Uji Aktivitas Antimikroba

UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DARI BAHAN ALAM 1
BAB I
PENDAHULUAN
A. LATAR BELAKANG
Mikroorganisme adalah makhluk hidup yang berukuran sangat kecil
yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang namun hanya dapat dilihat
dengan bantuan mikroskop, dimana mikroorganisme memiliki karakteristik
tersendiri yang membedakannya dengan hewan dan tumbuhan.
Mikroorganisme itu sendiri memiliki salah satu ciri yang sama dengan
hewan dan tumbuhan yaitu mampu mengadakan pertumbuhan dan
perkembangan.
Antimikroba merupakan suatu senyawa yang dapat membunuh atau
menghambat aktivitas mikroorganisme dengan cara menimbulkan
gangguan pada senyawa penyusun dinding sel, peningkatan permeabilitas
membran sel yang dapat menyebabkan kehilangan cairan sel,
menginaktivasi enzim, dan destruksi atau fungsi material genetik dari
mikroorganisme. Namun, dewasa ini kebanyak antibiotik telah mengalami
resistensi.
Ekstrak bahan alam mengandung banyak metabolit sekunder yang
dapat dijadikan sebagai sediaan baik itu fitofarmaka maupun OHT dan
jamu. Uji aktivitas antibakteri atau antimikroba dari ekstrak bahan alam
bertujuan untuk mengetahui apakah bahan alam yang diujikan dapat
menghambat aktivitas dari suatu mikroba, mengingat banyaknya obat-
EVI APRIYANI NURNANINGSIH

O1A1 16 103
obatan yang telah resisten, sehingga mendorong penemuan senaywa baru
yang efektif dalam membasi atau menghambat pertumbuhan bakteri. Oleh
karena itu, dilakukanlah percobaan ini untuk mengetahui aktivitas
antibakteri dari bahan alam pada beberapa bakteri dengan cara melihat
seberapa luas zona hambat dari esktrak tersebut.
B. RUMUSAH MASALAH
Rumusan masalah pada percobaan uji aktivitas antimikroba dari
bahan alam adalah bagaimana pengujian aktivitas antimikroba dari
ekstrak bahan alam?
C. TUJUAN
Tujuan dilakukannya percobaan uji aktivitas antimikroba dari
bahan alam adalah untuk mengetahui cara pengujian aktivitas
antimikroba dari ekstrak bahan alam.
D. MANFAAT
Manfaat dari percobaan uji aktivitas antimikroba dari bahan alam
adalah mahasiswa mampu mengetahui cara pengujian aktivitas
antimikroba .dari ekstrak bahan alam.

O1A1 16 103
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. TEORI UMUM
Antibakteri adalah zat yang dihasilkan oleh suatu mikroba, terutama
fungi yang dapat menghambat atau dapat membasmi mikroba lainnya.
Namun dalam perkembangannya antibakteri yang tidak dihasilkan dari
bakteri juga sering digolongkan sebagai antibiotik, misalnya tumbuhan
tingkat tinggi yang sebenarnya memiliki daya antibiotik (Nikham, 2012).
Senyawa antimikroba merupakan salah satu produk metabolit
sekunder. Pembentukan senyawa metabolit sekunder dikode oleh sejumlah
agen yang terdapat pada DNA kromosom atau DNA plasmid. Ada beberapa
kondisi yang mempengaruhi metabolit sekunder yaitu : keterbatasan nutrisi
yang tersedia di lingkungan tumbuh suatu bakteri. Penambahan senyawa
penginduksi dan penurunan kecepatan pertumbuhan. Umumnya metabolit
sekunder tidak terbentuk jika lingkungan tumbuh mengandung cukup
nutrisi untuk pertumbuhan bakteri karena senyawa tersebut bukan unsur
esensial bagi pertumbuhan dan reproduksi sel (Nofiani., 2009).
Resistensi terhadap obat antimikroba bisa didapat atau bawaan, pada
kasus resistensi bawaan, semua spesies bakteri, bisa resisten terhadap
suatu obat sebelum bakteri kontak dengan obat tersebut. Sebagai contoh,
Pseudomonas aeruginosa selalu resisten terhadap flukloksasilin. Yang
paling serius secara klinis adalah resistensi didapat, dimana bakteri yang
pernah sensitive terhadap suatu obat menjadi resistensi. Mekanisme yang

