Machine Translated by Google
ARTIKEL PENELITIAN
Integrin avB3–Target Pencitraan Kanker Paru1
Xiaoyuan Chen* ,y, Eric Sieversz Yingping
, Houy , Ryan Park*, Michel Tohme*, Robert Bart z
James R. Bading* and Peter S. Conti*
*Pusat Sains Pencitraan Molekuler, Departemen Radiologi, Universitas California Selatan, Los Angeles, y
CA 90033, AS; Program Pencitraan Molekuler di Stanford (MIPS), Fakultas Kedokteran Universitas Stanford,
300 Pasteur Drive, Gedung Edwards, Kamar 354, Stanford, CA 94305-5344, AS;
Bedah Kardiotoraks, Universitas California Selatan, Los Angeles, CA 90033, AS
Abstrak
Serangkaian ligan peptida arginin –glisin – asam aspartat (RGD)
siklik berlabel radiolabel untuk integrin molekul adhesi sel AvB3 –
penargetan angiogenesis tumor yang ditargetkan sedang
dikembangkan di laboratorium kami. Dalam penelitian ini, upaya ini
dilanjutkan dengan menerapkan pemancar radiotracer peptida
RGD 64Cu- DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 berlabel PEGylated dimeric
64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 untuk pencitraan paru-paru.
Peptida RGD PEGylated menunjukkan aviditas integrin AvB3 ,
tetapi PEGylation mengurangi afinitas pengikatan reseptor ligan ini
dibandingkan dengan dimer RGD yang tidak dimodifikasi.
Radiotracer mengungkapkan pembersihan darah yang cepat dan
rute pembersihan ginjal yang dominan. Akumulasi aktivitas
nonspesifik minimum dalam jaringan paru-paru normal dan jantung
menghasilkan gambar tumor kanker paru-paru ortotopik berkualitas
tinggi, memungkinkan pemisahan yang jelas dari tumor primer di
lobus atas paru-paru kiri, serta metastasis di me diastinum, paru-
paru kontralateral, dan diafragma. Sebagai perbandingan,
pemindaian fluorodeoxyglucose (FDG) pada tikus yang sama
hanya mampu mengidentifikasi tumor primer, dengan lesi metastatik
yang ditutupi oleh serapan jantung yang intens dan latar belakang
paru yang tinggi. 64Cu-DOTA-PEG E[c(RGDyK)]2 adalah pelacak
positron emission tomo graphy (PET) yang sangat baik untuk
pencitraan tumor integrin-positif.
Studi lebih lanjut untuk meningkatkan afinitas pengikatan reseptor
dari pelacak dan selanjutnya untuk meningkatkan besarnya
serapan tumor tanpa memasukkan kinetika in vivo yang
menguntungkan saat ini sedang berlangsung.
Neoplasia (2005) 7, 271–279
Kata kunci: tomografi emisi positron (PET); integrin avß3; peptida RGD dimerik; kanker paru-paru;
metastasis.
Perkenalan
Kanker paru-paru adalah penyebab utama kematian akibat kanker
baik pada pria maupun wanita, membunuh lebih banyak orang
daripada gabungan kanker payudara, prostat, usus besar, dan
pankreas [1]. Jenis histologis utama kanker paru-paru adalah
karsinoma sel skuamosa, adenokarsinoma, karsinoma sel besar
(disebut sebagai kanker paru-paru bukan sel kecil, atau NSCLC)
dan karsinoma paru-paru sel kecil (SCLC). Deteksi dan pengobatan
DOI 10.1593/neo.04538
dini dapat meningkatkan kelangsungan hidup beberapa jenis kanker paru [2]. Bahkan
Neoplasia. Vol. 7, No. 3, Maret 2005, hlm. 271 – 279 271
www.neoplasia.com
, Ross Bremner z,
Dengan
Departemen
pasien dengan tahap bedah paling awal (T1N0) memiliki penyakit
diseminata antara 15% dan 30% dari waktu [3]. Terapi kemoterapi,
pembedahan, dan terapi radiasi telah terbukti mengendalikan gejala
dan meningkatkan kualitas hidup; masih belum ada rejimen terapi
optimal standar untuk NSCLC [4]. Mekanisme resistensi terhadap obat
dan terapi radiasi kurang dipahami [5]. Meskipun ada kemajuan yang
signifikan, peristiwa molekuler yang mendasari perkembangan kanker
paru sebagian besar tidak diketahui. Tidak ada obat yang ditemukan
bermanfaat dalam pencegahan kanker paru [6]. Meskipun ada sarana
diagnosis dini yang terbukti tersedia untuk kanker paru-paru, apakah
teknik ini efektif dalam hal meningkatkan kelangsungan hidup pasien
atau hasilnya masih belum diketahui [7].
Diagnosis kanker paru berdasarkan histopatologi membutuhkan
biopsi jarum halus, bronkoskopi, atau biopsi paru terbuka untuk
membedakan lesi jinak dari lesi ganas, sebelum dan seringkali setelah
reseksi bedah atau terapi radiasi pada lesi tumor primer. Bronkoskopi,
termasuk pencucian dan penyikatan bronkus, memiliki sensitivitas 65%
untuk keganasan, dan biopsi transbronkial meningkatkan sensitivitas
hingga 80% untuk lesi yang dapat diakses. Pneumotoraks dan
morbiditas terkait dapat terjadi setelah prosedur invasif ini. Teknik
pencitraan anatomi konvensional seperti rontgen dada, pemindaian
tomografi terkomputasi (CT), pemindaian tulang, atau pencitraan
resonansi magnetik (MRI) tidak dapat menentukan stadium penyakit
secara akurat ketika metastasis terjadi tanpa perubahan anatomi, atau
membedakan antara tumor ganas dan tidak ganas.
Pencitraan tomografi emisi positron fluorodeoxyglucose positron (FDG
PET), yang memvisualisasikan pemanfaatan glukosa oleh sel kanker
paru-paru, semakin banyak digunakan untuk pengelolaan pasien
dengan kanker paru-paru, terutama mereka dengan NSCLC.
FDG-PET mengukur proses seluler tertentu, yaitu, fosforilasi 2-
deoksiglukosa oleh heksokinase. Teknik
Singkatan: RGD, arginin – glisin – asam aspartat; PET, tomografi emisi positron; NSCLC, kanker paru-paru
bukan sel kecil; DOTA, 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-N,NV,NW,Nj asam tetraasetat; PEG, poli(etilen glikol)
Alamat semua korespondensi ke: Peter S. Conti, MD, PhD, Departemen Radiologi USC, 1510 San Pablo
Street, Suite 350, Los Angeles, CA 90033. E-mail: pconti@usc.edu
1
Pekerjaan ini didukung oleh penghargaan penelitian dari American Lung Association of California (ALA
California; NIBIB R21 EB001785), DOD BCRP Concept Award (DAMD17-03-1-0752), DOD BCRP IDEA Award
(W81XWH-04-1-0697 ), dan NCI (P20 CA86532).
Diterima 10 Agustus 2004; Direvisi 21 September 2004; Diterima 28 September 2004.
Hak Cipta D 2005 Neoplasia Press, Inc. Semua hak dilindungi undang-undang 1522-8002/05/$25,00
Machine Translated by Google
272 Pencitraan PET Kanker Paru Chen et al.
menyediakan data yang sangat sensitif dan spesifik untuk diagnosis,
stadium, dan restaging NSCLC, tanpa perlu biopsi, dan sekarang
diterima dengan baik oleh sebagian besar dokter sebagai pelengkap
yang efektif untuk modalitas pencitraan yang ada [8-10].
FDG-PET juga dapat berkembang sebagai prediktor respon setelah
pengobatan lokal atau sistemik [11].
