NPWP 03.042.167.1-031.

000

Proposal Workshop CLX-22 Sciencewerke:

Cell Preparation: Isolation, Counting, Staining and Visualization
(Preparasi Sel: Proses isolasi, penghitungan, pewarnaan, dan visualisasi)

Pendahuluan
Workshop CLX Sciencewerke merupakan kegiatan seminar yang diadakan untuk memberikan edukasi
dan upgrade skill dibidang preparasi dan kultur sel kepada para peneliti, mahasiswa, dan dosen yang dikemas
dalam bentuk hands-on training. Acara ini merupakan wadah bagi para peneliti, akademisi, dan praktisi yang
tertarik dalam bidang kultur sel untuk meningkatkan keterampilan dan saling bertukar informasi. Acara ini
diharapkan dapat meningkatkan pengetahuan dan keterampilan mengenai preparasi sel, kultur sel,
menghitung dan mewarnai sel serta visualisasi sel sehingga dapat membantu untuk proses analisis sel.

Tujuan Kegiatan:
1. Memberikan kesempatan kepada para peneliti dan praktisi untuk meningkatkan keterampilan di
bidang kultur sel dan proses preparasi sel
2. Menjadi wadah untuk bertukar pengetahuan dan update teknologi terbaru
3. Memperkenalkan teknologi baruu kepada peserta webinar

Bentuk Kegiatan:
Kegiatan ini dalam bentuk workshop hands-on training di laboratorium.

Waktu dan Tempat:

Waktu : Selasa, 22 November 2022, pukul 09.00-16.00 WIB
Tempat : Laboratorium Gerontologi Departemen Biokimia & Biologi Molekuler FK UI

Peserta:
Peserta workshop sebanyak 10 orang dari laboratorium yang diundang, yaitu sebagai berikut:
No. Institusi Jumlah Undangan
1 Departemen Biokimia & Biologi Molekuler FK UI 2 orang
2 Klinik Hayandra 2 orang
3 Prodia Stem Cell Indonesia (ProSTEM) 2 orang
4 Universitas YARSI 2 orang
5 Universitas Tarumanegara 2 orang

PT Sciencewerke•Jl. Palmerah Barat No. 25, Jakarta Barat 11480 •t :021-53667591 •f : 021-5484232

www.sciencewerke.com/id/• enquiry@sciencewerke.com
 NPWP 03.042.167.1-064.000

Susunan Acara:
Waktu Topik Pembicara Keterangan
09.00 – 09.15 Pembagian
Registrasi Panitia
(15 menit) protokol kerja
09.15 – 09.30
Sambutan dan Pembukaan
(15 menit)
09.30 – 12.00 Workshop (1): Isolation and Team trainer Application
(150 menit) Counting Scientist Sciencewerke
Tersedia makan
12.00 – 13.00
Ishoma Panitia siang untuk
(25 menit)
peserta
13.00 – 15.30 Workshop (2): Staining and Team trainer Application
(150 menit) Visualization Scientist Sciencewerke
15.30 – 16.00
Diskusi dan Penutup
(30 menit)

PT Sciencewerke•Jl. Palmerah Barat No. 25, Jakarta Barat 11480 •t :021-53667591 •f : 021-5484232

www.sciencewerke.com/id/• enquiry@sciencewerke.com
Workshop on PBMC using SepMate™ and
Cell Isolation using EasySep™ Immunomagnetic

Sepmate Easysep

Cell
Preparati linker
on antibo
dies
antibo antibo
dy dy
again again
st st
unwa RBCs
Isolasi PBMC dari Darah Perifer nted in the
cells sampl
e
1. Siapkan semua alat dan bahan dalam biosafety cabinet dan pastikan semua proses
dilakukan secara steril.
2. Masukkan density gradient medium (lymphoprep) sebanyak 4.5 ml ke dalam tube
SepMate 15 ml melewati lubang di bagian tengah tube.
3. Dilusi sampel darah 1 : 1 dengan PBS + 2% FBS, mis agar homogen.
4. Posisikan tube secara vertikal, masukkan sampel darah ke dalam tube dengan
menggunakan serogical pipet.
5. Sentrifugasi tube selama 10 menit dengan kecepatan 1200 x g.
6. Pindahkan bagian atas (berwarna bening) yang berisi MNCs ke dalam tube falcon
steril, pastikan tidak memposisikan tube SepMate terbalik lebih dari 2 detik.
7. Sentrifugasi larutan yang berisi MNCs selama 8 menit pada kecepatan 300 x g (suhu
ruang)
8. Buang supernatant yang terbentuk,lalu resuspensi sel dengan menambahkan 1 ml
PBS + 2% FBS.
9. Sentrifugasi larutan yang berisi MNCs selama 8 menit pada kecepatan 300 x g (suhu
ruang)
10. Buang supernatant yang terbentuk,lalu resuspensi sel dengan menambahkan 1 ml
PBS + 2% FBS.
11. Sentrifugasi larutan yang berisi MNCs selama 8 menit pada kecepatan 300 x g (suhu
ruang)
12. Ambil MNCs sebanyak 10 ul ke dalam tube 1,5 ml, lalu tambahkan 990 ul PBS + 2%FBS.
13. Hitung jumlah sel yang didapatkan dengan menggunakan metode trypan blue.
14. Catat hasilnya untuk setiap kelompok.
Workshop on PBMC using SepMate™ and
Cell Isolation using EasySep™ Immunomagnetic

