PEWARNAAN BAKTERI

PENGECATAN BAKTERI 1
BAB I
PENDAHULUAN
A. LATAR BELAKANG
Pemanfaatan mikroorganisme dalam bidang teknologi semakin banyak
digunakan misalnya dalam menghasilkan berbagai produk seperti bahan
pangan, industri, pertanian, obat-obatan, dan lain sebagainya. Pemilihan
mikroorganisme yang tepat untuk suatu tujuan tertentu dan pemanfaatan
mikroorganisme secara maksimal perlu didukung oleh suatu metode isolasi
dan identifikasi yang baik.
Secara alami, mikroba di alam ditemukan dalam populasi campuran.
Untuk memperoleh biakan murni dapat dilakukan isolasi dari sampel.
Mikroorganisme umumnya ada yang bersifat patogen dan ada yang bersifat
non-patogen. Mikroorganisme yang bersifat patogen biasanya dapat
menimbulkan menimbulkan berbagai penyakit dan merugikan makhluk
hidup, sedangkan yang bersifat non-patogen dapat dimanfaatkan sebagai
bahan dalam pembuatan produk industri, baik makanan, minuman dan obat-
obatan.
Bakteri merukan salah satu mikroorganisme yang jenisnya dialam
berlimah. Bakteri berdasarkan komposisi dinding selnya dibagi menjadi 2,
yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Pengamatan morfologi
bakteri sangat penting guna untuk membantu mengidentifikasi apakah
bakteri tersebut termasuk gram positif atau gram negatif. Oleh karena itu,
EVI APRIYANI FISMATULLAH MALAIJI, S.Farm

O1A1 16 103
dilakukanlah percobaan ini untuk mengetahui apakah bakteri yang diteliti
termasuk bakteri gram positif atau bakteri gram negatif. Teknik yang
digunakan untuk mengidentifikasi bakteri adalah dnegan melakukan
pewarnaan. Pewarnaan bakteri bertujuan untuk mempermudah pengamatan
morfologi baketeri dibawah mikroskop sehingga dapat diebdakan antara
bakteri gram positif dan bakteri gram negatif.
B. Rumusan Masalah
Rumusan masalah dari percobaan ini adalah :
1. Bagaimana cara melakukan perwarnaan pada bakteri ?
2. Bagaimanakah bentuk dan morfologi dari bakteri ?
C. Tujuan
Tujuan pada percobaan ini adalah :
1. Untuk mengetahui cara melakukan pewarnaan pada bakteri
2. Untuk mengetahui bentuk dan morfologi dari bakteri
D. Manfaat
Manfaat pada percobaan ini adalah :
1. Agar dapat mengetahui cara melakukan pewarnaan pada bakteri
2. Agar dapat mengetahui bentuk dan morfologi dari bakteri

O1A1 16 103
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. TEORI UMUM
Mikroorganisme merupakan jasad hidup yang mempunyai ukuran
sangat kecil (biasanya kurang dari 1 mm) sehingga untuk mengamatinya
diperlukan alat bantuan. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal
(uniselular) meskipun beberapa protista bersel tunggal masih terlihat oleh
mata telanjang dan ada beberapa spesies multisel tidak terlihat mata
telanjang. Ilmu yang mempelajari mikroorganisme disebut mikrobiologi
(Lestari., dkk, 2010).
Sel bakteri amat beragam panjangnya, sel beberapa spesies berukuran
100 kali lebih panjang daripada sel spesies yang lain. Satuan ukuran bakteri
ialah mikrometer, yang setara dengan 1/1000 mm atau 10-3 mm. Masing-
masing ciri ini penting dalam pengamatan morfologi suatu spesies. Sel
bakteri yang berbentuk bola dinamakan kokus. Sel bakteri yang berbentuk
batang atau slindris dinamakan basilus (Pelczar dan Chan, 2008).
Bakteri gram positif dinding selnya mengandung peptidoglikan dan
juga asam teikoat dan asam teikuronat. Oleh sebab itu dinding sel bakteri
gram positif sebagian adalah polisakarida. Sedangkan pada dinding sel
bakteri gram negatif terdapat peptidoglikan yang sedikit sekali dan berada
diantara selaput luar dan selaput dalam dinding sel. Jadi, setelah disimpulkan
bakteri gram positif mengalami proses denaturasi sel terlebih dahulu di
bandingkan dengan bakteri gran negatif. Karena Dinding sel yang paling

