TSH – Hormon Penstimulasi Tiroid (CLIA)

Tujuan Penggunaan
Pengujian TSH seri CL adalah Chemiluminescent Immunoassay (CLIA) untuk penentuan
kuantitatif hormon penstimulasi tiroid (Thyroid Stimulating Hormone - TSH) dalam serum
manusia.

Ringkasan
Thyroid Stimulating Hormone (TSH) adalah glikoprotein yang memiliki berat
molekul sekitar 28.000 dalton dan terdiri dari dua subunit. Subunit β membawa informasi
imunologi dan biologis spesifik TSH, sedangkan rantai-α membawa informasi spesifik
spesies dan memiliki sekuens asam amino yang identik dengan rantai-a LH, FSH dan HCG.
Baik subunit alfa dan beta diperlukan untuk aktivitas biologis.1
TSH dibentuk di dalam sel basofil spesifik dari hipofisis anterior dan dikendalikan
oleh hormon pelepas tirotropin, suatu tripeptida yang diproduksi oleh hipotalamus. TSH
merangsang produksi tiroksin (T4) dan triiodothyronine (T3) oleh kelenjar tiroid. Fraksi
bebas T4 dan T3 yang bersirkulasi selanjutnya meregulasi sekresi TSH melalui mekanisme
umpan balik negatif pada hipofisis dan mungkin hipotalamus. 2 Secara kolektif, sistem ini
disebut sebagai aksis hipotalamo-hipofisis-tiroid.
Penentuan TSH berfungsi sebagai pemeriksaan awal dalam diagnostik tiroid.
Bahkan perubahan yang sangat kecil dalam konsentrasi hormon tiroid bebas membawa
perubahan yang berlawanan dan jauh lebih besar pada kadar TSH. Dengan demikian, TSH
adalah parameter yang sangat sensitif dan spesifik untuk menilai fungsi tiroid dan sangat
cocok untuk deteksi dini atau eksklusi gangguan di sirkuit regulator pusat antara
hipotalamus, hipofisis dan tiroid.3-6
Pemeriksaan TSH dengan tingkat presisi yang tinggi dan klaim sensitivitas
fungsional 0,01-0,02 IU/mL telah disebut tes “generasi ketiga”. 7 Pemeriksaan ini berguna
dalam membedakan pasien dengan hipertiroidisme sejati dari pasien lain yang mengalami
supresi TSH yang terlihat pada hipertiroidisme subklinis dan beberapa penyakit non-tiroid. 8
Pemeriksaan TSH seri CL digunakan sebagai bantuan dalam penilaian status tiroid,
diagnosis penyakit tiroid.

Prinsip Uji
Uji TSH seri CL adalah uji sandwich dua situs untuk menentukan kadar TSH.

Pada langkah pertama, sampel, mikropartikel paramagnetik yang dilapisi dengan antibodi
anti-TSH monoklonal (tikus) dan antibodi anti-TSH monoklonal (tikus)-alkalin fosfatase
konjugat ditambahkan ke dalam bejana reaksi. Setelah inkubasi, TSH yang ada dalam
sampel berikatan dengan mikropartikel yang dilapisi antibodi anti-TSH dan konjugat
berlabel alkalin fosfatase antibodi anti-TSH untuk membentuk kompleks sandwich.
Mikropartikel ditangkap secara magnetik sementara zat lain yang tidak terikat dihilangkan
dengan pencucian.

Pada langkah kedua, larutan substrat ditambahkan ke bejana reaksi. Proses ini dikatalisis
oleh antibodi anti-TSH (tikus)- alkalin fosfatase konjugat dalam imunokompleks yang
dipertahankan pada mikropartikel. Reaksi chemiluminescent yang dihasilkan diukur sebagai
unit cahaya relatif (RLU) oleh fotomultiplier yang dibangun ke dalam sistem. Jumlah TSH
yang ada dalam sampel sebanding dengan unit cahaya relatif (RLU) yang dihasilkan selama
reaksi. Konsentrasi TSH dapat ditentukan melalui kurva kalibrasi.

