Keringkan Cuci dengan Celupakn ke Celupkan ke Celupkan ke Keringkan Fiksasi

Aquades Kristal Violet Buffer Safranin (5 dengan
(5 menit) Phospat (2-3 Menit) Alkohol 96%
kali) (5 menit)

Note : Perhitungan dilakukan dengan menghitung total

100 spermatozoa (normal, abnormal kepala,
abnormal leher, abnormal ekor, dan abnormal
sitoplasmik droplet) kemudian hasilnya
Amati dengan perbesaran 100X
dikonversikan ke dalam persentase (%).

4
 PREPARASI SPERMATOZOA

Metode Swim up
Alat dan bahan : Centrifuge, incubator, tabung Nunc (2 buah), pipet transfer (6 buah), tabung
Falcon 5 mL (1 buah), microtube (1 buah).
Langkah Kerja :

Pindahkan seluruh Sisa sperma Ke dalam tabung homogenkan Bagi menjadi

sperma ke tabung diperiksa berisi sperma, dua tabung
Nunc lalu ukur motilitas dan tambahkan sperm sama rata
volumenya konsentrasinya medium dengan
perbandingan 1:1

Pindahkan Inkubasi Tambahkan 1 mL Supernatan Centrifuge

supernatan ke selama 30 sperm medium pada dibuang, pelet 2500 RPM
tabung Falcon menit pada masing-masing disisakan 5 menit
5 mL suhu 37oC tabung, melalui
dinding tabung

Centrifuge Supernatan Homogenkan Ambil sedikit untuk

2500 RPM dibuang Lalu simpan di diperiksa konsentrasi
5 menit sisakan 0,3 mL suhu ruang dan motilitasnya
pelet

Syarat : Vol 0.5, Motilitas >50%, konsentrasi>20 jt

5
 Metode Standard Gradient
Alat dan bahan : Centrifuge, tabung Nunc (2 buah), tabung Falcon 5 mL (3 buah), pipet transfer
(6 buah), microtube (1 buah), sperm medium, gradient 80%, gradient 40%.
Langkah Kerja :

Siapkan
Gradient

Pindahkan seluruh Sisa sperma Ke dalam tabung Tambahkan

sperma ke tabung diperiksa Nunc kosong, gradient 80 %
Nunc lalu ukur motilitas dan masukkan gradient sebanyak 1 mL
volumenya konsentrasinya 40 % sebanyak 1 kedasar tabung
mL

Sperma
Pelet ada
di dasar Grad 40%

Grad 80%

Buang Lapisan Centrifuge 800

1800 3 Lapisan yang Tambahkan 1 mL
Atas sisakan RPM selama Terbentuk Sperma di bagian
pellet 20 menit
10 menit Seperti ini atas

Pindahkan ke Centrifuge 1500

1800 Buang supernatan Homgekan Ambil sedikit
tabung Falcon RPM selama 105 sisakan 0,3 mL lalu simpan di untuk
kosong lalu menit susu ruang diperiksa
tambahkan 2 mL konsentrasi
Menunggu
sperm medium dan
dimasukkan
ke kateter motilitasnya

Syarat : Motilitas >25-40%, konsentrasi>15 jt

 Metode Mini Gradient
Alat dan bahan : Centrifuge, tabung Nunc (2 buah), tabung Falcon 5 mL (3 buah), pipet
transfer(6 buah), microtube (1 buah), sperm medium, gradient 80%,
gradient 40%.
Langkah Kerja :

Siapkan
Gradient

Pindahkan seluruh Sisa sperma Ke dalam tabung Tambahkan

sperma ke tabung diperiksa Nunc kosong, gradient 80 %
Nunc lalu ukur motilitas dan masukkan gradient sebanyak 0.5 mL
volumenya konsentrasinya 40 % sebanyak 0.5 kedasar tabung
mL

Sperma
Pelet ada
di dasar Grad 40%

Grad 80%

Buang Lapisan Centrifuge 800 3 Lapisan yang Tambahkan 10,5

mLml
1800 Sperma di bagian
Atas sisakan RPM selama Terbentuk
pelet 20 menit Seperti ini atas
10

Pindahkan ke Centrifuge 1500

1800 Buang supernatan Homgekan Ambil sedikit
tabung Falcon RPM selama 105 sisakan 0,3 mL lalu simpan di untuk
kosong lalu menit susu ruang diperiksa
tambahkan 2 mL
Menunggu konsentrasi
sperm medium
dimasukkan dan
ke kateter motilitasnya

Syarat : Vol >0.5, Motilitas >20%, konsentrasi>6 jt

Metode Two Layer Albumin Gradient (TLAG)
Alat dan bahan : Centrifuge, inkubator 37oC, tabung Nunc (1 buah), tabung Falcon 5 mL (4
buah), pipet transfer (6 buah), microtube, albumin 25%.
Langkah Kerja :
a. Persiapan Sperma

Sambil
Menunggu,
siapkan medium
Pindahkan seluruh Sisa sperma Ke dalam tabung homogenkan Centrifuge Albumin
sperma ke tabung diperiksa berisi sperma, 3500 RPM
Nunc lalu ukur motilitas dan tambahkan sperm (10 menit)
volumenya konsentrasinya medium dengan
perbandingan 1:1

Kerjakan dulu
pembuatan layer

Homogenkan Tambahkan 1 mL Supernatan dibuang,

sperm medium pelet disisakan

b. Persiapan Gradien

Masukkan 1,6 mL Homogenkan Albumin Pada salah satu Homogenkan Albumin 10%
albumin 25% ke dalam maka 20% dibagi dimasukkan
tabung albumin maka
tabung Falcon 5 mL lalu ke dalam 2
konsentrasi ke dalam 2 20% tambahkan konsentrasi
tambahkan 0,4 mL tabung
sperm medium albumin tabung sama 1 mL sperm albumin masing-
menjadi 20% rata medium menjadi 10% masing 1 mL

Sperma

Albumin 10% Tambahkan 0,5 mL Tambahkan albumin

Buang Inkubasi sperma yang telah 20 % sebanyak 0,5
lapisan selama 30 Albumin 20% diproses pada mL ke dasar masing-
sperma menit Lapisan yang bagian atas masing- masing tabung
terbentuk masing tabung Albumin 10%

Inkubasi Buang Lapisan gradien Tambahkan Centrifuge Buang Homogen-

lagi 30 lapisan 20% disatukan 0,5 mL sperm 3500 RPM suprnatan kan lalu
menit gradien 10% dlm 1 tabung medium selama 15 sisakan 0,3 simpan di
menit mL pelet suhu ruang

8
Syarat : Motilitas > 50% ; Konsentrasi > 20 jt