O1A1 16 103
mudah terjadi denaturasi adalah dinding sel yang tersusun oleh polisakarida
di bandingkan dengan dinding sel yang tersusun oleh fosfolipid (Helmiyati
dan Nurrahman, 2010).
Pseudomonas aeruginosa merupakan suatu mikroba gram negatif
berbentuk batang lurus atau melengkung, non sporulasi, tidak berkapsul dan
umumnya memproduksi pigmen yang larut air. Pseudomonas aeruginosa
adalah salah satu spesies yang merupakan kontaminan, umumnya terdapat
pada kulit dan pada keadaan tertentu bersifat patogenik (Purwani, dkk.,
2009).
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dan berbentuk
kokus. Staphylococcus aureus bersifat non-motil, nonspora, anaerob
fakultatif, katalase positif dan oksidase negatif. Staphylococcus aureus
tumbuh pada suhu 6,5-46° C dan pada pH 4,2-9,3. Staphylococcus
mengandung polisakarida dan protein yang bersifat antigenik dan
merupakan substansi penting di dalam struktur dinding sel (Dewi, 2013).
Pengamatan morfologi koloni dilakukan dengan melihat bentuk, tepi,
elevasi dan warna dan untuk pengamatan morfologi sel dilakukan teknik
pewarnaan gram dengan tujuan mengetahui warna dan jenis gram sel bakteri
tersebut (Sardani, dkk., 2015).
Pewarnaan Gram digunakan untuk mengetahui morfologi sel bakteri
serta untuk membedakan bakteri gram positif dan gram negatif. Bakteri
gram positif pada pewarnaan Gram berwarna ungu disebabkan kompleks zat
warna kristal violet-yodium tetap dipertahankan meskipun diberi larutan

O1A1 16 103
pemucat aseton alkohol, sedangkan bakteri gram negatif berwarna merah
sebab kompleks tersebut larut pada saat pemberian larutan pemucat aseton
alkohol sehingga mengambil warna merah safranin (Fitri dan Yekki, 2011).
Teknik pewarnaan pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat
macam yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan
diferensial dan pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau
jasad- jasad renik lain dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarna
pada lapisan tipis, atau olesan, yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan
sederhana. Prosedur pewarnaan yang menampilkan perbedaan di antara sel-
sel bakteri atau bagian-bagian sel bakteri disebut teknik pewarnaan
diferensial. Sedangkan pengecatan struktural hanya mewarnai satu bagian
dari sel sehingga dapat membedakan bagian-bagian dari sel. Termasuk dalam
pengecatan ini adalah pengecatan endospora, flagella dan pengecatan kapsul
(Jiwantarum, dkk., 2016)
Uji Gram dilakukan dengan cara metode pengecatan Gram. Satu tetes
Kristal violet ditambahkan pada preparat yang telah di olesi isolat BAL.
Preparat dibiarkan selama 1 menit dan dicuci dengan akuades. Sebanyak 1
tetes iodium ditambahkan kedalam preparat, dibiarkan selama 2 menit dan
dibilas dengan akuades. Preparat dicuci ulang menggunakan etanol 95% dan
dibilas pada air mengalir. ditambahkan safranin, dibilas pada air yang
mengalir. Preparat yang mengandung bakteri tersebut dikeringkan dan
diamati menggunakan mikroskop. Warna ungu menunjukkan sel bakteri
merupakan Gram positif (Sari, dkk, 2012).

O1A1 16 103
B. URAIAN BAHAN
1. Alkohol (Ditjen POM, 1979 : 65).
Nama resmi : Aethanolum
Nama lain : Etanol / Alkohol
Rumus molekul : C2H5OH / 46,07 g/mol
Rumus struktur :
Pemerian : Cairan mudah menguap, jernih, tidak berwarna,
bau khas dan menyebabkan rasa terbakar pada
lidah. Mudah menguap meskipun pada suhu
rendah dan mendidih pada suhu 78ºC dan
mudah terbakar.
Kelarutan : Bercampur dengan air dan praktis bercampur
dengan semua pelarut organik.
Berat Jenis : 0,812 – 0,816 g/ml.
Stabilitas : Mudah menguap walaupun pada suhu rendah.
Penyimpanan : Wadah tertutup rapat, jauh dari api.
Kegunaan : Anti mikroba, disinfektan, pelarut, penetrasi.
2. Agar (Ditjen POM RI, 1979)
Nama resmi : AGAR
Pemerian : Tidak berbau atau bau lemah, berasal musilago
pada lidah.

O1A1 16 103
Kelarutan : Tidak larut dalam air dingin dan larut dalam air
mendidih.
Kegunaan : Sebagai bahan pemadat medium.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.
3. Aquadest (Ditjen POM RI, 1979 : 96)
Nama resmi : AQUA DESTILLATA
Nama lain : Air suling
RM/BM : H2O/18,02
R. struktur :
Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna,tidak berbau,
tidak berasa.
Kegunaan : Sebagai sumber nutrien mikroba dan pelarut
medium.
4. Dekstrosa (Ditjen POM Edisi III, 1979)
Nama resmi : DEXTROSUM
Nama lain : Glukosa, Dekstrosa
RM / BM : C6H12O6/180,16
Rumus struktur :