Komponen reagen
Posisi masing-masing komponen reagen ditunjukkan pada gambar di bawah ini (tampak
depan pada gambar sebelah kiri dan tampak atas pada gambar sebelah kanan):

Penyimpanan dan Stabilitas

Kit reagen TSH (CLIA) yang belum dibuka stabil hingga tanggal kedaluwarsa yang
disebutkan bila disimpan pada 2-8°C.
Kit reagen TSH (CLIA) dapat disimpan di fasilitas tersebut dan digunakan maksimal 56
hari setelah dibuka pada suhu 2-8°C.
Persiapan Reagen
Ra: Siap digunakan
Rb: Siap digunakan

Bahan yang Diperlukan tetapi tidak Disediakan

Mindray CL-series Chemiluminescence Immunoassay Analyzer
Katalog No. TSH211: Kalibrator TSH Mindray, 1×2,0 mL untuk masing-masing kalibrator
C0, C1 dan C2
Katalog No. TFL321/TFL322/TFL323/TFL324: Mindray Thyroid Function Multi Control
(L), 1×5.0 mL/3×5.0 mL/6×5.0 mL/12×5.0 mL.
Katalog No. TFH321/TFH322/TFH323/TFH324: Mindray Thyroid Function Multi Control
(H), 1×5.0 mL/3×5.0 mL/6×5.0 mL/12×5.0 mL.
Katalog No.WB411: Mindray Wash Buffer, 1×10 L.
Katalog No. CS511/CS512: Mindray Substrate Solution, 4×115 mL/4×75 mL.
Mindray Reaction Vessels

Instrumen yang dapat diaplikasikan

Mindray CL-series Chemiluminescence Immunoassay Analyzer

Pengumpulan dan Persiapan Spesimen

Serum manusia direkomendasikan untuk pengujian ini.
Sentrifugasi spesimen setelah pembentukan klot selesai. Pindahkan supernatan ke dalam
tabung untuk disimpan atau diuji dalam waktu dua jam setelah sentrifugasi.
Spesimen harus diuji sesegera mungkin setelah pengambilan sampel. Jika pengujian tidak
dilakukan dalam waktu 8 jam, spesimen harus ditutup rapat dan didinginkan pada suhu 2-
8°C. Jika pengujian akan tertunda lebih dari 72 jam, spesimen harus dibekukan pada suhu -
20°C atau lebih rendah.

Hindari siklus pembekuan dan pencairan berulang.

Prosedur Pengujian
Untuk performa yang optimal dari pengujian ini, operator harus membaca manual
pengoperasian sistem terkait dengan cermat, untuk mendapatkan informasi yang adekuat
seperti instruksi pengoperasian, penyimpanan dan pengelolaan sampel, tindakan
pencegahan keselamatan, dan pemeliharaan. Siapkan semua bahan yang diperlukan untuk
pengujian juga.

Sebelum memasukkan kit reagen TSH (CLIA) pada mesin untuk pertama kalinya, botol
reagen yang belum dibuka harus dibalik perlahan setidaknya 30 kali untuk melarutkan
kembali mikropartikel yang telah mengendap selama pengiriman atau penyimpanan.
Periksa botol secara visual untuk memastikan mikropartikel telah tersuspensi kembali. Jika
mikropartikel tetap menempel pada botol, lanjutkan membalik sampai mikropartikel
tersuspensi kembali sepenuhnya. Jika mikropartikel tidak dapat disuspensikan kembali,
disarankan untuk tidak menggunakan botol reagen ini. Hubungi Layanan Pelanggan
Mindray untuk mendapatkan bantuan. Jangan membalik botol reagen yang terbuka.

Pengujian ini membutuhkan 110 μL sampel untuk pengujian tunggal. Volume ini tidak
termasuk volume mati dari wadah sampel. Volume tambahan diperlukan saat melakukan
pengujian tambahan dari sampel yang sama. Operator harus mengacu pada manual
pengoperasian sistem dan persyaratan khusus pengujian untuk menentukan volume sampel
minimum.

Kalibrasi
CL-series TSH (CLIA) telah distandarisasi terhadap hormon penstimulasi tiroid Standar
Internasional WHO (kode NIBSC: 81/565). Informasi spesifik dari kurva kalibrasi master
kit reagen TSH (CLIA) disimpan dalam barcode dua dimensi yang terlampir dalam paket
reagen. Barcode digunakan bersama dengan kalibrator untuk mengkalibrasi lot reagen
spesifik. Saat melakukan kalibrasi, pindai informasi kurva kalibrasi master dari barcode ke
dalam sistem terlebih dahulu, lalu gunakan kalibrator pada tiga tingkat. Kurva kalibrasi
yang valid diperlukan sebelum pemeriksaan TSH apa pun. Rekalibrasi direkomendasikan
dilakukan setiap 4 minggu, atau bila lot reagen baru digunakan, atau kendali mutu berada di
luar rentang yang ditentukan. Untuk instruksi detail tentang kalibrasi, lihat manual operasi
sistem.