O1A1 16 103
bertanggung jawab untuk resistensi terhadap obat antimikroba adalah
sebagai berikut : menginaktivasi enzim yang merusak obat, mengurangi
akumulasi obat, dan perkembangan jalur metabolik alternatif (Neil, 2006).
Mekanisme penghambatan mikroorganisme oleh senyawa
antimikroba dapat disebabkan oleh beberapa faktor, antara lain: (1)
gangguan pada senyawa penyusun dinding sel, (2) peningkatan
permeabilitas membran sel yang dapat menyebabkan kehilangan cairan sel,
(3) menginaktivasi enzim, dan (4) destruksi atau fungsi material genetik
(Sitepu, 2012).
Mikroorganisme merupakan jasad hidup yang mempunyai ukuran
sangat kecil (biasanya kurang dari 1 mm) sehingga untuk mengamatinya
diperlukan alat bantuan. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal
(uniselular) meskipun beberapa protista bersel tunggal masih terlihat oleh
mata telanjang dan ada beberapa spesies multisel tidak terlihat mata
telanjang. Ilmu yang mempelajari mikroorganisme disebut mikrobiologi
(Lestari dkk., 2010).
Pseudomonas aeruginosa merupakan suatu mikroba gram negatif
berbentuk batang lurus atau melengkung, non sporulasi, tidak berkapsul
dan umumnya memproduksi pigmen yang larut air. Pseudomonas
aeruginosa adalah salah satu spesies yang merupakan kontaminan,
umumnya terdapat pada kulit dan pada keadaan tertentu bersifat patogenik
(Purwani, dkk., 2012).

O1A1 16 103
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dan berbentuk
kokus. Staphylococcus aureus bersifat non-motil, nonspora, anaerob
fakultatif, katalase positif dan oksidase negatif. Staphylococcus aureus
tumbuh pada suhu 6,5-46° C dan pada Ph 4,2-9,3. Staphylococcus
mengandung polisakarida dan protein yang bersifat antigenik dan
merupakan substansi penting di dalam struktur dinding sel (Dewi, 2013).

O1A1 16 103
B. URAIAN BAHAN
1. Agar (Ditjen POM, 1979:74).
Nama resmi : Agar
Nama lain : Agar-agar
Pemerian : Berkas potongan memanjang, tipis seperti selaput dan
berlekatan, atau berbentuk keping, serpih atau
butiran, jingga lemah kekuningan, abu-abu
kekuningan sampai putih kekuningan atau tidak
berwarna, tidak berbau atau berbau lemah, rasa
berlendir, jika lembab liat, ika kering rapuh
Kelarutan : Praktis tidak larut dalam air, larut dalam air mendidih
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik
2. Akuades (Ditjen POM, 1979:96).
Nama resmi : Aqua destillata
Nama lain : Air suling
RM/ BM : H2O / 18,02
Rumus struktur : O
H H
Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau, tidak
mempunyai rasa
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.
Stabilitas : Air adalah salah satu bahan kimia yang stabil dalam
bentuk Fisik (es , air , dan uap). Air harus disimpan

O1A1 16 103
dalam wadah yang sesuai. Pada saat penyimpanan
dan penggunaannya harus terlindungi dari
kontaminasi partikel - pertikel ion dan bahan organik
yang dapat menaikan konduktivitas dan jumlah
karbon organik. Serta harus terlindungi dari partikel
– partikel lain dan mikroorganisme yang dapat
tumbuh dan merusak fungsi air.
OTT : Dalam formula air dapat bereaksi dengan bahan
eksipient lainya yang mudah terhidrolisis.
Kegunaan : Sebagai sampel
3. Etanol (Dirjen POM, 1979:65)
Nama resmi : Aethanolum
Nama lain : Etanol / Alkohol
BM/RM : 46,07/C2H6O
Rumus struktur :
Pemerian : Cairan mudah menguap, jernih, tidak berwarna, bau
khas dan menyebabkan rasa terbakar pada lidah.
Mudah menguap meskipun pada suhu rendah dan
mendidih pada suhu 78ºC dan muda terbakar.
Kelarutan : Bercampur dengan air dan praktis bercampur dengan
semua pelarut organik.

O1A1 16 103
Berat Jenis : 0,812 – 0,816 g/ml.
Stabilitas : Mudah menguap walaupun pada suhu rendah.
OTT : Bahan pengoksidasi Bila dicampur dengan alkali,
warna akan menjadi gelap.
Konsentrasi : 60-90 %.
Kegunaan : Anti mikroba, desinfektan, pelarut, penetrasi kulit.

O1A1 16 103
C. URAIAN MIKROBA
1. Pseudomonas aeruginosa (Purwani, dkk., 2009)
a) Klasifikasi
Kingdom : Bacteria
Filum : Probacteria
Classis : Gamma probacteria
Ordo : Pseudomonadales
Familia : Pseudomonadaceae
Genus : Pseudomonas
Spesies : Pseudomonas aeruginosa
b) Morfologi
Pseudomonasaeruginosa merupakan suatu mikroba gram negatif
berbentuk batang lurus atau melengkung, non sporulasi, tidak berkapsul
dan umumnya memproduksi pigmen yang larut air. Pigmentasi
mengandung pyocyanin (berwarna kebiru- biruan) dan fluorecein (warna
kehijau-hijauan).
c) Deskripsi
Pseudomonas aeruginosa adalah salah satu spesies yang merupakan
kontaminan, umumnya terdapat pada kulit dan pada keadaan tertentu
bersifat patogenik. Spesies dari Pseudomonas umumnya ditemukan di air,
tanah dan sering menyebabkan kebusukan pada makanan.