O1A1 16 103
Pemerian : Hablur tidak berwarna, serbuk halus atau
butiran putih, tidak berbau, rasa manis.
Kelarutan : Mudah larut dalam air, sangat mudah larut
dalam air mendidih, agak sukar larut dalam
etanol (95%).
Kegunaan : Sebagai sumber nutrient yang spesifik
5. Ekstrak daging (Ditjen POM Edisi III, 1979)
Nama resmi : BEEF EXTRACT
Pemerian :Berbau dan berasa pada lidah. Kaldu daging sapi
konsentrat diperoleh dengan mengekstraksi
daging sapi segar tanpa lemak, dengn cara
merebus dalam air dan menguapkan kaldu pada
suhu rendah dalam hampa udara sampai
terbentuk residu kental berbentuk pasta. Massa
berbentuk pasta, berwarna coklat kekuningan
sampai coklat tua, bau dan rasa seperti daging,
sedikit asam.
Kelarutan : Larut dalam air dingin.
Kegunaan : Sumber protein untuk pertumbuhan
mikroorganisme.
Penyimpanan : Simpan dalam wadah tertutup rapat, tidak
tembus cahaya.

O1A1 16 103
6. Iodin (Dirjen POM, 1979 : 316)
Nama Lain : Iodium
RM/ BM : I2 / 126,1 g/mol
Rumus struktur :I-I
Pemerian : Keping atau butir, berat, mengkilat, seperti
logam; hitam kelabu; bau khas.
Kelarutan : Larut dalam lebih kurang 3500 bagian air,13
bagian dalam etanol 95 % P, dalam lebih kurang
80 bagian gliserol P, dan dalam lebih kurang 4
bagian karbondisulfida P;larut kloroform P dan
karbontetraklorida P.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik
Kegunaan : Sebagai bahan dasar pembuatan iodoform
7. Kristal Violet (Ditjen POM, 1979)
Nama resmi : Kristal violet
Pemerian : Hablur berwarna hijau tua
Kelarutan : Sukar larut dalam air; agak sukar larut dalam
etanol (95%) P dan dalam asam asetat glasial P.
Larutannya berwarna lembayung tua
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik
Kegunaan : Sebagai cat utama atau gram A dalam
pengecatan gram

O1A1 16 103
8. Metilen Blue (Ditjen POM, 1995 : 554).
Nama resmi : Metylen blue
RM / BM : C37H27N3Na2O9S3 / 799,80 g/mol
Rumus struktur :
Pemerian : Serbuk biru gelap
Kelarutan : Larut dalam air
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat
Kegunaan : Sebagai pewarna
9. Pepton (Farmakope Indonesia, edisi III, Hal : 721)
Nama Resmi : PEPTON
Nama Lain : Pepeton kering
Pemerian : Serbuk kuning kemerahan sampai coklat, bau
khas tidak busuk.
Kelarutan : Larut dalam air, memberika larutan berwana
coklat kekuningan yang bereaksi agak asam;
praktis tidak larut dalam etanol (95%) p dan
dalam eter P.
Kegunaan : Sebagai sumber nitrogen

O1A1 16 103
10. Safranin (Ditjen POM, 1979 : )
Nama resmi : Safranin
Pemerian : Serbuk halus berwarna biru keunguan.
Kelarutan :Tidak larut dalam air, mudah larut dalam etanol
Kegunaan : Sebagai komposisi cat D.

O1A1 16 103
C. URAIAN BAKTERI
1. Pseudomonas aeruginosa
a) Klasifikasi
Kingdom : Bacteria
Filum : Probacteria
Classis : Gamma probacteria
Ordo : Pseudomonadales
Familia : Pseudomonadaceae
Genus : Pseudomonas
Spesies : Pseudomonas aeruginosa
b) Morfologi
Pseudomonasaeruginosa merupakan suatu mikroba gram negatif
berbentuk batang lurus atau melengkung, non sporulasi, tidak berkapsul dan
umumnya memproduksi pigmen yang larut air. Pigmentasi mengandung
pyocyanin (berwarna kebiru- biruan) dan fluorecein (warna kehijau-hijauan).
c) Deskripsi
Pseudomonas aeruginosa adalah salah satu spesies yang merupakan
kontaminan, umumnya terdapat pada kulit dan pada keadaan tertentu
bersifat patogenik. Spesies dari Pseudomonas umumnya ditemukan di air,
tanah dan sering menyebabkan kebusukan pada makanan.

O1A1 16 103
2. Staphylococcus aureus
a) Klasifikasi
Domain : Bacteria
Kingdom : Eubacteria
Filum : Firmicutes
Classis : Bacilli
Ordo : Bacillales
Famili : Staphylococcaceae
Genus : Staphylococcus
Spesies : Staphylococcus aureus
b) Morfologi
Staphylococcus aureus bersifat non-motil, nonspora, anaerob
fakultatif, katalase positif dan oksidase negatif. Staphylococcus aureus
tumbuh pada suhu 6,5-46° C dan pada pH 4,2-9,3. Koloni tumbuh dalam
waktu 24 jam dengan diameter mencapai 4 mm.
Koloni pada perbenihan padat berbentuk bundar, halus, menonjol
dan berkilau. Staphylococcus aureus membentuk koloni berwarna abu-abu
sampai kuning emas tua. Staphylococcus aureus membentuk pigmen
lipochrom yang menyebabkan koloni tampak berwarna kuning keemasan dan
kuning jeruk. Pigmen kuning tersebut membedakannya dari Staphylococcus
epidermidis yang menghasilkan pigmen putih Pigmen kuning keemasan
timbul pada pertumbuhan selama 18-24 jam pada suhu 37° C, tetapi
membentuk pigmen paling baik pada suhu kamar (20-25° C).