Kendali kualitas
Direkomendasikan bahwa kontrol kualitas harus dilakukan setiap 24 jam sekali jika
pengujian sedang digunakan, atau setelah setiap kalibrasi. Frekuensi kontrol kualitas harus
disesuaikan dengan kebutuhan masing-masing laboratorium. Dua tingkat kontrol kualitas
yang direkomendasikan untuk pengujian ini adalah Mindray Thyroid Function Multi
Control (L) dan Thyroid Function Multi Control (H).

Hasil pengendalian kualitas harus berada dalam rentang yang dapat diterima. Jika kontrol
berada di luar rentang yang ditentukan, hasil pengujian terkait tidak valid dan sampel harus
diuji ulang. Kalibrasi ulang mungkin diperlukan. Periksa sistem pengujian dengan mengacu
pada manual pengoperasian sistem. Jika hasil kontrol kualitas masih di luar rentang yang
ditentukan, silakan hubungi Layanan Pelanggan Mindray untuk mendapatkan bantuan.

Kalkulasi
Alat analisis secara otomatis menghitung konsentrasi analit dari setiap sampel pada kurva
kalibrasi master yang dibaca dari barcode, dan 4-Parameter Logistic Curve Fitting (4PLC)
dengan unit cahaya relatif (RLU) yang dihasilkan dari kalibrator tiga tingkat dengan nilai
konsentrasi yang ditentukan. Hasilnya ditunjukkan dalam satuan μIU/mL.

Faktor konversi: μIU/mL x 1 = mIU/L

Dilusi
Sampel dengan konsentrasi TSH di atas batas atas dapat didilusi dengan Mindray Sample
Diluent. Dilusi yang direkomendasikan adalah 1:10 (baik secara otomatis oleh penganalisis
atau secara manual). Konsentrasi sampel yang didilusi harus > 2 μIU/mL. Setelah dilusi
manual, kalikan hasilnya dengan faktor dilusi. Setelah dilusi otomatis oleh analyzer, sistem
secara otomatis mengalikan hasilnya dengan faktor dilusi saat menghitung konsentrasi
sampel.

Nilai yang diperkirakan

Sebuah studi pada kohort dari 530 orang sehat telah menentukan rentang referensi berikut:

Direkomendasikan agar setiap laboratorium menetapkan rentang referensinya sendiri.

Keterbatasan
Batas atas pengujian ini adalah 100 μIU/mL. Spesimen dengan konsentrasi TSH yang lebih
rendah dari batas atas dapat ditentukan secara kuantitatif, sedangkan spesimen dengan
konsentrasi lebih tinggi dari batas atas akan dilaporkan sebagai >100 μIU/mL atau dengan
mendilusi sampel dengan Mindray Sample Diluent.

Konsentrasi TSH dalam spesimen tertentu, ditentukan dengan pengujian dari pabrik yang
berbeda, dapat bervariasi karena perbedaan metode pengujian, kalibrasi, dan spesifisitas
reagen. Hasil pengujian harus digunakan bersama dengan data lain, seperti gejala, hasil tes
lain, riwayat klinis, dll.

Spesimen dari individu yang telah terpapar antibodi monoklonal tikus mungkin
mengandung antibodi anti-tikus manusia (HAMA). Spesimen tersebut dapat menunjukkan
nilai yang meningkat atau rendah secara palsu dengan kit uji yang menggunakan antibodi
monoklonal tikus. Namun, tidak ada gangguan yang jelas dari HAMA yang diamati dalam
pengujian ini.

Karakteristik Performa
Sensitivitas Analitis/Batas Deteksi
Kit reagen TSH (CLIA) memiliki sensitivitas analitis ≤0,005 μIU/mL. Sensitivitas analitik
didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah yang dapat dibedakan dari sampel yang
tidak mengandung analit. Ini didefinisikan sebagai konsentrasi TSH pada dua standar
deviasi di atas rata-rata RLU dari 20 pengukuran sampel bebas analit.
Sensitivitas Fungsional
Kit reagen TSH (CLIA) memiliki sensitivitas fungsional ≤0,02 μIU/mL, yang memenuhi
kriteria uji TSH generasi ketiga. Sensitivitas fungsional didefinisikan sebagai konsentrasi
TSH yang dapat diukur dengan CV interassay 20%.6

Rentang yang Dapat Dilaporkan

Rentang yang dapat dilaporkan ditentukan oleh sensitivitas analitis dan batas atas kurva
kalibrasi master. Rentang kit reagen TSH (CLIA) yang dapat dilaporkan adalah 0,005-100
μIU/mL (atau batas atas hingga 1000μIU/mL untuk 10-kali lipat sampel yang didilusi).

Spesifisitas
Hemoglobin hingga 500 mg/dL, bilirubin hingga 10 mg/dL, trigliserida hingga 1.800
mg/dL, dan total protein hingga 10 g/dL tidak akan mengganggu uji TSH seri-CL. Zat ini
menunjukkan kurang dari 10% gangguan pada konsentrasi yang ditunjukkan.

Tidak ada gangguan yang jelas yang dapat diamati dari faktor rheumatoid hingga 200
IU/mL atau antibodi antinuklear hingga 4,000U/L. Mindray TSH Calibrator C0 dilengkapi
dengan luteinizing hormone (LH), follicle stimulating hormone (FSH) dan human
chorionic gonadotropin (HCG) pada tingkat tertentu yang diindikasikan dalam tabel di
bawah. Tidak ada reaktivitas silang yang jelas teramati karena semua hasilnya ≤0.2
μIU/mL. Hasilnya dinyatakan dalam tabel di bawah ini.

Kait Dosis Tinggi

Untuk uji TSH seri CL, tidak ada efek kait dosis tinggi yang diamati ketika sampel yang
mengandung TSH hingga sekitar 1.000 μIU/mL diuji.

Akurasi
Sampel hormon perangsang tiroid Standar Internasional WHO (kode NIBSC: 81/565)
dengan nilai yang dapat dilacak dan ditentukan digunakan untuk memverifikasi akurasi
pengujian ini. Hasil penelitian menunjukkan bahwa deviasi relatif kurang dari ±10%.
Hasilnya tercantum dalam tabel berikut.

Presisi
Uji TSH seri CL didesain untuk memiliki presisi ≤10% (dalam CV perangkat). Presisi
ditentukan dengan mengikuti National Committee for Clinical Laboratory Standards
(NCCLS) EP5-A2. Dua tingkat kontrol kualitas diuji dalam rangkap dua dalam dua proses
terpisah per hari, dengan total 20 hari, menggunakan satu lot reagen dan satu kurva
kalibrasi. Data presisi diringkas dalam tabel di bawah ini.

Linearitas
Sampel TSH konsentrasi tinggi (sekitar 100 μIU/mL) dicampur dengan sampel konsentrasi
rendah (≤0,01 μIU/mL) pada rasio yang berbeda, yang menghasilkan serangkaian dilusi.
TSH dari setiap dilusi ditentukan menggunakan Mindray CL-Series TSH Assay. Linearitas
ditunjukkan dalam rentang 0,01 μIU/mL sampai 100 μIU/mL，koefisien korelasi r adalah
≥0,990. Data linearitas dirangkum dalam tabel di bawah ini.

Perbandingan Metode
Mindray CL-Series TSH Assay dibandingkan dengan kit diagnostik yang tersedia secara
komersial dalam studi korelasi dengan sekitar 441 spesimen. Data statistik yang diperoleh
dengan mode komputasi Deming ditunjukkan pada tabel di bawah ini.

Peringatan dan pencegahan

1. Untuk penggunaan diagnostik in vitro saja.
2. Ikuti semua aturan dalam penanganan reagen laboratorium dan lakukan tindakan
pencegahan keselamatan yang diperlukan.
3. Karena perbedaan metodologi dan spesifisitas antibodi, hasil pemeriksaan dari
sampel yang sama mungkin berbeda saat menggunakan kit reagen dari produsen
 yang berbeda pada sistem Mindray, atau menggunakan kit reagen Mindray pada
sistem lain.
4. Jangan gunakan kit reagen melebihi tanggal kedaluwarsa.
5. Jangan menggunakan reagen yang dicampur dari lot reagen yang berbeda.
6. Selalu simpan kemasan reagen dalam posisi tegak untuk memastikan tidak ada
partikel mikro yang hilang sebelum digunakan.
7. Kemasan reagen yang dibuka lebih dari 56 hari tidak direkomendasikan untuk
digunakan.
8. Reliabilitas hasil pengujian tidak dapat dijamin jika instruksi dalam lembar sisipan
paket ini tidak diikuti.
9. Semua spesimen dan limbah reaksi harus dipertimbangkan berpotensi biohazard.
Penanganan spesimen dan limbah reaksi harus sesuai dengan peraturan dan
pedoman setempat.
10. Lembar Data Keselamatan Material (MSDS) tersedia bila permintaan diajukan.