Isolasi dan Identifikasi

Senyawa Antioksidan dari

Fraksi Bunga Kitolod
(Hippobroma longiflora)
 1 Andriyani Budi Listyo

2 Dita Widia Ningrum

3 Ditya Vega Fauzia
4 Siti Nurhasanah

Dosen Pembimbing: Dra. Dewi Kusrini, M.Si

 Latar Belakang
PERKEMBANGAN TANAMAN OBAT

BERLIMPAHNYA KEKAYAAN
TANAMAN OBAT INDONESIA

KITOLOD

10/13/2019
 Salah satu tanaman di Indonesia yang dimanfaatkan sebagai
obat tradisional adalah tanaman kitolod (H. Longiflora). Bagian
yang bermanfaat dari tanaman kitolod ini adalah daun dan
bunganya yang digunakan sebagai obat luka (Hutapea, 1994),
efek fisiologis yang kuat terutama pada susunan syaraf pusat
(Alondra, et al.,2014), obat anti radang (Suparni, 2012), Bunga
dari tanaman ini biasa digunakan untuk mengobati sakit mata,
seperti mata berair, mata plus, minus, katarak, dan glaukoma
(Nuraini, 2014). Menurut Hodek et al. (2002), flavonoid yang
tekandung dalam bunga kitolod memiliki aktivitas biologis seperti
antimikroba, anti alergi dan antioksidan.

10/13/2019
Kingdom : Plantae
Sub Divisi : Angiosperms
Kelas : Eudicots
Sub Kelas : Asterids
Order : Asterales
Family : Campanulaceae
Genus : Hippobroma
Species : H. longiflora

10/13/2019
 1. Daun: obat luka (Hutapea, 1994), efek
fisiologis yang kuat (Alondra, 2014), obat anti
radang (Suparni, 2012), obat mata (Nuraini,
2014).

Manfaat tumbuhan kitolod

2. Bunga : memiliki aktivitas biologis

seperti antimikroba, anti alergi
dan antioksidan.
 Senyawa yang Terkandung dalam
Tumbuhan Kitolod

Alkaloid

Flavonoid

Lobelin

Saponin

Lobelamin

Polifenol

Isotomin

10/13/2019
Rumusan Masalah

1. Senyawa-senyawa apa dalam tiap fraksi bunga kitolod

(H. Longiflora).

2. Pemisahan senyawa dalam fraksi etanol yang

dilakukan dengan uji KLT untuk memastikan
kandungannya dalam bunga kitolod (H. Longiflora).

3. Uji antioksidan dari kandungan senyawa dalam bunga

kitolod (H. Longiflora).

10/13/2019
 Tujuan
1. Untuk mengetahui senyawa-senyawa dalam tiap
fraksi bunga kitolod (H. Longiflora).

2. Untuk mengetahui dan memahami pemisahan

senyawa dalam fraksi etanol bunga kitolod (H.
Longiflora) dengan menggunakan metode
Kromatografi Lapis Tipis (KLT).

3. Untuk menguji aktivitas antioksidan secara kualitatif

dari kandungan bunga kitolod (H. Longiflora)
dengan metode DPPH.

10/13/2019
 Metodologi Percobaan
 Bahan • Alat
 Hippobroma Longiflora .P  Lampu UV
 NaOH  Plat silika gel GF 254
 Aquades  rotary evaporator vakum
 H2SO4
 Seperangkat alat gelas
 FeCl3 (erlenmeyer, gelas beker,
 NH3 pipet tetes, gelas ukur)
 HCl Pipa kapiler
 Etanol  Cawan penggerus
 Asam asetat anhidrid  Chamber
 Pereaksi mayer
 Labu alas bulat
 N-Heksana
 Etil Asetat  Aluminium Foil
 Logam Mg  corong pemisah
 Pereaksi dragendorf
 amil alkohol

10/13/2019
 A. Isolasi Senyawa Antioksidan dari Fraksi
Etanol Bunga Kitolod (H. longiflora)

1. Penanganan Awal Bunga Kitolod (H. longiflora)

Bunga kitolod segar

Pendiaman selama beberapa hari tanpa

sinar matahari hingga kering


Hasil

10/13/2019
2. Isolasi Senyawa Antioksidan dari Bunga
Kitolod dengan Pelarut Etanol
Bunga Kitolod Kering

penggerusan bunga kitolod dengan

blender
Penimbangan serbuk bunga yang
dihasilkan
Perendaman serbuk bunga dengan
pelarut etanol selama 24 jam
• Penyaringan

Filtrat Residu

• Penguapan dengan rotary evaporator vakum

•

Hasil
10/13/2019
 B. Fraksinasi Ekstrak dengan n-Heksan
dan Etil Asetat Bunga Kitolod
(Hippobroma Longiflora .P)

10/13/2019
 1. Fraksinasi Menggunakan pelarut n-Heksana
Ekstrak etanol kasar
Bunga Kitolod

 Ekstraksi menggunakan pelarut n-

heksan
 Pengulangan ekstraksi sebanyak 3
kali
 Pemisahan fraksi pelarut

Fraksi n-heksan Fraksi etanol

- Penguapan dengan rotary evaporator vakum

- Uji Skrining (tannin, flavonoid, saponin, steroid, alkaloid,
terpenoid)
Hasil

10/13/2019
 2. Fraksinasi Menggunakan pelarut
Etil Asetat
Ekstrak Etanol hasil
ekstraksi Pertama

