BIAKAN MURNI, ISOLASI DAN

PURIFIKASI BAKTERI
 BIAKAN MURNI
• Biakan murni bakteri adalah biakan yang terdiri
atas satu spesies bakteri yang ditumbuhkan
dalam medium buatan. Medium buatan tersebut
berfungsi sebagai medium pertumbuhan.
TEKNIK BIAKAN MURNI
1. Cara Penegnceran : Caranya adalah dengan mengencerkan suatu
suspensi kemudian diencerkan dalam suatu tabung tersendiri. Dari
pengenceran ini kemudian diambil 1 ml untuk diencerkan lagi, kalau
perlu dari enceran yang kedua ini diambil 1 ml untuk diencerkan lebih
lanjut.
2. Cara Penuangan : Cara pengenceran, seperti dijelaskan diatas prinsip
melakukan pengeceran adalah menurunkan jumlah mikroorganisme
sehingga suatu saat hanya ditemukan suatu sel dalam satu tabun
demikian juga denngan cara penuangan.
3. Cara Penggoresan : Cara ini lebih menggunakan bila ditinjau dari
sudut ekonomi dan waktu tetapi memerlukan keterampilan yang
diperoleh dari latihan penggoresan yang sempurna akan menghasilkan
koloni yang terpisah. Tetapi kelemahan cara ini adalah bakteri-bakteri
anaerob tidak dapat tumbuh.
4. Cara penyebaran : Pengenceran sampel sama seperti pada cara-cara
penuangan, dengan memipet sebanyak 0,1 ml cairan dari botol pengencer dan
biarkan cairan mengalir keatas permukaan agar.
5. Cara pengucilan 1 sel : Cara ini dengan menggunakan suatu alat yang dapat
memungut satu bakteri dari sekian banyak bakteri, dengan tanpa ikutnya bakteri
yang lain.alat semacam ini tidak mudah untuk menggunakannya. Alat itu berupa
mikropipet yang ditempatkan pada suatu micrromanupulator.
6. Cara inokulasi pada hewan : Metode ini didasarkan pada kenyataan bahwa tidak
semua bakteri dapat tumbuh didalam tubuh seekor hewan. Misalnya, kita ambil
bahan pemeriksaan berupa dahak (sputum) dari seseorang yang disangka
memderita TBC, bila dahak disuntikkan kedalam tubuh tikus putih, maka sproba
akan ikut serta, tetapi tidak dapat bertahan hidup. Sehingga kemudian hanya kita
dapatkan kuman TBC saja. Biakan murni Pneumococcus dapat diperoleh dengan
cara dmikian juga (Schlegel, 1994)
ISOLASI BAKTERI
adalah proses mengambil bakteri dari medium atau lingkungan asalnya dan
menumbuhkannya di medium buatan sehingga diperoleh biakan yang
murni.
Teknik kultur isolat untuk mendapatkan biakan murni terbagi menjadi 3 yaitu
:
a. Metode gores atau streak plate : cara ini adalah cara untuk mengisolasi
dengan cara menggores permukaan medium dengan menggunakan ose.
Penggoresan bertujuan untuk membuat garis sebanyak mungkin pada medium
agar bakteri yang tumbuh pada garis-garis terakhir berupa koloni yang terpisah-
pisah. (Irianto, 2012)
b. Metode tuang atau pour plate : Metode untuk memperoleh biakan murni
dari populasi campuran mikroorganisme dengan cara mengencerkan specimen
yang kemudian dituangkan kedalam cawan petri steril dan diikuti dengan
menuangkan medium agar yang telah dicairkan dan didinginkan pada suhu
kurang lebih 50ºC (Hadiotetomo, 1983). Tujuan dari metode ini adalah untuk
menentukan perkiraan jumlah bakteri hidup dalam cairn atau spesimen. Hasil
perhitungan dinyatakan dalam koloni (Irianto, 2012)
c. Metode sebar atau spread plate
Isolasi dengan penyebaran serupa dengan isolasi bakteri pada penuangan.
Hal yang membedakan adalah pada saat penuangan suspensi sampel
kedalam medium isolasi diawali dengan pengenceran sampelpada setiap
penuangan. Medium yang telah dipersiapkan dituangkan kdalam cawan
petri steril. Tunggu hingga medium memadat setelah itu tuangkan
suspense sampel kedalam cawan petri yang telah berisi medium yang
memadat. Penyebaran suspensi sampel dilakukan dengan menyebarkan
suspensi batang Drugalsky yang telah dipanaskan terlebih dahulu
(Waluyo. 2007)
Lag

Eksponsial

Stastioner
Kematian
PERUFIKASI BAKTERI
adalah proses pemisahan mikroorganisme yang diinginkan
dari populasi campuran ke media biakan (buatan ) untuk
mendapatkan kultur murni. Inokulasi merupakan perpindahan
inokulum dari sumbernya ke dalam tanaman inang.
pertanyaan
1. CANTIKA ada batasan ga buat pengenceran
2. Beda masing 2 penggoresan
3. Teknik
4. Teknik penggoresan dimulai dari mana? (IMRON)