O1A1 16 103
2. Staphylococcus aureus (Dewi, 2013)
a) Klasifikasi
Domain : Bacteria
Kingdom : Eubacteria
Filum : Firmicutes
Classis : Bacilli
Ordo : Bacillales
Famili : Staphylococcaceae
Genus : Staphylococcus
Spesies : Staphylococcus aureus
b) Morfologi
Staphylococcus aureus bersifat non-motil, nonspora, anaerob
fakultatif, katalase positif dan oksidase negatif. Staphylococcus aureus
tumbuh pada suhu 6,5-46° C dan pada pH 4,2-9,3 .
c) Deskrispi
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dan berbentuk
kokus. Staphylococcus aureus mudah tumbuh pada banyak pembenihan
bakteri. Berbagai tingkat hemolisis dihasilkan oleh S. Aureus dan kadang-
kadang oleh spesies bakteri lain. Staphylococcus aureus merupakan agen
penyebab utama mastitis pada sapi perah maupun kambing.

O1A1 16 103
3. Candida albicans
a) Klasifikasi
Divisio : Thallophyta
Subdivisio : Fungi
Classis : Deuteromycetes
Ordo : Moniliales
Familia : Cryptococcaceae
Genus : Candida
Spesies : Candida albicans
b) Morfologi
Morfologi mikroskopis C. albicans memperlihatkan pseudohyphae
dengan cluster di sekitar blastokonidia bulat bersepta panjang berukuran 3-
7x3-14 μm. Jamur membentuk hifa semu/pseudohifa yang sebenarnya
adalah rangkaian blastospora yang bercabang, juga dapat membentuk hifa
sejati. Pseudohifa dapat dilihat dengan media perbenihan khusus.
c) Deskripsi
Candida albicans/C. albicans merupakan bagian dari mikroba flora
normal yang beradaptasi dengan baik untuk hidup pada manusia, terutama
pada saluran cerna, urogenital, dan kulit. Candida albicans penyebab
kandidiasis yang merupakan infeksi jamur dengan insiden tertinggi
disebabkan oleh infeksi oportunistik.

O1A1 16 103
D. URAIAN SAMPEL
1. Kunyit (Curcuma domestica Val.)
a) Klasifikasi
Regum : Plantae
Divisio : Spermatophyta
Classis : Monocotyledonae
Ordo : Zingiberales
Familia : Zingiberaceae
Genus : Curcuma
Spesies : Curcuma Domestica Val.
b) Morfologi
Kunyit (Curcuma domestica Val.) mempunyai batang semua yang
terbentuk dari pelepah daun-daunnya. Ketinggian tanamannya dapat
mencapai 1,0 – 1,5 m, tumbuh tegap dan membentuk rumpun seperti semak
bergerombol. Daunnya tunggal bertangkai dan membentuk lancet bertepi
rata, ujung dan pangkalnya meruncing dan bertulang menyirip permukaan
licin dan berwarna hijau pucat.
c) Deskripsi
Kunyit (Curcuma domestica Val.) merupakan salah satu jenis temu-
temuan yang termasuk dalam famili zingiberaceae yang terdiri atas senyawa
kurkumin dan turunannya yang meliputi desmetoksikurkumin dan
bisdesmetoksikurkumin.

O1A1 16 103
2. Kesambi (Schleichera oleosa)
a) Klasifikasi
Plantae : Plantae
Diviso : Spermatophyta
Classis : Dicotyledonae
Ordo : Sapindales
Familia : Sapindaceae
Genus : Schleichera
Spesies : Schleichera oleosa
b) Deskripsi
Kusambi merupakan salah satu tumbuhan yang sudah dipakai secara
turun temurun untuk bahan bakar pengasapan daging Se’i di daerah Timor
timur. Dalam asap yang dihasilkan diduga terdapat berbagai senyawa aktif
yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba pencemar daging Se’i.
c) Morfologi
Kesambi merupakan tumbuha dengan tinggi ± 25 m, batangnya tegak,
bulat, berkayu, permukaan kasar. Daunnya merupakan daun tunggal
berbentuk lanset yang berseling, panjang 11-25 cm, lebar 2-6 cm, tepi rata,
ujung lancip dan pertulangan menyirip. Bunganya merupakan bunga
majemuk, bentuk tandan, di ketiak daun atau ujung batang, kelopannya 4-6
lembar.

O1A1 16 103
3. Kecombrang
a) Klasifikasi
Plantae : Plantae
Filum : Spermatophyta
Classis : Dicotyledonae
Ordo : Zingiberales
Familia : Zingiberaceae
Genus : Etlingera
Spesies : Etlingera elatior Jack.
b) Deskripsi
Kecombrang (Etlingera elatior Jack.) merupakan salah satu jenis
tananaman rempah-rempah asli indonesia yang termasuk dalam familia
Zingiberaceae yang secara tradisional sudah lama digunakan dan
dimanfaatkan masyarakat sebagai obat-obatan dan penyedap rasa.
c) Morfologi
Kecombrang mempunyai batang semu, bulat gilig dan membesar di
pangkalnya, arah tumbuh tegak, tumbuh berdekat-detakan, membentuk
rumpun jarang, keluar dari rrimpan dan menjalar di bawah tanah.