O1A1 16 103
c) Deskrispi
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dan
berbentuk kokus. Staphylococcus aureus mudah tumbuh pada banyak
pembenihan bakteri. Berbagai tingkat hemolisis dihasilkan oleh S. Aureus dan
kadang-kadang oleh spesies bakteri lain. Staphylococcus aureus merupakan
agen penyebab utama mastitis pada sapi perah maupun kambing.
3. Escherichia coli
a. Klasifikasi
Kingdom : Prokaryot
Divisi : Gracilicutes
Class : Scotabacteria
Ordo : Eubacteriales
Family : Enterobacteriaceae
Genus : Escherichia
Species : Escherichia coli
b. Morfologi
Bakteri ini termasuk flora normal tubuh yang berbentuk batang
pendek (kokobasil) berukuran 0,4-0,7 µm x 1,4 µm dan bersifat gram negatif.
E. coli termasuk bakteri anaerob fakultatif sehingga dapat hidup dalam
kondisi aerob maupun anaerob.

O1A1 16 103
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. WAKTU DAN TEMPAT
Percobaan ini dilaksanakan pukul 08:00 WITA pada tanggal 16 April
2017, tempat dilakukan percobaan ini adalah di laboratorium mikrobiologi
fakultas farmasi Universitas Halu Oleo.
B. ALAT DAN BAHAN
1. Alat
Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini yaitu :
a) Autoklaf
b) Baskom
c) Batang pengaduk
d) Botol semprot
e) Bunsen
f) Cawan petri
g) Cover glass
h) Deck glass
i) Inkubator
j) LAF (Laminar Air Flow)
k) Mikroskop
l) Ose lurus dan bulat

O1A1 16 103
m) Pipet tetes
n) Rak tabung
o) Tabung reaksi
2. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini yaitu :
a) Alkohol 70%
b) Aluminium foil
c) Aquadest
d) Larutan etil alkohol 95%
e) Larutan iodin
f) Larutan Kristal violet
g) Larutan metilen blue
h) Larutan safranin
i) Medium PDA
j) Sampel
1) Bakteri Escheria coli
2) Bakteri Pseudumonas aeruginosa
3) Bakteri Staphylococcus aureus

O1A1 16 103
C. PROSEDUR KERJA
Prosedur kerja pada percobaan ini adalah :
1. Sterilisasi alat
Alat
- Disiapkan semua alat yang akan digunakan
- Dibungkus dengan kertas
- Dimasukkan ke dalam autoklaf untuk disterilkan
Alat-alat steril
2. Pembuatan Cat A (Larutan kristal violet)

Kristal violet
- Dibuat larutan A (2 g Kristal violet dilarutkan dalam 20 ml

etil alkohol)
- Dibuat larutan B (0,8 g ammonium oksalat dilarutkan dalam
80 ml water steril)
- Dimasukkan larutan A dan larutan B ke dalam labu takar
- Dihomogenkan
- Dimasukkan dalam botol gelap
Cat A (Larutan kristal violet)
3. Pembuatan Cat B (Larutan iodin)

Larutan iodin
- Ditimbang iodine 1 g dan KI 2 g
- Dilarutkan dalam 300 ml water steril
- Diaduk hingga larut
Cat B (Larutan iodin)

O1A1 16 103
4. Pembuatan Cat C (Larutan Etil alkohol)

Etil alkohol
- Diambil etil alkohol 95% sebanyak 95 ml

- Ditambahkan 5 ml air water steril
Cat C (Larutan Etil alkohol)
5. Pembuatan Cat D (Larutan safranin)

Etil alkohol
- Diambil 0,2 ml safranin

- Diencerkan dengan etil alkohol 95% sebanyak 10 ml
- Dicukupkan hingga 100 ml dengan water steril
- Digojok
Cat D (Larutan safranin)
6. Pewarnaan Sederhana
Sampel
- Diambilkan sampel dengan menggunakan jarum ose bulat
- Disimpan di atas kaca objek dengan cara digores
- Dikeringkan dengan cara dipanaskan diatas api kecil
- Ditetesi larutan metilen blue sebanyak 1 tetes
- Didiamkan selama 30 detik
- Difiksasi diatas nyala api atau diatas bunsen
- Ditutup dengan menggunakan deck glass
- Diamati bentuk bakteri di bawah mikroskop
Hasil pengamatan ?

