LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA KLINIK II

PEMERIKSAAN GANGGUAN ENDOKRIN (T4)

OLEH

KELOMPOK : IV (EMPAT)

KELAS : 17C

DIAN AMALIA RAHMAN (17 3145 453 086)

MARIA FAUSTINA PETRIN NAHAK (17 3145 453 095)

NURLELA SAENI (17 3145 453 102)

SRI MEGA SUATRAT (17 3145 453 109)

ULFA MAYANG SARI (17 3145 453 115)

DIII TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

UNIVERSITAS MEGAREZKY MAKASSAR

2020
A. Judul Percobaan
Pemeriksaan Gangguan Endokrin (T4)
B. Metode Percobaaan
Metode ELFA (Enzyme linked immunofluorescence assay)
C. Prinsip Percobaan
Pengujian T4 metode ELFA menggunakan prinsip kompetitif dengan
waktu pemeriksaan 40 menit. Sampel diambil dan di transfer ke dalam SPR
yang mengandung antigen T4 berlabel fosfatase alkalin ( conjugate).
Kompetisi terjadi antara antigen sampel dan antigen berlabel untuk antibodi
T3 yang melapisi bagian dalam SPR. Kemudian ditambahkan substrat 4-
methyl umbelliferyl fosfat, enzim akan mengkatalisis reaksi hidrolisis
substrat menjadi 4-methyl-umbelliferon sebagai produk fluoresen dan di
baca pada panjang gelombang 450 nm.
D. Landasan Teori
Penyakit dan kelainan kelenjar tiroid merupakan kelainan endokrin
tersering kedua setelah diabetes mellitus. Kelainan tiroid memberikan
pengaruh ke hampir seluruh tubuh karena hormon tiroid mempengaruhi
banyak organ. Untuk mempelajari dan mendiagnosis kelainan tiroid perlu
memahami sumbu Hipotalamus-Hipofisis-Tiroid, hormon- hormon yang
bekerja pada sumbu tersebut, serta pengaruhnya pada organ-organ lain, serta
sebaliknya, pengaruh luar terhadap sumbu tersebut (Suryaatmadja 2010).
Pemeriksaan hormon tiroid meliputi pemeriksaan T3, T4, TSH dan fT4.
Pemeriksaan terhadap hormon tiroid mulai berkembang setelah
diperkenalkan teknik radioimmunoassay (RIA) pada awal tahun 1970-an,
diikuti dengan immunoradiometric assay (IRMA), enzyme-linked
immunoassay (ELISA), enzyme-linked immunofluorescence assay (ELFA)
dan enzyme immunoassay (EIA), serta yang terbaru
electrochemiluminescent assay (ECLIA). Cara ECLIA menjadi metode
yang paling peka dibandingkan yang terdahulu. Cara ini dikembangkan
sejak akhir tahun 1980-an dan pada Kursus Laboratory Endocrinology di
Singapore tahun 1989 sudah dinyatakan sebagai metode yang menjanjikan
untuk analisis hormon. Kepekaan bergeser dari kadar µg/dL menjadi ng/dL
bahkan pg/gL. Cara ini sudah diterapkan pada otomasi (automated
analyzer). Dengan demikian, selain makin peka, juga ketelitian dan
ketepatan analisis hormon makin baik (Suryaatmadja 2010).
Pada orang dewasa dikenal ada 4 jenis kelainan/gangguan tiroid.
Pertama dan kedua gangguan fungsi atau keseimbangan homeostasis berupa
kekurangan hormon tiroid (hipotiroid) dan kelebihan hormon tiroid
(hipertiroid). Ketiga, kelainan berupa pembesaran kelenjar tiroid dan
keempat kelainan hormon tiroid tanpa disertai gangguan klinis (eutiroid).
Perlu pula diperhatikan adanya pengaruh obat-obatan terhadap fungsi tiroid
(Suryaatmadja 2010).
Hipotiroid dapat dibedakan antara yang klinis jelas (overt) dan klinis
tidak jelas (subklinis). Hipotiroid subklinis didefinisikan sebagai keadaan
dengan kadar TSH meningkat ringan dan kadar fT3 dan T4 normal disertai
dengan sedikit/tanpa gejala klinis. Hipotiroid klinis/overt atau tiroid yang
kurang aktif merupakan kelainan klinis yang paling umum, didefinisikan
sebagai kadar TSH tinggi dan fT4 rendah dalam serum. Penyebab utamanya
adalah kadar yodium yang tidak cukup atau asupan yodium yang rendah.
Hipertiroid juga dapat dibedakan antara klinis jelas (overt) dan klinis tidak
jelas (subklinis). Hipertiroid klinis atau tirotoksikosis ditandai dengan