O1A1 16 103
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. WAKTU DAN TEMPAT
Percobaan ini dilaksanakan pukul 08:00-13:00 WITA pada tanggal 09
Mei 2017, tempat dilakukan percobaan ini adalah di laboratorium
mikrobiologi fakultas farmasi Universitas Halu Oleo.
B. ALAT DAN BAHAN
1. Alat
Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini yaitu :
a) Autoklaf
b) Bunsen
c) Cawan Petri
d) Elektromantel
e) Erlenmeyer 250 mL
f) Gelas kimia 100 mL dan 250 mL
g) Gelas ukur 25 mL dan 50 mL
h) Inkubator
i) Kaca arloji
j) Labu Takar
k) LAF (Laminar Air Flow)
l) Ose lurus dan bulat

O1A1 16 103
m) Pinset
n) Pipet Tetes
o) Rak tabung
p) Spatula
q) Spidol
r) Spoit
s) Tabung reaksi
t) Timbangan analitik
u) vortex
2. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan yaitu :
a) Akuades
b) Alkohol
c) Aluminium Foil
d) Aqua Pro Injection
e) Ekstrak kecombrang
f) Ekstrak kesambi
g) Ekstrak kunyit
h) Kertas cakram
i) Media Nutrient Agar (NA)
j) Media Potatoes Dextrose Agar (PDA)
k) Natrium Klorida (NaCl)

O1A1 16 103
l) Plastic wrap
m) Suspensi bakteri CA (Candida albicans)
n) Suspensi bakteri PA (Pseudomonas aeruginosa)
o) Suspensi bakteri SA (Staphylococcus aureus)
p) Tissue

O1A1 16 103
C. PROSEDUR KERJA
1. Inokulasi Bakteri
a) Disiapkan alat dan bahan
b) Dihidupkan LAF dan dibersihkan meja kerja pada LAF
c) Dibagi meja kerja menjadi tiga bagian, yaitu sisi kanan untuk alat dan
sampel, sisi tengah sebagai tempat kerja dan sisi kiri untuk alat dan bahan
yang tidak digunakan
d) Diisi tabung reaksi dengan media NA/PDA hingga setengah tinggi tabung
dan dimiringkan
e) Dibiarkan memadat
f) Diambil suspensi mikroba yang telah diisolasi menggunakan ose lurus
hingga ujungnya memutih
g) Digoreskan pada media yang memadat didalam tabung reaksi
h) Diletakkan pada rak tabung dan ditutup mulut tabung menggunakan kain
kasa yang telah diisi dengan kapas
i) Diinkubasi selama 1x24 jam untuk bakteri dan 3x24 jam untuk jamur
2. Pembuatan larutan difusi
Pada pembuatan larutan ini digunakan 3 konsentrasi yaitu 10 % ; 20 % ; dan
30 %
a) Konsentrasi 10 %
1) Dipipet 1 ml ekstrak kunyit, kecombrang, kesambi .
2) Ditambahkan larutan API sebanyak 10 ml.

O1A1 16 103
b) Konsentrasi 20 %
1) Dipipet 2 ml ekstrak kunyit, kecombrang, kesambi.
c) Konsentrasi 30 %
1) Dipipet 3 ml ekstrak kunyit, kecombrang, kesambi.
3. Uji Aktivitas Antimikroba dari bahan alam
a) Disiapkan alat dan bahan
b) Disterilisasi pada autoklaf selama 15 menit pada suhu 121°C
c) Dihidupkan LAF dan dibersihkan meja kerja pada LAF
d) Dibagi meja kerja menjadi tiga bagian, yaitu sisi kanan untuk alat dan
sampel, sisi tengah sebagai tempat kerja dan sisi kiri untuk alat dan bahan
yang tidak digunakan
e) Diambil 1 mL suspensi bakteri yang telah diinokulasi dan diencerkan
menggunakan spoit 1 mL
f) Ditambahkan 15 media NA/PDA ke dalam cawan petri berisi suspensi
bakteri
g) Dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat
h) Dibagi media pada cawan petri menjadi 3 bagian
i) Dicelupkan kertas cakram pada masing-masing ekstrak yang telah
diencerkan pada konsentrasi yang berbeda-beda

O1A1 16 103
j) Diletakkan di tengah-tengah media yang telah dibagi menjadi tiga bgaian
pada cawan petri
k) Dibungkus dan diinkubasi selama 1x24 jam untuk bakteri dan 3x24 jam
untuk kapang
l) Dilakukan semua tahapan secara aseptis
m) Diamati dan Dicatat hasil pengamatan

O1A1 16 103
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. HASIL PENGAMATAN
1. Gambar Pengamatan
a) Ekstrak Kunyit
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS HALU OLEO
Paper disck
MEDIA : Nutrient agar

