PEMERIKSAAN TPHA

NO DOKUMEN REVISI HALAMAN

UNIMUS/IK/LAB/001 00 1/5

Ditetapkan oleh, Mengetahui,

Kepala Laboratorium Direktur
INSTRUKSI Semarang,
01 Januari 2021
KERJA
Syafira Widihastuti, Amd.Kes Umi Amalia, SE,M.Kom

I. PELAKSANA : STAF ANALIS

: TPHA Reagen digunakan untuk memeriksa serum / antibodi plasma manusia

T. palidum melalui metode Indirect Hemagglutination (IHA). Eritrosit unggas
yang diawetkan melayani dengan komponen antigenik pathogen T. palidum
(Ketegangan Nichol). Sel Tes ini menggumpal dengan adanya antibodi spesifik
II. PRINSIP terhadap T. palidum, dan menunjukkan pola di pelataran mikrotitrasi.
Setiap reaksi non-spesifik yang terjadi dideteksi menggunakan Sel Kontrol,
yaitu eritrosit unggas yang tidak memungkinkan T. palidum antigen. Antibodi
terhadap treponema non-patogen diserap oleh ekstrak treponema Reiter,
termasuk dalam suspensi sel uji. Hasil tes diperoleh dalam 45-60 menit dan
pola aglutinasi mudah dibaca dan tahan lama.
III. METODE Metode Semi Kuantitatif
IV. SAMPEL

(i) Jenis : Serum dan Plasma

(ii) Jumlah : 2 ml

(iii) Stabilitas : 2°C sampai 8°C hingga 7 hari sebelum pengujian.

Jika penyimpanan lebih lama diperlukan, simpan di –20°C (hanya sekali).
Spesimen yang dicairkan harus dilakukan sebelum penguji
 Pemeriksaan TPHA
No Dokumen Revisi Halaman

UNIMUS/IK/LAB/001 00 2/5

V. REAGEN
(i) jenis
: Buffer Pengencer (Botol R1), Uji Suspensi sel (Vial R2), Kontrol Penangguhan

sel (Botol R3), Serum Kontrol Positif sebelumnya 1/20 (Botol R4), Serum

Kontrol Negatif sebelumnya 1/20 (Botol R5).

(ii) Penyimpanan : Simpan pada 2-8 ° C bebas dari cahaya.

(iii) Stabilitas dan 1. Jika kontaminasi bebas, disimpan dalam botol asli dan digunakan seperti
penyimpanan yang benar dalam lembar data teknis, stabilkan reagen hingga tanggal
reagen : kedaluwarsa yang terlihat pada label kit dan komponen.
2. Reagen harus disimpan sepanjang waktu dalam berdiri tegak.
3. Buang reagen apa pun jika terkontaminasi.
4. Jangan gunakan reagen setelah tanggal kadaluwarsa.
5. Reagen dalam setiap kit telah distandarisasi untuk menghasilkan reaksi yang
tepat dan reagen tidak boleh diganti dengan reagen dari batch lain.

VI. KONTROL
(i) Jenis
Kontrol positif dan negatif disertakan dalam kit ini. Program kendali mutu
eksternal.

(ii) Penanganan 1. Setidaknya sekali lari.

2. Setidaknya sekali dalam 24 jam.
3. Saat mengganti botol reagen.
4. Jika kontrol tidak benar, terapkan tindakan berikut:
a) Ulangi pengujian dengan kontrol yang sama.
b) Jika kontrol masih belum benar, coba lagi dengan vial kontrol baru.
c) Jika kontrol masih belum benar, coba lagi dengan vial reagen baru.
d) Jika kontrol masih belum benar, silakan hubungi dukungan teknisi
atau Agen lokal Anda.
 Pemeriksaan TPHA
No Dokumen Revisi Halaman

