PROPOSAL PENELITIAN

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSAN,

ETIL ASETAT DAN AIR HERBA KROKOT
(Portulaca oleracea L.) TERHADAP
Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis

TINSY CLAUDIA .A
NIM : F20170118

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS MANDALA WALUYA
2022
 LEMBAR PERSETUJUAN PROPOSAL

Proposal ini telah kami setujui untuk diajukan pada Seminar Proposal Program

Studi Farmasi Universitas Mandala Waluya Kendari, dalam rangka penyempurnaan

Penulisan.

Kendari, Maret 2022

Tim Pembimbing

Pembimbing I Pembimbing II

Risky Juliansya, S.Si.,M.si Wa Ode Nova Noviyanti R. S.Psi.,M.Kes

NIDN : 09 1103 8804 NIDN : 09 0511 8202

Mengetahui,

Ketua Program Studi Farmasi

apt. Wa Ode Yuliastri, S.Farm., M.Si

NIDN : 09 2007 8202

ii
 KATA PENGANTAR

Syukur Alhamdulillah Penulis panjatkan kehadirat Allah SubhanahuWata‘ala

yang telah memberikan Rahmat dan Karunia-Nya sehingga Penulis dapat

menyelesaikan Proposal Penelitian yang berjudul “Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi

n-Heksan, Etil Asetat dan Air Herba Krokot (PortulacaoleraceaL.) Terhadap

Propionibacterium Acnes dan Staphylococcus Epidermidis” guna memenuhi salah

satu persyaratan untuk menyelesaikan pendidikan pada Program Studi IlmuFarmasi

STIKES-MW Kendari.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penyusunan Proposal Penelitian ini telah

dilakukan semaksimal mugkin meskipun jauh dari kata sempurna oleh karena itu saran-

saran dari semua pihak yang sifatnya membangun untuk meningkatkan mutu dari

penulisan Proposal Penelitian ini sangat Penulis harapkan.

Pada kesempatan ini Penulis tidak lupa menghanturkan rasa terimakasih yang

sebesar-besarnya kepada Risky Juliansyah, S.Si., M.Si selaku Pembimbing I dan

kepada Wa Ode Nova Noviyanti R, S.Psi., M.Kes selaku Pembimbing II atas semua

waktu, tenaga dan pikiran yang telah diberikannya dalam membimbing, mengarahkan,

memberi saran maupun kritik sehingga Proposal Penelitian ini menjadi lebih baik.

Demikian semoga proposal penelitian ini dapat bermanfaat bagi semua pihak dan

terutama pada penulis dalam menyelesaikan pendidikan di STIKES-MW Kendari,

amin

Kendari, Maret 2022

penulis

iii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ............................................................................................... i

LEMBAR PERSETUJUAN ................................................................................... ii

KATA PENGANTAR ............................................................................................. iii

DAFTAR ISI ............................................................................................................ iv

DAFTAR TABEL..................................................................................................... vi

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................... vii

DAFTAR SINGKATAN ......................................................................................... vii

BAB 1 PENDAHULUAN

A. LatarBelakang................................................................................................ 1

B. RumusanMasalah........................................................................................... 2

C. TujuanPenelitian ........................................................................................... 3

D. ManfaatPenelitian.......................................................................................... 3

E. KebaruanPenelitian........................................................................................ 4

BAB II TINJAUANPUSATAKA

A. Tinjauan Umum Variabel Terikat ................................................................. 6

1. Jerawat ..................................................................................................... 6

2. Uraian Bakteri ......................................................................................... 10

B. Tinjauan Umum Variabel Bebas ................................................................... 12

1. Uraian Tanaman herba krokot (Portulaca oleracea L.).......................... 12

2. Uraian Antibakteri.................................................................................. 14

3. Uraian Ekstraksi ..................................................................................... 16

4. Uraian Fraksinasi .................................................................................... 18

5. Uraian Sterilisasi ................................................................................... 24

6. Uraian Uji Aktivitas Antibakteri ........................................................... 26

iv
 C. Kajian Empiris .............................................................................................. 27

BAB III KERANGKA KONSEP PENELITIAN ................................................. 29

A. Dasar Piker Penelitian .................................................................................. 29

B. Bagan Kerangka Konsep Penelitian .............................................................. 30

C. Variabel penelitian ........................................................................................ 30

D. Definisi Operasional dan Kriteria Obyektif .................................................. 30

E. Hipotesis Penelitian....................................................................................... 31

BAB IV METODE PENELITIAN ........................................................................ 32

A. Jenis dan Desain Penelitian............................................................................ 32

B. Lokasi dan Waktu Penelitian......................................................................... 33

C. Alat dan Bahan Penelitian.............................................................................. 33

D. Populasi dan Sampel...................................................................................... 33

E. Prosedur Kerja Penelitian............................................................................... 34

F. Uji Aktivitas Fraksi Herba Krokot (Portulaca oleracea L.)......................... 39

G. Pengolahan dan Analisis Data....................................................................... 41

H. Etika Penelitian ............................................................................................. 41

I. Jadwal Waktu Penelitian................................................................................ 41

DAFTARPUSTAKA................................................................................................ 42

v
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1. Kebaruan Penelitian.........................................................................................................4

2. Desain penelitian .......................................................................................................... 33

vi
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1. Tanaman Heirba Krokot (Portulaca oleracea L.) ......................................................12

2. Corong Pisah ..............................................................................................................21

3. Sebagian Destilasi Colum ..........................................................................................22

vii
 DAFTAR ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN

No. Singkatan Arti

1. cm centimeter

2. C Celcius

3. Depkes Departemen Kesehatan

4. G Gram

5. kg kilo gram

6. mg mili gram

7. mL mili Liter

viii
BAB I

1
 PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Ilmu kesehatan adalah salah satu bidang ilmu yang mengalami perkembangan

paling cepat saat ini begitu pula dengan perkembangan tindak pidana dibidang ilmu

kesehatan. Tindak pidana yang terjadi di bidang ilmu kesehatan antara lain malpraktek,

pemalsuan obat, pengedaran dan penyalahgunaan obat tanpa izin dan transplantasi

organ manusia. Masalah kesehatan merupakan keprihatinan serius di setiap negara,

baik negara maju maupun sedang berkembang, karena kesehatan merupakan salah satu

faktor yang menentukan kemajuan suatu negara dan merupakan hak asasi manusia.

Salah satu bagian dari ilmu kesehatan adalah ilmu farmasi.

Farmasi merupakan salah satu dari berbagai macam bidang professional

kesehatan yang mengkombinasi ilmu kesehatan dan ilmu kimia, mempunyai peran dan

tanggung jawab dalam memastikan keefektivitasan dan keamanan penggunaan obat.

Obat dalam bidang farmasi dapat berupa obat untuk kesehatan tubuh dan untuk

kesehatan kulis termasuk kesehatan wajah.

Jerawat atau acne vulgaris merupakan penyakit kulit obstruktif dan inflamatif

kronik pada pilosebasea yang sering terjadi pada masa remaja. Di Indonesia sekitar 95-

100% laki-laki maupun 83-85% perempuan usia 16-17 tahun menderita jerawat.

Prevalensi jerawat pada perempuan dewasa sekitar 12% dan pada laki-laki dewasa 3%.

Dalam suatu penelitian lain didapatkan bahwa jerawat merupakan masalah kulit sampai

melewati masa remaja dengan prevalensi perempuan lebih tinggi dibandingkan laki-

laki pada rentang usia 20 tahun atau lebih (Ika et al., 2015).

2
 Jerawat atau yang biasa disebut acne vulgaris adalah gangguan pada folikel

rambut dan kelenjar sebasea. Jerawat terjadi akibat tersumbatnya folikel polisebasea

(saluran minyak) yang salah satu penyebabnya adalah infeksi bakteri

Propionibacterium acne dan Staphylococcus epidermidis. Bakteri pada saluran kelenjar

sebasea yang didukung dengan kurangnya kebersihan kulit dan tersumbatnya pori-pori

kulit sehingga berakibat pori-pori kulit sulit untuk bernafas dan dapat mengakibatkan

infeksi atau pembengkakan pada jerawat. Pengobatan jerawat menggunakan antibiotik

dalam jangka panjang dapat menimbulkan resistensi, kerusakan organ dan imuno

hipersensitifitas sehingga membutuhkan alternatif antibakteri.