Bakteri : Staphylococcus aureus

O1A1 16 103

FAKULTAS FARMASI
Paper disck

Bakteri : Pseudomonas aeruginosa

FAKULTAS FARMASI
Paper disck
MEDIA : Potatoes Dextrose Agar

Bakteri : Candida albicans

O1A1 16 103
b) Ekstrak Kusambi
FAKULTAS FARMASI
Paper disck


FAKULTAS FARMASI
Paper disck

Bakteri : Pseudomonas aureginosa

O1A1 16 103

FAKULTAS FARMASI
Paper disck
MEDIA : Potatoes Dextrose agar

c) Ekstrak Kecombang

FAKULTAS FARMASI
Paper disck


O1A1 16 103

FAKULTAS FARMASI
Paper disck

Bakteri : Pseudomonas aeruginosa

FAKULTAS FARMASI
Paper disck
MEDIA : Potatoes Dextrose Agar


O1A1 16 103
2. Tabel perhitungan
Zona hambat konsentrasi

(Ekstrak Kunyit)
No. Mikroorganisme
10% 20% 30%
1. Pseudomonas aeruginosa - - -
2. Staphylococcus aureus - - -
3. Candida albicans - - -

(Ekstrak Kesambi)
No. Mikroorganisme
10% 20% 30%
1. Pseudomonas aeruginosa - 1,1 cm 1,42 cm
2. Staphylococcus aureus - - -
3. Candida albicans - - -

(Ekstrak Kecombrang)
No. Mikroorganisme
10% 20% 30%
1. Pseudomonas aeruginosa - 0,79 cm 1,83 cm
2. Staphylococcus aureus - - 0,81 cm
3. Candida albicans 0,54 cm 1,1 cm 1,14 cm

O1A1 16 103
B. PEMBAHASAN
Antimikroba adalah bahan yang dapat membunuh atau
menghambat aktivitas mikroorganisme dengan bermacam-macam cara.
Antimikroba dapat membunuh atau menghambat pertumbuhan
mikroorganisme dengan beberapa cara yaitu merusak dinding sel,
mengganggu permeabilitas sel, merusak molekul protein dan asam
nukleat, menghambat aktivitas enzim, serta menghambat sintesa asam
nukleat. Selain antimikroba sintetik, terdapat pula antimikroba non
sintetik yang berasal dari bahan alam yang biasa digunakan masyarakat
untuk mengobati berbagai penyakit.
Penggunaan antimikroba atau antibakteri yang tidak sesuai dapat
menjadi masalah yang membuat antimikroba tersebut resistensi.
Resistensi meruakan perlawanan yang terjadi ketika bakteri, virus, dan
parasit lainnya secara bertahap kehilangan kepekaan terhadap obat yang
sebelumnya membunuh mereka.
Percobaan ini dilakukan untuk mengetahui dan menguji beberapa
ekstrak bahan yang alam yang memiliki aktivitas sebagai antimikroba.
Dimana ekstrak diperoleh dari proses maserasi beberapa hari dan
dievaporasi, sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sampel dapat
keluar dan dimanfaatkan sebagai bahan uji. Sedangkan mikroorganisme
yang akan di hambat aktivitasnya adalah Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa dan Candida albicans, media yang digunakan
untuk bakteri SA dan PA adalah media Nutrient Agar (NA) sedangkan

O1A1 16 103
untuk kapang CA media yang digunakan adalah Potatoes dextrose agar
(PDA). Dimana sebelum digunakan, bakteri dan kapang yang akan
digunakan diinokulasi dan diinkubasi selama 1x24 jam dan 3x24 jam.
Metode yang digunakan pada percobaan ini adalah metode dilusi
(pengenceran) dan difusi. Sebelum digunakan ekstrak yang diperoleh
diencerkan terlebih dahulu dengan pengenceran bertingkat untuk
memperoleh beberapa variasi konsentrasi yang berbeda-beda yang akan
digunakan sebagai pembanding. Sedangkan untuk proses isolasi
mikroorganismenya dilakukan dengan metode tuang, dimana 1 mL
suspensi bakteri dimasukkan ke dalam cawan peptri dan diberi 15 mL
media sesuai dengan mikroorganisme yang digunakan.
Metode difusi dengan kertas saring atau Kirby-Bauer merupakan
metode yang digunakan untuk mengetahui seberapa besar aktivitas
bahan alam sebagai antimikroba, kertas sarimg yang digunakan dibuat
melingkar dengan diameter 6 mm. Setelah proses isolasi, cawan petri
dibagi menjadi 3 bagian, karena ekstrak yang akan diuji dibuat dalam
beberapa konsentrasi yaitu 10%, 20% dan 30%. Kertas saring
dicelupkan ke masing-masing ekstrak dengan konsentrasi ebrbeda-beda
dan diletakkan ditengah-tengah media yang telah dibagi tadi. Kemudian
diinkubasi selama 1x24 jam untuk baketri dan 3x24 jam untuk jamur.
Ekstrak yang terserap pada kertas saring tadi akan berdifusi ke media,
sehingga akan terlihat lingkarang yang menunjukkan seberpa besar
aktivitas ekstrak tersebut sebagai antimikroba.

O1A1 16 103
Parameter yang dilhat pada percobaan ini adalah zona hambat
yang terbentuk disekitar kertas cakram yang digujikan, sehingga dapat
diketahui apabila ekstrak yang diujikan memiliki daya hambat. Daya
hambat antimikroba berbeda-beda, kekuatan daya hambat bakteri atau
jamur dapat dikategorikan menurut Davis dan Stouk (1971) dibagi atas :
sangat kuat (zona bening > 20 mm), kuat (zona bening 10-20 mm),
sedang (zona bening 5-10 mm) dan lemah (zona bening < 5 mm).
Hasil yang diperoleh pada percobaan ini adalah sampel ekstrak
kunyit tidak memiliki aktivitas antimikroba pada konsentrasi 10%, 20%
dan 30%, karena tidak telihat zona hambat disekitar kertas cakram yang
di simpan pada media yang berisi suspensi bakteri. Hasil yang dieperoleh
tidak sesuai dengan literatur, pada penelitian-penelitian yang telah
dilakukan diketahui bahwa aktivitas senyawa kurkumin dalam rimpang
kunyit mampu menghambat pertumbuhan jamur, virus, dan bakteri baik
gram positif dan negatif seperti Escherichia coli, Klebsiela pneumonia,
Listeria monocytogenes, dan Salmonella, Staphylococcus aureus,
Micrococcus prygenes var, dan Pseudomonas sp.
Ektrak kecombrang pada percobaan ini diketahui memiliki
aktvitas antimikroba pada konsentrasi 10%, 20% dan 30%, karena
memiliki daya hambat yang dapat menghambat pertumbuhan Candida
albicans dengan zona hambat 0,54 cm pada konsentrasi 10%, 1,1 cm
pada konsentrasi 20% dan 1,14 pada konsentrasi 30%, dan zona hambat
pada Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 20% sebesar 0,79, pada

O1A1 16 103
konsenrasi 30% sebesar 1,83 cm. Serta zona hambat pada Staphylococcus
aureus sebesar 0,81 cm pada konsentrasi 30%. Hasil yang diperoleh
sudah sesuai dengan literatur, dimana pada penelitian-penelitian yang
telah dilakukan diketahui bahwa ekstrak rimpang dan bunga
kecombrang yang mengandung senyawa fenolik, flavanoid, minyak atsiri,
alkaloid dan lain-lain yang memiliki aktivitas antimikroba.
Ektrak kesambi pada percobaan ini diketahui memiliki aktivitas
antibakteri, yang dapat menghambat pertumbuhan Pseudomonas
aeruginosa, dengan zona hambat sebesar 1,1 cm pada konsentrasi 20%
dan 1,42 cm pada konsentrasi 30%. Hasil yang diperoleh pada percobaan
ini sesuai dengan literatur, dimana pada penelitian yang telah dilakukan
diketahui bahwa ektrak kesambi mengandung senyawa fenol yang dapat
membentuk ikatan kompleks dengan membran plasma sel bakteria,
sehingga dapat mengganggu permeabilitas membran sel atau memacu
terjadinya lisis pada sel bakteri. namun bakteri yang dapat dihambat
pertumbuhannya pada penelitian tersebut adalah E. coli. Fenomena
inilah yang menyebabkan senyawa fenol tersebut dapat berperan
sebagai senyawa antibakteria.
Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil yang didapat tidak sesuai
dengan literatur adalah perbedaan konsentrasi yang digunakan, cara
kerja yang tidak baik, kesalahan pada saat mencelupkan kertas cakram
yang digunakan, bisa saja kertas camkram tidak tercelup dengan baik
pada ekstrak yang telah diencerkan, serta kesalahan pada saat

O1A1 16 103
dilakukannya pengenceran untuk membuat variasi konsentrasi dari
ekstrak bahan alam.
Manfaat percobaan ini dalam bidang farmasi adalah dengan
mengetahui cara menguji aktivitas antimiroba dari bahan alam, akan
memudahkan dan membantu bagi seorang farmasis untuk membuat
sediaan dari bahan alam yang memiliki aktivitas dan potensi sebagai
antimikroba untuk menggantikan obat-obat sintetik yang telah
mengalami resisten.

O1A1 16 103
BAB V
PENUTUP
A. KESIMPULAN
Kesimpulan pada percobaan ini adalah pengujian aktivitas
antimikroba dari bahan alam dapat dilakukan dengan metode agar
difusion (difusi agar) menggunakan kertas cakram dengan melihat
seberapa besar zona hambatnya.
B. SARAN
Saran pada percobaan ini adalah agar semua alat satu hari sebelum
praktikum di sterilisasi terlebih dahulu, agar dapat mengefisienkan waktu
pada saat melakukan percobaan.