O1A1 16 103
7. Pewarnaan Gram
Sampel
- Ditetesi larutan Kristal violet sebanyak 1 tetes
- Difiksasi diatas nyala api atau di atas Bunsen
- Dicuci dengan air mengalir
- Ditetesi larutan iodine sebanyak 1 tetes
- Difiksasi di atas nyala api
- Ditetesi dengan larutan etil alkohol
- Ditetesi larutan safranin sebanyak 1 tetes
- Difiksasi diatas nyala api
- Diamati bentuk dan jenis bakteri di bawah mikroskop
Hasil pengamatan ?

O1A1 16 103
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. HASIL PENGAMATAN
Hasil pengamatan dari percobaan ini yaitu :
No Jenis Bakteri Gambar Bentuk
Escherichia
1 Coccus
coli
Pseudomonas
2 Bacillus
aeruginosa
Staphylococcus
3 Coccus
aureus

O1A1 16 103
Staphylococcus
4 Coccus
aureus
Staphylococcus
5. Coccus
aureus
Staphylococcus
6. Coccus
aureus
2. Pewarnaan Gram
No Jenis Bakteri Gambar Warna
Ungu (Bakteri
1 Escherichia coli
gram positif)

O1A1 16 103
Pseudomonas Merah (Bakteri

2
aeruginosa gram negatif)
Staphylococcus Ungu (Bakteri

3
aureus gram positif)

4

5

O1A1 16 103
Ungu (Bakteri
6. Escherichia coli
gram positif)

O1A1 16 103
B. PEMBAHASAN
Mikroorganisme merupakan makhluk hidup yang berukuran kecil
(mikroskopis), yang memiliki bentuk kehidupan serta karakteristik yang khas
yang bisa dibedakan dari organisme lain, terutama mampu hidup diberbagai
habitat. Secara alami, mikroba di alam ditemukan dalam populasi campuran.
Bakteri adalah salah satu jenis mikroorganisme yang hampir tumbuh pada
semua tempat dan memiliki banyak peranan dan kerugian bagi makhluk
hidup.
Inokulasi adalah suatu cara untuk memindahkan biakan murni dair
suatu media ke media lain yang sejenis atau berbeda. Tujuan dilakukannya
isolasi dan inokulasi adalah untuk memisahkan mikroba satu dengan mikroba
lain yang berasal dari campuran mikroba dan untuk mempelajari sifat biakan,
morfologinya. Inokulasi dilakukan satu hari sebelum pengecatan, agar mikroba
dapat tumbuh dengan baik karena umunya pertumbuhan bakteri yang baik
adalah 1x24 jam. Metode yang digunakan pada proses inokulasi adalah metode
gores dengan menggunakan media miring. Hal ini agar memudahkan
pengambilan baketri pada saat pewarnaan. Oleh karena itu, dilakukan
pengujian mikroorganisme melalui inokulasi pada praktikum mikrobiologo,
salah satunya adalah pewarnaan gram.
Pewarnaan gram atau metode gram merupakan salah satu metode
empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar
yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Bakteri gram positif
merupakan bakteri yang dapat mempertahankan zat warna metil ungu pada

O1A1 16 103
saat pewarnaan gram sedangkan bakteri gram negatif tidak dapat
mempertahankan zat warna tersebut.
Perbedaan gram positif dan gram negatif adalah bakteri gram positif
memiliki struktur dinding sel dengan kandungan peptidoglikan yang banyak
dan tebal dang mengandung asam teikoat dan asam teikuronat sedangkan
bakteri gram negatif memiliki struktur dinding sel dengan kandungan lipid
(fospolipid) yang tinggi. Selain itu bakteri gram posiitif mengalami
denaturasi lebih ceoat dibandingkan bakteri gram negatif karena hanya
memiliki sedikit kandungan lipid. Tujuan dilakukannya pengecatan bakteri
adalah untuk membedakan morfologi antara bakteri gram positif dengan
bakteri gram negatif dengan melihat perbedaan bentuk dan sel-selnya.
Teknik pengecatan yang dilakukan pada perocobaan ini adalah teknik
pewarnaan gram dan teknik pewarnaan sederhana. Sedangkan bakteri yang
akan diamati adalah bakter Staphylococcus auresus, Pseudomonas aeruginosa
dan Escherichia coli.
Pengecatan sederhana adalah pewarnaan yang hanya menggunakan
satu macam zat warna saja. Pengecatan sederhana bertujuan untuk melihat
bentuk, morfologi dan struktur dari dinding sel bakteri yang dilakukan dengan
mengambil biakan bakteri menggunakan ose dan diletakkan diatas kaca
preparat dan diberi sedikit air agar bakteri tersebut tersebar dipermukaan kaca
preparat. Kemudian dilakukan fikasai yang bertujuan untuk mematikan bakteri
dan mempertahankan serta melekatkan bakteri pada kaca preparat. Setelah itu
diberi zat warna kristal violet agar memudahkan pengamatan dibawah