UNIMUS/IK/LAB/001 00 3/5

VII. KALIBRATOR
(i) Penanganan 1. Setidaknya sekali pemakaian.
2. Setidaknya sekali dalam 24 jam.
3. Saat mengganti botol reagen.
4. Jika kontrol tidak benar, terapkan tindakan berikut:
a) Ulangi pengujian dengan kontrol yang sama.
b) Jika kontrol masih belum benar, coba lagi dengan vial kontrol baru.
c) Jika kontrol masih belum benar, coba lagi dengan vial reagen baru.
d) Jika kontrol masih belum benar, silakan hubungi dukungan teknisi
atau Agen lokal Anda

VIII. ALAT 1. Pipet akurat untuk pengiriman 10, 25, 75, 190 µL
2. Plat titrasi mikro dengan baik.
3. Kit tes TPHA BIOLABO

IX. LANGKAH KERJA : Setiap sampel membutuhkan 8 sumur dari pelat mikrotitrasi berlabel A-H

a) Tambahkan 25 µL pengencer (vial R1) ke sumur B ke inklusif.

b) Pindahkan 25 µL pengenceran serum 1/20 ini dari uji skrining ke
Wells A dan B. Campur dengan baik isi sumur B.
c) Ambil 25 µL serum yang diencerkan dari Well B dan encerkan secara
serial dari Wells B ke H termasuk dalam 25 µL alikuot, buang 25 µL
serum yang diencerkan dari Well H.
d) Pastikan Sel Tes disuspensi ulang secara menyeluruh. Tambahkan 75
µL sel Tes ke sumur A ke H inklusif.
e) Ini akan memberikan pengenceran serum 1/80 di Sumur A hingga
1/10240 Sumur H.
f) Kocok piring dengan lembut agar isinya tercampur rata.
g) Tutupi pelataran dan perlindungan dari sinar matahari langsung,
panas, dan sumber getaran.
h) Inkubasi selama 45-60 menit pada suhu kamar.
i) Baca hasil. Hasil stabil selama 24 jam jika ditutup dan
tindakanpencegahan di atas perhatikan.
j) Di akhir penguji, buang pelat bekas (lihat § Perhatian Keamanan).
 Pemeriksaan TPHA
No Dokumen Revisi Halaman

UNIMUS/IK/LAB/001 00 4/5

X. HASIL 1. Hasil Reaktif/Positif

2. Hasil Non Reaktif/Negatif

XI. INTERPRESTASI
HASIL

Keterangan :
1. Setiap spesimen yang memberikan aglutinasi kurang dari “+/-“ adalah
Negatif.
2. Setiap spesimen yang memberikan aglutinasi lebih besar dari "+/-" harus
disebut sebagai positif sementara, dan pengujian prosedur diulang seperti di
atas, tetapi dalam duplikat, menambahkan Sel
3. Kontrol yang diberikan ke satu set sumur, dan Sel Uji ke yang lain.
4. Jika aglutinasi dengan Sel Uji lebih besar dengan Sel Kontrol, spesimen positif
mengandung antibodi anti-treponemal, dan harus menjalani tes lebih lanjut
untuk konfirmasi.Jika aglutinasi dengan Sel Kontrol lebih besar atau sama
dengan Sel Uji, prosedur ini untuk absorpsi reaksi non-spesifik harus
diterapkan.
 Pemeriksaan TPHA
No Dokumen Revisi Halaman

UNIMUS/IK/LAB/001 00 5/5

XII. CATATAN : Jangan gunakan serum atau plasma hemolisis, terkontaminasi atau lipemik
untuk pengujian karena hal ini akan mempengaruhi hasil.

: Spesimen dapat disimpan di suhu 2°C sampai 8°C hingga 7 hari sebelum
pengujian. Jika penyimpanan lebih lama diperlukan, simpan di –20°C (hanya
sekali). Spesimen yang dicairkan harus dilakukan sebelum penguji
Refrensi 1. Pedoman Praktik Laboratorium yang benar (Good Laboratory Practice),
Direktorat Laboratorium kesehatan, 2004;
2. BIOLABO Kit TPHA
LAMPIRAN :

1. Kit TPHA Metode Semi Kuantitatif sumber BIOLABO

2. Bahan Kontrol dan spesimen Sumber GLP (Good Laboratory Practice)