Isolasi Sel CD34+ dengan Immunomagnetic Separation (positive selction)

1. Siapkan sel dengan konsentrasi sebagai berikut :

 Jika jumlah sel ≤ 5 x 107 , resuspensi sel dalam 250 µl
 Jika jumlah sel 5 x 107 – 2 x 108 , resuspensi sel pada konsentrasi 2 x 108 sel/ml.
 Jika jumlah sel 2-5 x 108 , resuspensi sel dalam 1 ml
 Jika jumlah sel 5 x 108 – 2 x 109, resuspensi sel pada konsentrasi 5 x 108 sel/ml.
2. Masukkan suspense sel ke dalam tube 14ml (round-buttom tube), lalu tambahkan 100
µl/ml Easysep Positive Selection Cocktail, kemudian mix dengan cara up and down.
3. Inkubasi suspensi sel selama 10 menit pada suhu ruang.
4. Selama proses inkubasi, vortex RapidSphere Magnetic selama 30 detik.
5. Tambahkan RapidSphere 75 µl/ml, homogenisasi sampel dengan cara up and down.
6. Inkubasi pada suhu ruang selama 5 menit.
7. Tambahkan medium yang direkomendasikan hingga mencapai volume 3 ml jika
volume sampel < 1 ml dan 10 jika volume sampel ≥ 1 ml, lalu mix dengan cara
pipetting up and down selama 2-3 kali.
8. Masukkan tube ke dalam magnet The Big Easy, lalu inkubasi selama 3 menit
9. Buang supernatant dengan cara dituang, lalu ambil tube dari magnet The Big Easy.
10. Ulangi step 7-9 sebanyak 3 kali atau total 4 x 3 menit separasi.
11. Resuspensi sel dengan medium yang disarankan.
12. Amati jumlah sel CD34+ dalam mikroskop, lalu sel siap digunakan untuk analisis.

<1% CD34+ cell

frequency in most
samples. Cell isolation
or enrichment needed
Workshop on PBMC using SepMate™ and
Cell Isolation using EasySep™ Immunomagnetic

Isolasi Sel CD56+ dengan Immunomagnetic Separation (positive selection)

1. Siapkan sel dengan konsentrasi 1 x 108 , resuspensi sel dalam 500 µl – 5 ml

2. Masukkan suspense sel ke dalam tube 14ml (round-buttom tube), lalu tambahkan
100 µl/ml Easysep Positive Selection Cocktail, kemudian mix dengan cara up and
down.
3. Inkubasi suspensi sel selama 10 menit pada suhu ruang.
4. Selama proses inkubasi, vortex RapidSphere Magnetic selama 30 detik.
5. Tambahkan RapidSphere 100 µl/ml, homogenisasi sampel dengan cara up and down.
6. Inkubasi pada suhu ruang selama 5 menit.
7. Tambahkan medium yang direkomendasikan hingga mencapai volume 5 ml jika
volume sampel < 1 ml dan 10 jika volume sampel ≥ 1 ml, lalu mix dengan cara
pipetting up and down selama 2-3 kali.
8. Masukkan tube ke dalam magnet The Big Easy, lalu inkubasi selama 3 menit
9. Buang supernatant dengan cara dituang, lalu ambil tube dari magnet The Big Easy.
10. Ulangi step 7-9 sebanyak 3 kali atau total 4 x 3 menit separasi.
11. Resuspensi sel dengan medium yang disarankan.
 Amati jumlah sel CD56+ dalam mikroskop, lalu sel siap digunakan untuk analisis

Isolasi Sel NK- (NK Cell negative isolation) dengan Immunomagnetic Separation

1. Siapkan sel dengan konsentrasi 5 x 107 , resuspensi sel dalam 500 µl – 8 ml

2. Masukkan suspense sel ke dalam tube 14ml (round-buttom tube), lalu tambahkan 50
µl/ml Easysep NK cell Negative Selection Cocktail, kemudian mix dengan cara up and
down.
3. Inkubasi suspensi sel selama 5 menit pada suhu ruang.
4. Selama proses inkubasi, vortex RapidSphere Magnetic selama 30 detik.
5. Tambahkan RapidSphere 50 µl/ml, homogenisasi sampel dengan cara up and down.
6. Tidak perlu inkubasi, langsung step berikutnya
7. Tambahkan medium yang direkomendasikan hingga mencapai volume 5 ml jika
volume sampel < 1 ml dan 10 jika volume sampel ≥ 1 ml, lalu mix dengan cara
pipetting up and down selama 2-3 kali.
8. Masukkan tube ke dalam magnet The Big Easy, lalu inkubasi selama 3 menit
9. Tuangkan supernatant pada tube baru, sel yang diisolasi siap digunakan
10. Resuspensi sel dengan medium yang disarankan.
Amati jumlah sel NK dalam mikroskop, lalu sel siap digunakan untuk analisis
Selamat Bekerja 
 NPWP 03.042.167.1-064.000

Date ofchecked. 12/10/2022 PerformedBy: Aisha Rizky Rahmawati

Checklist Kebutuhan Running sel Kultur

Checklist at columns number below, mark “yes” if items available or “no” if not available on
checklist columns.

Instruments:
Checklist
No Items Provider Quantity
Awal Akhir
1 Sentrifuge 300-1200 xg dengan rotor User 1 unit
falcon
2 Dry bath/ waterbath/ inkubator (15-65C) User 1 unit
3 Refrigerator 2-8C User 1 unit
4 Aluminium foil User secukupnya
5 Flow Cytometry User 1 unit
6 BSC User 1 unit
7 Serological pipet 10.5 mL User 10
8 Microtube 1.5 mL User secukupnya
9 Vortex User 1 unit
10 Magnet The Big Easy SW 1 unit
11 Mikroskop User 1 unit
12 Sentrifuge tube 2 mL 12000 rpm User 1 unit
13 Sentrifuge SWIM User 1 unit
14 Pipet Gun User 1 unit
15 Flash User 1 unit
16 Mikropipet set semua ukuran User 1 set
Reagents dan Consumables
No Items Provider Quantity Checklist
Awal Akhir
1 EasySep™ Buffer/PBS SW 15 mL
2 Anti-Human CD32 Antibody, Clone IV.3 User 2 ug
(optional)
3 DAPI (Hydrochloride)ORDRAQ7™ User 400 uL
(tergantung tipe tes)
4 OneComp eBeads™ Compensation Beads User 10 uL
(tergantung tipe tes)
5 Falcon® Round-Bottom Polystyrene SW secukupnya
Tubes, 5 mL, 14 mL
Page 1
 OR
Corning® 96-Well Round-Bottom
Microplate
6 MSC Characterization Antibody Panel SW 1 kit
(AntiHu CD73, CD90, CD105, CD45)
7 Kultur MSC User secukupnya
8 Tube SepMate 15 ml SW secukupnya
9 2% FBS User secukupnya

10 Tips untuk Serological Pipet SW 10

11 Tube Falcon steril User 10
12 Tryphan Blue SW secukupnya
13 Sampel Darah User secukupnya
14 Lympoprep SW 5 ml
15 PBS User secukupnya
16 Tube Falcon 15 mL steril User 20
7
17 sel CD34+ ≤ 5 x 10 User secukupnya
7 8
18 sel CD34+ 5 x 10 – 2 x 10 User secukupnya
8
19 sel CD34+ 2-5 x 10 User secukupnya
20 sel CD34+ 5 x 108 – 2 x 109 User secukupnya
21 Easysep CD34+ Positive Selection Cocktail SW 500 uL
22 RapidSphere SW 350 uL
23 Media kultur sesuai User Hingga 15 mL
8
24 Sel CD56+ 1 x 10 User secukupnya
25 Tube Falcon 15 mL steril User 1
26 Easysep NK cellSelection Cocktail (EasySep SW 100 uL
CD56+ selection)
27 RapidSphere SW 100 uL
28 Media kultur sesuai User secukupnya
7
29 Sel NK- 5 x 10 User secukupnya
30 Tube Falcon 15 mL steril User 1
31 Easysep NK cell Negative Selection SW 50 uL
Cocktail
32 RapidSphere SW 20 uL
33 Media kultur sesuai User secukupnya
34 CBB User secukupnya
35 Flash Kultur User secukupnya
36 Tips set semua ukuran User 1 set
37 AntiH CD34 FI SW
38 TC20 slide SW 1 box

Page 2
 NPWP 03.042.167.1-064.000

• Pastikan instrument yang digunakan sudah berada di customer

• Warna biru adalah kebutuhan untuk analisis kultur MSC manusia menggunakan flow cytometri
• Warna merah muda adalah kebutuhan untuk Isolasi PBMC menggunakan SepMate
• Warna hijau adalah kebutuhan untuk Isolasi Sel CD34+ dengan Immunomagnetic Separation
(positive selection)
• Warna ungu adalah kebutuhan untuk Isolasi Sel CD56+ dengan Immunomagnetic Separation
(positive selection). Instrument yang dibutuhkan sama dengan warna hijau (tidak ditulis ulang).
• Warna oranye adalah kebutuhan untuk Isolasi Sel NK-. Instrument yang dibutuhkan sama dengan
warna hijau (tidak ditulis ulang).
• Warna kuning, jumlah sel tergantung hasil isolasi

Page 1