Alat

1. Mikropipet

2. Erlenmeyer

3. Satu Perangkat Alat SDS Page

4. Chamber

5. Sumuran

6. Pencetak Gel

7. Power Supplay

8. Mikrotube

Bahan

1. Sampel Yg Sudah Dipreparasi

2. Acrilamide

3. Temed

4. Tris

5. -Glisin

6. SDS 10% (Sodium Dedecyl Sulfat)

7. H2O (Aquadest)

8. Dis H2O

9. Aps 10% (Amonium Persulfat)

10. -N,N'-Methylenebisacrylamide (Bis Acrilamide)

11. Butanol (Iso-Propanol)

12. Metanol

13. Asam Asetat Glasial

14. Comassie Blue 0,25% Dan 0,1 %

Cara kerja

1. pembuatan larutan akrilamid 30%

1. Disiapkan alat dan bahan

2. Ditimbang bahan yang akan digunakan yaitu akrilami 29 gram dan n, n' metilen
bisacrelamid (bis acrealamid) 1 gram

3. Dimasukkan bahan ke dalam

4. Dilarutkan dalam 100 ml dh2o (aquadest) hingga homogen

5. Disaring bahan

2. Pembuatan elektroda buffer (running buffer) konsentrasi 5 x

1. Disiapkan alat dan bahan

2. Ditimbang bahan yaitu treas base 15,1 g, glisin 34 g, SDS 10% 50 ml

3. Dicampurkan semua bahan ke dalam gelas kimia dan ditambahkan aquades sampai 1000
ml (1 liter)

4. Diaduk bahan menggunakan alat spirer atau batang pengaduk sampai bulir atau serbuk
bahan hilang hingga larutan berwarna bening

3. Pembuatan gradien jel atau separating gel (15 ml)

1. Disiapkan alat dan bahan

2. Ditimbang bahan yang akan digunakan yaitu acrilamid 30%, Tris (PH 8,8), SDS 10%,
dH2O, APS 10%, dan TEMED dalam konsentrasi yang akan dibuat (12%, 10%, 8%)

3. Ditambahkan dH2O dalam cetakan gel dengan konsentrasi yang telah ditetapkan (12%,
10% dan 8%)

4. Ditambahkan akrilamide, Tris (PH 8,8), SDS 10%, APS 10% dan terakhir tambahkan
TEMED dalam konsentrasi 12%, 10% dan 8% ke dalam cetakan gel

5. Ditambahkan aquades atau iso-propanol (Butanol) sebanyak 0,2 - 0,5 ml pada permukaan
gradien gel untuk meratakan permukaan gel
4. Pembuatan stacking gel

1. Disiapkan alat dan bahan

2. Ditimbang bahan yang akan digunakan yaitu dH2O 2,7 ml, akrilamid 30% 0,67 ml, Tris
(PH 6,8) 0,5 ml, SDS 10% 0,04 ml, APS 10% 0,04 ml dan TEMED 0,004 ml

3. Ditambahkan dh2o ke arah dalam cetakan gel kemudian tambahkan akrilamid 30%, Tris
(PH 6,8), SDS 10%, APS 10%, dan terakhir TEMED ke dalam cetakan gel

5. Proses pencetakan gel

1. Disiapkan alat dan bahan untuk menceritakan gel

2. Dituang separating gel yang sudah dibuat ke dalam alat pencetak gel

3. Ditambahkan butanol atau aquades pada permukaan gel jika terbentuk gelembung,
tunggu hingga larutan kering setelah larutan kering tambahkan steking gel kemudian
ditambahkan ke dalam cetakan gel

4. Ditunggu hingga kering lalu cetakan gel diambil

6. Proses poliakrelamigel elektroforesis (PAGE) / Running

1. Disiapkan alat dan bahan PAGE

2. Ditambahkan sampel di atas seumuran gel menggunakan mikropipet dengan tip yang
sesuai diisi hingga penuh

3. Dinyalakan power supplay (on) saat alat bekerja (running) protein yang saling bercampur
dengan satu sama lain akan melewati pori-pori dan akan terpisah (protein yang berat akan
berada di atas permukaan dan protein yang ringan berada di bawah)

7. Staining (pewarnaan pita protein)

1. Disiapkan alat dan bahan

2. Ditimbang bahan komasie blue 0,25% atau 0,1% (0,25 gram dan 0,1 gram), metanol (50
ml dan 40 ml), asam asetat glasial (10 ml dan 10 ml dan aquades (40 ml dan 50 ml)
 3. Dicampurkan semua bahan (pewarnaan tergantung dari presentase separating gel jika
separating gel tinggi 0,25% dan jika rendah 0,1%)

4. Di homogenkan dengan menggunakan magnetik spirer 1 - 2 jam

8. Destaining (penghilang warna CBB)

1. Disiapkan alat dan bahan

2. Ditimbang bahan yaitu metanol 50% atau 40% (500 ml/400 ml) asam asetat glasial 10%
(100 ml/100 ml) dan aquades (400 ml/500 ml)

3. Dilakukan press gel

9. Press gel

1. Disiapkan alat dan bahan untuk press gel

2. Diletakkan mangkuk terbalik diatas nampan sebagai penyangga kaca yang diletakkan di
atasnya

3. Dibasahi kaca dengan aquadest lalu letakkan plastic press di atasnya

4. Diratakan plastic sampai tidak ada gelembung di sekitarnya untuk menghindari pecahnya
gel

5. Diletakkan gel di atas plastik dan siram dengan aquadest lalu letakkan plastic ke dua di
atas gel

6. Disiram dengan aquadest dan ratakan sampai tidak ada gelembung

7. Ditunggu sampai kering selama ± 2 hari dan simpan di tempat yang gelap sebelum
dilakukan pembacaan