 Diekstraksi menggunakan pelarut

etil asetat
 Dilakukan pengulangan ekstraksi
sebanyak 3 kali
 Pemisahan fraksi pelarut

Fraksi Etil Asetat Fraksi etanol

- Penguapan dengan rotary
evaporator vakum - Penguapan dengan
- Uji Skrining (Fenolik, tannin, rotary evaporator
flavonoid, saponin, steroid, vakum
- Uji Skrining
alkaloid, terpenoid) (fenolik,tannin, flavonoid,
saponin, steroid, alkaloid,
Hasil terpenoid)
Hasil
10/13/2019
C. Uji Skrining Fitokimia Untuk Setiap
Fraksi
1. Uji Fenolik
Serbuk Bunga Fraksi n- Fraksi Etil Fraksi
Kitolod Heksana asetat Etanol

Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes

Penambahan pereaksi FeCl3

Hasil

10/13/2019
 2. Uji Flavonoid

Serbuk Bunga Fraksi n- Fraksi Etil Fraksi

Kitolod Heksana asetat Etanol

Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes

 - Penambahan 1-2 butir logam Mg

 - Penambahan beberapa tetes HCl
 - Penambahan amil alkohol
Hasil

10/13/2019
3. Uji Saponin

Serbuk Bunga Fraksi n- Fraksi Etil Fraksi Etanol

Kitolod Heksana asetat

Tabung Reaksi Tabung Reaksi Tabung

Tabung Reaksi Reaksi

• - Penambahan air
• - Pendidihan
• - Penyaringan dalam keadaan panas
• - Pengocokan kuat-kuat
• - Penambahan HCl 2N
Hasil

10/13/2019
4. Uji Triterpenoid / steroid

Serbuk Bunga Fraksi n- Fraksi Etil Fraksi

Kitolod Heksana asetat Etanol

Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes

Penambahan reagen Libermann-

Buchard (asetat anhidrat + asam
sulfat pekat)
Hasil

10/13/2019
5. Uji Tanin

Serbuk Bunga Fraksi n- Fraksi Etil Fraksi

Kitolod Heksana asetat Etanol

Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes

Penambahan pereaksi FeCl3 1%

Hasil

10/13/2019
6. Uji Alkaloid

Serbuk Bunga Fraksi n- Fraksi Etil Fraksi

Kitolod Heksana asetat Etanol

Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes

• penambahan 1 tetes reagen

dragendorf

Hasil

10/13/2019
 Serbuk Bunga Fraksi n- Fraksi Etil Fraksi
Kitolod Heksana asetat Etanol

Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes Plat Tetes

• penambahan 1 tetes pereaksi Meyer

Hasil

10/13/2019
 D. Analisis Senyawa: Fraksi Etanol Bunga Kitolod
(Hippobroma Longiflora P.) dengan
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

10/13/2019
1. Hidrolisis Fraksi Etanol

10/13/2019
2. Penentuan Jumlah Senyawa dari Fraksi Etanol
dengan KLT

Fraksi Etanol
 Penyiapan plat KLT dan pengelusi yang cocok
 Lakukan pengulangan pengelusian untuk tiap
eluen tunggal berikut : Etil Asetat ; Etanol dan
eluen campuran= etil asetat : etanol
 Penotolan larutan ekstrak pada plat KLT
dengan fasa diam silika gel dan fase gerak Etil
Asetat ; Etanol
 pengamatan dibawah sinar UV λ = 254 nm dan
λ = 365 nm
 Penyemprotan dengan pereaksi warna H2SO4
10%

Hasil

10/13/2019
 Analisis senyawa antioksidan dari
fraksi etanol dengan metode
DPPH
1. Uji flavonoid terhadap fraksi etanol

Plat KLT hasil analisis

 - Penguapan dengan NH3

 - Pengamatan dibawah sinar UV λ = 365 nm

Hasil

10/13/2019
 Plat KLT hasil analisis

 - Penyemprotan DPPH
 - Pengamatan dibawah sinar UV λ = 365 nm

Hasil

10/13/2019
2. Uji antioksidan senyawa dari fraksi etanol secara kualitatif

Hasil Uji Flavonoid

 - Pengerokan pada plat hasil uji flavonoid

 - Dilarutkan menggunakan air
 - Penotolan pada Plat KLT
 - Pengelusian dengan Eluen terbaik
 - Pengamatan noda dibawah sinar UV λ
=365 nm

Hasil

10/13/2019
 Jadwal Kegiatan PKT

10/13/2019
 Jadwal Minggu Minggu Minggu Minggu Minggu Minggu
Kegiatan ke-1 ke-2 ke-3 ke-4 ke-5 ke-6
Maserasi
Serbuk Bunga
Kitolod

Evaporasi filtrat
kitolod yang
dihasilkan

Ekstraksi filtrat
dengan
berbagai
pelarut

Uji Skrining
Fitokimia untuk
Setiap Fraksi

Hidrolisis dan
Analisis KLT
Ekstrak Bunga
Kitolod

Uji Antioksidan
10/13/2019
Thank You...