O1A1 16 103
mikrospok dan dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan. Proses pengamatan
dilakukan dibawah mikroskop dengan perbesaran 100x.
Pewarnaan gram bertujuan untuk mengetahui apakah bakteri yang diuji
termasuk bakteri gram positif atau gram negatif. Proses dari pewarnaan gram
hampir sama dengan pewarnaan sederhana, yang membedakan adalah pada
pewarnaan gram penetesan kristal violet bertujuan sebagai pemberi warna
utama pada bakteri, setelah itu diteteri pereaksi lugol yang berfungsi untuk
meingkatkan afinitas pengitanan zat warna oleh bakter. Alkohol 96%
diteteskan selanjutnya yang bertujuan untuk memucatkan bakteri sehingga
bakteri tidak berwarna.
Cat Gram yang digunakan terdiri dari 4 macam, yaitu cat Gram A, B, C
dan D. Masing-masing mempunyai fungsi yang berbeda. Cat Gram A
berwarna ungu (karena mengandung kristal violet). Cat Gram A merupakan
cat primer yang akan memberi warna mikroorganisme target. Pada saat
diberi cat ini, semua mikroorganisme akan berwarna ungu sesuai warna
cat Gram A. Cat Gram B berwarna coklat. Cat Gram B merupakan cat Mordan,
yaitu cat atau bahan kimia yang berfungsi memfiksasi cat primer yang
diserap mikroorganisme target. Akibat pemberian cat Gram B, maka
pengikatan warna oleh bakteri akan lebih baik (lebih kuat). Cat Gram C tidak
berwarna. Cat ini berfungsi untuk melunturkan cat sebelumnya. Cat D, Cat ini
berwarna merah. Cat ini merupakan cat sekunder atau kontras. Cat ini
berfungsi untuk memberikan warna mikroorganisme non target. Cat
sekunder mempunyai spektrum warna yang berbeda dari cat primer.

O1A1 16 103
Pada bakteri gram positif warnanya akan menjadi bening, karena
bakteri ini hanya mengandung sedikit lipid dan ketika diberi alkohol lipid
tersebut melarut sehinga memperbanyak pori-pori dari bakteri tersebut,
sehingga warna-warnanya akan menghilang dan menjadi bening. Kemudian
diberi safranin yang berfungsi sebagai zat warna pembalik yang akan mewarnai
bakteri yang telah dipucatkan sebelumnya, dimana pada bakteri gram potif
warnanya akan tetap ungu dan pada gram negarif akan berubah menjadi merah
atau jinga. Semua proses setelah dilakukan di cuci dengan air yang mengalir, hal
ini bertujuan untuk menghilangkan atau meminimalisir sisa zat-zat warna yang
terdapat pada sekeliling sampel dikaca preparat. Pengamatan dilakukan
dibawah mikroskop dengan perbesaran 100x
Hasil yang diperoleh pada percobaan ini adalah bakteri yang terlihat di
bawah mikroskop melalui pengujian pewarnaan gram menunjukkan bahwa
pada bakteri Escheria coli dan Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri
gram negatif karena pada saat pengamatan cenderung mempertahankan
warna merah, bakteri Staphylococcus aureus adalah bakteri gram positif
yang berwarna ungu ketika diamati menggunakan mikroskop. Sedangakan
pada pewarnaan sederhana didapatkan hasil bahwa pada bakteri Escheria
coli berbentuk basil, Staphylococcus aureus berbentuk coccus
(staphylococcus) dan bakteri Pseudomonas aeruginosa berbentuk basil.

O1A1 16 103
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Kesimpulan dari percobaan yang telah dilakukan antara lain:
1. Pengecatan bakteri dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu pewarnaan
gram dan pewarnaan sederhana. Pewarnaan gram atau metode gram
merupakan salah satu metode empiris untuk membedakan spesies
bakteri menjadi dua kelompok besar yaitu bakteri gram positif dan
bakteri gram negatif dengan menggunakan beberapa cat sebagai
pereaksi. Sedangkan, pengecatan sederhana adalah pewarnaan yang
hanya menggunakan satu macam zat warna saja.
2. Bentuk bakteri pada sampel yang diamati pada mikroskop yaitu semua
sampel menunjukkan bakteri dengan bentuk atau morfologi yang
berbeda. Pada bakteri Escheria coli berbentuk basil, Staphylococcus
aureus berbentuk coccus (staphylococcus) dan bakteri Pseudomonas
aeruginosa berbentuk basil.
B. SARAN
Saran saya adalah sebaiknya praktikan lebih aktif lagi serta
diharapkan kehati-hatian pada saat melakukan pewarnaan bakteri.