O1A1 16 103
DAFTAR PUSTAKA
Dewi Amalia Khirsna, 2013, Isolasi, Identifikasi Dan Uji Sensitivitas

Staphylococcus aureus Terhadap Amoxicillin Dari Sampel Susu
Kambing Peranakan Ettawa (Pe) Penderita Mastitis Di Wilayah
Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta, Jurnal Sains Veteriner, Vol. 31
(2).
Ditjen POM RI, 1979, Farmakope Indonesia Edisi III, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta.
Lestari, D. E., Dan Utomo, S. B., 2010, Pengaruh Bioksida Pengoksidasi

Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme Pada Air Pendingin
Sekunder, Rsg-Gas. Jfn. Vol 4 (2).
Neil, 2006, Farmakologi Medis, Erlangga: Jakarta.
Nikham, dan Taty E, 2012, Uji Bahan Baku Antibakteri Dari Buh Mahkota
Dewa (Phaleria Macrocarpa (Scheff) Boerl.) Hasil Iradiasi Gamma
Dan Antibiotik Terhadap Bakteri Patogen, Jurnal Ilmiah Ilmu
Pengetahuan dan Teknologi Bahan. Vol 1 (1)
Nofiani, R., Siti N., dan Ajuk S., 2009, Aktivitas Antimikroba Ekstrak Metanol
Bakteri Berasosiasi Spons Dari Pulau Lemukutan, Kalimantan
Barat, E-Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis, Vol. 1 (2).
Sitepu, Irma S., I Ketut S,. I Gede K., 2012. Uji Aktivitas Antimikroba Beberapa
Ekstrak Bumbu Dapur Terhadap Pertumbuhan Jamur Curvularia
Iunata (Wakk.) Boed. Dan Asperigillus flavus LINK. Jurnal
Agroekoteknologi Tropika. Vol 1 (1).
Purwani E, Setyo, W. N. H., Rusdin R, 2009, Respon Hambatan Bakteri Gram

Positif Dan Negatif Pada Ikan Nila (Oreochromis niloticus) Yang
Diawetkan Dengan Ekstrak Jahe (Zingiber officinale), Jurnal
Kesehatan, Vol. 2 (1).

O1A1 16 103
LAMPIRAN
A. SKEMA KERJA
1. Uji Difusi
a) Nutrient Agar
Bakteri
Suspensi biakan + NA Medium NA
bakteri Dipadatkan
Cawan Petri Steril
Ekstrak 10%
Ekstrak 20% Ekstrak 30%
Diinkubasi pada suhu 37⁰C selama

3 x 24 jam dan 2x24 jam
Di amati
Diukur zona hambatannya

O1A1 16 103
b) Potatoes Dextrose Agar
Suspensi biakan bakteri Jamur Medium PDA

+ PDA
Dipadatkan
Cawan Petri Steril
Ekstrak 10%
Ekstrak 20% Ekstrak 30%
Diinkubasi pada suhu 37⁰C selama
1 x 24 jam
Di amati
Diukur zona hambatannya

O1A1 16 103
B. KOMPOSISI
1. Nutrient Agar (NA)
a. Peptic digest of animal tissue 5.00 gr
b. Natrium klorida 5.00 gr
c. Extract beef 1.5 gr
d. Extract yeast 1.5 gr
e. Agar 15 gr
f. Aquades 1000 mL
2. Potato Dextrose Agar (PDA)
a. Potatos infusion from 200 gr
b. Dekstrosa 20 gr
c. Agar 15 gr
d. Aquades 1000 mL
C. PERHITUNGAN MEDIA
1. Pembuatan media
a) Nutrient Agar (NA)
Untuk membuat NA sintetik, dilarutkan 20 gram serbuk NA
dalam 1000 mL/1 L dalam akuades, maka untuk membuat nedia
NA sintetik 250 mL dibutuhkan sebanyak :
20 g X gram
=
1000 mL 250 mL
20 𝑔 𝑥 250 𝑚𝐿
𝑋=
1000 𝑚𝐿
= 5 𝑔𝑟𝑎𝑚
b) Potato Dextrose Agar (PDA)

Untuk membuat PDA sintetik, dilarutkan 39 gram serbuk
PDA dalam 1000 mL/1 L dalam akuades, maka untuk membuat
nedia PDA sintetik 250 mL dibutuhkan sebanyak :

O1A1 16 103
39 g X gram
=
1000 mL 250 mL
39 𝑔 𝑥 250 𝑚𝐿
𝑋=
1000 𝑚𝐿
= 9,75 𝑔𝑟𝑎𝑚
2. Aktivitas Ekstrak Bahan Alam

a. Ekstrak Kesambi Bakteri Pseudomonas aeruginosa
10% = A + B + C + D
4
= 0+0+ 0+0
4
= 1,1 cm
20% = A + B + C + D
4
= 1,1 + 1,0 + 1,2 + 1,1
4
= 1,1 cm
30% = A + B + C + D
4
= 1,3 + 1,5 + 1,4 + 1,5
4
= 1,42 cm
b. Ekstrak Kecombrang Bakteri Pseudomonas aeruginosa
0,1% = A + B + C + D
4
= 0,85 + 0,7 + 0,65 + 1,0
4
= 0,79 cm
0,15% = A + B + C + D
4
= 1,8 + 1,9 + 1,9 + 1,7
4
= 1,83 cm

O1A1 16 103
c. Ekstrak Kecombrang Bakteri Staphylococcus aureus

0,15% = A + B + C + D
4
= 0,9 + 0,8 + 0,85 + 0,7
4
= 0,81 cm
d. Ekstrak Kecombrang Jamur Candida albicans
0,05% = A + B + C + D
4
= 0,5 + 0,6 + 0,55 + 0,5
4
= 0,54 cm
0,1% = A + B + C + D
4
= 0,9 + 1,2 + 1,1 + 1,2
4
= 1,1 cm
0,15% = A + B + C + D
4
= 1,15 + 1,2 + 1,2 + 1,0
4
= 1,14 cm

O1A1 16 103

Uji Aktivitas Antimikroba

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Uji Aktivitas Antimikroba

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DARI BAHAN ALAM 1

Mikroorganisme adalah makhluk hidup yang berukuran sangat kecil

dengan bantuan mikroskop, dimana mikroorganisme memiliki karakteristik

tersendiri yang membedakannya dengan hewan dan tumbuhan.

hewan dan tumbuhan yaitu mampu mengadakan pertumbuhan dan

Antimikroba merupakan suatu senyawa yang dapat membunuh atau

menghambat aktivitas mikroorganisme dengan cara menimbulkan

gangguan pada senyawa penyusun dinding sel, peningkatan permeabilitas

membran sel yang dapat menyebabkan kehilangan cairan sel,

menginaktivasi enzim, dan destruksi atau fungsi material genetik dari

mikroorganisme. Namun, dewasa ini kebanyak antibiotik telah mengalami

Ekstrak bahan alam mengandung banyak metabolit sekunder yang

bertujuan untuk mengetahui apakah bahan alam yang diujikan dapat

menghambat aktivitas dari suatu mikroba, mengingat banyaknya obat-

EVI APRIYANI NURNANINGSIH

obatan yang telah resisten, sehingga mendorong penemuan senaywa baru

yang efektif dalam membasi atau menghambat pertumbuhan bakteri. Oleh

karena itu, dilakukanlah percobaan ini untuk mengetahui aktivitas

seberapa luas zona hambat dari esktrak tersebut.

Rumusan masalah pada percobaan uji aktivitas antimikroba dari

bahan alam adalah bagaimana pengujian aktivitas antimikroba dari

ekstrak bahan alam?

Tujuan dilakukannya percobaan uji aktivitas antimikroba dari

bahan alam adalah untuk mengetahui cara pengujian aktivitas

antimikroba dari ekstrak bahan alam.

Manfaat dari percobaan uji aktivitas antimikroba dari bahan alam

adalah mahasiswa mampu mengetahui cara pengujian aktivitas

antimikroba .dari ekstrak bahan alam.

EVI APRIYANI NURNANINGSIH

Antibakteri adalah zat yang dihasilkan oleh suatu mikroba, terutama

fungi yang dapat menghambat atau dapat membasmi mikroba lainnya.

Namun dalam perkembangannya antibakteri yang tidak dihasilkan dari

bakteri juga sering digolongkan sebagai antibiotik, misalnya tumbuhan

tingkat tinggi yang sebenarnya memiliki daya antibiotik (Nikham, 2012).

Senyawa antimikroba merupakan salah satu produk metabolit

sekunder. Pembentukan senyawa metabolit sekunder dikode oleh sejumlah

kondisi yang mempengaruhi metabolit sekunder yaitu : keterbatasan nutrisi

yang tersedia di lingkungan tumbuh suatu bakteri. Penambahan senyawa

penginduksi dan penurunan kecepatan pertumbuhan. Umumnya metabolit

sekunder tidak terbentuk jika lingkungan tumbuh mengandung cukup

nutrisi untuk pertumbuhan bakteri karena senyawa tersebut bukan unsur

esensial bagi pertumbuhan dan reproduksi sel (Nofiani., 2009).

Resistensi terhadap obat antimikroba bisa didapat atau bawaan, pada

kasus resistensi bawaan, semua spesies bakteri, bisa resisten terhadap

Pseudomonas aeruginosa selalu resisten terhadap flukloksasilin. Yang

pernah sensitive terhadap suatu obat menjadi resistensi. Mekanisme yang

EVI APRIYANI NURNANINGSIH

bertanggung jawab untuk resistensi terhadap obat antimikroba adalah

sebagai berikut : menginaktivasi enzim yang merusak obat, mengurangi

akumulasi obat, dan perkembangan jalur metabolik alternatif (Neil, 2006).

Mekanisme penghambatan mikroorganisme oleh senyawa

antimikroba dapat disebabkan oleh beberapa faktor, antara lain: (1)

gangguan pada senyawa penyusun dinding sel, (2) peningkatan

permeabilitas membran sel yang dapat menyebabkan kehilangan cairan sel,

Mikroorganisme merupakan jasad hidup yang mempunyai ukuran

sangat kecil (biasanya kurang dari 1 mm) sehingga untuk mengamatinya

diperlukan alat bantuan. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal

(uniselular) meskipun beberapa protista bersel tunggal masih terlihat oleh

telanjang. Ilmu yang mempelajari mikroorganisme disebut mikrobiologi

(Lestari dkk., 2010).

Pseudomonas aeruginosa merupakan suatu mikroba gram negatif

berbentuk batang lurus atau melengkung, non sporulasi, tidak berkapsul

dan umumnya memproduksi pigmen yang larut air. Pseudomonas