Penelitian mengenai Fraksi n-Heksana buah naga merah mengandung terpenoid

dan alkaloid. Kontrol positif yang digunakan adalah klindamisin 4μg/disk sedangkan

kontrol negatif yang digunakan adalah DMSO 10%. Analisis data menggunakan

program R-Commander versi 3.0.3. Berdasarkan hasil penelitian fraksi n-Heksana kulit

buah naga merah memiliki aktivitas antibakteri terhadap P. acnes, dengan rata-rata

zona hambat dari konsentrasi 20; 40 dan 80 mg/mL masing-masing secara berurutan

adalah 9 mm; 10,25 mm dan 10,5 mm. Sedangkan pada S. epidermidis fraksi n-

Heksana kulit buah naga merah tidak memiliki aktivitas antibakteri ( et al., 2014).

Penelitian lain menunjukkan bahwa Fraksi n-heksan dan etil asetat dapat

menghambat aktivitas bakteri P. acnes dan S. epidermidis mulai konsentrasi 50 mg/mL

dan semakin membesar seiring dengan bertambahnya konsentrasi. Pada fraksi air dapat

menghambat aktivitas bakteri P. acnes mulai konsentrasi 25 mg/mL sedangkan pada S.

epidermidis dimulai pada konsentrasi 12, 5 mg/mL. Hasil uji korelasi menunjukkan

hubungan yang yang sangat kuat dengan nilai Asymp Sig (2- tailed) > 0,05 dengan

pengaruh konsentrasi ekstrak terhadap diameter zona hambat sebesar 80,5 sampai

97,3% (Sugiarti, Adriyani, Pratitis, & Setyani, 2020).

3
 Hasil riset lain menunjukkan bahwa ekstrak etanol herba krokot dapat

menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis yang ditunjukkan terbentuknya zona

bening disekitar disc, diameter daya hambat yang dihasilkan oleh konsentrasi 25%

(10,0) konsentrasi 50% (11,0) dan 75% (11,5). Dari hasil zona hambat yang didapatkan

ketiga konsentrasi resistent terhadap bakteri Staphyococcus epidermidis (Indriana,

Meitasari, & Dewi, 2021).

Berdasarkan latar belakang diatas maka peneliti tertarik untuk melakukan

penelitian dengan judul “Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-Heksan, Etil Asetat dan Air

Herba Krokot (PortulacaoleraceaL.) Terhadap Propionibacterium Acnes dan

Staphylococcus Epidermidis”.

B. Rumusan Masalah

Adapun rumusan masalah pada penelitian ini adalah :

1. Bagaimana aktivitas antibakteri fraksi n-heksana, etil asetat dan air herba krokot

(Portulaca oleracea L.) terhadap Propionibacterium acnes dan Staphylococcus

epidermidis ?

2. Pada konsentrasi berapakah fraksi n-heksana etil asetat dan air herba krokot

(Portulaca oleracea L.) yang aktif menghambat pertumbuhan bakteri

Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis ?

3. Pada konsentrasi berapakah fraksi herba krokot yang paling efektif dalam

menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus

epidermidis ?

C. Tujuan Penelitian

Adapun tujuan pada penelitian ini adalah :

4
 1. Mengetahui aktivitas antibakteri fraksi n-heksana etil asetat dan air herba krokot

(Portulaca oleracea L.) terhadap Propionibacterium acnes dan Staphylococcus

epidermidis.

2. Mengetahui konsentrasi fraksi n-heksana etil asetat dan air herba krokot (Portulaca

oleracea L.) yang aktif menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium

acnes dan Staphylococcus epidermidis.

3. Mengetahui konsentrasi fraksi herba krokot yang paling efektif dalam menghambat

pertumbuhan bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis.

D. Manfaat Penelitian

Adapun manfaat pada penelitian ini adalah :

1. Manfaat Teoritis

a. Memberikan data ilmiah mengenai aktivitas antibakteri fraksi n-heksana etil

asetat dan air herba krokot (Portulaca oleracea L.) terhadap

Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis.

b. Bagi Peneliti, menambah pengetahuan dan keahlian dalam pengujian aktivitas

antibakteri terhadap terhadap Propionibacterium acnes dan Staphylococcus

epidermidis dari fraksi n-heksana etil asetat dan air herba krokot (Portulaca

oleracea L.)

2. Manfaat Praktis

a. Bagi Masyarakat, penelitian ini dapat menambah wawasan tentang

pemanfaatan tanaman herbal khususnya tanaman herba krokot sebagai

pengobatan terhadap jerawat yang disebabkan oleh Propionibacterium acnes

dan Staphylococcus epidermidis

5
 b. Bagi Institusi, penelitian ini dapat meningkatkan kredibilitas institusi prodi

Farmasi STIKES Mandala Waluya dalam pemanfaatan Obat Bahan Alam

Lokal.

E. Kebaruan Penelitian

Berdasarkan kajian literatur, penelitian tentang UJI AKTIVITAS

ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA ETIL ASETAT DAN AIR HERBA

KROKOT (Portulaca oleracea L.) TERHADAP BAKTERI Propionibacterium acnes

DAN Staphylococcus epidermidis belum pernah dilakukan sebelumnya. Penelitian

yang terkait dengan penelitian ini adalah:

Tabel 1. Kebaruan Penelitian

No Peneliti Judul Persamaan Perbedaan

1. Gazali Isolasi Senyawa Antibakteri Menggunakan Menggunakan
(2016) Ekstrak Etanol Akar Krokot sampel yang bakteri uji
(Portulaca oleracea Linn) sama yang berbeda
Menggunakan Bakteri Uji
Staphylococcus aureus
2. Karlina Aktivitas Antibakteri Ekstrak Menggunakan Menggunakan
(2013) Herba Krokot (Portulaca sampel yang bakteri uji
oleracea L.) Terhadap sama yang berbeda
Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli
3. Wahdaningsih Anti bakteri Fraksi n-Heksana Menggunakan Menggunakan
(2016) Kulit Hylocereus polyrhizus bakteri uji sampel yang
Terhadap Propionibacterium yang sama berbeda
acnes dan Staphylococcus
epidermidis
4. Fauzi Uji Aktivitas Antibakteri Menggunakan Menggunakan
(2017) Ekstrak Etanol dan Fraksi bakteri uji sampel yang

6
 Daun Jawer Kotok (Coleus yang sama berbeda
atropurpureus L.) terhadap
bakteri Propionibacterium
acnes ATTC 123 dan
Staphylococcus epidermidis
ATTC 12228
5. Rachman Uji Aktivitas Antibakteri Menggunakan Menggunakan
(2017) Fraksi Ekstrak Etanol Biji bakteri uji sampel yang
Alpukat (Persea americana yang sama berbeda
Miller) terhadap Bakteri
Propionibacterium acnes

7
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan Umum Antibakteri

Antibakteri merupakan suatu zat yang dapat menghambat atau bahkan

membunuh pertumbuhan bakteri yang merugikan dan relatif aman digunakan oleh

manusia. Tujuan dari pengendalian adalah mencegah terjadinya infeksi, membasmi

bakteri pada inang yang telah terinfeksi serta mencegah terjadinya kerusakan yang

disebabkan oleh pembusukan mikroorganisme (Savitri, Triatmoko, & Nugraha, 2020).

Antibakteri harus memiliki sifat toksisitas selektif setinggi mungkin, artinya zat

harus bersifat sangat toksik terhadap bakteri, tetapi relatif tidak toksik untuk hospes.

Berdasarkan toksisitas selektif, antibakteri dibedakan menjadi dua. Yaitu antibakteri

yang bersifat menghambat pertumbuhan (bakteriostatik) dan antibakteri yang bersifat

membunuh bakteri (bakterisid).

Berdasarkan mekanisme kerjanya, antibakteri dibagi dalam lima kelompok, yaitu

(Anggraeni, Yulianti, & Panjaitan, 2020):

a. Menghambat metabolisme sel bakteri

Pada mekanisme ini diperoleh efek bakteriostatik. Kerja antibakteri ini

adalah menghambat pembentukan asam folat. Bakteri membutuhkan asam folat

untuk kelangsungan hidupnya dan bakteri memperoleh asam folat dengan

mensintesis sendiri dari asam para amino benzoat (PABA). Apabila antibakteri

menang bersaing dengan PABA untuk diikutsertakan dalam pembentukan asam

folat, maka terbentuk analog asam folat yang nonfungsional. Akibatnya

kehidupan bakteri akan terganggu.

b. Menghambat sintesis dinding sel bakteri

7
 Dinding sel bakteri terdiri dari peptidoglikan. Kerja antibakteri ini adalah

menghambat proses sintesis peptidoglikan sehingga mengakibatkan dinding sel

menjadi tidak. Akibatnya, tekanan osmotik dalam sel bakteri menjadi lebih

tinggi daripada tekanan di luar sel maka kerusakan dinding sel bakteri akan

menyebabkan lisis. Lisis merupakan dasar efek bakterisidal.

c. Mengganggu keutuhan membran sel bakteri

Sitoplasma dibatasi oleh membran sitoplasma yang merupakan

penghalang dengan permeabilitas yang selektif. Membran sitoplasma akan

mempertahankan bahan-bahan tertentu di dalam sel serta mengatur aliran

keluar-masuknya bahan-bahan lain. jika terjadi kerusakan pada membran ini,

maka akan mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau matinya sel.

d. Menghambat sintesis protein sel bakteri

Kehidupan sel bakteri tergantung pada terpeliharanya molekul-molekul

protein dan asam nukleat dalam keadaan alamiah. Jika kondisi atau substansi

yang dapat mengakibatkan terdenaturasinya protein dan asam nukleat, maka

dapat merusak sel tanpa dapat diperbaiki kembali. Penghambatan sintesis

protein terjadi dengan cara terikatnya salah satu komponen ribosom dengan

antibakteri. Akibatnya akan terbentuk protein yang abnormal dan nonfungsional

bagi sel bakteri.

e. Menghambat sintesis asam nukleat sel bakteri

Protein, DNA, dan RNA berperan penting dalam proses kehidupan normal sel

bakteri. Apabila terjadi gangguan pada pembentukan atau pada fungsi zat-zat

tersebut akan mengakibatkan kerusakan total pada sel. Antibakteri akan

berikatan dengan enzim RNA-polimerase sehingga menghambat sintesis RNA

dan DNA oleh enzim tersebut.

8
 Aktivitas antibakteri diukur secara in vitro agar dapat ditentukan kemampuan

suatu zat antibakteri. Aktivitas antibakteri ditentukan oleh spektrum kerja

(spektrum luas atau spektrum sempit), cara kerja (bakterisidal atau bakteriostatik),

dan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM). Suatu antibakteri dikatakan

mempunyai aktivitas yang tinggi apabila KHM terjadi pada kadar yang rendah

tetapi mempunyai daya bunuh atau daya hambat yang besar.

Uji aktivitas antibakteri dapat dilakukan dengan dua metode, yaitu (Aisyah,

Harahap, & Arfi, 2020):

a. Metode Difusi

Prinsip metode difusi adalah pengukuran potensi antibakteri berdasarkan

pengamatan diameter daerah hambatan bakteri yang disebakan karena

berdifusinya zat antibakteri dari titik awal pemberian ke daerah difusi. Pada

metode ini dapat digunakan kertas cakram atau lubang sumuran yang

mengandung zat antibakteri di atas media yang diinkubasi pada suhu dan waktu

tergantung dari bakteri yang dihambat pertumbuhannya. Setelah

penginkubasian didapatkan diameter hambatan jernih sebagai daya antibakteri.

Kekuatan zat antibakteri bisa digolongkan sesuai dengan lebar diameter zona

hambat.

b. Metode Dilusi

Pada prinsipnya zat antibakteri diencerkan hingga diperoleh beberapa

konsentrasi. Pada dilusi cair, masing-masing konsentrasi antibakteri ditambah

suspensi kuman dalam media, sedangkan pada dilusi padat tiap konsentrasi

antibakteri dicampur dengan media agar lalu ditanami bakteri dan diinkubasi

pada suhu dan waktu disesuaikan dengan bakteri uji. Hasil inkubasi dengan

kekeruhan tertipis adalah konsentrasi yang dapat menghambat pertumbuhan

9
 bakteri. Potensi antibakteri ditentukan dengan melihat konsentrasi terendah

yang dapat menghambat bakteri.

B. Tinjauan Umum Variabel Terikat

1. Bakteri Propionibacterium acnes

Divisi : Protophyta

Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Eubacteriales

Suku : Propionibacteriaceae

Marga : Propionibacterium

Jenis : Propionibacterium acnes

Dalam penelitian ini salah satu bakteri yang digunakan adalah

Propionibacterium acnes. Bakteri ini organisme utama yang pada umumnya

memberi kontribusi terhadap terjadinya jerawat. P. acnes adalah termasuk gram-

positif berbentuk batang, tidak berspora, tangkai anaerob ditemukan dalam

spesimen-spesimen klinis, beberapa strain/jenis adalah aerotoleran, tetapi tetap

menunjukkan pertumbuhan lebih baik sebagai anaerob. Bakteri ini mempunyai

kemampuan untuk menghasilkan asam propionat, sebagaimana ia mendapatkan

namanya (Khumaidi, Nugrahani, & Gunawan, 2020).

Mekanisme terjadinya jerawat karena bakteri Propionibacterium acnes dengan

cara merusak stratum corneum dan stratum germinat dengan cara menyeksresikan

bahan kimia yang menghancurkan dinding pori-pori. Kondisi ini dapat

menyebabkan inflamasi. Asam lemak dan minyak kulit tersumbat kemudian

mengeras. Jika jerawat disentuh maka inflamasi akan meluas sehingga padatan

asam lemak dan minyak kulit yang mengeras akan membesar.

10
 Obat-obat yang biasa digunakan untuk terapi topikal kebanyakan mengandung

unsur sulfur dan astrigen lainnya. Benzoil peroksida 2,5-10% sangat aktif dalam

melawan Propionibacterium acnes. obat ini bersifat komedolitik, karena obat ini

mengandung antimikroba, antikomedo, dan efek antiinflamasi. Namun kerugian

utamanya adalah dapat menyebabkan iritasi. Topikal eritromisin dan klindamisin

juga sama efektifnya dengan benzoil peroksida (Dewi, Habibah, & Mastra, 2020).

Obat terapi sistemik yang digunakan adalah tetrasiklin dan eritromisin.

Namun demikian, pemakaian pada sistem gastrointestinal pada penggunaan ketika

perut kosong akan mengakibatkan dampak yang buruk. Studi terbaru menyatakan

bahwa doksisiklin, minosiklin, dan trimetroprim-sulfametoksazol lebih efektif

daripada tetrasiklin.

2. Bakteri Staphyloccocus epidermidis

Kingdom         : Protista

Divisi               : Schizophyta

Class                : Schyzomycetes

Ordo                : Eubacteriales

Famili              : Enterobacteriaceae

Genus              : Staphylococcus

Spesies             : Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri yang sering ditemukan

sebagai flora normal pada kulit dan selaput lendir manusia. Staphylococcus

epidermidis merupakan salah satu bakteri Gram positif berbentuk bulat,

biasanya tersusun dalam rangkaian tidak beraturan seperti anggur dan bersifat

anaerob fakultatif. Bakteri ini merupakan penyebab infeksi kulit ringan yang

disertai abses (Wardania, Malfadinata, & Fitriana, 2020).

11
C. Tinjauan Umum Variabel Bebas

1. Uraian Tanaman Herba Krokot

Gambar.1 Tanaman herba krokot (Portulaca oleracea L.)

a. Klasifikasi tanaman

Klasifikasi tanaman herba krokot (Portulaca oleracea L.) adalah sebagai

berikut ( et al., 2020):

Kingdom : Plantae

Sub Kingdom : Tracheobionta

Super Divisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Sub Kelas : Hamamelidae

Ordo : Caryophyllales

Famili : Portulacaceae

Genus : Portulaca

Spesies : Portulaca oleracea L.

b. Deskripsi Tanaman

12
 Krokot (Portulaca oleracea L.) merupakan tanaman yang dapat

dikonsumsi sebagai masakan, beberapa orang mengkonsumsi krokot sebagai

obat herbal dan beberapa jenis karena keindahan bunganya digunakan sebagai

elemen taman. Batang krokot berbentuk bulat berwarna coklat keunguan,

tumbuh tegak; berdaun tunggal, tebal berdaging berbentuk bulat telur dengan

warna permukaan atas daun hijau tua dan permukaan bawahnya merah tua,

tangkainya pendek, dan bagian ujung daun bulat melekuk ke dalam (Putra,

Azizah, & Nopriyanti, 2020).

c. Khasiat dan kandungan

Berdasarkan penelitian Karlina (2013) bahwa senyawa yang terkandung

dalam ekstrak krokot (Portulaca oleracea L.) adalah golongan tannin, saponin dan

flavanoid berkhasiat sebagai antibakteri.

2. Uraian Fraksinasi

Fraksinasi merupakan proses pemisahan antara zat cair dengan zat cair.

Fraksinasi dilakukan secara bertingkat berdasarkan tingkat kepolarannya yaitu dari

non polar, semi polar, dan polar. Senyawa yang memiliki sifat non polar akan larut

dalam pelarut non polar, yang semi polar akan larut dalam pelarut semi polar, dan

yang bersifat polar akan larut kedalam pelarut polar. Fraksinasi ini umumnya

dilakukan dengan menggunakan metode corong pisah atau kromatografi kolom.

Kromatografi kolom merupakan salah satu metode pemurnian senyawa dengan

menggunakan kolom. Corong pisah merupakan peralatan laboratorium yang

digunakan untuk memisahkan komponen-komponen dalam campuran antara dua

fase pelarut yang memiliki massa jenis berbeda yang tidak tercampur (Luntungan,

Wewengkang, & Rumondor, 2021).

13
 Ekstrak yang telah dilarutkan dalam, nantinya akan dimasukkan ke dalam

corong pisah dan dicampur dengan pelarut berdasarkan tingkat kepolarannya.

Setelah itu corong pisah dikocok. Setelah dikocok, akan terbentuk dua lapisan

seperti pada Pelarut yang memiliki massa jenis lebih tinggi akan berada di lapisan

bawah, dan yang memiliki massa jenis lebih kecil akan berada di lapisan atas.

Senyawa yang terkandung dalam ekstrak nantinya akan terpisah sesuai dengan

tingkat kepolaran pelarut yang digunakan. Senyawa akan tertarik oleh pelarut yang

tingkat kepolarannya sama dengan dengan senyawa tersebut.

Metode umum fraksinasi (Marpaung, 2020):

1) Presipitasi

Presipitasi terjadi ketika konsentrasi suatu zat dalam suatu larutan

melebihi kelarutan maksimumnya. Suatu senyawa dapat diendapkan dengan

berbagai metode, masing-masing tergantung pada perubahan salah satu

faktor yang memengaruhi kelarutan. Pengendapan dapat digunakan baik

untuk menghilangkan substansi yang menarik atau untuk menghilangkan

materi yang tidak diinginkan dan memprtahankan yang menarik dalam

larutan.

Metode sederhana untuk mencapai presipitasi adalah menurunkan

suhu larutan ekstrak. Komponen yang kurang larut akan mengendap keluar

dan dapat dipisahkan dengan sentrifugasi atau filtrasi. Jika satu zat hadir

sebagai konstituen utama, ia dapat mengendap sebagai kristal. Teknik ini

banyak digunakan sebagai tahap akhir dalam isolasi senyawa tunggal dari

alikuot yang berasal dari tahap fraksinasi terakhir. Kegunaan presipitasi

dengan pendinginan agak terbatas di kasus larutan air. Jika ekstrak awalnya

14
 pada suhu kamar, hanya sedikit penurunan suhu yang dimungkinkan

sebelum seluruh larutan membeku.

Cara lain untuk mempengaruhi presipitasi adalah dengan mengubah

polaritas pelarut dengan penambahan pelarut bercampur polaritas yang

berbeda. Jika asli ekstrak dibuat dengan air, kemudian metanol, etanol 96%

atau aseton dapat ditambahkan dalam alikuot sehingga, dengan setiap

tambahan, pelarut menjadi semakin sedikit polar dan semakin banyak

endapan polar. Sebaliknya, jika nonpolar pelarut seperti heksana digunakan

untuk ekstraksi awal, penambahan dengan cara yang sama pelarut miscible,

relatif polar seperti aseton akan mengendap komponen polar paling sedikit.

Pendekatan lain dengan ekstrak air adalah menambahkan larutan elektrolit

kuat yang sangat larut dalam air. Senyawa non-ionik yang kurang larut

hadir dalam ekstrak akan dipindahkan dan akan diendapkan. Teknik ini

dikenal sebagai 'salting out' dan banyak digunakan dalam persiapan

komponen protein dan peptida dari ekstrak. Amonium sulfat adalah salah

satu senyawa yang paling umum digunakan dalam konteks ini.

Alasan umum untuk presipitasi, sering dijumpai dalam klasik kimia,

adalah kompleksasi antara senyawa dalam ekstrak dan satu dalam larutan

ketika pereaksi ditambahkan. Metode ini memiliki beberapa aplikasi dalam

pemisahan konstituen tanaman tetapi harus dicatat bahwa setiap kompleks

yang terbentuk harus mudah reversibel untuk menghasilkan senyawa

awalnya ada dalam ekstrak tanaman.

2) Ekstraksi pelarut – pelarut

Cairan tidak bercampur ketika cairan ditambahkan ke ekstrak yang

dilarutkan dalam cairan lain yang tidak bercampur dengan yang pertama,

15
dua lapisan terbentuk. Setiap komponen campuran akan memiliki kelarutan

di masing-masing dua lapisan (biasanya disebut fase) dan setelah beberapa

waktu keseimbangan konsentrasi dalam dua lapisan tercapai. Waktu yang

dibutuhkan untuk mencapai keseimbangan biasanya tercapai dipersingkat

oleh pencampuran yang cukup kuat dari dua fase dalam labu pemisah

(Gambar 2).

Gambar 2. Corong pisah (Houghton, 1998).

Kelarutan zat yang tidak bermuatan dalam fase apa pun pada suhu

tetap tergantung pada kesamaannya dalam polaritas dengan fase cair, itu

prinsip “like dissolves like” berlaku. Molekul bermuatan memiliki afinitas

tinggi untuk cairan di mana sejumlah besar ion dengan muatan berlawanan

ada dan dengan demikian, dalam hal ini, 'berlawanan menarik', mis. zat

asam akan larut lebih banyak dalam basa daripada fase berair netral atau

asam. Rasio konsentrasi suatu zat dalam dua fase disebut koefisien partisi,

k. Zat yang berbeda akan memiliki koefisien partisi yang berbeda sehingga,

jika satu senyawa cukup polar, koefisien partisi-nya relatif terhadap fase

yang lebih polar jauh lebih tinggi dari pada senyawa fase non-polar. Jadi

ketika ekstrak terkena dua cairan yang tidak dapat bercampur, zat terlarut

yang berbeda akan mendistribusikan diri secara berbeda.

16
3) Destilasi

Pemisahan campuran senyawa yang mudah menguap dapat di

pengaruhi oleh destilasi frasional. Proses ini digunakan secara luas dalam

industri petrokimia tetapi memiliki aplikasi yang sangat terbatas dalam

fraksinasi ekstrak tanaman dan hanya dapat digunakan untuk volatil

(kadang-kadang disebut minyak atsiri).

Destilasi fraksional bergantung pada gradien suhu yang terbentuk

disepanjang kolom pendingin yang terletak di atas titik didih. Senyawa yang

paling tidak mudah menguap berkondensasi paling dekat dengan ruang

didih sedangkan paling banyak volatile menguap jauh lebih jauh. Penarikan

poin diposisikan di sepanjang kolom dan kondensat cair yang diambil dari

masing-masing akan berbeda komposisi.

Gambar 3. Sebagian Destilasi Colum ((Houghton, 1998).

17
4) Dialisis

Dialisis adalah metode pemisahan komponen campuran yang sesuai

dengan ukuran molekulnya. Proses ini terjadi secara alami di seluruh

membran sel dan sangat penting dalam banyak proses fisiologis. Bagian

penting dari setiap prosedur dialisis adalah membran semipermeable yang

tipis, terdiri dari bahan polimer dengan pori-pori biasa, yang memungkinkan

lewatnya molekul kecil (massa molekul <1000 dalton). Bagian dari molekul

yang lebih besar sangat terhambat atau tidak mungkin. Di bawah tekanan

atau gradien osmotik hampir semua molekul kecil dalam campuran

melewati membran, meninggalkan molekul yang lebih besar. Produk yang

memiliki berbagai ukuran pori tersedia sebagai dialisis komersial membran

sehingga dengan menggunakan membran yang berurutan meningkatkan

ukuran pori, campuran dapat difraksinasi sesuai dengan ukuran kisaran

molekul yang ada.

Dialisis sering digunakan dalam pemurnian polisakarida dan protein

dalam suatu proses kadang-kadang disebut 'desalting'. Ekstrak berair yang

mengandung molekul besar tertutup dalam membran dan direndam dalam

air. Senyawa massa molekul rendah seperti garam, gula dan zat lainnya

keluar melalui membran, sementara molekul air melewati membran karena

gradien osmotik. Molekul besar yang tertahan di dalam membran karenanya

dimurnikan dari komponen massa molekul kecil tetapi larutannya menjadi

lebih diencerkan. Sebaliknya, proses yang sama dapat digunakan untuk

menghilangkan molekul substansi massa moleku besar yang menjadi fokus

perhatian. Untuk mencapai penghilangan total molekul kecil fase berair di

18
 luar membran harus diganti secara berkala, karena pergerakan melintang

membran hanya akan berlangsung hingga konsentrasi di kedua sisi sama.

2) Prosedur kromatografi

Kromatografi adalah teknik yang paling beragam dan paling banyak

digunakan dalam fraksinasi ekstrak. Tidak ada keraguan bahawa dapat

memungkinkan pada isolasi banyak masalah yang terjadi secara alami.

Teknik kromatografi yang digunakan dalam fraksinasi adalah yang

digunakan dalam krimatografi preparatif. Harus di tunjukkan bahwa

penggunaan utama kromatografi adalah sebagai metode analitik untuk

kuantitasi satu atau lebih senyawa dalam campuran tanpa perlu banyak

prosedur pembersihan. Teknis yang dibahas disini adalah pada prinsip yang

sama tetapi ditingkatkan dan diadaptasi untuk isolasi jumlah setidaknya 10

mg zat.

Semua kromatografi bergantung pada distribusi diferensial dari pound

antara dua fase, salah satunya bergerak relatif terhadap lainnya. Fase- fase

ini disebut fase gerak dan stasioner, masing- masing fase fgerak adalah

fluida yang dapat berupa cairan, gas, atau super kritis, tetapi dalam

praktiknya semua prosedur fraksinasi yang di uariakn adalah cairan. Fase

diam seperti yang digunakan biasanya nampak padat yang terdiri dari

paertikel – partikel halus. Dalam beberapa kasus, bahan pdat sebenarnya

adalah fase yang mengambil nagian dalam proses kromatografi, tetapi

dalam kasus lain fase diam, sejauh menyangkut proses ini adalah film

monomolekuler dari cairan yang terkait pada bahan pendukung padat atau

film tebal dari cairan yang dilapisi di atasnya.

19
3. Uraian n-heksan

Pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi sangat menentukan terhadap

komponen-komponen bioaktif yang terekstrak. Pelarut yang baik untuk ekstraksi

harus yang tidak toksik, mudah diuapkan, memiliki tingkat absorbsi yang baik, dan

tidak memiliki kemampuan yang mengakibatkan ekstrak membentuk kompleks

dengan pelarut (Sugiarti et al., 2020).

N-Heksana merupakan salah satu pelarut non-polar, yang sering digunakan

dalam mengekstraksi suatu ekstrak. n-Heksana adalah bahan kimia yang dibuat dari

minyak mentah. N-Heksana murni adalah cairan tidak berwarna dengan bau sedikit

tidak menyenangkan. Bersifat sangat mudah terbakar, dan uap yang dapat meledak.

n-Heksana murni banyak digunakan di laboratorium. Sebagian besar n- heksan

digunakan dalam industri dicampur dengan bahan kimia serupa yang disebut

pelarut ( et al., 2014).

N-Heksana merupakan konstituen dalam fraksi paraffin dari minyak mentah

dan gas alam dan juga digunakan sebagai reagen pada industri kimia dan

laboratorium. Heksana merupakan produk industri yang terdiri dari campuran

hidrokarbon dengan 6 atom karbon dan memiliki 19 isomer 2-metil pentana dan 3-

metil pentana. n- Heksana merupakan jenis pelarut non polar.

n-Heksana adalah hidrokarbon alkana rantai lurus yang memiliki 6 atom

karbon dengan rumus molekul C6H14. Isomer n-heksana tidak reaktif dan

digunakan secara luas sebagai pelarut inert dalam reaksi organik karena n-heksana

bersifat non polar. n-Heksana didapatkan dari hasil penyulingan minyak mentah

dimana untuk produk industrinya ialah fraksi yang mendidih pada suhu 65-70 °C.

n-heksana biasa digunakan untuk mengekstrak minyak dan lemak yang memiliki

kepolaran yang sama. n-Heksana merupakan salah satu pelarut yang baik untuk

20
 mengekstraksi senyawa-senyawa yang bersifat non polar. Dalam keadaan standar

senyawa ini merupakan cairan tak berwarna yang tidak larut dalam air (Sugiarti et

al., 2020).

4. Uraian Etil Asetat

Etil asetat merupakan senyawa ester dengan rumus molekul CH3COOC2H5.

Etil asetat merupakan hasil reaksi antara asam asetat (CH3COOH) dan etanol

(C2H5OH). Umumnya reaksi pembuatan etil asetat adalah reaksi bolak-balik

(reversible) atau dalam suasana asam reaksi ini disebut dengan esterifikasi Fischer.

Reaksi eterifikasi Fischer adalah reaksi pembentukan ester dengan cara merefluks

asam karboksilat bersama etanol dengan katalis asam (Sugiarti et al., 2020).

Dalam proses tersebut, terbentuk azeotrop antara senyawa reaktan dan produk

sehingga sulit untuk memperoleh produk dengan kemurnian yang tinggi. Azeotrop

yang terbentuk pada reaksi tersebut yaitu antara etanol dan etil asetat (EtOH-EtAc),

etanol dan air (EtOH-H2O), etil asetat dan air (EtAc-H2O), serta etanol, etil asetat,

dan air (EtOH-EtAc-H2O). Dari keempat azeotrop yang terbentuk tersebut bentuk

EtOH-EtAc-H2O memiliki titik didih terendah. Hal ini menyebabkan pemisahan

ketiga komponen tersebut menjadi sulit, sehingga perlu adanya optimasi proses

untuk pemisahan campuran komponen terebut (Mailani & Pratiwi, 2019).

Etil asetat atau yang sering disebut Ethyl Acetate dalam nama dagang

mempunyai rumus molekul yaitu (CH3COOCH2CH3) atau (C4H8O2) dengan

berat molekul 88,106 g/mol. Etil asetat adalah pelarut yang cukup polar yang

memiliki keuntungan sebagai Volatile, relatif tidak beracun, dan tidak higroskopis.

Etil asetat umumnya dibuat dengan esterifikasi etanol dan asam asetat (Johnston, V.

J., dkk. 2011). Etil asetat umumnya digunakan sebagai pelarut industri yang

digunakan untuk cat, pelapis, noda kayu, pernis berbasis minyak dan enamel,

21
 perekat, selulosa, tinta, plastik, atau lemak. Selain itu, etil asetat dapat digunakan

dalam pembuatan film dan pelat fotografi, sebagai perantara obat atau penghilang

cat kuku. Di Indonesia terdapat dua Industri yang memproduksi etil asetat dengan

kapastas total 67.500 ton pertahun, Perusahaan tersebut adalah PT. Indo Acidatama

Tbk dengan kapasitas 7.500 ton per tahun dan PT. Showa Esterindo Indonesia

dengan kapasitas 60.000 ton per tahun. Namun produk etil asetat yang diproduksi

oleh kedua industri tersebut belum memenuhi kebutuhan dalam negeri, sehingga

Indonesia sendiri masih membutuhkan import etil asetat dari luar negeri salah

satunya yaitu dari Cina dan Malaysia (Mailani & Pratiwi, 2019).

D. Kajian Empiris

Secara empiris tanaman pengobatan pada penyakit kulit berupa jerawat telah

banyak dilakukan, yaitu salah satunya dengan menggunakan tanaman herbal seperti

krokot yang telah dilaporkan memiliki efek antibakteri. Tanaman krokot digunakan

sebagai obat alternatif untuk mengobati penyakit kulit (borok, bisul, radang kulit, dan

kudis) yang disebabkan oleh bakteri serta secara oral untuk pengobatan disentri,diare

akut, radang akut usus buntu, radang payudara, wasir berdarah, keputihan, gangguan

system saluran kencing, sakit kuning, cacingan dan sebagai bakterisida (Rahardjo,

2007). Hal tersebut telah sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Gazali (2016)

dijelaskan bahwa Ekstrak Etanol Akar krokot (Portulaca oleracea L.) mampu

menghambat bakteri Staphylococcus aureus yang merupakan bakteri gram positif dan

salah satu penyebab dari penyakit kulit berupa jerawat.

22
 BAB III

KERANGKA KONSEP PENELITIAN

A. Dasar Pikir Penelitian

Jerawat atau yang biasa disebut acne vulgaris adalah gangguan pada folikel

rambut dan kelenjar sebasea. Jerawat terjadi akibat tersumbatnya folikel

polisebasea (saluran minyak) yang salah satu penyebabnya adalah infeksi bakteri

Propionibacterium acne dan Staphylococcus epidermidis. Bakteri pada saluran

kelenjar sebasea yang didukung dengan kurangnya kebersihan kulit dan

tersumbatnya pori-pori kulit sehingga berakibat pori-pori kulit sulit untuk

bernafas dan dapat mengakibatkan infeksi atau pembengkakan pada jerawat.

Pengobatan jerawat menggunakan antibiotik dalam jangka panjang dapat

menimbulkan resistensi, kerusakan organ dan imuno hipersensitifitas sehingga

membutuhkan alternatif antibakteri.

Penelitian mengenai Fraksi n-Heksana buah naga merah mengandung

terpenoid dan alkaloid. Kontrol positif yang digunakan adalah klindamisin

4μg/disk sedangkan kontrol negatif yang digunakan adalah DMSO 10%. Analisis

data menggunakan program R-Commander versi 3.0.3. Berdasarkan hasil

penelitian fraksi n-Heksana kulit buah naga merah memiliki aktivitas antibakteri

terhadap P. acnes, dengan rata-rata zona hambat dari konsentrasi 20; 40 dan 80

mg/mL masing-masing secara berurutan adalah 9 mm; 10,25 mm dan 10,5 mm.

Sedangkan pada S. epidermidis fraksi n-Heksana kulit buah naga merah tidak

memiliki aktivitas antibakteri ( et al., 2014).

23
 Penelitian lain menunjukkan bahwa Fraksi n-heksan dan etil asetat dapat

menghambat aktivitas bakteri P. acnes dan S. epidermidis mulai konsentrasi 50 mg/mL

dan semakin membesar seiring dengan bertambahnya konsentrasi. Pada fraksi air dapat

menghambat aktivitas bakteri P. acnes mulai konsentrasi 25 mg/mL sedangkan pada S.

epidermidis dimulai pada konsentrasi 12, 5 mg/mL. Hasil uji korelasi menunjukkan

hubungan yang yang sangat kuat dengan nilai Asymp Sig (2- tailed) > 0,05 dengan

pengaruh konsentrasi ekstrak terhadap diameter zona hambat sebesar 80,5 sampai

97,3% (Sugiarti et al., 2020). Hasil riset lain menunjukkan bahwa ekstrak etanol herba

krokot dapat menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis yang ditunjukkan

terbentuknya zona bening disekitar disc, diameter daya hambat yang dihasilkan oleh

konsentrasi 25% (10,0) konsentrasi 50% (11,0) dan 75% (11,5). Dari hasil zona hambat

yang didapatkan ketiga konsentrasi resistent terhadap bakteri Staphyococcus

epidermidis (Indriana et al., 2021).

B. Bagan Kerangka Konsep Penelitian

Fraksi n-Heksan etil asetat dan

Aktivitas Antibakteri
air Herba Krokot
Keterangan :

: Variabel Dependen

: Variabel Independen

: Menyatakan pengaruh antara variabel independent

dan dependen

C. Variabel Penelitian

1. Variabel terikat 1. Variabel terikat pada penelitian ini adalah aktivitas

Antibakteri

24
 2. Variabel bebas 2. Variabel bebas pada penelitian ini adalah fraksi n-
heksan etil asetat dan air herba krokot (Portulaca
olerace L.).
3.
D. Definisi Operasional dan Kriteria Obyektif

1. Defenisi Operasional Variabel Dependen

a. Antibakteri

Antibakteri adalah zat yang dapat menghambat atau membunuh bakteri.

Kriteria objektif :

1. Memiliki efek antibakteri : Mempunyai kandungan senyawa yang dapat

bekerja untuk mennghambat bakteri

2. Tidak memiliki efek antibakteri : Tidak mempunyai kandungan senyawa

yang dapat bekerja untuk menghambat bakteri

2. Defenisi Operasional Variabel Independen

a. Fraksi n-heksan dan metanol herba krokot adalah hasil yang didapatkan dari

proses fraksinasi dari sampel herba krokot

Kriteria objektif : Dalam satuan (gram)

E. Hipotesis Penelitian

Hipotesis penelitian ini adalah:

p ¿ 0,05 H0 diterima, Ha ditolak

p ¿ 0,05 H0 ditolak, Ha diterima

Keterangan :

H0 = Aktivitas antibakteri tidak optimal dibandingkan kontrol negatif

Ha = Aktivitas antibakteri lebih optimal dibandingkan kontrol negatif

p Value > 0,05 Ha ditolak dan H0 diterima

25
P Value < 0,05 Ha diterima dan H0 ditolak

Keterangan :

H0 = Aktivitas antibakteri tidak optimal dibandingkan kontrol positif

Ha = Aktivitas antibakteri lebih

26
 BAB IV

METODE PENELITIAN

A. Jenis Dan Desain Penelitian

Jenis penelitian ini adalah penelitian analitik yang bertujuan untuk mengetahui

aktivitas antibakteri fraksi n-heksan etil asetat dan air herba krokot (Portulaca oleracea

L.) terhadap Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidi. Adapun

rancangan penelitiannya adalah herba krokot yang akan di fraksi n-Heksan etil asetat

dan air kemudian hasil dari fraksi tersebut akan dibagi 3 konsentrasi (10%, 15% dan

20%) yang akan di uji aktivitasnya sebagai antibakteri. Table desain penelitian dapat

dilihat dilihat pada tabel 2.

Tabel 2. Desain penelitian

Replikasi

Hasil Zona Hambat Total Rata-Rata Zona

Perlakuan
I II II Zona Hambat Hambat

Keterangan:

A = Kosentrasi fraksi 10%

B = Kosentrasi fraksi 15%

C = Kosentrasi fraksi 20 %

D = Kontrol positif kapsul Klindamisin

26
E = Kontrol negatif larutan DMSO

B. Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitiaan ini dilaksanakan di Laboratorium Farmokognosi-Fitokimia dan

Mikrobiologi Universitas Mandala Waluya.

C. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan adalah Alat yang digunakan adalah autoklaf, batang

pengaduk, bunsen, botol coklat, blender, cawan petri, cawan porselin, corong, cutter,

gelas kimia, gelas ukur, hot plate, jangka sorong, inkubator, kaca objek, lampu spiritus,

laminar air flow (LAF), ose, oven, pipet tetes, pinset, rotary evaporator, sendok

tanduk, toples, timbangan analitik.

Bahan-bahan yang digunakan adalah etanol 96% (pelarut), aquades, FeCl3,

alkohol 70%, pereaksi dragendorff, HCI pekat, kloroform, spirtus, pereaksi Mayer,

serbuk Mg, antibiotik sebagai kontrol positif (klindamisin), larutan NaCl (0,9%)

fisiologis dan media agar (Nutriet Agar) sebagai media padat.

Bakteri uji yang digunakan pada penelitian ini adalah Propionibacterium acnes

dan Staphylococcus epidermidis yang diperoleh dari koleksi Laboratorium

Mikrobiologi Program Studi Farmasi Stikes Mandala Waluya Kendari.

D. Populasi dan Sampel

1. Populasi

Populasi tanaman krokot diperoleh dari kebun warga Desa Puasana

Kecamatan Moramo Utara Kabupaten Konawe Selatan, Provinsi Sulawesi

Tenggara.

27
 2. Sampel

Sampel dalam penelitian ini adalah herba krokot (Portulaca oleracea L.) yang

akan dimaserasi kemudian menjadi ekstrak kental yang dilanjutkan dengan

fraksinasi menggunakan pelarut n-heksan dan metanol.

E. Prosedur Kerja Penelitian

1. Pengambilan Sampel

Herba krokot yang digunakan dalam penelitian diambil dari kebun warga

Desa Puasana Kecamatan Moramo Utara Kabupaten Konawe Selatan, Provinsi

Sulawesi Tenggara. Sampel herba krokot diambil dalam kondisi segar pada pagi

hari.

2. Pengolahan Sampel

Herba krokot yang telah dikumpulkan terlebih dahulu dilakukan sortasi kering

dipisahkan daun, batang, bunga dan akarnya, setelah daun dan batangnya

dipisahkan dari bunga dan akarnya kemudian dilakukan sortasi basah dengan tujuan

untuk menghilangkan kotoran yang melekat pada daun dan batang dengan

menggunakan air yang mengalir. Setelah itu sampel ditiriskan untuk mengurangi

kandungan air pada saat sortasi basah, kemudian dilakukan perajangan untuk

memperbesar luas permukaan sehingga area interaksi pelarut dengan Tanaman

herba krokot semakin besar. Tanaman herba krokot yang telah dirajang kemudian

diangin anginkan hingga kering lalu dimaserasi dan selanjutnya dipekatkan.

3. Ekstraksi Sampel

Sampel diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan cairan penyari

Etanol 96%. Sebanyak 1 kg sampel dimasukkan ke dalam bejana maserasi lalu

ditambahkan etanol 96% hingga seluruh bahan terendam. Wadah maserasi ditutup

28
 rapat dibiarkan selama 3 hari, disimpan ditempat yang tidak terkena sinar matahari

langsung dengan pengadukan 1x24 jam dan pelarutnya diganti tiap 1x24 jam pula,

setelah itu disaring dengan kertas saring. Ampas dari hasil maserasi selanjutnya

dimaserasi kembali, dilakukan perlakuan yang sama hingga pelarut yang digunakan

tidak berubah warna. Sehingga diperoleh filtrat. Filtrat yang diperoleh diuapkan

dengan alat rotary vacuum evaporator sampai mendapatkan ekstrak kental.

4. Fraksinasi

Fraksinasi n-heksan, etil asetat, dan air dilakukan pembuatan dengan cara

ditimbang ekstrak etanol batang langir 50 gram ekstrak disuspensikan dengan n

heksan aquades (1:1) sebanyak 250 kemudian dikocok selama 10-15 menit setelah

itu didiamkan sehingga terbentuk 2 lapisan yaitu lapisan n-heksan dan lapisan air.

Dikeluarkan lapisan air dan n-heksan masing-masing di tampung di dalam

Erlenmeyer. Lapisan air dimasukan kembali ke dalam corong pisah kemudian

ditambahkan dengan pelarut etil asetat lalu dikocok selama 10-15 menit setelah itu

didiamkan sehingga terbentuk 2 lapisan. Dikeluarkan lapisan air dan etil asetat

masing-masing di tampung di dalam Erlenmeyer. Sehingga di peroleh 3 fraksi yaitu

fraksi n-heksan, etil asetat dan air. Hasil fraksi ini kemudian dipekatkan dengan

Rotary Evaporator (Sarker et al., 2006).

5. Skrining Kandungan Kimia Ekstrak Herba Krokot (Portulaca oleracea L.)

a. Pemeriksaan Alkaloid

Ekstrak uji sebanyak 2 mL, di celupkan di atas cawan porselin hingga di

dapat residu. Residu kemudian di larutkan dengan 5 ml HCI 2 N. Larutan yang

di dapat kemudian dibagi dalam 3 tabung reaksi. Tabung pertama ditambahkan

dengan HCI 2 N yang berfungsi sebagai blanko. Tabung ke dua ditambhakna

pereaksi Dragedroff sebanyak 3 tetes dan tabung reaksi ke tiga ditambahkan

29
 pereaksi Mayer sebanyak 3 tetes. Terbentuknya endapan jingga pada tabung ke

dua dan endapan putih pada tabung ke tiga menujukkan adanya alkaloid

(Afriani et al., 2016).

b. Pemeriksaan Sterol dan Triterpenoid

Ekstrak uji di larutkan dalam 0,5 mL kloroform, lalu ditambahkan dengan

0,5 mL asam asetat anhidrat. Selanjutnya, campuran ini ditetesi dengan 2 mL

asam sulfat pekat melalui dinding tabung tersebut. Bila berbentuk warnah hijau

kebiruan menunjukkan adanya sterol. Jika hasil yang diperoleh berupa cincin

kecoklatan atau violet pada perbatasan dua pelarut, menunjukkan adanya

triterpenoid (Afriani et al., 2016).

c. Pemeriksaan Tanin

Uji tannin dilakukan dengan menambahkan larutan FeCl, ke dalam

sampel. Hasil positif tanin ditunjukan dengan terbentuknya warna hitam

kebiruan pada sampel uji (Afriani et al., 2016).

d. Pemeriksaan Saponin

Ekstrak uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, di tambahkan 10 ml air

panas, dinginkan dan kemudian kocok sekuat-kuatnya selama 10 detik.

Terbentuk buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-

10cm. pada penambahan HCI 2 N, buih tidak hilang (Afriani et al., 2016).

e. Pemeriksaan Flavonoid

Uji flavonoid dilakukan dengan cara menambahkan asam klorida pekat

pada sampel. Tes positif bila terjadi warna merah-jingga (Afriani et al., 2016).

f. Pemeriksaan Kuinon

30
 Tes Kuinon Sampel dipanaskan dalam air, kemudian disaring. Kemudian

di tambahkan NaOH. Warna kuning ke merah yang terbentuk menunjukkan

kandungan kuinon dalam fraksi (Afriani et al., 2016).

g. Pemeriksaan Fenol

Tes Polifenol: fraksi uji di tambahkan dengan sejumlah air dalam tabung,

kemudian tabung dipanaskan dan disaring dalam kondisi panas. Filtrat yang

diperoleh ditambahkan dengan FeCl3. adanya senyawa polifenol ditunjukan

dengan pembentukan hitam dan biru (Afriani et al., 2016).

6. Skrining Kandungan Kimia Fraksi n-heksan, Etil asetat dan Air Herba Krokot

(Portulaca oleracea L.)

a. Pemeriksaan Alkaloid

Fraksi uji sebanyak 2 ml., dicelupkan di atas cawan porselin hingga di

dapat residu. Residu kemudian di larutkan dengan 5 ml HCI 2 N. Larutan yang

di dapat kemudian di bagi dalam 3 tabung reaksi. Tabung pertama ditambahkan

dengan HCI 2 N yang berfungsi sebagai blanko. Tabung ke dua ditambhakna

pereaksi Dragedroff sebanyak 3 tetes dan tabung reaksi ke tiga ditambahkan

pereaksi Mayer sebanyak 3 tetes. Terbentuknya endapan jingga pada tabung ke

dua dan endapan putih pada tabung ke tiga menujukkan adanya alkaloid

(Afriani et al., 2016).

b. Pemeriksaan Sterol dan Triterpenoid

Fraksi uji di larutkan dalam 0,5 mL kloroform, lalu ditambahkan dengan

0,5 mL asam asetat anhidrat. Selanjutnya, campuran ini ditetesi dengan 2 mL

asam sulfat pekat melalui dinding tabung tersebut. Bila berbentuk warnah hijau

kebiruan menunjukan adanya sterol. Jika hasil yang di peroleh berupa cincin

31
 kecoklatan atau violet pada perbatasan dua pelarut, menunjukan adanya

triterpenoid (Afriani et al., 2016).

c. Pemeriksaan Tanin

Uji tanin dilakukan dengan menambahkan larutan FeCl3 ke dalam sampel.

Hasil positif tanin ditunjukkan dengan terbentuknya warna hitam kebiruan pada

sampel uji (Afriani et al., 2016).

d. Pemeriksaan Saponin

Fraksi uji di masukkan ke dalam tabung reaksi, di tambhakan 10 mL air

panas, dinginkan dan kemudian kocok sekuat-kuatnya selama 10 detik.

Terbentuk buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit setinggi 1-

10cm. Pada penambahn HCI 2 N, buih tidak hilang (Afriani et al., 2016).

e. Pemeriksaan Flavonoid

Uji flavonoid dilakukan dengan cara menambahkan asam klorida pekat

pada sampel. Tes positif bila terjadi warna merah-jingga (Afriani et al., 2016).

f. Pemeriksaan Kuinon

Tes kuinon Sampel dipanaskan dalam air, kemudian disaring. Kemudian

di tambahkan NaOH. Warna kuning ke merah yang terbentuk menunjukan

kandungan kuinon dalam fraksi (Afriani et al., 2016).

g. Pemeriksaan Fenol

Tes Polifenol: fraksi uji ditambahkan dengan sejumlah air dalam tabung,

kemudian tabung dipanaskan dan disaring dalam kondisi panas. Filtrat yang

diperoleh ditambahkan dengan FeCl3. Adanya senyawa polifenol ditunjukan

dengan pembentukan hitam dan biru.

32
F. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-heksan, Etil asetat dan Air Herba Krokot

(Portulaca oleracea L.)

a. Sterilisasi Alat

Sterilisasi dilakukan pada alat-alat yang telah dicuci bersih dan dikeringkan.

Pembakar Bunsen, untuk mensterilkan peralatan seperti ose, jarum, dan spatula

dengan cara membakar ujung peralatan tersebut di atas api bunsen sampai

berpijar. Oven untuk mensterilkan cawan petri, pipet tetes, batang pengaduk dan

tabung reaksi. Penggunaan alat ini dengan memasukkan alat-alat tersebut kedalam

oven dan dipanaskan dengan suhu 160- 170ºC selama 1-2 jam (Andriani, 2016).

Autoklaf untuk mensterilkan Erlenmeyer, gelas ukur, gelas kimia. Alat-alat

tersebut kemudian ditutup mulutnya dengan kapas dan dibungkus dengan kertas.

Alat-alat yang telah dibungkus dimasukkan ke dalam autoklaf dan disterilkan

selama 15 menit pada suhu 121ºC dan tekanan 1 atm (Rambiko dkk., 2016).

b. Pembuatan Media

Sebanyak 3 gram Nutrient Agar disuspensikan dalam 150 mL aquades

steril, kemudian dipanaskan hingga mendidih. Dilakukan pengadukan dengan

magnetic stirer untuk memastikan media telah tersuspensi secara sempurna.

Sebanyak 3 gram Nutrient Agar disuspensikan dalam 150 mL aquades steril,

kemudian dipanaskan hingga mendidih. Dilakukan pengadukan dengan magnetic

stirer untuk memastikan media telah tersuspensi secara sempurna.

Media yang sudah steril, kemudian dituang dalam tabung reaksi steril

sebanyak 5 mL. Media dituang dalam kondisi hangat (40°C-45°C). Tabung reaksi

yang berisi media, kemudian dimiringkan dengan kemiringan sekitar 30°-45°.

Bagian mulut tabung reaksi disumbat dengan kapas, kemudian ditunggu sampai

33
 media memadat. Pembuatan media dilakukan secara aseptis dalam Laminar Air

Flow).

c. Inokulasi (peremajaan) bakteri

Bakteri uji ditumbuhkan pada media Nutrient Agar (NA) miring dengan

cara menggoreskan 1 ose bakteri dari biakan murni pada media NA miring.

Baketri uji ditumbuhkan pada medium Nutrient Agar (NA) dengan cara

menggoreskan bakteri dari biakan murni menggunakan jarum ose pada permukaan

agar miring. Bakteri yang sudah digoreskan pada media kemudian diinkubasi pada

suhu 37°C selama 48 jam untuk Propionibacterium acnes sedangkan untuk

Staphylococcus epidermidis pada suhu 37°C selama 24 jam.

d. Pembuatan Suspensi Bakteri

Diambil stok kultur bakteri yang telah berumur 24 jam, kemudian

disuspensikan kedalam tabung reaksi yang telah berisi 10 mL larutan NaCl

fisiologis.

e. Pengujian zona hambat dengan metode Paper disk

Adapun prosedur pengujian zona hambat pada fraksi n-heksan, etil asetat

dan air herba krokot dalam penelitian ini yaitu disiapkan media nutrient agar (NA)

steril yang telah di cairkan dan biarkan pada suhu 45°C, kemudian ditambahkan 1

mL suspensi bakteri uji, dipipet sebanyak 15 mL media nutrient agar (NA) tanpa

biakan biarkan hingga memadat, diletakkan 5 paper disk diatas permukaan yang

telah dicelupkan pada ekstrak etanol herba krokot (Portulaca oleracea) 10%, 15%

dan 20%, kontrol (+) Klindamicin dan kontrol (-) DMSO dengan menggunakan

pinset, diatur jarak paper disk satu dengan lainnya agar tidak saling berhimpitan,

diinkubasi selama 1x24 jam pada suhu 37°C kedalam incubator, dikeluarkan dari

34
 incubator dan diamati luas daerah hambatan pertumbuhan bakterinya dan diukur

zona hambatan yang terbentuk dengan menggunakan jangka sorong.

G. Pengolahan dan Analisis Data

a. Teknik Pengumpulan Data

Teknik yang dipakai dalam pengumpulan data untuk penelitian ini adalah data

primer hasil zona hambat ekstrak herba krokot (Portulaca oleracea) yang dapat

diamati atau di observasi langsung kemudian diukur dan dihitung zona hambatan

pada uji efek ekstrak tersebut.

b. Pengolahan data

Data yang diperoleh selanjutnya dianalisis dengan uji Analysis of Varian

(ANOVA).

H. Etika Penelitian

Adapun etika dalam melakukan suatu penelitian yaitu pertama peneliti

mengajukan surat izin melakukan penelitian kepada Kepala Laboratorium Farmasi

STIKES-MW, selanjutnya peneliti menentukan alat dan bahan yang akan digunakan

dalam penelitian dan terakhir peneliti melakukan penelitian dengan tetap

memperhatikan aturan didalam laboratorium Farmasi STIKES-MW Kendari.

I. Jadwal Waktu Penelitian

Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan April sampai bulan Juni.

35
 DAFTAR PUSTAKA

Aisyah, N., Harahap, M. R., & Arfi, F. (2020). ANALISIS FITOKIMIA DAN UJI
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN BIDARA (Ziziphusmauritiana L.)
TERHADAP Esherichia coli DAN Staphylococcus aureus. 2(3), 106–113.
Anggraeni, V. J., Yulianti, S., & Panjaitan, R. S. (2020). Fitokimia Dan Aktivitas
Antibakteri Dari Tanaman Mangga (Mangifera indica L). Indonesia Natural Research
Pharmaceutical Journal, 5(2), 102–113.
Dewi, K. E. K., Habibah, N., & Mastra, N. (2020). UJI DAYA HAMBAT BERBAGAI
KONSENTRASI PERASAN JERUK LEMON TERHADAP BAKTERI
Propionibacterium acnes. JST (Jurnal Sains Dan Teknologi), 9(1), 86–93.
https://doi.org/10.23887/jst-undiksha.v9i1.19216
Gelar, M., & Masyarakat, S. K. (2021). Skripsi Ini Diajukan Sebagai Salah Satu Syarat
Untuk.
Indriana, I., Meitasari, A. D., & Dewi, A. O. T. (2021). Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol
Herba Krokot (Portulaca oleracea L.) terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis.
Jurnal Farmasindo Politeknik Indonusa Surakarta, 5. Retrieved from
infikaindriannaa@gmail.com
Khumaidi, A., Nugrahani, A. W., & Gunawan, F. (2020). Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Etanol Daun Kapas (Gossypium barbadense L.) terhadap Staphylococcus epidermidis
dan Propionibacterium acnes. Jurnal Farmasi Udayana, 9(1), 52.
https://doi.org/10.24843/jfu.2020.v09.i01.p08
Luntungan, B. M., Wewengkang, D. S., & Rumondor, E. (2021). UJI AKTIVITAS
ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Mycale Vansoesti DARI
PERAIRAN PULAU MANTEHAGE MINAHASA UTARA TERHADAP
PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus.
Pharmacon, 10(2), 889. https://doi.org/10.35799/pha.10.2021.34040
Mailani, D. P., & Pratiwi, N. (2019). Pra Rancangan Pabrik Etil Asetat dari Asam Asetat
dan Etanol dengan Proses Esterifikasi Menggunakan Katalis Aberlyst-15 Kapasitas
57.000 Ton/Tahun. Jurnal Tugas Akhir Teknik Kimia, 4(2), 73–77.
Marpaung, J. K. (2020). Fraksinasi dan Karakterisasi Ekstrak Etanol Buah Pandan
Jeronggi (Iris domestica (L.) Goldblatt & Mabb) Serta Uji Aktivitas ANtibakteri Dari
Masing- Masing Fraksi.
Putra, B., Azizah, R. N., & Nopriyanti, E. M. (2020). Efek Imunomodulator Ekstrak Etanol
Herba Krokot (Portulaca oleracea L.) terhadap Tikus Putih (Rattus norvegicus) Jantan
dengan Parameter Delayed Type Hypersensitivity (DTH). Jurnal Farmasi Galenika
(Galenika Journal of Pharmacy) (e-Journal), 6(1), 20–25.
https://doi.org/10.22487/j24428744.2020.v6.i1.14106

36
Savitri, G. R., Triatmoko, B., & Nugraha, A. S. (2020). Skrining Fitokimia dan Uji
Aktivitas Antibakteri Ekstrak dan Fraksi Tumbuhan Anyang-Anyang (Elaeocarpus
grandiflorus J. E. Smith.) terhadap Escherichia coli. JPSCR: Journal of
Pharmaceutical Science and Clinical Research, 5(1), 22.
https://doi.org/10.20961/jpscr.v5i1.32206
Sugiarti, L., Adriyani, D. M., Pratitis, M. P., & Setyani, R. (2020). AKTIVITAS
ANTIBAKTERI FRAKSI N-HEKSAN, ETIL ASETAT DAN AIR EKSTRAK
ETANOL DAUN PARIJOTO (Medinilla speciosa Blume) TERHADAP
Propionibacterium acnes DAN Staphylococcus epidermidis. Cendekia Journal of
Pharmacy, 4(2), 120–130.
Wahdaningsih, S., Untari, E. K., & Fauziah, Y. (2014). Antibakteri Fraksi n-Heksana Kulit
Hylocereus polyrhizus Terhadap Staphylococcus epidermidis dan Propionibacterium
acnes. Pharmaceutical Sciences and Research, 1(3), 180–193.
https://doi.org/10.7454/psr.v1i3.3490
Wardania, A. K., Malfadinata, S., & Fitriana, Y. (2020). Uji Aktivitas Antibakteri
Penyebab Jerawat Staphylococcus epidermidis Menggunakan Ekstrak Daun Ashitaba
(Angelica keiskei). Lumbung Farmasi: Jurnal Ilmu Kefarmasian, 1(1), 14.
https://doi.org/10.31764/lf.v1i1.1206
Yuniastri, R., Hanafi, I., & Sumitro, E. A. (2020). Potensi Antioksidan pada Krokot
(Portulaca oleracea) Sebagai Pangan Fungsional. Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis
Dan Biosistem, 8(3), 284–290. https://doi.org/10.21776/ub.jkptb.2020.008.03.10

37