RFLR

(Restriction Fragment Length Polymorphism)

Nama Kelompok

Aulia Pratiwi S. (611810062)

Ferdi Praing 611810076)
Imam Suhada (611810080)
Nurul Nafiah (611710060)
Resha Ramadhania (611810100)
Rifki Safrina Z. (611810102)
Sri Susilowati (611810105)
Wika Indaning H. (611810112)
 Pengertian
RFLP merupakan teknik DNA berdasarkan deteksi fragmen DNA dengan panjang yang bervariasi

Awalnya DNA diisolasi dari sampel yang kemudian dipotong dengan enzim khusus restriction
endonuclease.

Enzim ini memotong DNA pada pola sekuen tertentu yang disebut restriction endonuclease
recognition site (sisi yang dikenali oleh enzim restriksi).

Perbedaan dalam panjang fragmen disebut Restriction Fragment Length Polymorphism

(RFLP)
 Restriksi endonuclease adalah enzim yang memotong DNA panjang menjadi DNA pendek. Setiap endonuclease
restriksi menargetkan sequen nukleotida yang berbeda dalam untai DNA dan karenanya memotong dilokasi yang
berbeda. Jarak antara situs pembelahan dari endonuclease pembatasan tertentu berbeda antara individu. Oleh karena
itu, panjang fragmen DNA yang dihasilkan oleh restriksi endonuclease akan berbeda antar organisme dan spesies
individu
 1
contoh

DNA setelah dipotong oleh enzim restriksi maka akan membentuk 4 fragmen dan 3 fragmen
 2
contoh

Karena analisis RFLP biasanya menggunakan gel agarosa, hanya variasi ukuran besar yang
bisa diselesaikan Dalam hal basis molekuler, penghapusan dan penyisipan antara
pembatasan dalam menghasilkan RFLP. Misalnya, basis pertama AAATTC dapat bermutasi ke
G yang mengarah ke GAATTC
 Kelebihan Kelemahan
Tidak memerlukan pengetahuan Penanda DNA hanya
atau data tentang sekuens DNA bersifat dominan
genom yang akan dianalisa,
Memerlukan sedikit sampel DNA,
Dapat digunakan untuk berbagai
jenis sampel DNA, Penanandaan
yang dihasilkan dapat dipercaya
dan hasil pengulangan lebih baik
daari pada RAPD
How is it used?
RFLP telah memberikan informasi
berharga di banyak bidang biologi
termasuk:
 Sistematis, genetik & ekologi
(pemetaan genom)
 Sidik jari DNA (investigasi kejahatan
forensik, pengujian paternitas)
 Skrining DNA manusia untuk
keberadaan yang berpotensi gen yang
merusak
 CONTOH

CONTOH RFLP
Pasangan kakek-nenek pertama adalah heterozigot (AB dan CD) dan pasangan kakek-nenek kedua homozigot (BB
dan CC). Ketika putri kakek-nenek pertama (AD) kawin ituputra dari kakek nenek kedua (BC), empat jenis pemisahan
dimungkinkan: AB, AC, BD,dan CD
How to work?
Tahapan RFLP
1. Isolasi DNA
2. DNA yang sudah di isolasi dipotong
dengan enzim retriksi (tiap individu
memiliki panjang potongan DNA yg
berbeda)
3. DNA dipindah ke gel elektroforensis
(memisahkan fragmen-fragmen
berdasarkan panjang/ ukuran). Ukuran
fragmen yg berbeda membentuk pita
yang berbeda pula
4. Gel ditempatkan dalam larutan NaOH
untuk denaturasi sehingga DNA untai
tunggal terbentuk
5. DNA untai tunggal yang diperoleh
ditransfer ke membrane muatan yaitu
kertas nitroselulosa oleh proses yang
disebut blotting
6. Kemudian hasil di visualisasi dengan X-
Ray

video >>>>>>
Variasi yang dihasilkan RFLP
• Perubahan basis tunggal dalam urutan nukleotida (SNP)
• Tandem berulang (VNTR)
• Polimorfisme
• Mutasi

SNP atau VNTR hanyalah penanda yang paling banyak dalam kasus,
tidak diketahui efeknya pada struktur atau tingkat produksi protein
tertentu
Hasil dari potongan Enzim Retriksi
• Hasil pemotongan berujung tumpul (blunt atau flush end) karena
memotong secara simetris kedua utas DNA
• Hasil pemotongan berujung lancip atau lengket (sticky atau cohesive
ends)
a. Ujung menggantung 5’ karena memotong secara asimetris
pada situs pemotongan, menghasilkan pemotongan
memanjang pada ujung 5’
b. Ujung menggantung 3’ karena memotong secara asimetris
pada situs pengenalan, namun menghasilkan pemotongan
memanjang pada ujung 3’