DETERMINATION OF URINE ALBUMIN WITH BIURET METHOD

Albumin merupakan salah satu protein yang ditemukan dalam jumlah besar di dalam darah.
Biasanya, sejumlah kecil albumin disaring di glomerulus dan diserap kembali oleh tubulus
proksimal. Namun, albumin dapat masuk ke dalam urin melalui ginjal ketika ada masalah
ginjal. Kehadiran sejumlah kecil albumin dalam urin, yang disebut mikroalbuminuria.

Pada individu sehat, konsentrasi albumin lebih rendah dari 30 mg/24 jam, sedangkan pada
mikroalbuminuria konsentrasi albumin 30-300 mg/24 jam, dan jika albumin urin >300 mg/24
jam disebut dengan makroalbuminuria (proteinuria). Pada neonatus ekskresi albumin
cenderung lebih tinggi dibandingkan dengan anak yang lebih besar dan orang dewasa, hal ini
dapat menyebabkan permeabilitas glomerulus neonatus lebih besar daripada anak yang lebih
tua atau orang dewasa. Pada anak usia 4-16 tahun, setelah dikoreksi luas permukaan tubuh,
laju ekskresi albumin ditemukan meningkat seiring bertambahnya usia dan sedikit lebih
tinggi pada wanita. Pada orang dewasa, tampaknya tidak ada perbedaan jenis kelamin dalam
albumin urin. Namun bila dinyatakan sebagai rasio terhadap kreatinin, rentang acuan pada
wanita sedikit lebih tinggi, hal itu karena wanita memiliki massa otot yang lebih rendah,
sehingga ekskresi kreatinin juga lebih rendah.

Mikroalbuminuria juga merupakan penanda disfungsi endotel, pada populasi umum,

dikaitkan dengan hipertensi, obesitas, diabetes mellitus, dan penyakit ginjal yang nyata, dan
juga dengan peningkatan risiko infark miokard, dan stroke. Selain itu, mikroalbuminuria juga
berhubungan dengan preeklamsia pada kehamilan. Mikroalbuminuria yang persisten
menunjukkan kemungkinan kerusakan yang tinggi pada kapasitas filtrasi glomerulus di ginjal
dan memiliki relevansi diagnostik yang besar pada kehamilan sebagai kemungkinan prediktor
berkembangnya preeklamsia. Sebuah penelitian melaporkan bahwa 40% kejadian
preeklamsia pada ibu hamil juga disertai dengan diabetes mellitus tipe 1.

Mengukur konsentrasi albumin urin sangat berguna untuk memantau diabetes. Penderita
diabetes rentan terhadap beberapa komplikasi, salah satunya penyakit ginjal. Kehadiran
albumin dalam jumlah kecil dalam urin (mikroalbuminuria) pada pasien diabetes merupakan
indikator awal nefropati diabetik, bila kondisinya tidak ditangani dengan baik dapat
menyebabkan stadium akhir penyakit ginjal. Selanjutnya, mikroalbuminuria telah ditemukan
menjadi prediktor hasil pada pasien sakit kritis seperti operasi besar, trauma, dan sepsis.

Output urin bervariasi tergantung pada jumlah asupan cairan. Konsentrasi albumin urin akan
mewakili ini. Albumin akan lebih rendah ketika output urin tinggi, sebaliknya urin albumin
akan lebih tinggi ketika output urin rendah. Konfirmasi mikroalbuminuria sangat penting,
karena beberapa kondisi dapat menyebabkan peningkatan sementara ekskresi albumin urin
atau ekskresi albumin urin sementara. Kondisi ini termasuk olahraga, diet tinggi protein,
infeksi saluran kemih, demam, dan gagal jantung dekompensasi.

Principle
Protein bereaksi dengan pereaksi biuret menghasilkan senyawa dengan warna kompleks.
Warna terbentuk dari reaksi antara Cu-alkali dan protein, kemudian dibaca dengan
spektrofotometer pada panjang gelombang 450 nm.

Equipment and Materials

Equipment:
1. Tabung reaksi
2. Mikropipet
3. Pusaran
4. mesin sentrifugal
5. Spektrofotometer

Materials:
1. Reagen biuret (mengandung CuSO4, Na-K tartrat, NaOH dan KI)
2. Solusi sampel
3. Larutan protein standar (albumin serum sapi) 100 mg/100 mL, baru dibuat

Procedure
A. Preparation of sample solution:
1. Tambahkan 4500 L aquadest ke dalam 500 L urin dan aduk rata
2. Sentrifugasi suspensi pada 3000 g selama 10 menit
3. Pindahkan supernatan yang mengandung albumin ke dalam tabung baru sebagai
sampel
 B. Determination of albumin with biuret method:
1. Siapkan 3 tabung (tabung 1, 2, dan 3) dan tambahkan masing-masing tabung
dengan 3 mL pereaksi biuret
2. Ke dalam tabung 1 tambahkan 2 mL aquadest sebagai blanko, tabung 2
tambahkan 2 mL larutan standar protein, dan tabung 3 tambahkan 2 mL larutan
sampel
3. Aduk rata dan inkubasi pada suhu 370C selama 10 menit
4. Dinginkan dan baca dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 450 nm
5.

Note
Tidak mudah mendapatkan urin dari penderita albuminuria. Oleh karena itu, untuk larutan
sampel positif, beberapa tetes plasma atau serum ditambahkan ke dalam urin