Meskipun penilaian metabolisme jaringan menggunakan pelacak
FDG memberikan pencitraan yang berguna untuk neoplasma paru,
ini relatif tidak spesifik dan biasanya kurang berguna untuk
pencitraan tumor yang memiliki tingkat pertumbuhan yang sangat
rendah, atau sebagai panduan untuk pemberian terapi molekuler
spesifik. Pengembangan pelacak yang menargetkan kelainan
molekuler atau genetik tertentu, yang merupakan dasar dari kanker
paru-paru, oleh karena itu penting untuk pengembangan dan
kegunaan prosedur PET yang relevan secara klinis yang dapat
digunakan untuk menilai kemanjuran obat-obatan terapeutik yang
dirancang untuk mengobatinya. kelainan. Tujuannya adalah: untuk
memungkinkan deteksi dini dan karakterisasi penyakit, untuk
memberikan penilaian efek pengobatan yang lebih tepat waktu dan
langsung, dan untuk mendapatkan pemahaman yang lebih
mendasar tentang proses penyakit. Pengetahuan yang berkembang
pesat tentang patogenesis molekuler kanker paru-paru menunjukkan
bahwa sel-sel epitel pernapasan membutuhkan banyak perubahan
genetik untuk menjadi invasif, yang menyebabkan kanker
metastatik. Selain itu, sebagian besar tumor padat bergantung pada
angiogenesis [12]. Terapi antiangiogenik telah terbukti mencegah
pertumbuhan tumor dan bahkan menyebabkan regresi tumor pada
berbagai model tumor termasuk kanker paru [13]. Pertumbuhan
NSCLC, angiogenesis, invasi, dan metastasis ke organ tertentu
bergantung pada serangkaian peristiwa yang diatur yang meliputi:
transformasi seluler; pembentukan lingkungan proangiogenik;
proliferasi sel tumor, invasi, dan masuk ke dalam sirkulasi; dan
perdagangan sel tumor dan pertumbuhan tumor metastatik pada
organ tertentu [14]. Reseptor adhesi sel dari keluarga integrin,
yang bertanggung jawab untuk berbagai sel - matriks ekstraseluler
(ECM) dan interaksi sel - sel, telah dipelajari dengan baik di banyak
jenis tumor termasuk tumor otak, payudara, kulit, dan ovarium.
Namun, sedikit yang diketahui tentang fungsi integrin dalam
pertumbuhan dan metastasis kanker paru [15].
Karena ekspresinya yang tinggi pada pembuluh darah tumor
dan sel tumor dibandingkan dengan sel endotel istirahat dan
jaringan normal, integrin avb3 adalah target yang sangat baik untuk
intervensi target integrin [16,17]. Telah ditunjukkan bahwa antagonis
integrin avb3 , seperti antibodi monoklonal, peptida arginin-glisin-
asam aspartat (RGD), dan molekul kecil, memblokir angiogenesis
dan pertumbuhan tumor dengan mempromosikan apoptosis sel
endotel vaskular secara selektif [16-18]. Pengembangan metode
noninvasif untuk memvisualisasikan dan mengukur ekspresi
integrin av in vivo tampaknya menjadi penting untuk keberhasilan
terapi antiangiogenik berdasarkan antagonisme integrin [17,19].
Sejumlah probe molekuler telah dikembangkan untuk MRI [20,21],
PET [22 – 30], single photon computed tomography (SPECT) [31
– 35], dan aplikasi pencitraan suara ultra [36].
Peptida RGD berlabel 64Cu sangat menarik karena 64Cu [t1/2
= 12,8 jam; 40% b (656 keV); 19% b+ (600 keV); 38% EC] adalah
radionuklida yang menarik untuk pencitraan PET dan radioterapi
target kanker [37].
Kami pertama-tama menggabungkan monomer RGD peptida c
(RGDyK) dengan makrosiklik chelator, 1,4,7,10-tetraazacyclododecane
N,N,VNW,Nj-tetraacetic acid (DOTA), dan memberi label konjugat
RGD DOTA dengan 64Cu untuk penargetan tumor . Radiotracer
menunjukkan serapan tumor sedang tetapi juga retensi tinggi di hati
dan ginjal [23]. Pengenalan gugus bifungsional poli(etilen glikol)
(PEG; MW = 3.400) antara DOTA dan RGD menyebabkan
peningkatan kinetika in vivo secara signifikan dari radiotracer yang
dihasilkan 64Cu-DOTA-PEG-RGD dibandingkan dengan 64Cu-
DOTA-RGD [ 25]. Kami juga mengamati bahwa dimer RGD peptida
E[c(RGDyK]2 dengan afinitas pengikatan integrin yang lebih tinggi,
ketika dikonjugasikan dengan DOTA dan diberi label dengan 64Cu,
menghasilkan penyerapan tumor hampir dua kali lebih banyak,
serta akumulasi aktivitas ginjal yang meningkat secara signifikan
dibandingkan dengan analog monomer [27].Dalam penelitian ini,
kami berusaha untuk memperluas upaya ini dengan memeriksa
ekspresi integrin pada kanker paru menggunakan pencitraan PET
noninvasif dan radiotracer baru—64Cu-labeled PEGylated dimeric
RGD peptide 64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK )]2 (Gambar 1).
Bahan dan metode
Bahan dan Analisis DOTA
dibeli dari Macrocyclics, Inc. (Dallas, TX).
N-hydroxysulfonosuccinimide (SNHS), 1-ethyl-3-[3-(dime
thylamino)propyl]carbodiimide (EDC), dan Chelex 100 (50–100
mesh) diperoleh dari Aldrich (St. Louis, MO). PEG heterofungsional
(MW 3400), t-Boc-NH-PEG CO2NHS, diperoleh dari Nektar, Inc.
(San Carlos, CA).
Peptida RGD siklik c(RGDyK) disintesis melalui siklisasi larutan
pasang pentapep linier yang dilindungi sepenuhnya, H-Gly-
Asp(OtBu)-D-Tyr(OtBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-OH, diikuti oleh Deproteksi
TFA [22 – 24]. Dimeric RGD peptide E[c(RGDyK)]2 dibuat dengan
menggabungkan Boc-Glu-OH dengan dua ekuivalen peptida RGD
monomer c(RGDyK) diikuti dengan pembelahan TFA [26,27]. Radio-
thin layer chroma tography (TLC) dilakukan menggunakan pelat
MKC18F (What man, Clifton, NJ), sistem Bioscan 200, dan
perangkat lunak Winscan (Washington, DC), versi 2.2. Kartrid C-18
SepPak ekstraksi fase terbalik diperoleh dari Waters (Milford, MA).
64Cu diproduksi pada siklotron biomedis CS-15 di THE Washington
University School of Medicine oleh reaksi nuklir 64Ni(p,n)64Cu [37].
Pelat mikro Chromalux HB diperoleh dari Dynex Tech nology
(Chantilly, VA). [125I]echistatin yang diberi label dengan metode
lakto peroksidase untuk aktivitas spesifik 2000 Ci/mmol berasal dari
Amersham Biosciences (Piscataway, NJ). Echistatin dibeli dari
Sigma (St. Louis, MO).
Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) fase terbalik semipreparatif
dilakukan pada sistem kromatografi Waters 515 dengan detektor
absorbansi merdu 486. Perangkat lunak Labtech Notebook/XE versi
7.2.1
(Andover, MA) digunakan untuk merekam kromatogram. Pemurnian
dilakukan pada protein Vydac dan kolom peptida 218TP510 (5 mm,
250 10 mm). Aliran adalah 5 ml/menit, dengan fase gerak mulai dari
95% pelarut A (0,1% TFA dalam air) dan 5% pelarut B (0,1% TFA
dalam air)
Neoplasma . Vol.7, No.3, 2005
Machine Translated by Google
Gambar 1. Skema struktur DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2. PEG heterobifungsional (MW = 3400) terhubung ke gugus karboksilat DOTA melalui terminal-N dan ke
gugus amino glutamat dari peptida RGD dimerik melalui terminal-C.
asetonitril) (0–2 menit) hingga 35% pelarut A dan 65% pelarut B
pada 32 menit. Metode HPLC analitis dilakukan dengan sistem
gradien yang sama, tetapi dengan kolom Vydac 218TP54 (5 mm,
250 x 4,6 mm) dan aliran 1 ml/menit. Absorbansi UV dipantau
pada 218 nm.