peningkatan kadar T3 dan T4 dan penurunan kadar TSH serum. Penyebab
tersering adalah penyakit Graves yang disebabkan oleh produksi antibodi
terhadap reseptor TSH yang merangsang pembentukan hormon tiroid
berlebih (Anwar R. 2007).
Pemeriksaan free T4 (FT4) merupakan pemeriksaan menggunakan
sampel darah yang diambil dari pembuluh darah vena di lengan untuk
mengukur konsentrasi thyroxine (T4) dalam bentuk bebas (tidak terikat
dengan protein) dalam darah. Thyroxine (T4) adalah salah satu dari dua
hormon utama yang dihasilkan oleh kelenjar tiroid. Hormon tiroid utama
lainnya disebut triiodothyronine (T3). T4 dan T3 secara bersama-sama
mempunyai fungsi untuk mengatur metabolisme tubuh. Hampir sebagian
 besar T4 ditemukan dalam bentuk terikat dengan protein di dalam darah.
Sisanya dalam jumlah kecil tidak terikat dengan protein yang disebut
sebagai free T4, dan merupakan bentuk aktif biologis dari hormon (Hanifah,
2006).
L-Thyroxine (T4) merupakan hormon yang disintesis dan disimpan
dalam kelenjar tiroid. Proses pemecahan proteolisis Thyroglobulin akan
melepaskan T4 ke dalam aliran darah. Lebih dari 99% T4 terikat pada 3
protein plasma secara 27 reversibel, yaitu : Thyroxine binding globulin
(TBG) 70%, thyroxine binding pre albumin (TBPA) 20% dan albumin 10%.
Sekitar 0,03% T4 yang berada dalam keadaan tidak terikat (Hanifah, 2006).
Penyakit yang mempengaruhi fungsi tiroid dapat menimbulkan gejala
yang sangat bervariasi. Pengukuran T4 total dengan immunoassay
merupakan metode skrining yang paling memungkinkan dan dapat
dipercaya untuk mengetahui adanya gangguan tiroid pada pasien.
Peningkatan kadar T4 ditemukan pada hipertiroidisme karena Grave’s
disease dan Plummer’s disease pada akut dan subakut tiroiditis. Kadar T4
yang rendah berhubungan dengan hipotiroidisme kongenital, myxedema,
tiroiditis kronis (Hashimoto’s disease) dan beberapa kelainan genetik
(Aryani, 2018).
Metode ELFA, merupakan cara pemeriksaan dengan menggunakan
enzim sebagai petanda dan digunakan substrat yang berfluoresensi. Metode
ELFA menggunakan system reagen strip dan solid phase receptable ( SPR)
yang dilapisi antigen atau antibodi berfungsi sebagai pippeting. Semua
langkah dilakukan otomatis oleh alat. Produk fluoresen yang biasa
digunakan adalah 4- Methylumbelliferone dan akan dibaca pada panjang
gelombang 450nm (Cobas 2016).
F. Alat Dan Bahan
1. Alat
Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah mikropipet 200 µl,
vidas.
 2. Bahan
Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah serum, dan strip
vidas.
G. Prosedur Kerja
a) Pra analitik
Persiapan Pasien: Tidak ada persiapan khusus.
Persiapan spesimen: Serum atau plasma. Stabilitas sampel 2 - 8°C : 8
hari-25 ± 6°C : 6 bulan (serum) / 4 bulan (heparin).
Persiapan reagen: keluarkan reagen dari lemari es, biarkan 30 menit di
suhu ruangan. Satu kit reagen Vidas berisi 60 test atau 30 test.
Periksa reagen yang akan di gunakan tentang tanggal kadaluwarsa
dan massa kalibrasi atau rekalibrasi. Reagen bisa digunakan bila
kita telah melakukan kalibrasi.
b) Analitik
1. Dipindahkan reagen yang diperlukan dari lemari es ke temperatur
ruangan paling tidak 30 menit.
2. Digunakan satu T4 dan satu strip SPR T4 untuk setiap sampel
3. Dimasukan kalibrator, control dan sampel masing – masing sebanyak
200 µl
4. Dimasukan SPR dan strip reagen ke dalam alat.
5. Semua langkah pemeriksaan dilakukan secara otomatis oleh alat
dalam waktu kira – kira 40 menit.
6. Setelah pengujian selesai, pindahkan SPR dan strip reagen dari alat
c) Pasca analitik
Nilai normal:
 0,7 - 1,55 ng/dL
H. Hasil Pengamatan dan Pembahasan
a. Tabel Hasil Pemeriksaan Enzim Amylase

No Nilai Rujukan Keterangan

.
 1.
0,7-1,55 ng/dL Normal

b. Pembahasan
Pada praktikum ini telah dilakukan pemeriksaan gangguan
endokrin yaitu analisis hormone tiroksin (T4), pada sampel serum.
Pemeriksaan ini dilakukan untuk mengetahui dan memahami cara
pemeriksaan tiroksin (T4) pada sampel serum mennggunakan metode
ELFA (Enzim Linked Immunoabsorbant Assay). Thyroxine (T4)
merupakan hormon yang disintesis dan disimpan dalam kelenjar tiroid.
Proses pemecahan proteolisis Thyroglobulin akan melepaskan T4 ke
dalam aliran darah. Lebih dari 99% T4 terikat pada 3 protein plasma
secara reversibel, yaitu : Thyroxine binding globulin (TBG) 70%,
thyroxine binding pre albumin (TBPA) 20% dan albumin 10%. Sekitar
0,03% T4 yang berada dalam keadaan tidak terikat.
Metode ELFA, merupakan cara pemeriksaan dengan menggunakan
enzim sebagai petanda dan digunakan substrat yang berfluoresensi.
Metode ELFA menggunakan system reagen strip dan solid phase
receptable ( SPR) yang dilapisi antigen atau antibodi berfungsi sebagai
pippeting. Semua langkah dilakukan otomatis oleh alat. Produk
fluoresen yang biasa digunakan adalah 4- Methyl-umbelliferone dan
akan dibaca pada panjang gelombang 450nm.
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan pada
pemeriksaan Thyroxine (T4) yaitu sebesar 5 ng/dl. Hasil yang didapatkan
normal yang mana nilai rujukan untuk Thyroxine (T4) yaitu berkisar 4,5-13
ng/dl.
Kelainan kadar hormon tiroid dapat dijumpai pada keadaan klinis
normal (eutiroid). Penyebabnya adalah keadaan fisiologis normal atau
terganggu atau oleh pengaruh obat-obatan. Keadaan sindrom eutiroid
sakit (sick euthyroid syndrome) tersering diamati pada pasien rawat inap
dengan penyakit bukan tiroid. Sebanyak 13% pasien rawat inap dengan
 penyakit akut mungkin menunjukkan nilai hormon tiroid tidak normal.
Pada kebanyakan pasien kelainan bersifat sementara dan akan kembali
normal setelah pulih dari penyakit akut. Sebagai respon akut, terjadi
penurunan hormon tiroid terutama T3 karena hambatan proses
deyodinasi T4 menjadi T3. Hal ini merupakan respon fisiologis untuk
menurunkan penggunaan kalori dan katabolisme protein, yang
menguntungkan terutama pada pasien dengan status gizi kurang baik.
Beberapa obat dapat mempersulit penilaian status tiroid, baik pada
diagnosis awal maupun pada pemantauan. Mekanisme kerjanya dapat
mempengaruhi sekresi TSH, bioavailabilitas obat levothyroxine oral,
protein pengikat hormon tiroid (TBG), dan metabolisme T3 dan T4.
Contoh : dopamine dan glukokortikoid mengurangi sekresi TSH, lithium
dan sediaan yodida menurunkan fT4, amiodarone mungkin
meningkatkan atau menekan fT4, estrogen dan androgen mempengaruhi
TBG tapi tidak mempengaruhi fT4 atau fT3.
I. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan pada pemeriksaan
gangguan endokrin Thyroxine (T4) pada sampel serum dapat disimpukan
bahwa nilai rujukan untik pemeriksaan T4 ialah 0,7 - 1,55 ng/dL.
 DAFTAR PUSTAKA

Anwar R. 2007, Fungsi dan Kelainan Kelenjar Tiroid, Sub Bagian Fertilisasi dan
Endokrinologi Universitas Padjajaran, Bandung, hal 1-65.
Aryani,T. dkk. 2018. Modul Pemeriksaan Laboratorium Endokrin Blok X
Endokrin Kode Modul Tlm Tlm 5102 Semester 6 Cetakan I
Revisi Ke-0. Program Studi Teknologi Laboratorium Medis
Jenjang Diploma 4 Fakultas Ilmu Kesehatan.
COBAS manual user. Roche Diagnostics 2016. Available at : www.roche.com
Hanifah, S. 2006. Diktat Farmakoterapi Endoktrin & Hormon. FMIPA UII. UII
Suryaatmadja M. 2010, Tiroid : Faal dan Kelainan. ABC Laboratorium Amerind
Bio-Clinic. Jakarta