O1A1 16 103
DAFTAR PUSTAKA
Dewi Amalia Khirsna, 2013, Isolasi, Identifikasi Dan Uji Sensitivitas
Staphylococcus aureus Terhadap Amoxicillin Dari Sampel Susu
Kambing Peranakan Ettawa (Pe) Penderita Mastitis Di Wilayah
Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta, Jurnal Sains Veteriner, Vol. 31
(2).
Ditjen POM RI, 1979, Farmakope Indonesia Edisi III, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta.
Ditjen POM RI, 1995, Farmakope Indonesia Edisi IV, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta.
Fitri L, Dan Yekki Y, 2011, Isolasi Dan Pengamatan Morfologi Koloni Bakteri
Kitinolitik, Jurnal Ilmiah Pendidikan Biologi, Biologi Edukasi, Vol. 3
(2).
Helmiyati, A. F., Dan Nurrahman, 2010, Pengaruh Konsentrasi Tawas

Terhadap Pertumbuhan Bakteri Gram Positif Dan Negatif, Jurnal
Pangan Dan Gizi, Vol. 1 (1).
Jiwantarum Y, Rohmi, I Dewa, P. M. R., 2016, Buah Naga (Hylocereus

polyrhizus) Sebagai Pewarna Alami Untuk Pewarnaan Bakteri,
Jurnal Kesehatan Prima, Vol. 10 (2).
Lestari, D. E., Dan Utomo, S. B., 2010, Pengaruh Bioksida Pengoksidasi

Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme Pada Air Pendingin
Sekunder, Rsg-Gas. Jfn. Vol 4 (2).
Pelczar, M. J., dan Chan, E. C. S., 2008, Dasar-dasar Mikrobiologi, UI-Press,

Jakarta
Purwani E, Setyo, W. N. H., Rusdin R, 2009, Respon Hambatan Bakteri Gram

Positif Dan Negatif Pada Ikan Nila (Oreochromis niloticus) Yang
Diawetkan Dengan Ekstrak Jahe (Zingiber officinale), Jurnal
Kesehatan, Vol. 2 (1).
Sardani N, Magdaleena L, Rusco, G. B., Dody P, Syahribulan, Zaraswati D,

2015, Potensi Tunikata Rhopalaea Sp Sebagai Sumber Inokulum
Bakteri Endosimbion Penghasil Antibakteri; 1. Karakterisasi
Isolat, Jurnal Alam Dan Lingkungan, Vol. 6 (11).
Sari, R. A., Risa N Dan Puji A, 2012, Karakteriasi Bakteri Asam Laktat Genus
Leuconostoc Dari Pengasam Ale-Ale Hasil Formulasi Skala
Laboratorium. Jkk. Vol.1 (1).

O1A1 16 103
LAMPIRAN
A. SKEMA KERJA
1. Sterilisasi alat
Alat
- Disiapkan semua alat yang akan digunakan
- Dibungkus dengan kertas
- Dimasukkan ke dalam autoklaf untuk disterilkan
Alat-alat steril
2. Pembuatan Cat A (Larutan kristal violet)

Kristal violet
- Dibuat larutan A (2 g Kristal violet dilarutkan dalam 20 ml

etil alkohol)
- Dibuat larutan B (0,8 g ammonium oksalat dilarutkan dalam
80 ml water steril)
- Dimasukkan larutan A dan larutan B ke dalam labu takar
- Dihomogenkan
Cat A (Larutan kristal violet)
3. Pembuatan Cat B (Larutan iodin)

Larutan iodin
- Ditimbang iodine 1 g dan KI 2 g
- Dilarutkan dalam 300 ml water steril
- Diaduk hingga larut
Cat B (Larutan iodin)

O1A1 16 103
4. Pembuatan Cat C (Larutan Etil alkohol)

Etil alkohol
- Diambil etil alkohol 95% sebanyak 95 ml

- Ditambahkan 5 ml air water steril
Cat C (Larutan Etil alkohol)
5. Pembuatan Cat D (Larutan safranin)

Etil alkohol
- Diambil 0,2 ml safranin

- Diencerkan dengan etil alkohol 95% sebanyak 10 ml
- Dicukupkan hingga 100 ml dengan water steril
- Digojok
Cat D (Larutan safranin)
Sampel
- Ditetesi larutan metilen blue sebanyak 1 tetes
- Difiksasi diatas nyala api atau diatas bunsen
- Diamati bentuk bakteri di bawah mikroskop
Hasil pengamatan ?

O1A1 16 103
7. Pewarnaan Gram
Sampel
- Ditetesi larutan Kristal violet sebanyak 1 tetes
- Difiksasi diatas nyala api atau di atas Bunsen
- Ditetesi larutan iodine sebanyak 1 tetes
- Ditetesi dengan larutan etil alkohol
- Ditetesi larutan safranin sebanyak 1 tetes
- Difiksasi diatas nyala api
- Diamati bentuk dan jenis bakteri di bawah mikroskop
Hasil pengamatan ?

O1A1 16 103
B. KOMPOSISI
1. Nutrient Agar
Peptic digest of animal tissue 5.00 gr
Natrium klorida 5.00 gr
Extract beef 1.5 gr
Extract yeast 1.5 gr
Agar 15 gr
Aquades 1000 mL
C. PERHITUNGAN
1. Nutrient Agar
Untuk membuat NA sintetik, dilarutkan 20 gram serbuk PDA
dalam 1000 mL/1 L dalam akuades, maka untuk membuat media
PDA sintetik 50 mL dibutuhkan sebanyak :
20 g X gram
=
1000 mL 25 mL
20 𝑔 𝑥 50 𝑚𝐿
𝑋=
1000 𝑚𝐿
= 1 𝑔𝑟𝑎𝑚
Jadi untuk membuat NA sintetik dalam 50 mL diperlukan serbuk
NA sebanyak 1 gram.