Kimia dan Radiokimia t-Boc-NH-
PEG-E[c(RGDyK)]2 konjugat t-Boc – ester suksinimidil PEG
terlindungi (t-Boc-NH-PEG-CO2NHS, MW = 3400), 30 mg (ca.
8.8 mmol), dilarutkan dalam asetonitril (2 ml); E[c(RGDyK)]2, 16
mg (kira-kira 11,8 mmol), dilarutkan dalam air (2 ml); dan buffer
Na2B4O7 0,2 M (pH = 8,3), 2 ml, dicampur bersama dan
diinkubasi semalaman pada suhu 4jC. Reaksi dipadamkan
dengan menambahkan 5% HOAc (0,5 ml) dan seluruh campuran
kemudian mengalami beberapa pemurnian HPLC semipreparatif.
Penghapusan fase gerak memberikan produk sebagai padatan
terliofilisasi. Hasil: 30 mg (ca. 70% berdasarkan PEG).
NH2-PEG-E[c(RGDyK)]2 Dua puluh miligram t-Boc-NH PEG-
E[c(RGDyK)]2 konjugat dilarutkan dalam 2 ml TFA 95% dan
didiamkan pada suhu kamar selama 2 jam .
Sebagian besar TFA kemudian dihilangkan dengan rotary
evaporator (dilengkapi dengan CO2/acetone cold finger, oil
pump, dan acid trap). Residu ditriturasi dengan eter dingin (10
ml) untuk mengendapkan peptida mentah. Pemurnian HPLC
semipreparatif diikuti dengan liofilisasi menghasilkan konjugat
RGD-PEG yang tidak terlindungi. Hasil: 15 mg (ca. 75%).
DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 DOTA diaktifkan in situ oleh EDC
dengan rasio molar DOTA:EDC:SNHS 10:5:4 [23].
NH2-PEG-E[c(RGDyK)]2 (10 mg, kira-kira 2,1 mmol) dilarutkan
dalam 2 ml air didinginkan hingga 4jC dan ditambahkan ke DOTA
Neoplasma . Vol.7, No.3, 2005
Pencitraan PET dari Kanker Paru Chen et al. 273
Campuran reaksi OSSu (20 mmol; dihitung berdasarkan SNHS)
dan pH disesuaikan menjadi 8,5 dengan 1 N NaOH. Reaksi
diizinkan untuk diinkubasi semalam pada 4jC. Konjugat DOTA-
PEG E[c(RGDyK)]2 dimurnikan dengan HPLC semipreparatif
dan dikarakterisasi dengan HPLC analitik dan matriks dengan
bantuan laser desorpsi/ionisasi time-of-flight mass spec troscopy
(MALDI-TOF MS). Hasil: 6,5 mg (ca. 60%). Puncak yang
mengandung konjugat RGD dikumpulkan, diliofilisasi, dan
dilarutkan dalam H2O pada konsentrasi 1 mg/ml untuk digunakan
dalam reaksi radiolabeling.
Pelabelan radio 64Cu 64CuCl2 (5 mCi, koreksi pembusukan)
diencerkan dengan 400 ml NaOAc 0,1 N (pH 5,5) dan kemudian
ditambahkan ke DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 (25 mg) . Campuran
reaksi diinkubasi pada 50jC selama 50 menit dan kemudian
diakhiri dengan menambahkan 5 ml larutan EDTA 10 mM. Hasil
kimia radio ditentukan oleh radio-TLC menggunakan pelat TLC
Whatman MKC18F sebagai fase diam dan 70:30 MeOH:10%
NaOAc sebagai eluen. 64Cu-DOTA-PEG-E [c(RGDyK)]2
dimurnikan pada kartrid SepPak C-18, menggunakan etanol 85%
sebagai pelarut elusi. Kemurnian radiokimia (RCP) ditentukan
oleh radio-TLC atau radio-HPLC. Etanol diuapkan, dan
aktivitasnya dilarutkan dalam saline buffer fosfat dan melewati
filter Millipore (Billerica, MA) 0,22 mm ke dalam botol multidosis
steril untuk digunakan dalam percobaan hewan.
Receptor Binding Assay
Afinitas peptida echistatin dan RGD untuk integrin avb3 pada
permukaan sel NSCLC NCI-H1975 ditentukan oleh percobaan
pengikatan kompetitif menggunakan echistatin berlabel 125I
sebagai radioligand seperti yang dijelaskan dalam literatur,
dengan modifikasi [38]. Singkatnya, sel NCI-H1975 dipanen, dicuci
Machine Translated by Google
274 Pencitraan PET Kanker Paru Chen et al.
dua kali dengan PBS, dan disuspensikan kembali (2 106 sel/
ml) dalam bufer pengikat (20 mM Tris, pH 7,4, 150 mM NaCl,
2 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2, dan 0,1% BSA).
Pelat DV multilayar sembilan puluh enam sumur (ukuran pori
filter: 0,65 mm; Milipori) diinkubasi dengan [125I]echistatin
(50.000 cpm/ sumur) dengan adanya peningkatan konsentrasi
analog peptida RGD yang berbeda (0–1000 nM). Total volume
inkubasi disesuaikan menjadi 200 ml. Setelah sel diinkubasi
selama 3 jam pada suhu kamar, pelat disaring melalui manifold
vakum multilayar dan dicuci dua kali dengan buffer pengikat
dingin. Filter PVDF hidrofilik dikumpulkan dan radioaktivitas
ditentukan menggunakan pencacah gamma NaI(Tl) (Packard,
Meriden, CT). Nilai IC50 yang paling sesuai untuk sel NCI-
H1975 dihitung dengan menyesuaikan data dengan regresi
nonlinier menggunakan GraphPad Prism (GraphPad Software,
Inc., San Diego, CA). Eksperimen dilakukan dengan sampel
rangkap tiga.
In Vivo Model
The University of Southern California Institutional Animal
Care and Use Committee menyetujui studi hewan yang
dijelaskan di sini. Semua hewan menerima perawatan
manusiawi sesuai dengan Panduan Perawatan dan
Penggunaan Hewan Laboratorium yang diterbitkan oleh National Institutes of Health.
Tikus imunodefisiensi gabungan berat (SCID bg jantan;
Harlan Sprague Dawley, Inc., Indianapolis, IN) berusia enam
minggu ditempatkan di kandang polikarbonat (lima per
kandang) di ruangan yang menyala selama 12 jam setiap hari
dan dipertahankan pada suhu 27jC selama 2 hari sebelum
penyuntikan. Diet Teklad (4%) (Harlan Teklad, Madison, WI)
dan air ledeng diberikan secara ad libitum. Dalam persiapan
untuk injeksi, sel adenocar cinoma paru-paru wanita manusia
NCI-H1975 (American Type Culture Collection, Manassas, VA)
dikultur dalam RPMI 1640 yang dilengkapi dengan 10% serum
janin sapi (GIBCO, Carlsbad, CA) hingga 90% konfluen. Sel
dicobakan, dicuci, disentrifugasi, dan disuspensikan kembali
ke konsentrasi 2 106 sel / 30 ml dalam RPMI 1640 (saluran
sel 35 ± 3). Tikus dibius dengan mentitrasi inhalan isofluran.
Sayatan aksila 1 cm memungkinkan visualisasi paru kiri melalui
otot interkostal dan pleura. Suspensi sel NCI-H1975 disuntikkan
melalui jarum ukuran 27 ke lobus kiri atas di ruang interkostal
keempat di bawah visualisasi langsung. Sayatan ditutup
menggunakan jahitan 4.0 yang dapat diserap, dan tikus
dibiarkan pulih [39]. Tikus menjadi sasaran studi pencitraan
mikroPET dan autoradiografi digital seluruh tubuh (WBDA)
pada 4 minggu setelah implantasi.
Biodistribusi
Tikus SCID-bg jantan yang mengandung tumor subkutan
NCI-H1975 (n = 3 per titik waktu) disuntik dengan 64Cu-DOTA
PEG-E[c(RGDyK)]2 (aktivitas 10 mCi dalam 150 ml saline)
melalui vena ekor . Hewan-hewan itu di-eutanasia pada 0,5, 1,
2, 4, dan 24 jam pasca injeksi. Eksperimen pemblokiran
dilakukan dengan menyuntikkan radiotracer dengan dosis
jenuh c(RGDyK) (10 mg/kg) dan dikorbankan pada 1 jam
pasca injeksi. Setelah eutanasia, darah, tumor, dan organ
serta jaringan utama dikumpulkan, ditimbang basah, dan
dihitung dalam g-counter (Packard). Persen dosis yang disuntikkan Nilai P <0,05 dianggap signifikan.
per gram (% ID/g) dihitung dengan membandingkan standar
yang mewakili dosis yang disuntikkan per hewan. Nilai dikutip
sebagai rata-rata ± standar deviasi (SD). Untuk membandingkan
kinetika in vivo 64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 dan 64Cu
DOTA-E[c(RGDyK)]2, studi biodistribusi dari kedua pelacak
dilakukan pada tikus telanjang athymic betina selama 30
menit. , titik waktu 1 jam, 2 jam, 4 jam, dan 24 jam (aktivitas
10 mCi untuk setiap hewan; n = 4 per titik waktu).
Pencitraan MicroPET dan
pencitraan WBDA PET dilakukan pada pemindai model
tikus microPET R4 (Concorde Microsystems, Inc., Knoxville, TN).
Pemindai memiliki alas yang dikendalikan komputer, dan
bidang pandang (FOV) transaksial 10,8 cm dan aksial 8 cm.
Tidak memiliki septa dan beroperasi secara eksklusif dalam
mode daftar 3D. Semua data mentah pertama-tama diurutkan
ke dalam sinogram 3D diikuti oleh rekonstruksi maksimum a
posteriori (MAP) berdasarkan formulasi Bayesian, yang
menggabungkan pemodelan akurat dari proses deteksi
kebetulan dengan statistik sebelumnya pada gambar PET [40].
Pada 4 minggu pascainokulasi, tikus pembawa tumor ortotopik
dibius dengan injeksi larutan ketamin / xilazin intraperitoneal,
ditempatkan dalam posisi terlentang di atas bilah karton, dan
disuntikkan dengan 200 mCi [18F] FDG ke dalam vena ekor
pada a volume 150 ml. Tikus dipindai selama 10 menit mulai
dari 30 menit setelah injeksi FDG. Tikus yang sama diinjeksi
secara intravena dengan 300 mCi 64Cu-DOTA-PEG-
E[c(RGDyK)]2 dan dikorbankan pada 1 jam pasca injeksi
dengan dislokasi serviks di bawah anestesi ketamin/xylazine
dan ditempatkan di dekat pusat FOV dari microPET, di mana
resolusi dan sensitivitas gambar tertinggi tersedia. Tikus
dipindai selama 20 menit diikuti oleh autoradiografi seluruh
tubuh, menggunakan sistem Layar Fosfor Penyimpanan
Cyclone Packard (Down ers Grove, IL) dan cryomicrotome
Bright 5030/WD/MR (Hacker Instruments, Fairfield, NJ) [22] .
Daerah minat (ROI) untuk pencitraan mikroPET diambil di atas
tumor subkutan, ortotopik, dan metastatik pada gambar
koronal seluruh tubuh yang dikoreksi dengan pembusukan.
Hitungan per piksel per menit yang diperoleh dari ROI
dikonversi menjadi hitungan per mililiter per menit dengan
menggunakan faktor kalibrasi sistem yang diperoleh dari
pemindaian phantom silinder dalam pemindai microPET.
Indeks serapan [ROI (mCi/ml)/dosis injeksi (mCi) 100%]
jaringan dan organ yang diamati dibandingkan dengan
persentase dosis injeksi per nilai gram yang diperoleh dari
pengambilan sampel jaringan langsung setelah pencitraan
mikroPET. Kuantifikasi gambar autoradiografi divalidasi
dengan mengkorelasikan ROI dalam jaringan [sebagai unit
lampu detektor (DUL)/mm2 ] dengan uji penghitung gamma
langsung dari sampel jaringan yang diambil dari blok beku (n
= 3). Sebuah hubungan linier antara persentase jaringan yang
disuntikkan dosis per gram dan intensitas gambar autoradiografi diamati, dan f
Analisis Statistik
Data dinyatakan sebagai rata-rata ± SD. Analisis varians
satu arah (ANOVA) digunakan untuk evaluasi statistik. Rata-
rata dibandingkan menggunakan Student's t-test.
Neoplasma . Vol.7, No.3, 2005
Machine Translated by Google
Hasil
Persiapan Konjugat RGD Dimerik PEGylated dan
Radiolabeling
Skema sintetik DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 ditunjukkan pada
Gambar 2. Konjugat PEGylated diperoleh dengan sintesis larutan
melalui protokol ester aktif dalam 30% hasil keseluruhan yang
dihitung dari t-Boc-NH-PEG-CO2NHS. Setiap perantara
dikarakterisasi dengan HPLC analitik dan pengukuran berat
molekul oleh MALDI-TOF MS. Waktu retensi HPLC (berdasarkan
kondisi yang dijelaskan di bagian Bahan dan Metode) untuk
E[c(RGDyK)]2, t-Boc NH-PEG-E[c(RGDyK)]2, NH2-PEG-
E[c( RGDyK)]2, dan DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 masing-masing
adalah 13,8, 23,7, 21,4, dan 22,8 menit. Spektrum massa dimer
PEGylated RGD dicirikan oleh puncak yang luas karena dispersi
poli PEG, dengan ukuran PEG rata-rata f3400.
Berat molekul dari DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 akhir adalah sekitar
5100, menunjukkan rasio molar 1:1:1 sehubungan dengan DOTA,
PEG, dan E[c(RGDyK)]2. 64Cu -DOTA-PEG E[c(RGDyK)]2
disiapkan dalam aktivitas spesifik tinggi. Biasanya, 10 mg
peptida mampu mengikat 1 mCi dari 64Cu dengan hasil radiokimia
> 95% setelah 1 jam inkubasi dalam buffer NaOAc (pH = 5,5)
sebagaimana ditentukan oleh radio-TLC.
Pemisahan SepPak menyediakan produk dengan RCP lebih
tinggi dari 99%. Aktivitas spesifik dengan demikian dihitung
menjadi sekitar 500 Ci/mmol (koreksi pembusukan).
Evaluasi In Vitro dan In Vivo
Untuk mengkarakterisasi sifat pengikatan integrin avb3 dari
peptida RGD dimerik PEGylated berlabel 64Cu, studi uji
pengikatan kompetitif dilakukan. Pemeliharaan afinitas pengikatan
ditunjukkan oleh pengukuran pengikatan kompetitif antara
[125I]echistatin dan ligan peptida RGD
Gambar 2. Sintesis langkah demi langkah dari ligan peptida RGD dimerik PEGylated, DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2.
Neoplasma . Vol.7, No.3, 2005
Pencitraan PET dari Kanker Paru Chen et al. 275
dengan kultur sel NCI-H1975 (Gambar 3). Pengikatan sel
[ 125I]echistatin ke NCI-H1975 dihambat oleh berbagai
konsentrasi echistatin, c(RGDyK), E[c(RGDyK)]2, atau DOTA-
PEG-E[c(RGDyK)]2, dengan IC50 nilai masing-masing 0,54,
44,8, 11,1, dan 84,9 nM.
Perbandingan data biodistribusi 64Cu-DOTA-PEG
E[c(RGDyK)]2 dan 64Cu-DOTA-E[c(RGDyK)]2 pada darah, otot,
hati, dan ginjal tikus telanjang athymic betina ditunjukkan pada
Gambar. 4. Peptida RGD PEGylated memiliki aktivitas darah
yang serupa dengan 64Cu-DOTA-E[c(RGDyK)]2 pada titik waktu
awal, tetapi menunjukkan pembersihan darah yang lebih cepat
daripada 64Cu-DOTA-E[c(RGDyK)]2 setelah 4 jam pasca injeksi.
Dimmer PEGylated RGD menunjukkan akumulasi aktivitas yang
secara signifikan lebih rendah di otot, hati, dan ginjal pada semua
titik waktu yang diperiksa (P <.001). Secara keseluruhan, 64Cu-
DOTA PEG-E[c(RGDyK)]2 diekskresikan dengan laju yang lebih
cepat daripada 64Cu-DOTA-E[c(RGDyK)]2.
Studi biodistribusi in vivo 64Cu-DOTA-PEG E[c(RGDyK)]2
dilakukan pada mencit SCID-bg jantan sehat yang diimplantasikan
secara subkutan dengan tumor NSCLC manusia yang
ditumbuhkan dari sel NCI-H1975. Tabel 1 merangkum hasil pola
biodistribusi 64Cu-DOTA-PEG E[c(RGDyK)]2 pada tikus SCID
yang mengandung tumor pada 0,5, 1, 2, 4, dan 24 jam. Pelacak
peptida PEGylated RGD menunjukkan pembersihan darah yang
cepat (0,57 ± 0,19% ID/g pada 30 menit pasca injeksi dan hanya
0,05 ± 0,01% ID/g pada 2 jam pasca injeksi). Penyerapan tumor
tertinggi diamati pada 1 jam pasca injeksi (2,64 ± 0,14% ID/g)
dan beberapa pencucian diamati (1,15 ± 0,07% ID/g pada 24
jam pasca injeksi). Karena pembersihan radiotracer yang cepat,
rasio tumor-ke-darah dan tumor-ke-otot yang baik dicapai setelah
1 jam pasca injeksi. Perlu juga dicatat bahwa pelacak peptida
PEGylated RGD ini menghasilkan rasio tumor-ke-paru yang baik
karena akumulasi aktivitas paru-paru yang rendah. Itu
Machine Translated by Google
276 Pencitraan PET Kanker Paru Chen et al.
Gambar 3. Kompetisi pengikatan spesifik [125I]echistatin dengan echistatin tidak
berlabel, c(RGDyK), E[c(RGDyK)]2, dan DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 pada integrin
av3 yang diekspresikan pada permukaan sel NSCLC NCI-H1975 manusia.
Semua poin mewakili pengukuran rangkap tiga. PEGilasi mengurangi afinitas
pengikatan reseptor dari ligan yang dihasilkan dari 11 menjadi 85 nM.
rute utama pembersihan radiolabel dari 64Cu-DOTA PEG-E[c(RGDyK)]2
adalah melalui ginjal ke dalam urin.
Hanya 0,94 ± 0,20% ID/g dan 0,90 ± 0,35% ID/g ditemukan di hati dan
usus masing-masing pada 1 jam pasca injeksi. Penting juga untuk dicatat
bahwa ada serapan minimal 64Cu pada organ selain ginjal, yang
menunjukkan bahwa jaringan dan organ normal ini menunjukkan sedikit
ekspresi integrin avb3 , yang konsisten dengan laporan sebelumnya
[22-33]. Untuk menunjukkan bahwa pengambilan 64Cu-DOTA-PEG-
E[c(RGDyK)]2 pada tumor NCI-H1975 spesifik dan dimediasi reseptor,
studi biodistribusi dilakukan dengan koinjeksi c(RGDyK) (10 mg/kg) dengan
64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2.
Nilai serapan 0,68 ± 0,10% ID/g diamati pada 1 jam pasca injeksi, sekitar
empat kali lebih rendah dari
Gambar 4. Perbandingan data biodistribusi 64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 (o) dan 64Cu-DOTA-E[c(RGDyK)]2 (.) pada tikus telanjang athymic betina. Bilah kesalahan
menunjukkan SD (n = 4).
serapan tumor 64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 ketika tidak ada agen
pemblokiran yang disuntikkan secara koin.
MicroPET dan Autoradiografi Kami
menggunakan microPET untuk secara semikuantitatif mencitrakan
ekspresi integ rin pada tumor kanker paru ortotopik dan metastasisnya.
Gambar proyeksi 2D dari tikus yang disuntikkan 2 jam sebelumnya dengan
64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 (pemindaian statis 15 menit) ditunjukkan
pada Gambar 5. Tumor primer (lobus atas kiri pada interkostal keempat
ruang) dan metastasisnya ke paru kontralateral keduanya divisualisasikan
dengan baik. Sebagai perbandingan, pemindaian FDG pada tikus yang
sama mengidentifikasi tumor primer tetapi gagal memvisualisasikan
metastasis apa pun, mungkin karena serapan miokard yang signifikan di
dekatnya. Bagian koronal termasuk tumor ortotopik primer dan tumor
subkutan di sisi kanan dengan jelas menggambarkan tumor primer dan
metastasisnya ke paru kontralateral, mediastinum, dan diafragma.
Autoradiografi seluruh tubuh (resolusi 100 mm) sangat sesuai dengan
temuan mikroPET (Gbr. 5). Analisis ROI dari gambar FDG PET
menunjukkan rasio tumor-ke-otot primer sebesar 4,8 dan rasio tumor-ke-
paru primer sebesar 1,5. SUV. Pelacak peptida RGD memiliki kontras
tumor-ke-latar belakang yang jauh lebih tinggi daripada FDG, mengikuti
tren tumor subkutan> tumor primer> metastasis (paru-paru kontralateral).
Pembahasan
Studi ini menunjukkan bahwa 64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 adalah
pelacak radionuklida pemancar positron yang sangat baik untuk visualisasi
tumor NSCLC dan metastasisnya berdasarkan ekspresi integrin. Kontras
tumor-ke-paru yang tinggi disebabkan oleh
Neoplasma . Vol.7, No.3, 2005
Machine Translated by Google
Pencitraan PET dari Kanker Paru Chen et al. 277

Tabel 1. Biodistribusi 64Cu-Labeled PEGylated Dimeric RGD Peptide (64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2) pada Pria SCID-bg Mice Bearing Subcutaneous NCI-H1975 NSCLC Tumors di Sisi Kanan.

0,5 jam 1 jam 2 jam 4 jam 24 jam blok 1 jam

Darah 0,57 ± 0,19 0,17 ± 0,02 0,05 ± 0,01 0,04 ± 0,02 0,04 ± 0,01 0,16 ± 0,04
Otot 0,37 ± 0,05 0,46 ± 0,12 0,22 ± 0,03 0,16 ± 0,03 0,15 ± 0,03 0,81 ± 0,07
Tumor 1,87 ± 0,05 2,64 ± 0,14 1,35 ± 0,06 1,46 ± 0,12 1,15 ± 0,07 0,68 ± 0,10
Kulit 0,92 ± 0,05 0,55 ± 0,11 0,56 ± 0,34 0,38 ± 0,09 0,47 ± 0,01 0,31 ± 0,07
Tulang 0,56 ± 0,32 0,58 ± 0,14 0,33 ± 0,05 0,33 ± 0,01 0,37 ± 0,08 0,42 ± 0,21
Jantung 0,52 ± 0,15 0,31 ± 0,07 0,25 ± 0,02 0,25 ± 0,04 0,23 ± 0,03 0,14 ± 0,05
Paru-paru 1,31 ± 0,35 0,78 ± 0,09 0,51 ± 0,08 0,55 ± 0,05 0,46 ± 0,05 0,48 ± 0,12
Hati 0,83 ± 0,17 0,94 ± 0,20 0,77 ± 0,09 1,01 ± 0,09 0,88 ± 0,01 0,36 ± 0,04
Ginjal 3,50 ± 0,54 1,92 ± 0,26 1,63 ± 0,04 1,61 ± 0,17 1,15 ± 0,11 1,33 ± 0,12
Limpa 1,01 ± 0,48 1,23 ± 0,18 0,94 ± 0,06 1,30 ± 0,21 1,15 ± 0,10 0,28 ± 0,04
Pankreas 0,43 ± 0,25 0,29 ± 0,01 0,16 ± 0,01 0,18 ± 0,01 0,18 ± 0,03 0,15 ± 0,12
Perut 1,25 ± 0,06 1,16 ± 0,22 0,87 ± 0,03 0,90 ± 0,13 0,66 ± 0,11 0,23 ± 0,04
Usus halus 1,30 ± 0,09 0,90 ± 0,35 0,83 ± 0,08 1,02 ± 0,14 0,73 ± 0,05 0,29 ± 0,14
Tumor/darah 3,58 ± 1,43 15,3 ± 1,06 27,9 ± 6,37 36,9 ± 13,1 28,7 ± 3,71 4,64 ± 2,19
Tumor/otot 5,07 ± 0,69 6,07 ± 1,68 6,17 ± 1,02 8,99 ± 1,59 7,60 ± 0,94 0,83 ± 0,05
Tumor/paru-paru 1,51 ± 0,48 3,41 ± 0,29 2,68 ± 0,51 2,65 ± 0,22 2,45 ± 0,14 1,44 ± 0,33

Data dilaporkan sebagai persentase dosis yang disuntikkan per gram ± standar deviasi pada titik waktu yang berbeda setelah injeksi radioaktivitas 20 mCi. Eksperimen pemblokiran selama 1 jam dilakukan
dengan injeksi koin 10 mg/kg c(RGDyK) (n = 3).

kurangnya ekspresi integrin pada jaringan dan organ normal, dan pembersihan radiolabel dari rute hepatobilier untuk monomer ke rute
akibatnya akumulasi aktivitas jantung dan paru nonspesifik minimal ginjal dominan untuk dimer [26].
dengan radiotracer ini. Tikus yang mengandung tumor yang dicitrakan Meskipun keberhasilan peptida RGD berlabel 18F untuk ekspresi
dengan FDG menunjukkan kontras tumor yang rendah dan integrin pencitraan dalam berbagai model tumor praklinis, penting
ketidakmampuan untuk menggambarkan metastasis tumor karena juga untuk mengembangkan peptida RGD berlabel radiometal seperti
serapan jantung yang intens. 64Cu (t1/2 = 12,7 jam) untuk pencitraan PET karena adanya pasangan
Sebagian besar tumor padat bergantung pada angiogenesis dan, pencitraan/terapi radio nuklida dari logam-logam ini (yaitu, 64Cu/
oleh karena itu, berbagai penargetan pengobatan antiangiogenik 67Cu dan 86Y/90Y).
pada mekanisme molekuler yang berbeda sedang dieksplorasi [13,42,43]. Radiotracer yang diberi label isotop "pencitraan" dapat digunakan
Dengan meningkatnya jumlah obat antiangiogenik yang tersedia yang untuk menentukan dosimetri dan memantau respons tumor untuk
menargetkan jalur yang berbeda, mungkin berguna untuk memilih ligan yang sama yang diberi label dengan isotop terapeutik yang
rejimen terapeutik berdasarkan karakteristik molekul tumor pada sesuai. Dengan tujuan ini, kami awalnya mengkonjugasikan
masing-masing pasien seperti yang diidentifikasi oleh agen pencitraan makrosiklik chelator DOTA dengan RGD monomer
in vivo selektif. Ekspresi integrin avb3 yang berlebihan pada kedua
sel tumor dan pertumbuhan pembuluh darah tumor, tetapi tidak pada
sebagian besar jaringan normal dan sel endotel istirahat, merupakan
target yang sangat baik untuk intervensi antiangiogenik [16].
Uji klinis dan studi praklinis baru-baru ini menunjukkan bahwa ekspresi
avb3 berkorelasi positif dengan potensi metastasis tumor dan bahwa
terapi anti-integin menggunakan antagonis avb3 paling efektif dengan
tumor positif integrin [16,18]. Pencitraan ekspresi avb3 non invasif
sangat penting untuk seleksi pasien dan pemantauan noninvasif
terhadap efikasi pengobatan anti-integrin [17,19].

Serangkaian peptida RGD siklik telah diberi label dengan 18F (t1/2
= 109,7 menit) untuk pencitraan PET dari ekspresi integrin tumor
[22,23,25,26,29,30]. Pengenalan kelompok pelabelan 18F prostetik
yang cukup besar (4-[18F]fluorobenzoyl atau 2-[18F]fluoropropionate)
ke peptida RGD monomer menghasilkan ekskresi hepatobilier yang
tidak menguntungkan dan pencucian tumor yang cepat [22,23].
Memasukkan bagian gula amino [29,30] atau PEG [25] antara urutan Gambar 5. Gambar mikroPET proyeksi 2D dari tikus SCID-bg yang mengandung tumor NCI-
RGD yang mengikat integrin dan label 18F meningkatkan hidrofilisitas H1975 subkutan dan ortotopik. Tikus yang sama dibius dan dipindai dengan [18F]FDG (hari 1)

dan dengan demikian meningkatkan kemanjuran penargetan tumor dan 64Cu-DOTA-PEG E[cRGDyK)]2 (hari 2). Kiri: Pemindaian statis selama lima belas menit
dimulai 30 menit setelah injeksi FDG 200 Ci secara intravena. Kanan: Pemindaian statis lima
dan farmakokinetik dari radiotracer yang dihasilkan. Baru-baru ini, belas menit dimulai 2 jam setelah injeksi 300 Ci 64Cu-DOTA-PEG E[cRGDyK)]2. (1) Tumor
juga telah ditemukan bahwa peptida RGD dimer berlabel 18F dengan ortotopik primer di lobus atas paru kiri; (2) metastasis paru kontralateral; (3) tumor subkutan; (4)

afinitas pengikatan reseptor yang lebih tinggi daripada bagian lawan hati; (5) hati; (6) ginjal; dan (7) kandung kemih. Daerah yang diidentifikasi sebagai tumor
dikonfirmasi dengan cryosectioning dan autoradiografi setelah pemindaian 64Cu (Gambar 6).
monomer yang sesuai menghasilkan peningkatan serapan dan
pergeseran tumor yang signifikan.

Neoplasma . Vol.7, No.3, 2005

Machine Translated by Google
278 Pencitraan PET Kanker Paru Chen et al.
Gambar 6. Kiri: Gambar koronal dari tikus pembawa tumor yang sama seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5. Baik tumor primer maupun metastasis diidentifikasi
dengan jelas. Kanan: WBDA dari bagian setebal 50 m berkorelasi dengan baik dengan irisan mikroPET koronal yang ditunjukkan di sebelah kiri. (A) Tumor ortotopik
primer di lobus atas paru kiri; (B) metastasis lokal dari tumor primer; (C) metastasis paru kontralateral; (D) metastasis di diafragma; (E) tumor subkutan; dan (F) hati.
peptida c (RGDyK) dan mengevaluasi radiotracer 64Cu-DOTA
c (RGDyK) yang dihasilkan dalam model xenograft kanker
payudara MDA-MB-435. Meskipun pelacak peptida RGD
monomer mampu menggambarkan tumor dari latar belakang, ia
juga memiliki akumulasi aktivitas tinggi di hati. Mirip dengan
peptida RGD dimer berlabel 18F, pelacak peptida RGD dimer
terkonjugasi DOTA 64Cu-DOTA-E[c(RGDyK)]2 memiliki serapan
tumor hampir dua kali lebih banyak dan serapan ginjal agak
meningkat dibandingkan dengan pelacak peptida RGD monomer
yang sesuai 64Cu -DOTA-c(RGDyK). Tidak ada perbedaan yang
signifikan dalam pembersihan darah atau akumulasi aktivitas
hati antara bentuk monomer dan dimer. Didorong oleh fakta
bahwa PEGylation meningkatkan kemanjuran penargetan tumor
dan mengurangi ekskresi empedu dari peptida RGD monomerik
berlabel 18F [22], kami berharap bahwa peptida RGD dimerik
PEGylated ketika diberi label dengan 64Cu juga akan
meningkatkan kinetika in vivo. Memang, 64Cu-DOTA-PEG
E[c(RGDyK)]2 memiliki pembersihan darah yang serupa,
pembersihan ginjal yang lebih cepat, dan secara signifikan
mengurangi serapan hati dibandingkan dengan 64Cu-DOTA-
E[c(RGDyK)]2 [27]. Namun, serapan tumor juga diturunkan
karena fakta bahwa dimer PEGylated RGD memiliki afinitas
pengikatan reseptor yang lebih rendah daripada peptida RGD
dimerik (Gambar 3). Kami hanya menguji satu PEG bifungsional
(MW = 3400) dalam penelitian ini. Kami mengantisipasi
penyelidikan sistematis tentang efek ukuran dan geometri PEG
pada penargetan tumor dan biodistribusi label radio dalam upaya
untuk mengembangkan radiotracer dengan aviditas reseptor tinggi dan pada
Lokalisasi tumor yang cepat dengan serapan jaringan normal
yang relatif rendah di luar usus menjadikan 64Cu-DOTA-PEG
E[c(RGDyK)]2 agen yang menjanjikan untuk pencitraan tumor.
Studi pembuktian prinsip yang disajikan di sini menggambarkan
kelayakan tumor NSCLC dan delineasi metastasis dengan
radiotracer ini. Juga mengejutkan bahwa pelacak peptida RGD
dimerik PEGylated terakumulasi lebih spesifik daripada FDG
pada lesi tumor paru primer dan metastatik. Namun, signifikansi
dari temuan ini dipengaruhi oleh fakta bahwa besarnya serapan
tumor mungkin terlalu rendah (kurang dari 3% ID/g) untuk
aplikasi radioterapi reseptor peptida (PRRT). Modifikasi lebih
lanjut dapat mengarah pada identifikasi ligan reseptor integrin
berlabel radioaktif untuk pencitraan PET dan terapi target.
Kesimpulan
Pelacak radio peptida RGD dimerik RGD berlabel PEGylated
64Cu dievaluasi sebagai agen pencitraan untuk NSCLC manusia
di mana integrin avb3 diekspresikan dengan kuat. Pada sel
kanker paru-paru (NCI-H1975) yang mengekspresikan integrin
avb3 , pengikatan [125I]echistatin dihambat oleh ligan DOTA
PEG-E[c(RGDyK)2 dengan cara log dose-dependent,
menunjukkan bahwa ligan terikat ke reseptor permukaan sel.
Nilai IC50 dari dimer PEGylated RGD lebih rendah daripada
peptida RGD dimer yang tidak dimodifikasi, menunjukkan
melemahnya interaksi ligan-reseptor pada modifikasi PEG.
Distribusi 64Cu-DOTA-PEG-E[c(RGDyK)]2 dalam model
xenograft NCI-H1975 yang ditanam secara subkutan menunjukkan
pembersihan darah yang cepat dan akumulasi aktivitas tumor
spesifik reseptor. Karena serapan nonspesifik yang terbatas
perilaku sistemik
organ yang optimal.
dan jaringan normal yang tidak mengekspresikan
integrin avb3, rasio tumor-ke-latar belakang yang sangat baik
diperoleh pada semua titik waktu yang diperiksa. MicroPET dan
pencitraan grafis autoradio digital seluruh tubuh dari model
kanker paru ortotopik memberikan gambaran yang jelas dari nodul adenokarsinom
Neoplasma . Vol.7, No.3, 2005
Machine Translated by Google
Pencitraan PET dari Kanker Paru Chen et al. 279

serta metastasisnya ke mediastinum, paru kontralateral, dan [23] Chen X, Park R, Tohme M, Shahinian AH, dan Bading PS (2004).
MicroPET dan pencitraan autoradiografi ekspresi av-integrin kanker payudara
diafragma. Visualisasi tumor dengan 64Cu-DOTA PEG- menggunakan peptida RGD berlabel 18F- dan 64Cu. Bioconjug Chem 15, 41 – 49.
E[c(RGDyK)]2 lebih unggul dibandingkan dengan pelacak
metabolik [18F]FDG, yang tidak mengidentifikasi lesi [24] Chen X, Park R, Shahinian AH, Bading JR, dan Conti PS (2004).
Farmakokinetik dan retensi tumor dari peptida RGD berlabel 125I ditingkatkan
metastatik karena serapan jantung yang intens. Data in vivo dengan PEGylation. Nucl Med Biol 31, 11 – 19.
sangat menyarankan bahwa ligan peptida dari kelas ini [25] Chen X, Park R, Hou Y, Khankaldyyan V, Gonzales-Gomez I, Tohme M, Bading JR,
menjanjikan untuk pencitraan ekspresi integrin pada kanker Laug WE, dan Conti PS (2004). Pencitraan MicroPET dari angiogenesis tumor
otak dengan peptida RGD PEGylated berlabel 18F.
paru-paru. Modifikasi lebih lanjut untuk meningkatkan Pencitraan Eur J Nucl Med Mol 31, 1081 – 1089.
besarnya serapan tumor untuk radioterapi internal bertarget integrin[26]
diperlukan.
Chen X, Tohme M, Park R, Hou Y, Bading JR, and Conti PS (2004).
Pencitraan MicroPET dari ekspresi integrin avb3 dengan peptida RGD dimer
berlabel 18F. Pencitraan Mol 3, 96 – 104.
[27] Chen X, Liu S, Hou Y, Tohme M, Park R, Bading JR, and Conti PS (2004). Pencitraan
Referensi MicroPET ekspresi av-integrin kanker payudara dengan peptida RGD dimer
[1] Jemal A, Tiwari RC, Murray T, Ghafoor A, Samuels A, Ward E, Feuer EJ, and Thun berlabel 64Cu. Pencitraan Mol Biol 6, 350 – 359.
MJ (2004). Statistik kanker, 2004. CA Cancer J Clin 54, 8 – 29. [28] Chen X, Hou Y, Tohme M, Park R, Khankaldyyan V, Gonzales-Gomez I, Bading JR,
Laug WE, dan Conti PS (2004). Peptida RGD PEGylated: pelabelan 64Cu dan
[2] Mulshine JL, Cuttitta F, Tockman MS, dan De Luca LM (2002). pencitraan PET dari ekspresi integrin avb3 tumor otak .
Evolusi kanker paru-paru ke manajemen pra-invasif. Clin Dada Med 23, 37 – 48. J Nucl Med 45, 1776–1783.
[29] Haubner R, Kuhnast B, Mang C, Weber WA, Kessler H, Wester HJ, dan Schwaiger
[3] Park BJ dan Altorki NK (2002). Diagnosis dan penatalaksanaan sejak dini M (2004). [18F] Galacto-RGD: sintesis, radiolabeling, stabilitas metabolik, dan
kanker paru-paru. Surg Clinic North Am 82, 457 – 476. perkiraan dosis radiasi. Bioconjug Chem 15, 61 – 69.
[4] Spira A dan Ettinger DS (2004). Penatalaksanaan multidisiplin paru
kanker. N Engl J Med 350, 379 – 392. [30] Haubner R, Wester HJ, Weber WA, Mang C, Ziegler SI, Goodman SL, Senekowitsch-
[5] Danesi R, de Braud F, Fogli S, de Pas TM, Di Paolo A, Curigliano G, and Del Tacca Schmidtke R, Kessler H, and Schwaiger M (2001).
M (2003). Farmakogenetik sensitivitas obat antikanker pada kanker paru-paru Pencitraan non-invasif dari ekspresi integrin avb3 menggunakan glikopeptida
non-sel kecil. Pharmacol Rev 55, 57 - 103. yang mengandung RGD berlabel 18F dan tomografi emisi positron.
[6] Sandler AB (2003). Agen target molekuler di paru-paru non-sel kecil Kanker Res 61, 1781 – 1785.
kanker. Klinik Kanker Paru 5, S22 – S28. [31] Haubner R, Wester HJ, Burkhart F, Senekowitsch-Schmidtke R, Weber W, Goodman
[7] Etzioni R, Urban N, Ramsey S, McIntosh M, Schwartz S, Reid B, Radich J, Anderson SL, Kessler H, dan Schwaiger M (2001). Peptida yang mengandung RGD
G, dan Hartwell L (2003). Kasus deteksi dini. Nat Rev Kanker 3, 243 – 252. terglikosilasi: pelacak untuk penargetan tumor dan pencitraan angiogenesis
dengan biokinetik yang lebih baik. J Nucl Med 42, 326 – 336.
[8] Jalur BR dan CS Putih (2004). Pemindaian tomografi emisi positron untuk diagnosis [32] Haubner R, Wester HJ, Reuning U, Senekowitsch-Schmidtke R, Diefenbach B,
dan pengelolaan kanker paru-paru. Curr Treat Pilihan Oncol 5, 63 – 73. Kessler H, Stocklin G, dan Schwaiger M (1999). Antagonis integrin avb3 berlabel
radio : kelas pelacak baru untuk penargetan tumor. J Nucl Med 40, 1061 – 1071.
[9] Seltzer MA, Yap CS, Silverman DH, Meta J, Schiepers C, Phelps ME, Gambhir SS,
Rao J, Valk PE, dan Czernin J (2002). Dampak PET pada pengelolaan kanker [33] Janssen M, Oyen WJ, Massuger LF, Frielink C, Dijkgraaf I, Edwards DS, Radjopadhye
paru-paru: perspektif dokter yang merujuk. J Nucl Med 43, 752 – 756. M, Corstens FH, dan Boerman OC (2002). Perbandingan RGD-peptida radiolabel
monomer dan dimer untuk penargetan tumor. Cancer Biother Radiopharm 17,
[10] Rohren EM, Turkington TG, dan Coleman RE (2004). Aplikasi klinis PET dalam 641–646.
onkologi. Radiologi 231, 305 – 332. [34] Janssen ML, Oyen WJ, Dijkgraaf I, Massuger LF, Frielink C, Edwards DS,
[11] Weber V, Petersen WA, Schmidt B, Tyndale-Hines L, Link T, Peschel C, dan Rajopadhye M, Boonstra H, Corstens FH, dan Boerman OC (2002). Penargetan
Schwaiger M (2003). Tomografi emisi positron pada kanker paru-paru non-sel tumor dengan peptida pengikat integrin avb3 berlabel radioaktif dalam model tikus
kecil: prediksi respons terhadap kemoterapi dengan penilaian kuantitatif telanjang. Cancer Res 62, 6146 – 6151. [35] van Hagen PM,
penggunaan glukosa. J Clinic Oncol 21, 2651 – 2667. Breeman WA, Bernard HF, Schaar M, Mooij CM, Srinivasan A, Schmidt MA, Krenning
[12] Kirsch M, Schackert G, dan Black PM (2004). Metastasis dan angiogenesis. EP, dan de Jong M (2000). Evaluasi analog DTPA-RGD siklik berlabel radioaktif
Pengobatan Kanker Res 117, 285 – 304. untuk pencitraan tumor dan terapi radionuklida. Kanker Int J 90, 186 – 198.
[13] Kerbel RS (2004). Obat antiangiogenik dan strategi saat ini untuk pengobatan kanker
paru-paru. Semin Oncol 31, 54 – 60. [36] Ellegala DB, Leong-Poi H, Carpenter JE, Klibanov AL, Kaul S, Shaffrey ME, Sklenar
[14] Strieter RM, Belperio JA, Phillips RJ, dan Keane MP (2004). Kines kemo: J, dan Lindner JR (2003). Pencitraan angiogenesis tumor dengan ultrasonografi
angiogenesis dan metastasis pada kanker paru-paru. Novartis Menemukan Symp kontras dan gelembung mikro yang ditargetkan ke avb3. Sirkulasi 108, 336 – 341.
256, 173 – 184.
[15] Smythe WR, LeBel E, Bavaria JE, Kaiser LR, dan Albelda SM (1995). [37] McCarthy DW, Shefer RE, Klinkowstein RE, Bass LA, Margeneau WH, Cutler CS,
Ekspresi integrin pada karsinoma paru non-sel kecil. Metastasis Kanker Rev 14, Anderson CJ, dan Welch MJ (1997). Produksi efisien aktivitas spesifik tinggi 64Cu
229 – 239. menggunakan siklotron biomedis. Nucl Med Biol 24, 35 – 43.
[16] TuckerGC (2003). av Integrin inhibitor dan terapi kanker. Curr Opin Investasikan
Obat 4, 722 – 731. [38] Kumar CC, Nie H, Rogers CP, Malkowski M, Maxwell E, Catino JJ, dan Armstrong L
[17] McQuade P dan Knight LC (2003). Radiofarmasi untuk penargetan (1997). Karakterisasi biokimia dari pengikatan echis tatin ke reseptor integrin
penanda angiogenesis avb3. QJ Nucl Med 47, 209 – 220. avb3 . J Pharmacol Exp Ada 283, 843 – 853.
[18] Kumar CC (2003). Integrin avb3 sebagai target terapi untuk pemblokiran [39] Diperna CA, Bart RD, Sievers EM, Ma Y, Starnes VA, dan Bremner RM (2003).
angiogenesis yang diinduksi oleh tumor. Target Obat Curr 4, 123 – 131. Penghambatan siklooksigenase-2 menurunkan beban tumor primer dan metastatik
[19] Haubner RH, Wester HJ, Weber WA, dan Schwaiger M (2003). dalam model murine adenokarsinoma paru ortotopik.
Strategi berbasis radiotracer untuk mencitrakan angiogenesis. QJ Nucl Med 47, J Thorac Cardiovasc Surg 126, 1129 – 1133.
189 – 199. [40] Qi J, Leahy RM, Cherry SR, Chatziioannou A, dan Farquhar TH (1998).
[20] Sipkins DA, Cheresh DA, Kazemi MR, Nevin LM, Bednarski MD, dan Li KC (1998). Rekonstruksi gambar Bayesian 3D beresolusi tinggi menggunakan pemindai
Deteksi angiogenesis tumor in vivo dengan pencitraan resonansi magnetik hewan kecil microPET. Phys Med Biol 43, 1001 – 1013.
bertarget avb3. Nat Med 4, 623 – 626. [41] Chen X, Park P, Hou Y, Shahinian AH, Tohme M, Bading JR, dan Conti PS (2004).
[21] Anderson SA, Rader RK, Westlin WF, Null C, Jackson D, Lanza GM, Wickline SA, MicroPET dan pencitraan autoradiografi dari ekspresi reseptor GRP dengan 64Cu-
dan Kotyk JJ (2000). Peningkatan kontras resonansi magnetik neovaskularisasi DOTA-[Lys3 ]bombesin pada xenografts karsinoma adenoprostat manusia. J
dengan nanopartikel bertarget avb3. Magn Reson Med 44, 433 – 439. Nucl Med 45, 1390 – 1397.
[42] Waspada KK (2004). Target molekuler untuk terapi anti-angiogenik. Curr Opin Mol
[22] Chen X, Park R, Shahinian AH, Tohme M, Khankaldyyan V, Bozorgzadeh MH, Ada 6, 54 – 70.
Bading JR, Moats R, Laug WE, and Conti PS (2004). Peptida RGD berlabel 18F: [43] Longo R, Sarmiento R, Fanelli M, Capaccetti B, Gattuso D, and Gasparini G (2002).
evaluasi awal untuk pencitraan angiogenesis tumor otak. Terapi anti-angiogenik: rasional, tantangan dan studi klinis. Angiogenesis 5, 237
Nucl Med Biol 31, 179 – 189. – 256.

Neoplasma . Vol.7, No.3, 2005