O1A1 16 103

PEWARNAAN BAKTERI

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

PEWARNAAN BAKTERI

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENGECATAN BAKTERI 1

Pemanfaatan mikroorganisme dalam bidang teknologi semakin banyak

digunakan misalnya dalam menghasilkan berbagai produk seperti bahan

pangan, industri, pertanian, obat-obatan, dan lain sebagainya. Pemilihan

mikroorganisme yang tepat untuk suatu tujuan tertentu dan pemanfaatan

mikroorganisme secara maksimal perlu didukung oleh suatu metode isolasi

dan identifikasi yang baik.

Secara alami, mikroba di alam ditemukan dalam populasi campuran.

Untuk memperoleh biakan murni dapat dilakukan isolasi dari sampel.

non-patogen. Mikroorganisme yang bersifat patogen biasanya dapat

menimbulkan menimbulkan berbagai penyakit dan merugikan makhluk

hidup, sedangkan yang bersifat non-patogen dapat dimanfaatkan sebagai

Bakteri merukan salah satu mikroorganisme yang jenisnya dialam

berlimah. Bakteri berdasarkan komposisi dinding selnya dibagi menjadi 2,

bakteri sangat penting guna untuk membantu mengidentifikasi apakah

EVI APRIYANI FISMATULLAH MALAIJI, S.Farm

dilakukanlah percobaan ini untuk mengetahui apakah bakteri yang diteliti

digunakan untuk mengidentifikasi bakteri adalah dnegan melakukan

pewarnaan. Pewarnaan bakteri bertujuan untuk mempermudah pengamatan

morfologi baketeri dibawah mikroskop sehingga dapat diebdakan antara

bakteri gram positif dan bakteri gram negatif.

Rumusan masalah dari percobaan ini adalah :

1. Bagaimana cara melakukan perwarnaan pada bakteri ?

2. Bagaimanakah bentuk dan morfologi dari bakteri ?

Tujuan pada percobaan ini adalah :

1. Untuk mengetahui cara melakukan pewarnaan pada bakteri

2. Untuk mengetahui bentuk dan morfologi dari bakteri

Manfaat pada percobaan ini adalah :

1. Agar dapat mengetahui cara melakukan pewarnaan pada bakteri

2. Agar dapat mengetahui bentuk dan morfologi dari bakteri

EVI APRIYANI FISMATULLAH MALAIJI, S.Farm

Mikroorganisme merupakan jasad hidup yang mempunyai ukuran

sangat kecil (biasanya kurang dari 1 mm) sehingga untuk mengamatinya

diperlukan alat bantuan. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal

(uniselular) meskipun beberapa protista bersel tunggal masih terlihat oleh

telanjang. Ilmu yang mempelajari mikroorganisme disebut mikrobiologi

(Lestari., dkk, 2010).

Sel bakteri amat beragam panjangnya, sel beberapa spesies berukuran

batang atau slindris dinamakan basilus (Pelczar dan Chan, 2008).

Bakteri gram positif dinding selnya mengandung peptidoglikan dan

gram positif sebagian adalah polisakarida. Sedangkan pada dinding sel

bakteri gram positif mengalami proses denaturasi sel terlebih dahulu di

EVI APRIYANI FISMATULLAH MALAIJI, S.Farm

di bandingkan dengan dinding sel yang tersusun oleh fosfolipid (Helmiyati

dan Nurrahman, 2010).

Pseudomonas aeruginosa merupakan suatu mikroba gram negatif

umumnya memproduksi pigmen yang larut air. Pseudomonas aeruginosa

adalah salah satu spesies yang merupakan kontaminan, umumnya terdapat

Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dan berbentuk

kokus. Staphylococcus aureus bersifat non-motil, nonspora, anaerob

fakultatif, katalase positif dan oksidase negatif. Staphylococcus aureus

tumbuh pada suhu 6,5-46° C dan pada pH 4,2-9,3. Staphylococcus

mengandung polisakarida dan protein yang bersifat antigenik dan

merupakan substansi penting di dalam struktur dinding sel (Dewi, 2013).

Pengamatan morfologi koloni dilakukan dengan melihat bentuk, tepi,

tersebut (Sardani, dkk., 2015).

Pewarnaan Gram digunakan untuk mengetahui morfologi sel bakteri

warna kristal violet-yodium tetap dipertahankan meskipun diberi larutan

EVI APRIYANI FISMATULLAH MALAIJI, S.Farm

pemucat aseton alkohol, sedangkan bakteri gram negatif berwarna merah

Teknik pewarnaan pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat

macam yaitu pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan

diferensial dan pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau